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一氧化氮合酶抑制剂治疗实验性自身免疫性心肌炎的研究
目的:观察一氧化氮合酶(NOS)抑制剂NG硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)对小鼠实验性自身免疫性心肌炎(EAM)的治疗效果并且探讨与凋亡相关的治疗机制.方法:30只Balb/C雄性小鼠,随机分成3组(n=10):正常对照组、模型对照组和实验组.模型对照组和实验组分别在第0天和第7天在小鼠双侧腹股沟和腋窝皮下给予猪心肌肌凝蛋白注射,腹腔注射百日咳毒素制作EAM模型,实验组于第1～21天给予L-NAME(5 mg/(kg·day))腹腔注射,模型对照组给予等剂量生理盐水.第21天眼球取血后断髓处死小鼠,计算心脏重量/体重(HW/BW); HE染色检测各组心肌炎症积分；原位末端缺口标记技术(TUNEL)检测各组心肌细胞凋亡指数；化学发光法检测各组血清一氧化氮(NO)的含量和分光光度法检测血清诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活性；实时定量PCR检测心脏中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9)和iNOS mRNA表达水平；免疫组织化学检测Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达水平.结果:模型对照组的HW/BW、心肌炎症积分、NO含量、iNOS活性和mRNA表达、Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9 mRNA和蛋白表达以及心肌细胞凋亡指数明显高于正常对照组(P＜0.01)；与模型对照组相比,实验组除HW/BW(P＜ 0.05)降低外,心肌炎症积分、血清NO含量、血清iNOS活性和心脏iNOS的mRNA表达、Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的mRNA和蛋白表达以及心肌细胞凋亡指数均显著降低(P＜0.01).结论:EAM小鼠心肌组织内高表达的iNOS催化产生的NO促进了心肌细胞的凋亡和EAM病程进展,初期给予L-NAME治疗能通过抑制iNOS活性,减少NO生成,降低对心肌的损伤程度,作用机制可能与其抑制心肌细胞凋亡有关.
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IL-6单克隆抗体对自身免疫性心肌炎的保护作用及其机制
目的:观察白介素-6(interleukin,IL-6)单克隆抗体(IL-6 mAb)治疗Lewis大鼠自身免疫心肌炎(EAM)的疗效,探讨IL-6与辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)在EAM发病中的机制.方法:将34只8～ 10周龄Lewis大鼠随机分为正常对照组(n=6),EAM组(n=12),IL-6mAb干预组(n=16).对EAM组和干预组注射心肌肌凝蛋白,干预组于免疫注射后第1、7至第20天腹腔注射IL-6 mAb1 mg,分别于急性峰值期(第21天)、慢性持续期(第84天)取材,观察心肌炎症浸润、纤维化、细胞凋亡以判断IL-6 mAb疗效.检测脾脏Th17、Treg细胞数量和功能,比较各组血清中IL-6、IL-10、IL-17和转化生长因子-β(TGF-β)的浓度,实时定量PCR测定外周血STAT3、RORγt、Foxp3 mRNA水平,对EAM源性脾细胞进行体外IL-6mAb刺激,并用ELISA法测定IL-10、IL-17和TGF-β的浓度.结果:炎症积分、纤维化积分、凋亡指数IL-6mAb干预组较EAM组明显下降(P＜0.01).急性峰值期(21 d组)EAM组Th17和Treg细胞数量上调,干预组则受明显抑制(P＜ 0.01);21d干预组血清IL-6、IL-10、IL-17和TGF-β的浓度较EAM组明显下降(P＜0.01); 21 d干预组外周血STAT3、RORγt、Foxp3 mRNA水平下降(P＜0.01);体外IL-6mAb刺激EAM源性脾细胞,IL-10、IL-17和TGF-β表达明显增加.结论:IL-6mAb对EAM有明显的保护作用,IL-6mAb通过抑制Th17、Treg细胞的数量和功能,实现对EAM的保护作用.
