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中药火把花根对油酸致急性肺损伤大鼠 气道紧密连接蛋白表达的影响
目的：观察中药火把花根对急性肺损伤（ALI）大鼠支气管上皮紧密连接蛋白claudin-2和ZO-1表达的影响，探讨火把花根对ALI的保护机制。方法将24只健康成年清洁级雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、ALI组、火把花根预处理组，每组8只。经尾静脉注射油酸0.04mL/kg复制大鼠ALI模型，对照组注射等量生理盐水（NS）；火把花根预处理组于制模前10d连续灌胃药物600mg·kg-1·d-1（2mL），对照组和ALI组灌胃等量NS。制模后4h取腹主动脉血、收集支气管肺泡灌洗液（BALF），测定血浆及BALF中蛋白含量，计算肺通透性指数（LPI）；处死大鼠取肺组织，测定肺湿/干质量（W/D）比值，苏木素-伊红（HE）染色后光镜下观察肺组织病理学变化，并进行肺损伤评分（LIS）；应用免疫组化法观察支气管黏膜上皮claudin-2和ZO-1的阳性表达及定位；应用蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测支气管黏膜上皮claudin-2和ZO-1的蛋白表达。结果镜下显示：与对照组比较，ALI组大鼠肺组织损伤明显，细胞水肿，细胞间连接结构紊乱，LIS、W/D及LPI均显著升高〔LIS（分）：3.81±0.42比0.40±0.08，W/D：7.68±0.64比4.44±0.39，LPI：0.89±0.15比0.38±0.05，均P＜0.01〕；claudin-2和ZO-1主要表达在支气管上皮细胞，且ALI组表达强度较对照组明显减弱；WesternBlot显示，ALI组claudin-2和ZO-1的蛋白表达较对照组显著下调〔claudin-2蛋白（灰度值）：0.43±0.31比2.16±1.33，ZO-1蛋白（灰度值）：1.25±0.41比2.82±0.76，均P＜0.01〕。与ALI组比较，火把花根预处理可明显改善ALI大鼠肺损伤程度〔LIS（分）：1.22±0.39比3.81±0.42，W/D：4.62±0.84比7.68±0.64， LPI：0.46±0.07比0.89±0.15，均P＜0.01〕，且claudin-2和ZO-1的蛋白表达均明显上调〔claudin-2蛋白（灰度值）：2.98±0.91比0.43±0.31，ZO-1蛋白（灰度值）：2.35±0.51比1.25±0.41，均P＜0.01〕。结论火把花根可能通过上调支气管上皮细胞紧密连接蛋白claudin-2及ZO-1的表达，以减轻ALI时气道上皮损伤，从而起到肺脏的保护性作用。
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Claudin-1、Claudin-2、Claudin-3和Claudin-4在胃癌中的表达及其意义
目的 探讨Claudin-1、Claudin-2、Claudin-3和Claudin-4在胃癌组织中的表达及意义.方法 选取手术切除的胃癌患者72例,术后均经病理证实为胃癌,且未合并其它肿瘤疾病,应用免疫组化ABC法检测胃癌手术标本中Claudin-1、Claudin-2、Claudin-3和Claudin-4的表达.结果 本样品中Claudin-2的表达率为73.6％,Claudin-4的表达率为44.4％,Claudin-1在腺癌中的表达水平明显降低,Claudin-3和Claudin-4在淋巴转移阳性中的表达更低,Claudin-3在T3、T4中的表达明显降低,Claudin-3与其它Claudin蛋白质具有显著相关性,在患者生存分析里,Claudin-4与良好的预后有关.结论 Claudin-3与Claudin-4可以作为胃癌的分子标志物,在淋巴侵袭的病例中检测Claudin-3与Claudin-4具有显著意义.
