免疫学杂志
Immunological Journal 면역학잡지
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IL-13对与成纤维细胞共培养的乳腺癌细胞表达Bcl-2和TIGAR的影响
目的 探索白细胞介素-13(interleukin-13,IL-13)对乳腺癌作用的分子机制.方法 采用Transwell小室方法共培养人乳腺癌细胞与人成纤维细胞;RT-qPCR和Western blot检测IL-13对乳腺癌细胞抗凋亡因子B-cell lymphoma-2(Bcl-2)和TP53-induced glycolysis apoptosis regulator (TIGAR)表达的影响;AnnexinV和CCK-8实验检测IL-13对乳腺癌细胞凋亡和增殖的影响.结果 IL-13上调了与人成纤维细胞CCC-ESF-1 (ESF)共培养的人乳腺癌细胞BT-474的抗凋亡因子Bcl-2和TIGARmRNA和蛋白的表达.与其他各组比较,BT-474+ESF+IL-13组BT-474细胞的Bcl-2和TIGAR表达显著上调(P＜0.05);加入IL-13可抑制BT-474细胞的凋亡,与BT-474+ESF共培养组比较,BT-474+ESF+IL-13共培养组的早期调亡的BT-474细胞下降了10.85倍;IL-13促进了BT-474细胞增殖,BT-474+ESF+IL-13组与各组比较,培养48 h、72h、96 h和120 h后,BT-474细胞的增殖显著高于其它各组(P＜0.05).结论 IL-13可上调与人成纤维细胞共培养的人乳腺癌细胞BT-474抗凋亡因子Bcl-2和TIGAR的表达;IL-13对乳腺癌作用的分子机制涉及Bcl-2和TIGAR.
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血管紧张素Ⅱ在EAM小鼠中的表达及致病作用的初步研究
目的 探讨EAM小鼠血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)水平及其在EAM发生中的作用.方法 首先诱导EAM模型,ELISA检测ATⅡ的表达水平,然后实验分为对照组、EAM组、EAM+氯沙坦(ATⅡ抑制剂)组,第21天处死小鼠,HE染色观察心肌炎症浸润情况;RT-qPCR检测心脏组织中相关炎症因子(IL-1β、IL-6、TGF-β)的mRNA的表达水平;Transwell实验检测ATⅡ对巨噬细胞迁移作用及氯沙坦的抑制作用.结果 成功诱导小鼠心肌炎模型,心肌组织中有大量的淋巴细胞浸润,ATⅡ水平增高,具有促进炎症因子释放及巨噬细胞迁移的作用;使用ATⅡ抑制剂氯沙坦治疗后,心肌组织炎症评分降低,减少了淋巴细胞浸润;IL-1β、IL-6水平降低,而抑炎因子TGF-β表达高于EAM组;ATⅡ对巨噬细胞的迁移作用受到抑制.结论 ATⅡ可能是EAM发生的重要因素,抑制ATⅡ能够有效缓解心肌炎症损伤.
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肺癌T7噬菌体文库中MUC1蛋白抗原模拟表位的筛选
目的 利用噬菌体表面展示技术,从肺癌T7噬菌体展示文库中筛选MUC1蛋白抗原的模拟表位.方法 以MUC1单克隆抗体为靶分子,对肺癌T7噬菌体文库进行淘洗筛选,得到的阳性克隆进行测序并推导其氨基酸序列,对得到的阳性噬菌体克隆进行鉴定.结果 经3轮淘选,得到20个阳性克隆.测序获得AAPDFRP、SAPDDRP 2种氨基酸序列,对MUC1单抗的抑制率均在50％以上,与肺癌血清结合特异性较高,此2种蛋白序列可模拟MUC1蛋白抗原表位.结论 通过噬菌体展示技术成功筛选到MUC1蛋白的模拟表位序列XAPDXRP(X为任意氨基酸),对肺癌的早期诊断有一定的参考价值.