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不同免疫方案建立实验性自身免疫性心肌炎小鼠模型的分析与评价
目的 探讨不同免疫方案建立Balb/c小鼠实验性自身免疫性心肌炎模型的优劣.方法 取6周龄雄性Balb/c小鼠,设计三种造模方案,并均设正常对照组和模型组.经不同方案免疫动物后行动物超声影像系统检测心功能,病理形态观察心肌炎症和纤维化,并计算心指数和脾指数,qRT-PCR检测小鼠心脏和脾脏组织TLR2、TLR4基因的表达水平.结果 与正常对照组相比,方案一中模型组小鼠心指数和脾指数无明显差异,超声检测中射血分数(EF)及各室壁厚度均无明显差异,心肌炎症改变不明显,纤维化不明显,TLR2、TLR4 mRNA的表达量无明显变化;方案二中模型组EF、左室舒张末内径(LVEDd)以及左室收缩末内径(LVEDs)明显降低,但舒张期室间隔厚度(IVSd)及收缩期室间隔厚度(IVSs)与对照组相比无统计学意义;病理形态观察可见心肌出现少量单核细胞浸润,心肌细胞肿胀,心肌间质及外膜可见少量的纤维化,同时脾指数明显增加,心脏与脾脏组织TLR2、TLR4的mRNA表达量无明显变化;方案三中模型组EF、LVEDd、LVEDs均明显降低,而IVSd及IVSs未见显著改变,病理学检测可见心肌大量炎细胞浸润,心肌细胞肿胀,心肌间质及外膜可见少量的纤维化,伴有脾指数的显著增加,心脏与脾脏组织TLR2 mRNA的表达量升高,而TLR4的mRNA表达量无明显变化.结论 与方案一模型组和方案二模型组相比,方案三模型组的造模效果更好,其免疫方案可用于自身免疫性心肌炎相关研究,具有较好的参考价值.
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自身免疫性心肌炎发病机制和临床意义的研究进展
自身免疫受遗传、免疫、激素和环境等因素影响,病毒感染可能会触发自身免疫.在各种类型心脏病的发病过程中自身免疫可能扮演一个重要角色,被定义为由心肌功能受损引起的心肌炎症反应,是导致扩张型心肌病常见的病因.心肌炎可以由感染和非感染因素引起,非感染因素包括伴随心肌炎的自身免性疾病.为了更好地了解自身免疫性心肌炎,该文就自身免疫性心肌炎的发病机制和临床意义作一综述.
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大黄素对实验性自身免疫性心肌炎大鼠IFN-γ及IL-17水平的影响
目的 探讨大黄素对自身免疫性心肌炎大鼠IFN-γ及IL-17的影响,及其对大鼠的心肌保护作用.方法 6周龄雄性Lewis大鼠24只随机分为3组(8只/组):自身免疫性心肌炎(EAM)组、大黄素(Emodin)组和对照(Control)组.于实验0d及7d,EAM组和Emodin组用心肌肌球蛋白/完全弗氏佐剂免疫,而对照组仅用完全弗氏佐剂假性免疫.Emodin组于0d起,每日给予50 mg大黄素灌胃治疗,共21 d,而EAM组和对照组每日给予蒸馏水灌胃.21d时处死大鼠,心肌组织行HE染色及Masson染色,光镜下评价心肌组织炎细胞浸润及纤维化程度；Western blot法检测心肌组织IFN-γ及IL-17蛋白的表达水平；Elisa法检测血清中IFN-γ及IL-17的水平.结果 与EAM组相比,大黄素显著减轻了Emodin组心肌组织中的炎性细胞浸润及纤维化改变.EAM组和Emodin组血清及心肌组织中IFN-γ和IL-17的水平明显高于Control组(P＜0.05).而Emodin组上述指标均明显低于EAM组(P＜0.05).结论 大黄素可以降低IFN-γ和IL-17的水平,对EAM大鼠的心肌起到保护作用.