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麦冬皂苷B抑制非小细胞肺癌体内迁移机制的研究
目的：探究麦冬皂苷B （Ophiopogonin-B，OP-B）抑制非小细胞肺癌细胞株A549体内迁移的作用及其机制。方法：通过对裸鼠进行尾静脉注射A549细胞制成肺转移瘤模型，以37.5 mg·kg-1和75 mg·kg-1的剂量进行小鼠的口服灌胃给药21天；ELISA法检测外周血中炎症因子TNF-α、IL-1、IL-6的水平，同时取肺癌组织通过HE染色进行转移灶的观察，结合Western blot法进行Claudin-2、ephrinA1、EphA2、p-ERK、p-p38MAPK、p-SAPK/JNK的检测，探讨OP-B体内抑制肺癌A549细胞转移的分子机制。结果：高、低剂量OP-B对TNF-α水平均有抑制作用，以高剂量抑制作用更显著；形态学结果表明，高剂量OP-B更能显著抑制A549细胞的体内迁移，同时抑制p38MAPK的磷酸化激活；另外，高、低剂量OP-B均能促进Claudin-2的表达。结论：OP-B通过抑制TNF-α的水平进一步抑制p38MAPK的活化，同时上调Claudin-2的表达，抑制A549细胞的裸鼠体内迁移。
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肠屏障功能障碍及cingulin、claudin-2表达变化在溃疡性结肠炎中的作用
目的 通过检测溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)结肠黏膜组织形态学、超微结构变化及结肠黏膜扣带蛋白(cingulin)、claudin-2表达,探讨UC发病的可能机制.方法 40只清洁级雄性Balb-c小鼠随机分为2组,其中正常组10只,模型组30只.除正常组外,模型组采用自由应用DSS法制备UC模型,于第8周末处死全部小鼠.应用光镜及透射电镜观察结肠黏膜组织形态学、超微结构及上皮黏膜屏障变化;应用AB-PAS及HID-AB染色观察结肠黏蛋白变化;应用Real-time PCR技术检测结肠黏膜cingulin、claudin-2表达.结果 模型组光镜下见结肠黏膜不同程度缺损、溃疡形成,表面可见坏死组织及隐窝脓肿形成;电镜下见肠上皮细胞表面微绒毛稀疏,细胞连接间隙增宽,杯状细胞减少,线粒体肿胀,结构不清或呈空泡样变,部分可见核固缩,并见凋亡小体.模型组结肠黏蛋白表达明显较正常组减少,差异有统计学意义(P＜0.05).模型组cingulin、claudin-2表达分别为2.32±0.47、2.41±0.65,与正常组比较,其表达呈下降趋势,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 cingulin通过促进claudin-2表达上升,破坏肠黏膜屏障完整,增加肠黏膜通透性导致结肠黏膜免疫反应异常,可能在UC发病中占据重要地位.
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健脾清热活血类方药对溃疡性结肠炎肠黏膜功能障碍及claudin-2、claudin-5的影响
[目的]基于检测溃疡性结肠炎结肠黏膜组织形态、超微结构、上皮紧密连接,及紧密连接蛋白claduin-2、claudin-5表达的变化,探讨健脾清热活血方防治溃疡性结肠炎的可能机制.[方法]72只雄性Balb-c小鼠按体重随机分为6组,即正常组、模型组、对照组、治疗组(低、中、高剂量),每组12只.除正常组外,其余各组小鼠均采用自由饮用3％DSS 6周法制备溃疡性结肠炎模型,自第7周起分组给药,模型组予等剂量生理盐水,对照组予艾迪莎,治疗组予不同剂量健脾清热活血方,连续给药4周,第11周末处死全部小鼠.应用光镜、透射电镜及免疫组织化学观察结肠黏膜组织形态、超微结构及黏蛋白变化;应用荧光定量PCR技术检测紧密连接蛋白claudin-2、claduin-5表达变化.[结果]模型组光镜下见结肠黏膜不同程度缺损、溃疡形成,表面可见坏死组织,以及隐窝脓肿形成;电镜下见肠上皮细胞表面微绒毛稀疏,细胞连接间隙增宽,杯状细胞减少,线粒体肿胀,结构不清或呈空泡变,部分可见核固缩,并见凋亡小体;结肠黏蛋白分泌下降.治疗组光镜下见结肠黏膜充血肿胀、少量炎性细胞浸润,可见隐窝脓肿,未见明显溃疡;电镜下见肠上皮细胞表面绒毛排列尚整齐,可见线粒体肿胀,核固缩及凋亡小体;结肠黏蛋白分泌增加,与模型组比较,有统计学意义(P＜0.05).模型组claudin-2表达呈上升趋势、claudin-5表达呈下降趋势;治疗组claudin-2表达下降及claudin-5表达上升,经比较有统计学意义(P＜0.05).[结论]健脾清热活血方药可能通过降低claudin-2表达,上升claudin-5表达,促进黏膜修复,达到缓解溃疡性结肠炎的效用.
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紧密连接蛋白claudin-2在急性肾损伤患儿肾组织中的表达及意义
目的 研究紧密连接蛋白claudin-2在急性肾损伤(AKI)患儿肾组织中的表达变化,探讨claudin-2与肾脏病理损害及肾功能损害程度的关系.方法 2009年12月至2011年12月确诊为AKI并完善肾活检的24例患儿,依据病情严重程度分为轻症组(n=7)及重症组(n=17).对照组为12例肾小球轻微病变的孤立性血尿患儿.采用全自动生化分析仪比色法检测血清肌酐水平;采用肾脏病理计量评分法对肾小管间质损害程度进行分析;免疫组织化学方法检测肾组织claudin-2的表达;Pearson相关分析评估claudin-2与患儿肾脏病理评分及血肌酐水平间的关系.结果 AKI轻症组(190±68 μmol/L)与AKI重症组(477±128 μmol/L)血清肌酐水平均高于对照组(29±7μmol/L)(均P＜0.01),且AKI重症组血清肌酐水平高于AKI轻症组(P＜0.01).AKI轻症组患儿肾小管间质损害计分(10.4±1.7分)低于重症组(14.0±1.5分)(P＜0.05).AKI轻症组(5.0％±0.5％)与AKI重症组(3.7％±0.7％) claudin-2阳性表达面积均低于对照组(8.0％±0.7％)(均P＜0.01),且AKI重症组claudin-2阳性表达面积低于AKI轻症组(P＜0.01).claudin-2阳性表达面积与血肌酐水平及肾小管间质的病理损害评分均呈负相关(分别r=-0.809、-0.903,均P＜0.01).结论 AKI患儿肾组织claudin-2的表达水平发生变化,且claudin-2的表达水平与肾脏病理损害程度及肾功能损害程度密切相关.