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MicroRNA Let-7a在小鼠变应性鼻炎中的作用
目的 探讨microRNA Let-7a在小鼠变应性鼻炎中的作用.方法 选取32只8周龄成熟雌性C57BL/6小鼠随机分成4组:Let-7a组、Let-7a对照组、OVA组和PBS组,每组8只.Let-7a组、Let-7a对照组及OVA组采用卵清蛋白(OVA)致敏激发,建立小鼠变应性鼻炎模型.Let-7a组于第1、2、3次激发前半小时给予Let-7a和脂质体2000混合物,而Let-7a对照组给予Let-7a对照和脂质体2000混合物.PBS组以PBS代替OVA.造模成功后计数小鼠搔鼻次数、鼻腔灌洗液中炎性细胞情况,取小鼠鼻腔黏膜固定后染色评估鼻黏膜杯状细胞增生病理学变化,检测小鼠鼻腔灌洗液中IL-4 、IL-13及IFN-γ水平.结果 与Let-7a对照组小鼠相比,Let-7a组小鼠搔鼻次数明显增加,鼻腔黏膜嗜酸性粒细胞浸润及杯状细胞增生显著,具有明显统计学差异(P＜0.05),鼻黏膜中IL-4及IL-13显著增高(P＜0.05),而IFN-γ无明显差异(P＞0.05).结论 Let-7a促进变应性鼻炎的发生及发展.
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IL-7对诱导型Tregs表型及功能的影响
目的 初步探讨IL-7对C57BL/6小鼠脾细胞诱导CD4+CD25+调节T细胞(iTregs)的表型及功能的影响.方法 采用磁珠分选技术分选出小鼠CD4+CD25-T细胞,体外环境下给予anti-CD3、anti-CD28、TGF-β、IL-2和维甲酸共同诱导7d,生成CD4+CD25+调节T细胞(iTregs),流式细胞术分析经IL-7刺激24 h后iTreg的表型变化,同时用CFSE稀释法观察其对iTreg细胞抑制功能的影响.结果 CD4+CD25-T细胞通过anti-CD3、anti-CD28、TGF-β、IL-2和维甲酸共同作用,成功诱导为CD4+CD25+iTregs;通过10 ng/ml IL-7干预刺激,iTregs的CD39 (P=0.000 7)和CTLA-4(P=0.011 0)表面分子表达显著下降,iTregs凋亡显著增加(P=0.002 0),抑制功能显著减弱(P=0.001 3).结论 在高质量浓度IL-7的环境中,iTregs抑制功能明显下降且更易于凋亡,说明体外大量诱导的iTregs应用于高质量浓度IL-7机体中,可能是无法达到理想治疗效果的原因之一.
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LAT棕榈酰化在裸鼠T系白血病细胞信号转导中的作用
目的 建立人Jurkat淋巴细胞白血病裸鼠模型,观察Jurkat细胞在小鼠体内存活及增殖情况,研究T细胞活化连接蛋白(LAT)及其棕榈酰化在T细胞活化信号转导中的相关作用.方法 将Balb/c纯系雌性裸鼠随机分为正常Jurkat组、正常LAT转染组、突变LAT转染组以及空白对照组,每组6只.连续2d腹腔定量注射环磷酰胺后,实验组小鼠尾静脉注射人Jurkat细胞株5×106/只,对照组小鼠尾静脉注射等量PBS溶液.观察小鼠发病一般体征、体质量及外周血白细胞数量变化,濒死小鼠处死后取病理组织进行HE染色观察.流式细胞术(FCM)检测肿瘤细胞阳性率.结果 接种肿瘤细胞后,实验组小鼠逐渐出现体质量减轻、弓背、精神萎靡等症状,外周血WBC计数逐渐增高,生存时间缩短.骨髓及肝脾组织可见肿瘤细胞浸润.流式细胞仪检测结果显示,正常LAT转染组肿瘤细胞阳性率高于其他各组.结论 成功建立人Jurkat细胞裸鼠动物模型,从体内实验进一步证实LAT棕榈酰化促进T细胞活化增殖,而LAT棕榈酰化位点突变后,将阻碍T细胞活化信号的传递.