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巨噬细胞活化与自身免疫病
巨噬细胞“活化”在免疫反应、机体自稳、疾病的发生发展与预后中发挥重要作用,与多种自身免疫病的发生发展密切相关.但目前对其活化的定义、分类、鉴定等尚未有统一的标准,因此研究巨噬细胞活化的定义、分类、表面标记的改变、更清楚地了解巨噬细胞活化在自身免疫病中发挥的重要作用很有必要.
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腺病毒介导的TGF-β1基因转导对小鼠自身免疫性心肌炎的治疗作用
目的:研究腺病毒介导的TGF-β1基因转导对小鼠自身免疫性心肌炎的治疗作用.方法:以猪心肌肌凝蛋白免疫BALB/c小鼠,诱导自身免疫性心肌炎;实验组以腺病毒为载体转移TGF-β1基因,对照组则转移Lacz基因;采用ELISA法测定血浆TGF-β1浓度,间接ELISA法检测肌凝蛋白自身抗体,荧光酶联免疫法检测肌钙蛋白I;从心肌炎细胞浸润程度、血浆肌钙蛋白I水平、血浆肌凝蛋白自身抗体滴度评估TGF-β1转基因治疗自身免疫性心肌炎的作用.结果:实验组血浆TGF-β1浓度显著高于对照组和正常小鼠(P<0.01),对照组和正常小鼠无显著性差异;实验组小鼠心肌炎细胞浸润程度明显低于对照组,血浆中的肌钙蛋白I水平和抗肌凝蛋白自身抗体水平低于对照组(P<0.01).结论:腺病毒介导的TGF-β1基因转导对小鼠自身免疫性心肌炎有明显的治疗效果.
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细菌脂多糖促进克氏锥虫抗原诱导的自身免疫性心肌炎
目的观察细菌脂多糖(LPS)对克氏锥虫抗原诱导自身免疫性心肌炎的影响.方法克氏锥虫抗原辅以完全弗氏佐剂免疫A/J小鼠,LPS经腹腔接种方式给药,其后加强免疫2次,28 d后,测定心肌肌球蛋白特异的迟发型超敏反应(DTH)及自身抗体,并取鼠心脏观察心肌炎症情况.结果 LPS提高锥虫抗原诱导的心肌肌球蛋白特异性DTH及自身抗体, 并且25μg LPS与锥虫抗原免疫的小鼠可见明显的心肌炎.结论 LPS能够促进心肌肌球蛋白特异的自身免疫反应及锥虫抗原诱导的自身免疫性心肌炎.
关键词： 细菌脂多糖(LPS) 克氏锥虫 肌球蛋白 自身免疫性心肌炎 -
丹参酮ⅡA对自身免疫性心肌炎作用机制的研究进展
自身免疫性心肌炎发生于病毒性心肌炎急性期,其中涉及到复杂的免疫机制,包括自身免疫反应、氧化反应及细胞凋亡等.丹参酮ⅡA是丹参酮的有效成分之一,有抗菌、抗病毒、调节免疫、抗氧化及提高心功能等作用,在中西医结合治疗病毒性心肌炎中取得了一定的疗效,但其机制尚不明确.本文就丹参酮ⅡA对自身免疫性心肌炎的调节作用及其机制的研究进展进行综述,以期为丹参酮ⅡA治疗自身免疫性心肌炎提供理论依据.
