免疫学杂志
Immunological Journal 면역학잡지
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IL-18通过JNK途径诱导肾小管上皮细胞转分化
目的 探讨白细胞介素18(IL-18)是否通过JNK细胞内信号转导途径诱导近端肾小管上皮细胞转分化.方法 应用体外细胞培养技术培养人近端肾小管上皮细胞株(HK-2细胞),分别予不同浓度的JNK通路特异性阻断剂SP600125预孵育HK-2细胞30 min后,加入IL-18共培养,于24 h、48 h和72 h 3个时点分别收集细胞.应用逆转录多聚酶链反应(RTPCR)检测α-SMA mRNA的表达水平,应用酶联免疫吸附法(ELISA方法)测定细胞α-SMA的表达水平.结果 SP600125可抑制IL-18诱导的HK-2细胞α-SMA基因和蛋白的表达,且呈一定程度的剂量依赖趋势.结论 JNK通路可能是调控IL-18所诱导肾小管上皮细胞转分化的信号通路之一.
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粉尘螨变应原对树突状细胞作用的研究
目的 研究粉尘螨(Der.f)变应原对树突状细胞的作用.方法 分别检测经Der.f变应原作用后,DC2.4(树突状细胞株)细胞白介素-12(IL-12)和IL-10的分泌,TLR2受体的基因表达和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)p44/42的磷酸化水平.结果 Der.f促进DC2.4 IL-10的分泌(由空白组的不分泌到Der.f作用组的27.7 pg/mL,P＜0.01),抑制IL-12的分泌(由空白组的22.8 pg/mL到Der.f作用组的15.9 pg/mL,P＜0.05),并可促进p44/42 MAPK蛋白的磷酸化和TLR2的基因表达,U0126可逆转其细胞因子的分泌模式,并降低p44/42 MAPK磷酸化水平.结论 Der.f变应原可影响树突状细胞的细胞因子分泌,受体表达及信号通路磷酸化水平.
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重组人RGD-FasL对胶质瘤细胞U138/U343/U373的体外抗肿瘤的活性分析
目的 研究重组人RGD-FasL对3株胶质瘤细胞U138/U343/U373的杀伤作用及机制.方法 采用RT-PCR方法、MTT比色法、DNA倍体分析、流式细胞术检测融合蛋白对3株胶质瘤细胞的杀伤作用;利用Western blot法探讨其作用机制.结果 Fas mRNA在U138和U343细胞中有表达,在U373细胞中未有可见表达;DcR3 mRNA在3株细胞中均有表达,在U373细胞中强表达.采用流式细胞术检测肿瘤细胞表面两种受体的表达情况,结果与RT-PCR相符.U138细胞株对RGD-FasL敏感并呈剂量依赖性;U343细胞株对RGD-FasL相对敏感;U373细胞对RGD-FasL不敏感.用PI检测细胞周期与凋亡表明RGD-FasL能使U138/U343细胞停留在G_1期,推迟进入S期,抑制细胞生长并诱导细胞发生凋亡.Western blot实验表明RGD-FasL作用细胞后caspase-8/3/9的表达升高,Bcl-2的表达降低.结论 重组人RGD-FasL可以不同程度的诱导胶质瘤细胞凋亡,其机制与其受体的表达和caspase-8/3/9、Bcl-2的表达有关.
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基于柔性肽连接的双特异性抗体分子的设计与结构模拟
目的 构建抗人红细胞与抗HIV-1p24抗原双特异性抗体分子基因并进行三维立体结构模拟,为双特异性抗体蛋白的表达奠定理论基础.方法 采用RT-PCR法从特异性分泌抗HIV-1p24抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株3D7中克隆单抗的可变区基因,构建抗HIV-1p24抗原单链抗体基因ScFv_(3D7),并通过ANTHEPROT5.0软件进行物理和化学以及二级结构预测,利用SWISS-MODLE软件进行立体结构模拟.通过15、30、45、60、75肽模拟连接单链抗体基因ScFv_(3D7)与ScFv_(2E8)(抗人红细胞H抗原,已制备),构建双特异性抗体分子基因,并进行立体结构预测.结果 由柔性肽(G_4S)_3连接的单链抗体基因ScFv_(3D7),大小为729 bp,编码243个氨基酸,等电点为5.665,相对分子质量为26 147.937.其二级结构分析显示了不同比例的螺旋、片层和转角结构,三维立体结构预测模型符合免疫球蛋白家族特征.采用不同长度的柔性肽模拟连接两个单链抗体基因,其中以75肽连接的双特异性抗体分子的三维立体模型形成了完整的蛋白分子.结论 基于75肽连接的双特异性抗体分子基因所模拟的立体结构可以认为是适合蛋白表达的分子模型.