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过敏性休克小鼠血清中类胰蛋白酶、类糜蛋白酶及PAR-2的表达
目的 探讨蛋白酶激活受体2(PAR-2)在过敏性休克中的作用,为过敏性休克的治疗提供新的思路.方法 昆明种雄性小鼠随机分成致敏组和对照组.致敏组小鼠于第1天腹腔注射致敏原,1周后加强注射1次,饲养3周后尾静脉注射致敏原诱发过敏性休克.对照组以同等量的PBS缓冲液代替.酶联免疫吸附法(ELISA)检测致敏组和对照组小鼠血清类胰蛋白酶及类糜蛋白酶含量;RT-PCR法检测血液中PAR-2相对表达量.结果 成功建立过敏性休克小鼠模型,RT-PCR结果显示致敏后小鼠PAR-2 mRNA相对表达量为3.372±0.28,对照组为0.759±0.062,2组比较有显著性差异(P＜0.01);ELISA结果显示致敏后小鼠血清类胰蛋白酶含量为72.378 μg/L±8.018 μg/L,正常对照组为20.265 μg/L±1.953 μg/L,2组比较有显著性差异(P＜0.01),致敏后小鼠血清类糜蛋白酶含量(16.186 μg/L±0.959 μg/L)低于对照组(34.905μg/L±3.972 μg/L),组间比较有显著性差异(P＜0.01).结论 PAR-2可能参与了过敏性休克的发病过程.
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Lunasin对实验性类风湿关节炎大鼠滑膜成纤维细胞增殖与凋亡的影响
目的 探讨大豆多肽Lunasin对实验性类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)大鼠滑膜成纤维细胞(synovial fibroblasts, SFs)增殖与凋亡的影响及可能的作用机制.方法 采用弗氏完全佐剂(freund's complete adjuvant,FCA)注入大鼠足跖皮内建立大鼠RA模型,造模成功后从大鼠关节滑膜组织中分离纯化出SFs,然后与不同浓度的Lunasin(0、50、100、200 μmol/L)分别孵育24、48和72 h,MTT法检测SFs增殖;RT-PCR、 Western blot检测Caspase3、 Bax、Bcl-2基因及蛋白的表达.结果 Lunasin可显著抑制体外培养的滑膜成纤维细胞增殖,增加Caspase3、Bax的表达,抑制Bcl-2基因和蛋白的表达,并呈现一定的时间和剂量依赖关系.结论 Lunasin对RA的治疗作用可能与其抑制SFs增殖和促进凋亡有关.
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鲍曼不动杆菌外膜蛋白A1S_1969的克隆表达及免疫保护机制初步研究
目的 制备鲍曼不动杆菌(Ab)A1S_1969重组蛋白,利用小鼠全身脓毒血症感染致死模型评价A1S_1969重组蛋白的免疫保护效果,探讨可能的免疫保护机制,为筛选Ab疫苗有效的保护性抗原奠定基础.方法 基于反向疫苗学技术筛选出Ab外膜蛋白A1S_1969,利用pGEX-6P-2质粒构建GST融合表达载体,重组表达的A1S_1969蛋白经亲和层析高效纯化后与铝佐剂吸附制备而成重组A1S_1969免疫原;采用Balb/c小鼠全身感染模型评价A1S_1969重组蛋白的免疫保护效果,通过ELISA检测免疫小鼠IgG抗体滴度和IgG抗体亚型.制备A1S_1969重组蛋白抗血清进行体外调理吞噬杀菌实验.结果 成功克隆、表达并纯化A1S 1969重组蛋白,纯度＞90％.动物免疫保护结果显示A1S_1969重组蛋白组小鼠存活率为55.6％,对照组小鼠存活率为20.0％(P＜0.05);末次免疫7d后小鼠体内总IgG抗体滴度为1:64 000,以IgG1亚型为主;体外调理吞噬杀菌实验结果显示A1S_1969特异性血清抗体可以增强中性粒细胞对Ab的杀菌作用,实验组杀菌率可达55％,对照组无杀菌活性.结论 A1S_1969重组蛋白可显著提高全身脓毒血症感染致死模型小鼠的存活率,具有良好的免疫保护效果.