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siRNA 沉默 CD40基因对实验性自身免疫性心肌炎大鼠的作用及 IL-22表达的影响
目的：探讨小分子干扰 RNA（siRNA）沉默 CD40基因表达后对实验性自身免疫性心肌炎（EAM）大鼠心肌组织病理变化、血清肌钙蛋白 T（cTNT）、脑钠肽（BNP）及白细胞介素-22（IL-22）的影响及意义。方法将6～8周雄性 Lewis 大鼠48只随机分为正常对照组、EAM 组、CD40 siRNA 组及 siRNA 组，每组12只。在免疫第21天，每组处死6只大鼠，免疫第56天，处死剩余全部大鼠，光镜与电镜下观察大鼠心肌组织病理及超微结构的改变，计算心肌组织病理积分，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清 cTNT、BNP 及 IL-22的浓度。结果免疫第21天与第56天，除正常对照组，其他3组大鼠发病率均为100％。各组大鼠生存率与死亡率无差异（P ＞0．05）；CD40 siRNA 组心肌组织病理积分、cTNT 和 BNP 的水平均明显低于 EAM组（P ＜0．05），IL-22的水平均明显高于 EAM组（P ＜0．05），且cTNT和 BNP 均与心肌组织病理积分呈正相关性（r ＝0．732，r ＝0．869，P ＜0．05）。结论siRNA 沉默 CD40基因表达能减轻 EAM大鼠心肌炎症，降低心肌损伤程度，改善心功能，其机制可能与上调 IL-22的表达，抑制免疫反应有关。
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CD40小干扰 RNA 对自身免疫性心肌炎大鼠血白细胞介素-21与白细胞介素-35表达的影响
目的：探讨 CD40小干扰 RNA（siRNA）对实验性自身免疫性心肌炎（EAM）大鼠外周血白细胞介素-21（IL-21）与白细胞介素-35（IL-35）表达的影响及意义。方法将6～8周20只雄性 Lewis 大鼠采用随机数字表法分为正常组、EAM组、CD40 siRNA 组及 siRNA 组，每组5只。实验第0天及第7天，正常组大鼠双后肢足垫区皮下注射 PBS 缓冲液，其余3组双后肢足垫区皮下注射猪心肌球蛋白，建立 EAM大鼠模型。第7天 CD40 siRNA 组及 siRNA 组大鼠经尾静脉分别注射 CD40 siRNA 及 siRNA 慢病毒表达载体。第21天，行超声心动图检查后处死大鼠。光镜下观察心肌组织病理变化并计算心肌组织病理积分。采用酶联免疫吸附试验检测大鼠外周血 IL-21与 IL-35水平。结果1．除正常组大鼠，余3组大鼠 EAM发病率均为100％，无一例死亡。2．CD40 siRNA 组大鼠心脏质量／体质量比值明显低于 EAM组，差异有统计学意义（3．13±0．21比3．80±0．29，F ＝0.332，P ＜0．05）；其心肌组织病理积分亦明显低于 EAM组，差异有统计学意义（2．22±0．43比3．32±0．51， F ＝0．456，P ＜0．05）。3．超声心动图检测显示，EAM组有1例大鼠探及大量心包积液，CD40 siRNA 组大鼠均未探及心包积液。EAM组、CD40 siRNA 组及 siRNA 组大鼠室间隔和左心室后壁均增厚，心腔缩小，室壁运动减低。CD40 siRNA 组左心室短轴缩短率较 EAM组明显升高，差异有统计学意义[（63．34±11．06）％比（38．56±6.98）％，F ＝16．080，P ＜0．05]。4．CD40 siRNA 组大鼠外周血 IL-21水平明显低于 EAM组，差异有统计学意义[（141．19±17．46）ng／L 比（157．81±17．58）ng／L，F ＝57．008，P ＜0．05]；而其 IL-35水平明显高于 EAM组，差异有统计学意义[（195．96±18．26）ng／L 比（174．78±13．91）ng／L，F ＝31．727，P ＜0．05]。5．EAM组大鼠外周血 IL-21水平与心肌组织病理积分呈正相关（r ＝0．69，P ＜0．05），而其 IL-35水平与心肌组织病理积分呈负相关（r ＝－0．64，P ＜0．05）。结论CD40 siRNA 可减轻 EAM大鼠的心肌炎症，降低心肌损伤程度。IL-21与IL-35水平变化可在一定程度上反映心肌损伤程度。CD40 siRNA 对 EAM大鼠的治疗作用可能与下调 IL-21、上调 IL-35的表达有关。