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Claudin-1、2、3、4在胃癌中的表达
目的 探讨Claudin-1、Claudin-2、Claudin-3及Claudin-4在胃癌组织中的表达及意义.方法 选取手术切除的胃癌患者72例,术后均经病理证实为胃癌,且未合并其他肿瘤疾病,应用免疫组化ABC法检测胃癌手术标本中Claudin-1、Claudin-2、Claudin-3和Claudin-4的表达.结果 Claudin-2的表达率为73.6%,Claudin-4的表达率为44.4%.Claudin-1在腺癌中的表达水平明显降低,Claudin-3、Claudin-4在淋巴转移阳性中的表达更低,Claudin-3在T3、T4中的表达明显降低.Claudin-3与其他Claudin蛋白质具有显著相关性.在生存分析里,Claudin-4 与良好的预后有关.结论 Claudin-3与Claudin-4可以作为胃癌的分子标志物,检测Claudin-3与 Claudin-4在淋巴侵袭中具有重要意义.
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紧密连接蛋白claudin-1和claudin-2表达载体的构建
目的:为进一步研究紧密连接蛋白claudin-1和claudin-2在结肠直肠癌中的作用,分别构建包含claudin-1和claudin-2基因编码区的重组质粒,并在人类结肠癌细胞株T84中表达.方法:从T84细胞中提取总RNA,反转录PCR获得cDNA,插入pCRⅡ-TOPO质粒中测序鉴定.将测序正确的cDNA连接入pcDNA3.1(-)表达载体,进一步测序鉴定后转染入T84细胞,并采用反转录荧光定量实时PCR技术及Western blot技术检测重组质粒在T84细胞中的表达.结果:重组质粒经限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列分析,显示所克隆的DNA分子大小及序列正确.经重组质粒转染的T84细胞能大量稳定地表达目标蛋白.结论:本研究成功地构建了claudin-1/pcDNA3.1(-)和claudin-2/pcDNA3.1(-)重组表达质粒,并能在结肠癌细胞中稳定表达.
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溃疡性结肠炎组织中cingulin、claudin-2表达量与菌群紊乱、氧化应激及炎症的相关性
目的 :探讨溃疡性结肠炎组织中cingulin、claudin-2表达量与菌群紊乱 、氧化应激及炎症的相关性.方法 :选取在本院确诊并作为UC组的UC患者70例,同期至本院进行肠镜体检的结肠息肉患者90例作为结肠息肉组.对比两者肠道病变组织中cingulin、claudin-2蛋白表达量以及粪便标本中菌群分布 、血清中氧化应激及炎症相关指标的差异.结果 :UC组结肠病灶中cingulin、claudin-2蛋白表达量高于结肠息肉组;肠道内大肠杆菌的计数高于结肠息肉组,双歧杆菌 、乳酸杆菌的计数值低于结肠息肉组;血清中氧化应激指标GSH-Px、T-AOC的含量低于结肠息肉组,ROS、LHP的含量高于结肠息肉组;血清中炎症因子IL-4、IL-6、IL-17、IL-23、TGF-β 的含量均高于结肠息肉组.相关性分析显示:UC病灶组织中cingulin、claudin-2蛋白表达量与菌群紊乱 、氧化应激及炎症反应指标均直接相关.结论 :UC病灶中存在cingulin、claudin-2异常高表达,可推进机体肠道菌群紊乱及全身炎症应激反应.
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紧密连接蛋白Claudin-2研究进展
紧密连接蛋白Claudin-2是构成细胞间紧密连接的重要蛋白分子,在维持细胞极性和紧密连接的屏障功能方面具有重要作用.Claudin-2在细胞旁路孔通道形成、阳离子通透、离子大小选择性及水分转运方面均有重要作用,并参与多种疾病如肿瘤、炎症、细菌或病毒感染等的发生与发展.本文对Claudin-2的相关研究进展进行综述,以便对Claudin-2有一较全面的了解.