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Mda-7/IL-24对B细胞淋巴瘤化疗敏感性的影响
目的 研究Mda-7/IL-24对B细胞淋巴瘤化疗敏感性的影响并探讨其作用机制.方法 构建稳定过表达Mda-7/IL-24的人B表型淋巴瘤Raji和Daudi细胞株,MTS法检测稳定转染Mda-7/IL-24对Raji和Daudi细胞在顺铂、表柔比星及长春新碱作用下化疗敏感性的影响,并计算IC50值;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡水平及胞内罗丹明-123(rhodamine-123)聚集量;RT-PCR及Western blot技术分别从mRNA及蛋白水平检测转染Mda-7/IL-24对Raji和Daudi细胞表达耐药相关基因MDR1、MRP1及BMI1水平的影响.Western blot技术检测转染Mda-7/IL-24对Raji和Daudi细胞总ERK1/2及p-ERK1/2表达水平的影响.结果 在CDDP、epirubicin及VCR作用下,过表达Mda-7/IL-24的Raji和Daudi细胞株增殖水平明显下降,化疗敏感性明显增高,而化疗药物IC50值明显下降,同时,细胞凋亡水平明显增加;过表达Mda-7/IL-24的Raji和Daudi细胞肿瘤耐药相关基因MDR1、MRP1、BMI1、总ERK1/2及p-ERK 1/2的表达水平均明显下降,而胞内Rhodamine-123聚集量明显增加.结论 转染Mda-7/IL-24可能通过调节ERK途径的活化改变肿瘤多药耐药相关基因的表达,从而促进B细胞淋巴瘤对化疗药物的敏感性.因此Mda-7/IL-24在B细胞淋巴瘤的治疗中可能具有防治多药耐药的作用.
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早期CVVH治疗坏死性筋膜炎并发脓毒性休克的临床研究
目的 评价早期持续静-静脉血液滤过(CVVH)在坏死性筋膜炎(NF)并发脓毒性休克中的治疗效果.方法 回顾性研究坏死性筋膜炎并发脓毒性休克患者实施CVVH治疗33例,其中早期(24h内)实施CVVH治疗15例(试验组),晚期实施CVVH治疗13例(对照组),比较2组患者2、4、6d体内炎症指标CRP、TNF-α、IL-1、IL-6、IL-10,免疫指标淋巴细胞CD4/CD8,血流动力学指标ELWI、LAC,平均氧合指数(OI)、平均机械通气时间(MVT)、平均ICU住院日(ALST)及死亡率.结果 试验组IL-1、IL-6、IL-10、ELWI、LAC水平均明显低于相应时间对照组水平,OI明显高于对照组(P＜0.05);CD4/CD8值、CRP及TNF-α水平无统计学差异性(P＞0.05);MVT、ALST及死亡率均明显低于对照组,有统计学意义(P＜0.05).结论 NF并发脓毒性休克早期实施CVVH治疗可降低炎性介质水平,重塑炎症与抑炎平衡,降低ELWI,改善氧合指数,缩短MVT、ALST及降低死亡率.
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Ⅰ型固有淋巴细胞对慢性乙型肝炎的作用及机制
目的 初步探讨固有淋巴细胞(ILCs)亚群如ILC1和ILC2(分别为适应性免疫应答中Th1和Th2的映像)对病原体感染的作用机制.方法 收集临床慢性乙肝(CHB)患者和健康对照外周血和肝组织,运用流式细胞术、定量PCR和ELISA方法,检测CHB患者中ILC1和ILC2的频率、Ⅰ型和Ⅱ型转录因子和细胞因子水平,并与CHB患者临床指标进行相关性分析.结果 CHB患者总ILCs中,ILC1转录因子T-bet、效应细胞因子IFN-γ、ILC1分化相关信号通路分子IL-12/IL-12R水平均显著升高.升高的ILC1亚群频率与CHB患者肝损伤显著相关,但与替比夫定疗效无明显关联.虽然ILC2相关的转录因子、细胞因子等在CHB中也升高,但升高的幅度均低于ILC1细胞.而且,ILC2细胞活性与HBV拷贝或肝损伤均没有显著关联.结论 本研究结果提示了ILC1在CHB病理过程中的潜在促炎作用,以及ILC1及其相关分子可能是CHB诊断、预后甚至治疗的潜在干预靶标.
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分枝杆菌表达质粒的快速构建及ClpC2基因功能初步研究
目的 通过一种不受到序列限制、酶切连接反应一步进行的分子克隆方法,构建分枝杆菌ClpC2重组表达质粒,检测其在耻垢分枝杆菌中的蛋白表达并对其功能进行初步探讨.方法 利用识别甲基化位点的内切酶FspEⅠ进行一步法酶切、连接反应,构建重组质粒PMV261(+)-ClpC2.将重组质粒转入耻垢分枝杆菌,利用SDS-PAGE和Western blot检测ClpC2基因在耻垢分枝杆菌中的表达以及氧化应激、酸应激对其功能进行初步探讨.结果 利用FspE Ⅰ快速构建了分枝杆菌表达质粒ClpC2,将其成功电转至耻垢分枝杆菌中,SDS-PAGEA和Western blot检测其蛋白的表达,His单抗和兔多抗均能检测到目的条带,Mr大小27 570.氧化应激及酸应激实验表明ClpC2重组耻垢分枝杆菌与空载耻垢分枝杆菌在对抗应激方面无明显差异.结论 成功构建了一种不受序列限制的分子克隆方法以及分枝杆菌ClpC2重组表达质粒,Western blot表明其具有一定的免疫原性,氧化应激及酸应激表明ClpC2重组耻垢分枝杆菌对抗应激方面无明显改变,为进一步深入研究ClpC2基因的功能奠定了基础.