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小干扰 RNA 沉默 CD40基因对自身免疫性心肌炎大鼠 Th1/Th2与 Th17/Treg 平衡的影响
目的：通过建立自身免疫性心肌炎（EAM）大鼠模型，探讨小干扰 RNA（siRNA）沉默 CD40基因后对 EAM 大鼠外周血 Th1/ Th2与 Th17/ Treg 平衡的影响。方法采用随机数字表法将 Lewis 大鼠分为正常对照组、EAM 组、CD40 siRNA 治疗组及 siRNA 对照组。第0天和第7天，EAM 组、CD40 siRNA 治疗组及 siRNA 对照组大鼠注射猪心肌肌球蛋白建立 EAM 模型。第7天，CD40 siRNA 治疗组大鼠予 CD40 siRNA 治疗。观察各组大鼠基本情况，于第21天记录各组大鼠心电图及超声心动图后处死大鼠，观察心肌组织病理变化并计算病理学积分，应用 ELISA 法检测大鼠外周血干扰素（IFN）-γ、IL-4、IL-17及转化生长因子（TGF）-β水平。结果1. EAM组、CD40 siRNA 治疗组及 siRNA 对照组大鼠 EAM 的总体发病率为100%，且在第0天至第21天均无死亡。2.正常对照组与 CD40 siRNA 治疗组大鼠心电图均正常，EAM 组与 siRNA 组大鼠仅2例出现期前收缩。3. EAM组、CD40 siRNA 治疗组及 siRNA 对照组大鼠超声心动图均异常，表现为左心室扩大、左心室壁肥厚、心肌动度减低、心功能明显降低、心包积液。CD40 siRNA 治疗组大鼠左心室短轴收缩率（LVFS）和左心室射血分数（LVEF）显著高于 EAM 组[（46.70±8.25）%比（34.28±11.81）%，（80.92±11.76）%比（64.03±12.60）%]，差异均有统计学意义（F ＝0.652、0.234，P 均﹤0.05）。4. EAM 组、CD40 siRNA 治疗组及 siRNA 对照组大鼠心肌组织病理检查显示心肌纤维断裂、心肌细胞坏死及炎性细胞浸润。CD40 siRNA 治疗组心肌组织病理学积分明显低于EAM 组（2.10±1.07比3.40±0.72），差异有统计学意义（F ＝1.290，P ﹤0.05）。5.与正常对照组比较，EAM组大鼠外周血 IFN-γ、IL-4、IL-17及 TGF-β水平均显著升高[（1245.55±244.56）ng/ L 比（501.53±18.93） ng/ L，（78.03±10.47）ng/ L 比（30.77±1.74）ng/ L，（80.82±13.33）ng/ L 比（27.98±3.01）ng/ L，（156.27±12.11）ng/ L 比（4.33±0.79）ng/ L]，差异均有统计学意义（ t ＝7.408、10.764、9.250、30.608，P 均﹤0.05）， CD40 siRNA 治疗组大鼠外周血 IFN-γ与 IL-17水平较 EAM 组显著降低[（940.62±128.40） ng/ L 比（1245.55±244.56）ng/ L，（60.42±12.40）ng/ L 比（80.82±13.33）ng/ L]，差异均有统计学意义（t ＝2.704、2.745，P 均﹤0.05），IL-4与 TGF-β水平显著升高[（97.91±13.62）ng/ L 比（78.03±10.47）ng/ L，（178.84±12.10）ng/ L 比（156.27±12.11）ng/ L]，差异均有统计学意义（t ＝2.835、3.229，P 均﹤0.05）。结论 CD40 siRNA 可明显减轻 EAM 大鼠心肌炎症，改善心功能，其机制可能与其降低 Th1与 Th17相关细胞因子水平，上调 Th2与 Treg 相关细胞因子的水平，从而纠正 Th1/ Th2与 Th17/ Treg 失衡有关。
