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MN9202在Beagle犬肝微粒体酶中的代谢动力学
目的研究MN9202在Beagle犬肝微粒体酶中的代谢.方法差速离心法制备Beagle犬肝微粒体酶,0.4μmol·L-1的MN9202与1.0 g·L-1的肝微粒体酶在37℃水浴中孵育30 min,加入0.5 mL碱化液终止反应,然后采用RP-HPLC法测定孵育液中MN9202原形药物的浓度.根据所测浓度与反应速度做Lineweave-Brurk双倒数曲线,推导出药物的米氏常数Km和大反应速度Vmax,并计算机体内在清除率.同时观察不同浓度和不同种类的人肝微粒体酶(CYP450)抑制剂对MN9202代谢的影响.结果MN9202在Beagle犬肝微粒体酶中的Km为(22.6±8.0)μmol·L-1;Vmax为(0.54±0.17)μmol·g-1·min-1;CLint为(0.024 2±0.000 9)L·g-1·min-1.醋竹桃霉素(Tro)和酮康唑(Ket)能够显著抑制MN9202的代谢;反苯环丙胺(Tra)对MN9202的代谢也有一定的抑制作用,而其他CYP450抑制剂对MN9202的代谢无明显影响.结论CYP3A和CYP2C19参与了MN9202的代谢,人CYP3A和CYP2C19的抑制剂可能使MN9202的代谢受到抑制,造成药物的药效或毒性的增加.
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细胞色素P450酶系与药物代谢的相互作用
药物在体内代谢,不论是哪一种方式,都有酶的参与.与药物代谢关系大的是细胞色素P450酶系,它主要存在于人体肝脏的微粒体中,故也称为肝微粒体酶,细胞色素酶是一种以铁卟啉为辅基的蛋白质(cytochrome protein),属于b族细胞色素,因还原型P450与一氧化碳的复合物P450-CO在450 nm处有一强吸收峰,故而得名细胞色素P450[1].该酶有许多同工酶,故称细胞色素P450酶系,简称为CYP450S.
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丙烯腈对蝾螈睾丸精原细胞DNA的诱导损伤
目的探讨丙烯腈(ACN)对睾丸精原细胞DNA的损伤作用及经肝微粒体酶活化前后该损伤程度的差异.方法用体外培养方法分离蝾螈睾丸精原细胞,不同浓度(0,0.1,0.4,0.8,1.6 μmol/ml)ACN染毒3 h,每个浓度分活化组(加S9)和非活化组(不加S9),另设2个阳性对照组(丝裂霉素C,1.6μg/ml,加S9)和(环磷酰胺,80μg/ml,不加S9),用单细胞凝胶电泳法检测DNA损伤程度.结果未活化ACN浓度≥0.8μmol/ml及活化后ACN浓度≥0.4 μmol/ml时,蝾螈精原细胞DNA损伤程度明显升高,彗星发生率、长尾彗星率及彗星细胞平均尾长均明显高于对照组(P＜0.05),并存在剂量-反应关系,经S9活化后,ACN对DNA损伤程度比同浓度未活化组明显增强.结论ACN能诱导蝾螈睾丸精原细胞DNA损伤,并且经肝微粒体酶活化后损伤能力明显增强.
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去甲斑蝥新型衍生物N-14NCTDA大鼠肝微粒体酶代谢
目的 初步阐明十四烷基去甲斑蝥素酰亚胺(tetradecyl derivative of norcantharidin,简称N-14NCTDA)肝微粒体酶代谢情况,鉴定该药物体外Ⅰ相代谢产物,并推测其主要代谢途径.方法 以超速离心法制备大鼠肝微粒酶并以二辛可酸(butyleyanoacrylate,BCA)法测定微粒体蛋白浓度.药物与肝微粒体在一定条件下孵育,使用飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF MS)进行分析.结果 制备的大鼠肝微粒体酶蛋白质量浓度约为6.4 g·L-1.代谢研究结果显示,孵育后反应液中主要检测到3个代谢产物,其分子离子峰相对分子质量分别为380.280 6、378.264 8和394.259 7,分别对应原型药羟基化、醛基化及羧化产物.结论 UPLC/Q-TOF MS方法适用于N-14NCTDA和其代谢产物的定性鉴别.体外初步代谢结果表明,N-14NCTDA的酰亚胺键难以在肝脏水解释放出NCTD,其主要以末端烷基氧化的方式进行Ⅰ相代谢.
