首页 > 文献资料
-
胎儿和出生后机体皮肤内转化生长因子-β1基因表达的变化
目的探讨转化生长因子-β1 (TGF-β1)及其转录因子smad2和smad3基因在不同胎龄的胎儿和出生后机体皮肤组织中表达的变化特征及其可能的生物学意义.方法用病理学技术检测不同发育时期皮肤的结构特征后,提取18例不同胎龄(13～32周)的胎儿皮肤和6例出生后机体皮肤组织的总RNA后,分离mRNA,用逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)方法检测这3种基因在不同组织中的表达变化规律.结果 TGF-β1、smad2和smad3基因在不同发育阶段的皮肤组织中都有表达.在早期妊娠胎儿的皮肤组织中,TGF-β1和smad2基因表达较弱,随着胎龄的增加,皮肤组织内这两种基因表达逐渐增强,在出生后机体的皮肤组织中,这两种基因的表达量分别为妊娠早期皮肤的1.3倍和5.9倍,基因表达显著升高(P<0.05).smad3基因的表达呈不同的变化规律,在妊娠早期的皮肤组织中,该基因的表达较强,随着胎儿的生长发育,该基因表达逐渐降低,而在出生后机体的皮肤组织内,smad3基因表达产物的灰度值又升至0.272±0.022,与早期妊娠胎儿皮肤相比差异不明显(P>0.05).结论 TGF-β1、smad2和smad3基因在不同发育阶段人皮肤组织内都有表达,显示TGF-β1介导的信号通路可能对皮肤的发生、结构功能的维持以及伤后修复十分重要.在早期妊娠胎儿皮肤中,TGF-β1和smad2基因低表达可能是胎儿皮肤创面无瘢痕修复的机制之一,smad3基因在其中的作用还需进一步研究.
-
siRNA下调Smad3基因后对多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶表达的影响
目的 以Smad3基因为研究对象,筛选出该基因的有效siRNA干扰载体,并探讨下调表达Smad3基因对多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAcTs)家族mRNA水平表达的影响.方法 将事先构建的3个带有荧光标记的干扰载体分别转染人肝星状细胞株(HSC)中,通过RT-PCR、Western blot方法分别从mRNA水平及蛋白水平检测干扰效率.并通过转染有效的Smad3基因的siRNA表达载体,检测下调Smad3以后对糖基转移酶ppGalNAcTs家族mRNA表达的影响情况.结果 成功筛选到Smad3基因的有效siRNA干扰载体,检测出转染了Smad3的siRNA表达载体的肝星状细胞中Smad3的mRNA和蛋白表达都受到了抑制,而糖基转移酶ppGalNAcTs的mRNA表达也随之发生了一些变化.结论 成功筛选到一个Smad3基因的siRNA 干扰载体,继而可转染人肝星状细胞,并抑制其中Smad3蛋白的表达,为研究siRNA方法在肝纤维化中的治疗作用提供了实验基础和理论支持.
-
阻断Smad3表达对转化生长因子β1诱导肌成纤维细胞增殖的影响
目的 探讨转化生长因子β1及其信号转导分子Smad3在肌成纤维细胞C2C12殖中的作用.方法 以转化生长因子β1作用于C2C12细胞,对其信号转导分子Smad3基因进行RNA干扰,用MTT法检测转化生长因子β1诱导的C2C12细胞增殖. 结果 0、1、5和10 μg/L转化生长因子β1作用C2C12细胞24 h后,C2C12细胞增殖随转化生长因子β1浓度增加而增加,且呈剂量依赖性(光密度值分别为0.096±0.015、0.177±0.014、0.240±0.028和0.312±0.012, P<0.01);经200 pmol/L siRNA-Smad3转染24 h后,再用5 μg/L转化生长因子β1作用,其细胞增殖(光密度值0.063±0.011)比内对照组下降(光密度值0.137±0.016,P<0.01).结论 转化生长因子β1通过Smad3信号转导促进C2C12细胞增殖并呈剂量依赖性,siRNA-Smad3可有效阻断其信号转导而降低C2C12细胞增殖.