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Fgl2基因过表达对自身免疫性心肌炎大鼠心功能的影响
目的：建立慢病毒介导纤维介素蛋白2（ Fgl2）基因过表达自身免疫性心肌炎（ EAM）大鼠模型，探讨Fgl2基因过表达对EAM大鼠心功能的影响。方法：32只雄性Lewis大鼠随机分为正常对照组、EAM组、空载体自身免疫性心肌炎组（ EAM-GFP组）和Fgl2慢病毒过表达自身免疫性心肌炎组（ EAM-Fgl2组）4组。在实验第60天，对各组大鼠行心脏彩色多普勒检查，检测各组大鼠的左室短轴缩短率（LVFS），计算左室射血分数（LVEF），Western blot法检测各组大鼠心肌组织中Fgl2蛋白表达情况，ELISA法检测各组大鼠静脉血脑钠肽（ BNP）水平。结果：4组心肌组织中Fgl2蛋白和静脉血BNP表达的水平差异有统计学意义（P均＜0．001），EAM-Fgl2组Fgl2蛋白表达高于对照组、EAM组和EAM-GFP组；与其他3组比较，EAM-Fgl2组的LVFS和LVEF均降低，差异有统计学意义（ P均＜0．001）。结论：慢病毒介导的Fgl2基因过表达载体能明显上调EAM-Fgl2组心肌细胞中Fgl2蛋白的表达；且慢病毒介导的Fgl2基因过表达后可恶化EAM大鼠心功能。
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白细胞介素-36α在自身免疫性心肌炎小鼠中的促炎作用
目的:探讨白细胞介素(IL)-36α在自身免疫性心肌炎(AMC)小鼠中的促炎作用.方法:将40只BALB/c小鼠随机分为对照组、实验组(包括AMC组、AMC+ IL-36α组和AMC+ IL-36Ra组),实验组构建实验性AMC动物模型,后两组小鼠在造模第15天,分别予IL-36α和IL-36Ra连续腹腔注射7d,于第21天行小鼠心脏超声检查,酶联免疫吸附法测定血清炎性因子IL-23、IL-17浓度;苏木精-伊红(HE)染色检查心肌病理改变.结果:与对照组相比,实验组小鼠出现不同程度的心功能不全,血清IL-23、IL-17水平明显增高,心肌病理切片可见炎性细胞浸润,其中又以AMC+IL-36α组小鼠炎性因子上升、炎性细胞浸润增加及心功能不全明显,而较AMC组,AMC+ IL-36Ra组小鼠的各项指标被显著抑制,各组间差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:IL-36α在小鼠AMC心肌组织中具有促炎作用,抑制IL-36α的表达可减轻AMC的进展.
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童心康合剂对实验性自身免疫性心肌炎大鼠心肌纤维化的影响
目的:探讨童心康合剂对实验性自身免疫性心肌炎(EAM)模型大鼠心肌纤维化的影响.方法:将60只Lewis大鼠随机分为正常对照组、EAM模型组、玉丹荣心丸组、童心康合剂高、中、低剂量组,每组10只.于免疫56 d处死存活大鼠,观察心肌病理变化、Masson染色观察心肌纤维化,免疫组化测心肌组织金属蛋白酶-9(MMP-9)及其组织抑制物-1(TIMP-1)的表达.结果:童心康合剂大中剂量组与玉丹荣心丸组心肌病理积分均低于EAM模型组(P＜0.05),3组之间差异无显著性(P＞0.05),童心康合剂小剂量组与EAM模型组病理积分差异无显著性(P＞0.05).童心康合剂大中剂量、玉丹荣心丸均能抑制心肌纤维化,童心康合剂大中剂量均优于玉丹荣心丸(P＜0.05),且2组之间差异无显著性(P＞0.05).童心康合剂中剂量能上调心肌组织MMP-9的表达,下调其TIMP-1的表达.结论:童心康合剂大中剂量、玉丹荣心丸可减轻EAM模型大鼠心肌炎症,抑制心肌纤维化,此作用可能与调节MMP-9/TIMP-1平衡有关.