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重组相思子毒素B链蛋白的制备与分析
目的 构建、表达和纯化相思子毒素B(ATB)链蛋白并分析其抗原性和毒性.方法 运用密码子优化软件优化ATB基因,合成目的基因亚克隆至原核载体pQE-80L构建表达质粒pQE80L-ATB,转化至E.coliM 15获得表达工程菌株,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化;通过Western blot检测重组蛋白的抗原性;采用人正常肺上皮细胞Beas-2B和胃黏膜细胞GES-1进行重组蛋白的细胞毒性实验.结果 ATB开放阅读框架全长804 bp,编码268个氨基酸残基;表达工程菌株在30℃、1 mmol/L IPTG,3h后获得包涵体形式表达的目的蛋白,相对分子质量均约为30 000,经Ni-NTA亲和层析柱纯化后纯度达97％以上,Western blot和MTS实验结果表明,目的蛋白能特异性识别抗相思子毒素多克隆抗体且无毒性.结论 重组ATB蛋白实现高表达,具有良好的抗原性,为相关疫苗研究奠定基础.
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mTOR调节免疫细胞分化与功能的研究进展
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)是一种进化保守的非典型丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,属于磷脂酰肌醇激酶相关激酶蛋白质家族成员.mTOR可整合来自营养、能量、生长因子和环境压力对细胞的刺激信号,调控细胞生长、增殖、分化及细胞周期等过程.在免疫系统研究中,mTOR可传递和集成来自免疫微环境的信号,作为免疫功能的关键调节器.近来研究证实,mTOR信号通路在免疫细胞分化发育及功能活性中发挥重要的调节作用.
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免疫治疗在三阴型乳腺癌中的研究进展
三阴型乳腺癌是特指雌激素受体、孕激素受体及人表皮生长因子受体2均阴性的乳腺癌患者,由于其对内分泌治疗无效及目前无可利用的分子靶向药物,使其临床治疗面对重大挑战,因此,探索新的方法治疗三阴型乳腺癌尤为重要.肿瘤的免疫治疗是继放疗、化疗和手术治疗之后的第4种有效的治疗方法,本文就免疫治疗在三阴型乳腺癌中的研究进展作一综述.
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免疫避孕疫苗的新研究进展
免疫避孕疫苗是利用多种实验技术,从参与生殖过程各要素中筛选出蛋白抗原或表位抗原,通过免疫避孕对象,在生殖道局部或全身产生中和抗体,从而影响和破坏生殖过程,起到延长妊娠间隔和避孕的作用.本文对免疫避孕现状和未来发展做一综述.
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破膜剂对流式细胞术检测Th1/Th2/Th17细胞频率的影响
目的 探讨不同破膜剂对流式细胞术检测Th 1/Th2/Th 17细胞频率的影响.方法 以健康人外周血为研究对象,使用多参数流式细胞仪分析,比较3种不同破膜剂(常规改进的破膜剂、eBioscience公司破膜剂、BD公司破膜剂)对CD4+T淋巴细胞内干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-4(IL-4)和白介素-17(IL-17)检测结果的影响.结果 在相同条件下,eBioscience公司破膜剂检测到的IL-4+ CD4+T细胞频率显著高于其它2组(P＜0.05);改进的破膜剂组(GJ)IL-17+CD4+T细胞频率明显高于其它组(P＜0.05);但IFN-γ+CD4+T细胞的频率在3组间无统计学差异(P＞0.05).结论 3种破膜剂破膜后均可检测到IFN-γ+CD4+ (Th1)、IL-4+CD4+(Th2)、IL-17+CD4+(Th17)T细胞,但不同破膜剂对不同类型Th细胞的检出频率有影响,因此操作过程中应根据不同的需求选择合适的破膜剂.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 Z1 |
| 1999 | 01 02 03 04 |