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人脐血单个核细胞Hlx基因的克隆、表达及其融合蛋白的免疫原性分析
目的 克隆人Hlx基因全长编码区,利用载体pQE30在大肠埃希菌M15中原核表达人Hlx基因,对表达产物进行纯化、免疫动物和制备多克隆抗体.方法 利用RT-PCR技术从人脐血单个核细胞中克隆出Hlx基因,构建重组表达质粒pQE30/Hlx,并于大肠埃希菌M15中表达,经Western blot判断,以可溶形式存在带6×His标签的融合蛋白,用Ni~(2+-)MAC层析柱对其进行纯化;将纯化蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体.结果 成功)克隆人Hlx基因编码区全长,包含1 467 bp,编码488个氨基酸残基.获得人Hlx融合蛋白和多克隆抗体,ELISA和Western blot结果表明融合蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性.结论 成功构建了原核表达质粒pQE30/Hlx,经纯化获Hlx蛋白,制备了效价和特异性良好的多克隆抗体,为进一步研究人Hlx的生物学功能奠定了基础.
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金雀根对类风湿性关节炎动物模型免疫调节作用的研究
目的 探讨金雀根药物在治疗类风湿关节炎中的免疫作用.方法 用昆明小鼠建立Ⅱ型胶原诱导关节炎模型,设正常组、模型组、金雀根高、中、低剂量组、雷公藤多甙片组,进行对CIA小鼠T淋巴细胞增殖和黏附能力、原代滑膜细胞增殖能力,培养上清液细胞因子对CIA小鼠脾细胞MMP2、TIMP-2表达的影响的观察.结果 金雀根高、中剂量组在RPMI-1640培养液中及ConA刺激下,脾细胞刺激指数、脾细胞粘附Ⅱ型胶原水平、致敏脾T淋巴细胞黏附能力黏附百分数、原代滑膜细胞增殖能力、滑膜细胞培养上清液中IL-1β、TNF-α水平明显低于模型组,与模型组相比,有显著性差异;并且可降低小鼠脾细胞MMP-2表达,升高小鼠脾细胞TIMP-2表达.结论 金雀根具有免疫调节治疗类风湿性关节炎的作用.作为传统药物,金雀根临床效果较好,副作用小.
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口蹄疫三价重组鸡痘病毒疫苗免疫原性研究
目的 对本室已经筛选到的共表达O型、A型和Asial型FMDV复合多表位免疫原基因OAAT与猪IL-18基因的重组鸡痘病毒vUTA-IL18-OAAT的免疫原性进行研究.方法 分别用重组病毒毒vUTA-IL18-OAAT、FPV疫苗株和PBS溶液进行小鼠免免疫,每间隔14 d加强免疫1次,第3次免疫后10 d杀鼠取血清和脾淋巴细胞检测抗体、T淋巴细胞亚群的数量及CTL活性.结果 小鼠免疫试验结果表明,与阴性对照组相比,vUTA-IL18-OAAT免疫组的T细胞亚类数量、CTL杀伤活性,抗O型、A型和Asial型FMDV的特异性抗体水平差异显著.结论 vUTA-IL18-OAAT能有效激发机体的细胞和体液免疫反应.