关键词： 自身免疫性心肌炎 童心康合剂 MMP-9/TIMP-1 -
TNFSF14及HVEM在自身免疫性心肌炎中的表达及意义
目的:建立自身免疫性心肌炎大鼠模型,探讨肿瘤坏死因子超家族成员(TNFSF14)LIGHT及其受体HVEM在实验性自身免疫性心肌炎大鼠心肌组织表达及意义.方法:从猪心室肌组织提取心肌肌球蛋白,以猪心肌肌球蛋白与完全弗氏佐剂混合的乳浊液间隔7 d皮下注射免疫模型组大鼠,对照组大鼠仅用完全弗氏佐剂皮下注射.分别在初次免疫后第21天和第90天检测超声心动图,取心肌组织作病理学检查, 用RT-PCR法检测心肌组织LIGHT及HVEM mRNA的表达.结果: 在急性期(第21天),模型组大鼠心肌组织HE染色见有不同程度的急性炎性细胞浸润和心肌细胞变性坏死,同时超声心动图检测到心功能的下降.第90天,模型组大鼠心肌组织炎症减弱,并伴有纤维化出现,对照组均未出现心肌炎症和纤维化.在第21天,模型组大鼠心肌组织中LIGHT和HVEM基因表达水平均高于对照组(P＜0.01).第90天,模型组LIGHT与HVEM基因表达仍然高于对照组(P＜0.01).结论: LIGHT及HVEM基因在实验性自身免疫性心肌炎大鼠心肌中的表达是上调的,LIGHT/HVEM通路可能参与自身免疫性心肌炎发生发展过程.
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静脉注射 IL-19重组质粒对大鼠实验性自身免疫性心肌炎的治疗作用
目的：评估静脉注射白细胞介素19（ interleukin-19，IL-19）重组质粒对大鼠实验性自身免疫性心肌炎（ experimental autoimmune myocarditis，EAM）的治疗作用。方法：将猪心室肌球蛋白与等体积完全弗氏免疫佐剂充分混匀后，双足皮下注射制作大鼠EAM模型，免疫后第6天应用静脉注射方法将IL-19重组质粒导入体内，第17天行心脏超声检查后处死大鼠，检测心脏重量与体重比值、病理学评估、心肌炎面积率；实时荧光定量PCR检测心衰标记物心房钠尿肽（ atrial natriuretic peptide，ANP）、脑钠尿肽（ brain natriuretic peptide，BNP）的表达水平，进一步检测心肌相关炎症因子IL-18、IL-1β、IL-12p35和IFN-γ的表达水平。结果：IL-19重组质粒导入组的大鼠心功能得到显著改善；心脏重量体重比、心肌炎面积率、ANP、BNP的表达均较模型组明显下降；相关炎症细胞因子的表达也显著降低。结论：应用静脉注射法进行IL-19重组质粒体内导入治疗，明显抑制大鼠实验性自身免疫性心肌炎的炎症反应，减轻了心肌损伤从而改善心功能。
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Toll样受体3信号通路介导自身免疫性心肌炎炎症反应及作用机制
目的 探讨自身免疫性心肌炎大鼠心肌组织Toll样受体3(TLR3)表达水平及临床意义.方法 将54只大鼠按照随机数字表法分为AM组、干预组和对照组,每组18只,对照组大鼠正常喂养,AM组、干预组建立自身免疫性心肌炎大鼠模型,干预组于模型建立第21天注射0.1 mg TLR3配体溶液,AM组、对照组大鼠注射等量PBS溶液.分别于模型建立第7、14、21、24、28、35天处死各组3只大鼠,观察各组大鼠心肌组织病理变化,酶联免疫吸附试验检测血清心肌肌凝蛋白自身抗体滴度,免疫组织化学染色法检测心肌组织TLR3蛋白表达,实时定量PCR检测心肌组织TLR3、TNF-α mRNA表达.结果 对照组大鼠血清心肌肌凝蛋白自身抗体在不同时间点比较差异无统计学意义(P＞0.05),干预组血清心肌肌凝蛋白自身抗体滴度在第28天达高峰,AM血清心肌肌凝蛋白自身抗体滴度在第21天达高峰;第14、21、24、28、35天AM组、干预组血清心肌肌凝蛋白自身抗体滴度显著高于对照组(P＜0.05),第24、28、35天干预组血清心肌肌凝蛋白自身抗体滴度显著高于AM组(P＜0.05).对照组TLR3蛋白表达在不同时间点比较差异无统计学意义(P＞0.05);第14、21、24、28、35天,AM组、干预组TLR3蛋白表达显著高于对照组(P＜0.05),第24、28、35天,干预组TLR3蛋白表达显著高于AM组(P＜0.05).对照组TLR3、TNF-α mRNA相对表达量在不同时间点比较差异无统计学意义(P＞0.05);第7、14、21、24、28、35天,AM组、干预组TLR3、TNF-α mRNA相对表达量显著高于对照组(P＜0.05),第24、28、35天,干预组TLR3、TNF-αmRNA相对表达量显著高于AM组(P＜0.05).结论 自身免疫性心肌炎心肌组织TLR3表达上调,TLR3信号通路介导的炎症反应参与了自身免疫性心肌炎的发病.
