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ppGalNAcT2反义RNA对胃癌细胞SGC7901生物学特性的影响
目的:研究人胃癌细胞SCd27901中多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(PP-GalNAc-T2)基因表达与肿瘤转移相关基因MMP2,TGF-β1表达的相关性,以及对细胞增殖和形态生物学特性的影响.方法:用两个已构建好的反义表达载体转染胃癌细胞SGC7901,通过G418筛选,建立一系列旨在封闭胃癌细胞SGC7901 ppGalNAc-T2基因表达的亚细胞克隆.通过共聚焦显微镜,RT-PCR检测反义封闭PP-GalNAc-T2基因RNA表达后,胃癌细胞SGC7901中TGF-β1,MMP2表达水平,细胞增殖以及形态的变化.结果:反义封闭PP-GalNAc-T2基因表达后,胃癌细胞SGC7901PP-GalNAc-T2的表达水平明显降低,细胞的形态发生改变,分裂增殖减慢.结果还显示,反义封闭PP-GalNAc-T2基因表达可使TGF-β1,MMP2基因在mRNA表达水平均增加,提示pp-GalNAc-T2基因表达可能对胃癌细胞SGC7901浸润转移产生影响.结论:PP-GalNAc-T2可能在肿瘤的增殖、浸润和转移中发挥作用.
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siRNA下调Smad3基因后对多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶表达的影响
目的 以Smad3基因为研究对象,筛选出该基因的有效siRNA干扰载体,并探讨下调表达Smad3基因对多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAcTs)家族mRNA水平表达的影响.方法 将事先构建的3个带有荧光标记的干扰载体分别转染人肝星状细胞株(HSC)中,通过RT-PCR、Western blot方法分别从mRNA水平及蛋白水平检测干扰效率.并通过转染有效的Smad3基因的siRNA表达载体,检测下调Smad3以后对糖基转移酶ppGalNAcTs家族mRNA表达的影响情况.结果 成功筛选到Smad3基因的有效siRNA干扰载体,检测出转染了Smad3的siRNA表达载体的肝星状细胞中Smad3的mRNA和蛋白表达都受到了抑制,而糖基转移酶ppGalNAcTs的mRNA表达也随之发生了一些变化.结论 成功筛选到一个Smad3基因的siRNA 干扰载体,继而可转染人肝星状细胞,并抑制其中Smad3蛋白的表达,为研究siRNA方法在肝纤维化中的治疗作用提供了实验基础和理论支持.