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CCL20基因短发夹RNA表达载体转染人胚胎肾细胞的干扰效应
目的 观察人CCL20基因短发夹RNA表达载体(pSCS-EGFP)转染人胚胎肾细胞(293FT细胞),以及对其表达CCL20mRNA和分泌CCL20蛋白的抑制作用.方法 用脂质体转染法把构建成功的3个pSCS-EGFP质粒(其中pSCS-EGFP-1为CCL20基因错配型,pSCS-EGFP-2和pSCS-EGFP-3均为CCL20基因特异型)转染到293FT细胞,24 h后分别用荧光显微镜照相和流式细胞仪检测293FT细胞的转染率.将未转染及分别转染3种质粒的293FT细胞培养48h,用TNF-α和IL-1β刺激培养24 h后,分别用荧光定量RT-PCR和ELISA法检测CCL20基因mRNA和蛋白的表达水平,计算其抑制率.结果 3种质粒(pSCS-EG-FP-1～3)转染293FT细胞的效率分别为(73.8±5.3)%、(50.0±4.8)%、(56.8±2.9)%.加细胞因子刺激下,3种载体对293FT细胞表达CCL20mRNA相应的抑制率分别为(18.53±34.44)%、(90.40±3.94)%和(92.50±6.15)%;上清中CCL20蛋白相应的抑制率分别为(14.88±17.39)%、(71.76±8.27)%和(88.56±1.74)%.未加细胞因子刺激下,CCL20 mRNA的相应抑制率分别为(61.37±11.72)%、(84.33±12.78)%和(80.27±15.84)%;CCL20蛋白的相应抑制率分别为(19.91±48.12)%、(-27.87±50.24)%和(87.21±8.36)%.结论 特异性CCL20shRNA表达载体能明显下调细胞因子刺激人胚胎肾细胞表达CCL20 mRNA及蛋白,该载体为研究肾移植排斥反应等CCL20相关性肾脏疾病的治疗提供了一定的实验基础.
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TLR4基因3'非翻译区11367位点多态性与婴幼儿喘息性疾病的研究
目的 检测TLR4基因3'非翻译区(3'UTR)11367位点的多态性,探讨该多态性与喘息性疾病的易感性、气道分泌物的细胞因子水平、病原学以及临床表型的关系.方法 采用单管双向等位基因特异性扩增技术检测TLR4基因3'UTR 11367位点的基因多态性.通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测喘息组患儿气道分泌物中细胞因子的水平.采用免疫荧光法进行呼吸道合胞病毒检测.结果 TLR4G11367C位点核苷酸存在G/C二态性,表现为GG纯合、GC杂合两种基因型.喘息组和对照组该位点基因型、等位基因分布频率之间均存在显著性差异(P均为0.002).GG型患儿IL-8水平、病原菌感染阳性率均明显高于GC型.不同基因型的临床表型无显著性差异.结论 TLR4基因3'UTR基因多态性与喘息性疾病易感性相关,且与气道分泌物中IL-8水平、机体对RSV易感性、气道细菌定植有关.
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CD8~+NKT和CTL细胞抗肿瘤活性的比较
目的 建立体外诱导CD8~+NKT的方法,并比较CTL和CD8~+NKT对肿瘤细胞的体外杀伤能力.方法 用流式分选OT1小鼠CD8~+NKT和CD8~+细胞并用DC及抗原肽体外活化,分别与荧光染料标记的EG7-OVA和B16-F10两种靶细胞共培养,作用12 h后,标记PI、Annexin V,用流式细胞仪检测两种效应细胞对靶细胞的杀伤.结果 CD8+ NKT对于EG7-OVA和B16-FIO均具有明显杀伤活性,而CTL则无明显杀伤作用.结论 CD8~+NKT同时具有对肿瘤的抗原特异性杀伤作用和非特异性杀伤作用.鉴于CD8~+NKT具有如此明显的抗肿瘤作用,研究CTL功能时应注意排除CD8~+NKT的存在对实验结果的干扰.
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重组耻垢分枝杆菌与微卡在鼠结核病免疫治疗作用中的比较
目的 比较颗粒溶素/白介素-12重组耻垢分枝杆菌(rMS)和微卡作为免疫治疗佐剂在鼠结核病治疗中的效果及机制.方法 结核分枝杆菌H37Rv感染Balb/c小鼠4周后,分别用生理盐水、耻垢分枝杆菌(MS)、rMS、INH+PZA,rMS+INH+PZA、微卡+INH+PZA治疗6次,于第1次治疗后3个月处死小鼠,检测器官荷菌量、血清IL-12和IFN-γ分泌水平和肺、脾组织中颗粒溶素表达及观察小鼠肺、脾组织病理改变情况.结果 rMS+INH+PZA器官荷菌量明显低于微卡+INH+PZA、rMS和INH+PZA药物组;血清IL-12水平rMS+INH+PZA和单纯rMS组明显高于微卡+INH+PZA和INH+PZA组;IFN-γ分泌水平rMS+INH+PZA、单纯rMS组和微卡+INH+PZA明显高于单纯的药物组;用免疫组化检测到单纯rMS组和rMS+INH+PZA组在肺脾组织中颗粒溶素的表达;rMS+INH+PZA、微卡+INH+PZA、单纯rMS组和INH+PZA组肺组织病变轻且局限,生理盐水组肺组织病理改变以渗出为主,病变广泛,正常肺泡结构被破坏.结论 rMS和微卡对小鼠结核病有一定免疫治疗作用,rMS通过增强宿主Th1型免疫应答和GLS的抗菌活性有关,而微卡主要通过调节免疫应答发挥作用;rMS对临床常用的抗结核药协同作用优于微卡,为结核病的综合治疗打下实验基础.