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非诺贝特通过调节Th1/Th2细胞因子的平衡改善自身免疫性心肌炎
目的 探讨非诺贝特(fenofibrate)对自身免疫性心肌炎(EAM)大鼠的治疗作用.方法 将提纯精制后的猪心室肌球蛋白加等体积含灭活的结核杆菌的完全弗氏免疫佐剂充分混匀后,于Lewis大鼠双后足皮下注射制作大鼠EAM模型.于第0天免疫后,非诺贝特组给予非诺贝特灌胃,EAM组给予生理盐水灌胃.免疫后的第17天,超声检测大鼠心功能,处死大鼠取心脏评估心肌炎的严重程度及心体质量比,HE染色,应用实时定量PCR检测心脏的IFN-γ,IL-2,IL-4和IL-10的mRNA表达水平,并进一步通过ELISA检测血清中IFN-γ和IL-4的表达水平.结果 非诺贝特组大鼠的心功能指标与EAM组相比得到了显著改善.非诺贝特治疗组的心体质量比和心肌的炎症浸润程度也比EAM模型组有明显的降低.另外,非诺贝特治疗组降低了Th1的细胞因子(IFN-γ,IL-2)的表达并增加了Th2细胞因子(IL-4,IL-10)的表达.ELISA的结果也显示非诺贝特治疗组血清中IFN-γ的水平降低而IL-4的水平升高.结论 非诺贝特治疗可能通过调节Th1 /Th2细胞因子的平衡改善自身免疫性心肌炎.
关键词： 非诺贝特 Th1/Th2细胞因子 自身免疫性心肌炎 -
IL-19及其相关因子在大鼠自身免疫性心肌炎各时程的表达特征
目的 探讨IL-19及其相关因子在大鼠实验性自身免疫性心肌炎(EAM)急慢性期各时程的表达特征.方法 建立大鼠EAM模型；病理学评估EAM急慢性期(normal、3w、3m、6m)心肌损伤程度；应用实时荧光定量RT-PCR检测IL-19及其两条受体链IL-20R 1/IL-20R2,IL-20在EAM大鼠各脏器(心、肝、脾、肾)以及在心肌组织各时程(normal、3w、3m、6m)的mRNA表达；进一步应用ELISA法检测IL-19和IL-20在EAM各时程心脏组织匀浆中的蛋白表达.结果 在EAM大鼠急性期3周时IL-19、IL-20与IL-20R2主要在心脏表达,IL-20R1主要在肾脏表达；在EAM大鼠慢性期3个月时IL-19主要在脾脏表达,IL-20主要在肝脏及脾脏表达,IL-20R1主要在肾脏表达,IL-20R2主要在心脏表达；IL-19及其两条受体链IL-20R1/R2在EAM大鼠心肌组织的表达高峰均出现在急性期3周,随后逐渐减少,在慢性期(3m、6m)已基本接近正常水平;而IL-20在EAM大鼠心肌组织的表达高峰在慢性期3个月,IL-19和IL-20心肌组织的蛋白水平与基因表达呈现一致性.结论 IL-19及其相关因子参与EAM的发病进程,IL-19主要在EAM急性期炎症反应的过程中发挥重要作用.