-
转化生长因子β1对肌成纤维细胞膜型基质金属蛋白酶1的影响
目的 观察转化生长因子β1(TGF-β1)对鼠肌成纤维细胞(C2C12细胞)分泌膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)的影响,探讨其内在机制.方法 用不同浓度的TGF-β1(0、1、5、10 ng/mL)干预C2C 12细胞5h,200 pmol/L siRNA-smad3转染C2C12细胞24 h,用Western blot和Northern blot方法测定MT1-MMP及其mRNA表达.结果 0、1、5、10 ng/mL TGF-β1干预C2C12细胞5 h,Western blot半定量检测MT1-MMP的结果分别为2.86±0.28、2.05±0.31、1.60±0.21、1.02±0.24,F=224.9,P<0.01;Northern blot定性结果显示,mRNA条带显示逐渐变弱.5 ng/mL TGF-β1干预C2C12细胞4、12、24 h,Western blot半定量检测结果分别为1.02±0.29、0.80±0.21、0.4±0.12,各时间点值比较,均P<0.05.Northern blot定性结果显示,mRNA条带显示随时间延长而逐渐变弱.200 pmol/L siRNA-smad3转染C2C12细胞24 h,再用5 ng/mL TGF-β1干预C2C12细胞5 h,半定量Western blot检测结果显示:内对照组0.82±0.12(siRNA-control+5 ng/mL TGF.131)、空白对照组1.61±O.21(siRNA-control)、实验组1.84±0.23(siRNA-Smad3+5 ng/mL TGF-β1),内对照组和实验组比较差异有统计学意义(P<0.05);Northern blot定性结果显示:MT1-MMP mRNA表达在实验组和空白对照组较强,而内对照组较弱.结论 TGF-β1抑制鼠C2C12细胞分泌MT1-MMP,呈剂量和时间依赖性:siRNA阻断Smad3表达可消除TGF-β1对MT1-MMP的抑制作用.
-
Smad3基因siRNA对TGF-β1双向调节成纤维细胞增殖的影响
目的 构建大鼠Smad3基因特异性siRNA沉默质粒,并探讨其在TGF-β1双向调节成纤维细胞增殖中的作用.方法 构建大鼠Smad3基因沉默质粒,荧光纤维镜观察转染效率,定量PCR、免疫组化法检测Smad3基因和蛋白的变化,BrdU ELISA法和EMSA法分别检测转染siRNA及联合大小剂量TGF-β1刺激后细胞增殖和Smad3结合活性变化.结果 沉默质粒转染效率为41.2%,瞬时转染后具有促增殖作用且与转染剂量成正比,并使其mRNA表达下调50%、蛋白表达明显降低,还可降低大小剂量TGF-β1双向调节细胞增殖和Smad3结合活性的变化程度.结论 pSUPERSmad3沉默质粒构建成功,TGF-β1可通过调节Smad3来达到双向调节成纤维细胞增殖作用.
-
蜚蠊提取液治疗皮肤慢性溃疡34例临床观察及其对Smad3基因表达水平的影响研究
目的:观察蜚蠊提取液治疗皮肤慢性溃疡的临床效果,试图寻求客观实验数据与临床效果的相关性,为进一步探索皮肤慢性溃疡的机理,寻求有效价廉的治疗方案提供实验室依据和数据支持.方法:68例患者随机分入治疗组和对照组,治疗组、对照组分别用康复新液湿敷、生肌散换药,每日更换敷料1次,4周为1个疗程.观察两组治疗后溃疡面积、创面愈合率和Smad3表达水平.结果:治疗组皮损面积从平均13.05cm2减少至0.59cm2,对照组从13.34cm2减少至2.35cm2;两组治愈率分别是82.353％、70.588％；治疗组治疗前后Smad3蛋白表达水平分别为79.6176个、35.8529个,对照组治疗前后Smad3蛋白表达水平为78.3235个、46.2294个.结论:治疗1周,试验组和对照组病例溃疡面积无明显差异(P＞0.05),治疗2周、3周、4周,试验组病例溃疡面积明显小于对照组(P＜0.05).治疗组治愈率明显高于对照组,(P＜0.05).治疗后,治疗组病理切片Smad3表达水平明显低于对照组,(P＜0.05),治疗前后对照,治疗组Smad3表达水平显著下降(P＜0.05).
-
小分子RNA干扰Smad3基因对人增生性瘢痕的作用
近年来对于增生性瘢痕形成机制的研究较多,TGF-β信号转导的中介分子Smad家族,位于TGF-β家族配体-受体信号转导系统的下游,通过调控核内靶基因的转录控制创面愈合和病理性瘢痕形成[1-2].本研究中,笔者利用小分子RNA干扰技术特异性抑制Smad 3基因的表达,观察其对瘢痕增生和Ⅰ、Ⅲ型胶原合成等的影响,为进一步临床应用基因治疗瘢痕提供理论依据和实验基础.