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家蚕变应原tropomyosin基因的克隆表达、纯化及其免疫学活性鉴定
目的 对家蚕过敏原tropomyosin基因进行克隆表达,鉴定其免疫学活性.方法 本研究提取家蚕总RNA,采用RT-PCR方法有效地扩增出tropomyosin片段,其长度为858 bp,编码286个氨基酸.通过连入载体PET28a在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)菌株中通过IPTG诱导得到重组家蚕原肌球蛋白.重组家蚕原肌球蛋白经过6His-tag蛋白纯化系统分离、纯化.经Western blot检测该重组蛋白与家蚕过敏患者血清中IgE的反应性.结果 19个病人血清反应中,有5个呈阳性,阳性率为26%.结论 成功克隆表达了家蚕tropomyosin基因,经免疫学鉴定发现其具有过敏原性.
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B7在血液病细胞系中的表达及对T淋巴细胞的免疫反应
目的 探讨B7共刺激分子在人类恶性血液病细胞系中的表达以及激活T淋巴细胞的免疫反应.方法 用流式细胞术检测HL-60、NB4、Jurkat、U937、Raji、Daudi、K562等细胞HLA抗原和B7分子表达,同时检测经Ara-C刺激前后B7分子的表达,用RT-PCR方法检测经Ara-C刺激前后激活T淋巴细胞分泌细胞因子IFN-γ mRNA.结果 HL-60、NB4、Jurkat、U937、Raji、Daudi、K562等恶性血液病细胞株均表达或高表达HLA抗原和B7-2分子,低表达或不表达B7-1分子,经Ara-C刺激后细胞株B7分子的表达明显增强,并能有效地激活T淋巴细胞表达高水平的IFN-γ mRNA.结论 大多数人类恶性血液病细胞株均不表达或低表达B7分子,但是B7-1可能在肿瘤免疫中起重要作用.
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猪苓多糖下调Colon26细胞肿瘤免疫抑制的体外研究
目的 体外研究猪苓多糖(polyporus umbellatus polysacharide,PUP)对结直肠癌Colon26细胞肿瘤免疫抑制的影响.方法 获取经PUP作用后的Colon26再培养上清,未经作用的同步培养上清作对照,检测PUP对Colon26肿瘤细胞所致NK杀伤和诱导转化(MTF法测定),以及IL-2Rα、CD3ε~+ξ~+和CD3ε~-ξ~+表达(流式细胞计数分析)5项免疫功能抑制的影响,定量ELISA法测定上清中TGF-β_1、VEGF、IL-4、IL-6和IL-10五种免疫抑制分子含量,多元相关分析PUP下调Colort26免疫抑制与分泌免疫抑制分子的关系.结果 对照上清中5种免疫抑制分子均可测到,TGF-β_1含量高,对5项免疫功能均有显著抑制.PUP作用后的第一次再培养上清,TGF-β_1含量及对5项免疫功能的抑制均明显降低;与其相比,第二次再培养上清的5种免疫抑制分子含量及对NK杀伤、IL-2Rα和CD3e~-ξ~+表达抑制均明显提高.TGF-β_1与抑制诱导转化、NK杀伤及CD3eε~+ξ~+表达正相关.结论 通过下调肿瘤细胞分泌免疫抑制分子而削弱肿瘤免疫抑制,可能是PUP抗瘤效应机制之一.
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甲状旁腺素对人肾小管上皮细胞凋亡的影响
目的 研究甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)对体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡的影响及其机制.方法 不同浓度的PTH刺激HK-2细胞后,应用Hoechst33258染色观察PTH对HK-2细胞形态学的改变,Annexin V/PI 双染流式细胞术检测PTH对HK-2细胞凋亡的影响.Western blot和半定量RT-PCR法检测PTH对HK-2细胞Bax和Bcl-2蛋白和基因表达的影响.结果 Hoechst33258染色结果表明,PTH作用于HK-2细胞48 h,细胞出现核固缩、核碎裂,随着PTH浓度的升高,凋亡细胞数逐渐增多,且具有一定的浓度依赖性.流式细胞术结果表明,随着PTH浓度的升高,凋亡细胞百分率逐渐增多,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot和半定量RT-PCR结果表明,随着PTH浓度的升高和作用时间的延长,Bax蛋白和基因表达量逐渐增加,Bcl-2蛋白和基因表达量逐渐减少,Bax/Bcl-2比值增加.结论 PTH可能通过调节凋亡基因Bax和Bcl-2的表达促进肾小管上皮细胞凋亡,进而促进肾小管问质纤维化.
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抗人DR5单克隆抗体的制备、鉴定及活性分析
目的 制备抗人DR5单克隆抗体(mAb),鉴定其特性,并进行生物学活性分析.方法 以纯化的可溶性DR5(sDR5)免疫Balb/c小鼠,杂交瘤技术制备抗人DR5 mAb;运用ELISA、SDS-PAGE电泳方法测定抗DR5 mAb与sDR5结合的特性;Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗DR5 mAb亚类;间接ELISA法检测腹水mAb效价;流式细胞仪检测肿瘤细胞表面DR5的表达水平;流式细胞仪检测抗DR5单克隆抗体(mAb)诱导肿瘤细胞凋亡的功能.结果 获得1株可分泌抗DR5 mAb的杂交瘤细胞系R150.SDS-PAGE电泳检测证实,获得的R150可特异性地识别DR5;R150的Ig亚类为IgGI(λ型);腹水效价为1×106;通过流式细胞仪可敏感地检测到肿瘤细胞表面DR3的表达水平及R150诱导肿瘤细胞凋亡情况.结论 获得1株可分泌抗DR5 mAb的细胞系R150,抗体具有效价高、特异性强等特点并能有效诱导肿瘤细胞凋亡,具有较好的应用价值.
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siRNA沉默人乳腺癌细胞株Livin基因的实验研究
目的 探讨Livin-siRNA对人乳腺癌细胞株MCF-7和ZR-75-30中Livin基因及蛋白表达的下调作用,以及对其增殖能力的影响.方法 构建3个靶向Livin的siRNA真核表达载体,分别转染乳腺癌细胞后,通过实时定量PCR、Western blot技术检测人乳腺癌细胞MCF-7,ZR-75-30的Livin在mRNA、蛋白水平的表达.采用MTF法检测si-Livin2对乳腺癌细胞增殖的抑制作用.结果 成功构建了针对Livin基因的3个特异性siRNA表达载体.它们不同程度地抑制了乳腺癌细胞Livin基因的表达,以si-Livin2抑制效率高.si-Livin2作用于人乳腺癌细胞株MCF-7和ZR-75-30后能明显抑制其Livin基因的mRNA及蛋白表达水平(P＜0.05),并且能有效抑制细胞的增殖.结论 Livin-siRNA能特异性抑制乳腺癌细胞的Livin mRNA及其蛋白的表达,抑制细胞增殖,为进一步研究沉默Livin基因对人乳腺癌细胞生物学功能的影响奠定了基础.
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人Eppin蛋白的基因克隆和原核表达
目的 克隆人附睾蛋白酶抑制蛋白(epididymal protease inhibitor,Eppin)基因,构建原核表达载体,诱导其在大肠杆菌中表达,并鉴定重组蛋白的免疫学活性.方法 采用RT-PCR克隆人Eppin基因,将其克隆到原核表达载体pMAL-c2X,并通过IPTG诱导目的 基因在大肠杆菌中表达.Amylose树脂预装柱层析法提纯重组蛋白,并用SDS-PAGE和蛋白印迹法鉴定.结果 PCR扩增出396 bp目的 基因片段Eppin.工程菌pMAL-c2X-Eppin经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带,Mr约为54 000与预期的一致,重组蛋白用Amylose树脂提纯,纯化蛋白的蛋白质经SDS-PAGE分析可见单一条带.Western blot显示重组蛋白质有良好的免疫活性.结论 获得了Eppin融合蛋白在原核系统中的稳定表达,为后续深入研究其抗生育功能奠定基础.
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摩氏摩根菌噬菌体MmP1内溶素基因的克隆、表达及活性鉴定
目的 克隆、表达摩氏摩根菌噬菌体编码的内溶素基因,为内溶素的生物学活性检测提供纯化蛋白产物.方法 以摩氏摩根菌噬菌体基因组为模板扩增内溶素全长基因,并将其插入原核表达载体pQE31中,成功构建了内溶素重组质粒pQE31-M12;将重组质粒转化大肠埃希菌JM109,获得了表达稳定的基因工程菌,并优化了表达条件;该表达菌经过超声裂解及SDS-PAGE电泳,确定重组融合蛋白的表达形式,并利用亲和层析及分子筛层析纯化目的 蛋白;利用平板扩散法检测重组蛋白抑菌活性.结果 内溶素基因重组质粒pQE31-M12经酶切及测序鉴定正确;重组工程菌经0.5 mmol/L IPTG在37℃诱导5 h后内溶素重组蛋白可获得佳分泌型表达,对其蛋白裂解上清行非变性的Ni-NTA柱亲和层析以及分子筛层析纯化后,获得单一条带的目的蛋白;该重组蛋白对金黄色葡萄球菌的生长具有明显的抑制作用.结论 成功构建了表达内溶素基因的大肠杆菌工程菌,获得了纯化的表达产物,并初步证明该内溶素蛋白可抑制金黄色葡萄球菌的生长,为进一步改组内溶素的结构并增强其抗菌功能奠定了基础.
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PINCH-1因子在白血病骨髓基质细胞中的表达及意义
目的 研究PINCH-1因子在急性白血病骨髓基质细胞中的表达及意义.方法 培养骨髓基质细胞,用Western-blotting和RT-PCR观察PINCH-1 mRNA和蛋白的表达情况;进行免疫细胞化学和免疫荧光染色,观察PINCH-1蛋白的表达及其在细胞内的分布情况.结果 在急性淋巴细胞白血病和急性髓系白血病患者骨髓基质细胞中,PINCH-1在mRNA水平和蛋白水平均比正常骨髓基质细胞增高(P＜0.01);急性淋巴白血病与急性髓系白血病之间PINCH-1蛋白的表达有显著差异(P＜0.01),但mRNA表达无明显差别.结论 PINCH-1在急性白血病骨髓基质细胞表达明显高于正常骨髓基质细胞,可能与急性白血病发生发展相关.
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人CD59突变促进糖尿病皿管并发症发生
目的 证实人CD 59突变抗补体活性下降,促进糖尿病血管并发症的发生发展.方法 构建2种HMCD59重组质粒,转染CHO细胞;FCM筛选高表达细胞,荧光免疫测定和固相酶免疫测定加一步检测阳性细胞.糖化培养阳性细胞,BCECF染料释放试验比较糖化人突变CD59和糖化人正常CD59抗补体活性.ELISA测定30例糖尿病无血管病变组和30例Ⅱ型糖尿病血管病组血清PDGF、bFGF含量.结果 筛选细胞株表达率分别为59.8%、53.0%、54.5%;BCECF染料释放试验显示糖化后人突变CD59细胞比较糖化前染料释放率高(P＜0.01);而正常CD59细胞较糖化后细胞染料释放率差异不明显(P＞0.05).Ⅱ型糖尿病有血管病变组与糖尿病无血管病变组相比,血清PDGF、bFGF明显增高(P＜0.01).结论 证实人CD59突变后易糖化抗补体活性下降加速糖尿病血管病的发生发展.
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抗髓过氧化物酶抗体检测对诊断自身免疫性肝炎的临床意义
目的 探讨抗髓过氧化物酶(anti-myeloperoxidase,MPO)抗体检测对诊断自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)的临床意义及诊断的评估方法.方法 研究对象为56例AIH患者、176例非AIH及40例健康体检者,采用ELISA法检测抗MPO抗体和间接免疫荧光法(IIF)检测抗核抗体(anti-nuclear antibodies,ANA)、抗平滑肌抗体(smooth muscle antibodies,SMA)和抗中性粒细胞胞质抗体(anti-neutrophil cytoplasmic antibodies,ANCA)等自身抗体并观察其临床评估指标,对其结果进行回顾性分析.结果 1)56例AIH与176例非AIH检测MPO结果显示其阳性率分别为64.3%(36/56)和1.7%(3/176);组间比较,P＜0.01差异有非常显著性意义.2)AIH及非AIH各疾病检测结果为SMA抗体阳性率高为69.6%(39/56),MPO、ANCA和SMA抗体检测在AIH与PBC中,经X2检验,P＜0.01差异均有非常显著性意义.3)AIH患者的临床评价指标在患病率不改变的情况下,结果显示除阴性似然比外高均为SMA;阴性似然比ANCA高为1.25.4)AIH-Ⅰ患者检测MPO抗体的结果阳性率为87.2%(34/39);AIH-Ⅱ患者无1例阳性;AIH-Ⅲ患者2例阳性.表明AIH-Ⅰ患者与其密切相关.5)AIH-Ⅰ患者的临床评价指标在患病率不改变的情况下,结果显示除阴性似然比外亦是SMA高;阴性似然比ANCA高为0.19.结论 血清抗髓过氧化物酶抗体联合其他自身抗体的检测对诊断、治疗和阻止AIH的发展有着十分重要作用.对提高AIH在临床上同其它肝病鉴别诊断和治疗有着非常重要的意义.
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10例X连锁无丙种球蛋白血症的临床分析和基因诊断
目的 通过对X连锁无丙种球蛋白血症(XLA)患儿Bruton's酪氨酸激酶(BTK)基因变异和临床特征的分析,提高临床医师对XLA的认识.方法 收集2008年2月至2008年12月在我院住院的10例XLA患儿外周静脉血,采用RT-PCR方法扩增BTK cDNA,PCR产物直接双向测序.突变结果经DNA相应外显子部位扩增、测序进一步证实.结果 10例XLA患儿中7例患儿发现有BTK基因突变.6例位于编码区,1例位于内含子区.突变类型包括错义突变3例,无义突变1例,缺失2例和内含子剪接位点突变1例.其中5例(F583L,135Nfs177X,R123X,C502Y,IVS9+2T＞C)为首次报道的新型突变.进行基因分析的6例XLA患儿母亲均为携带者.结论 BTK基因分析有助于XLA患儿的进一步明确诊断,而且有利于发现携带者和进行遗传咨询.
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赤潮藻毒素GTX_(2,3)免疫吸附生物条码检测方法的建立
目的 为了提高赤潮藻毒素GTX_(2,3)检测方法的灵敏度,以抗GTX_(2,3)单抗-纳米金-DNA为基础,建立检测GTX_(2,3)高灵敏度的免疫吸附生物条码方法.方法 制备腹水型GTX_(2,3)单克隆抗体,饱和硫酸铵、辛酸硫酸铵和Protein A亲和层析法进行纯化.确定单抗与纳米金标记偶联物的佳pH和小蛋白浓度,制备单抗-纳米金-DNA,应用于竞争ELISA建立免疫吸附生物条码检测技术.结果 在pH8.5、0.096 mg/mL抗体浓度下成功偶联GTX_(2,3)单抗和纳米金,并制备出GTX_(2,3)单抗-纳米金-条码DNA复合物,建立的检测GTX_(2,3)的免疫吸附生物条码检测法灵敏度为0.74μg/mL.结论 本研究建立了GTX_(2,3)高灵敏的免疫吸附生物条码法.
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采用噬菌体展示技术筛选玉米赤霉醇的单链抗体
目的 从噬菌体单链抗体库中筛选玉米赤霉醇(ZER)的阳性克隆.方法 人工抗原ZER-BSA作为包被原,采用负筛选,经过连续3轮固相"亲和-洗脱-富集"筛选,富集了噬菌体抗体库中阳性克隆的比例,同时采用Trypsin和ZER竞争洗脱2种洗脱方法.ELISA鉴定阳性克隆,运用SDS-PAGE方法对大肠杆菌分泌蛋白进行了时问条件的摸索.结果 随着淘洗轮数的增加,特异性噬菌体抗体得到了高度富集,从6个96孔板的克隆中筛选到10株阳性克隆(阳性大于阴性3倍视为阳性克隆),将菌株转换成功的5株测序发现有4株不同的阳性克隆,对一株进行了原核系统的表达,SDS-PAGE确定了目的 条带的存在,相对分子质量为Mr28 000.结论 为在天然噬菌体抗体库中制备玉米赤霉醇的抗体奠定了基础.
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SPG血清白蛋白结合区和RSV的G蛋白片段融合蛋白的构建和表达
目的 构建表达呼吸道合胞病毒(RSV)G蛋白片段(来自130-230氨基酸)和来自链球菌蛋白G(SPG)血清白蛋白结合区(BB)的原核表达质粒,寻找适合的表达和纯化条件,获得融合表达蛋白,为进行体内外实验检测奠定基础.方法 利用PCR技术,通过提取病毒cDNA和链球菌基因组DNA为模板扩增目的 片段,构建融合表达质粒PET32a(BBG2Na).转化宿主菌E.coli BI21(DE3)进行表达,并采用亲和层析纯化目的 蛋白.结果 Thx-G2Na-BB在E.coli BL21(DE3)中可获得高效表达,表达量可达菌体蛋白的68.3%,并以可溶性的形式表达,纯化后的目的 蛋白纯度可达90%.结论 实现Thx-G2Na-BB的融合表达,此蛋白可作为抗原用于重组蛋白疫苗的筛选.
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MAGE-12 B细胞表位联合应用的免疫原性研究
目的 设计合成肿瘤抗原MAGE-12的B细胞表位并研究其表位联合应用的免疫原性.方法 在MAGE-12的B细胞表位序列MAGE-12_(3-14)(LEQRSQHCKPEE)、MAGE-12_(82-93)(QSDEGSSNEEQE)的基础上,采用4分枝多重抗原肽结构设计合成抗原肽后分MAGE-12_(3-14)组、MAGE-12_(82-93)组、MAGE-12_(3-14)联合MAGE-12_(82-93)组,分别以MAGE-12_(3-14)、MAGE-12_(82-93)、MAGE-12_(3-14)联合MAGE-12_(83-93)抗原肽免疫C-57BL/6小鼠,产生多克隆抗体,应用ELISA和免疫组化实验检测多克隆抗体是否为抗原肽的特异性抗体.结果 免疫C-57BL/6小鼠后可产生MAGE-12的抗原特异性的多克隆抗体,且多表位抗原肽联合使用组抗体效价高于单表位抗原肽组产生的抗体效价.结论 证明MAGE-12的B细胞多表位抗原肽联合使用的免疫原性强于单个B细胞表位抗原肽的免疫原性.
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凋亡对CD4~+CD25~+调节性T细胞增殖和功能的影响
0CD4~+ CD25~+调节性T细胞是机体维持自身免疫耐受的重要组成部分,具有免疫抑制及免疫无能的特性,是重要的调节性T细胞(Treg细胞)亚群之一;细胞凋亡也可以诱导免疫耐受,本文将就细胞凋亡和CD4~+ CD25~+ 调节性T细胞之间的关系以及相互作用作一综述.
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Th17细胞分化调节研究的新进展
CD4~+Th细胞激活后会分化为生物学功能不同的不同谱系辅助T细胞.Th17细胞是新近被鉴定出的一种效应Th细胞,它在各种感染性疾病和自身免疫性性疾病中发挥重要作用.近年来,人们对Th17细胞的分化机制有了突飞猛进的认识.本文对Th17细胞独特的基因编码以及在细胞因子水平和转录水平的调控的新研究成果作一综述和展望.
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序列分析鉴定HLA新等位基因HLA-B*4078
人类白细胞抗原(HLA)是人类复杂的免疫遗传系统,具有显著的群体和地区间差异.HLA作为一种移植抗原,在器官移植和骨髓移植中起着重要的作用~([1]).新的HLA等位基因的不断发现,不但可以在帮助患者找到更适宜的供体,减少发生排斥反应的危险,提高移植的成功率,而且还可以广泛用于法医鉴定,人类种族迁移等相关研究.
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中草药免疫增强剂对鸡哈德氏腺的免疫组织化学研究
本研究运用免疫组织化学染色方法对不同日龄海兰褐公鸡给予中草药免疫增强剂,然后对其外分泌腺--哈德氏腺中的免疫细胞进行动态观察,旨在探索免疫增强剂免疫增强作用的机理,以期为临床应用提供理论依据.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 Z1 |
| 1999 | 01 02 03 04 |