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中国成人肝微粒体P450酶活性研究
目的 观察中国成人肝微粒体细胞色素P450(CYP450)、细胞色素b5(CYb5)的含量及常见几种药物代谢酶活性水平及在性别、民族间的分布差异.方法 肝组织匀浆10 000×g离心去除沉淀,再以100 000×g超速离心60 min,取沉淀加PBS甘油缓冲液,充分溶解制成微粒体悬液,用Lowry法测定蛋白含量;用双光道紫外分光光度计测定CYP450和CYb5的含量及P450酶活性.结果 48例成人肝微粒体CYP450和CYb5含量分别为(0.46±0.07)nmol/mg和(0.44±0.04)nmol/mg;男性组CYP450和CYb5含量分别为0.49±0.05)nmol/mg和(0.46±0.06)nmol/mg,均高于女性组的(0.41±0.08) nmol/mg、(0.42±0.05) nmol/mg,P<0.05;汉族、回族和壮族3个民族P450和CYb5含量作q检验进行两两比较,各组间差异均无统计学意义(P>0.05).药物代谢酶NADPH细胞色素C还原酶(NR)、乙基吗啡N-脱甲基酶(EDM)、氨基比林N-脱甲基酶(ADM)、苯并芘羟化酶(BPH)和戊巴比妥侧链羟化酶(PSCH)等酶活性水平分别为(0.71±0.13)nmol/(mg·min),(0.89±0.18)nmol/(mg·min),(0.99±0.17)nmol/(mg·min),(0.07±0.01)nmol/(mg·min),(4.15±0.65)μmol/(mg·min),其中EDM活性水平女性组高于男性组 (P<0.05) ,PSCH活性水平男性组高于女性组(P<0.05),其他各种酶活性男女之间无显著性差异;上述5种酶活性水平经q检验,汉族、回族和壮族3个民族之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 测定了中国成人肝微粒体CYP450、CYb5含量及NR,EDM,ADM,BPH,PSCH等酶活性水平,男性组CYP450、CYb5含量及PSCH活性高于女性组,而EDM活性水平女性组高于男性组,上述7种指标在汉族、回族和壮族之间差异均无统计学意义.
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氟喹诺酮类药物对肝微粒体酶系影响的研究
本实验首先以小鼠为研究对象,采用空白对照试验,比较分析了环丙沙星(Ciprofloxacin, CPFX)和司帕沙星( Sparfloxacin, SPFX)对安定镇静催眠的药理学效应的影响.并分析两药对安定在大鼠体内的药代动力学的影响,用CPFX和SPFX500mg/Kg@day剂量,每日给药一次,连续口服给药5天,用毛细管电泳法测定大鼠血药浓度,比较分析了给药前后安定血中消除半衰期(t1/2β),进一步是实验分析比较两药对大鼠肝微粒体酶的影响,测定了空白对照组和CPFX、SPFX75mg/kg和500mg/kg不同剂量连续口服给药5天后,大鼠肝微粒体酶CytP450、Cytb5、ADM和ECD的活性.
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蓝萼甲素在大鼠体内外的代谢转化
目的研究蓝萼甲素在大鼠体内外的代谢转化.方法采用大鼠肝微粒体体外温孵法,研究对蓝萼甲素的代谢转化.采用RP-HPLC法同时分离检测蓝萼甲素及其体外代谢产物.结果用液-液萃取、制备HPLC法,从大鼠胆汁中分离了一个代谢产物,经质谱分析推测结构为羟基化蓝萼甲素,并采用HPLC-MS连用,分析了肝微粒体体外温孵样品中的代谢产物,推测了蓝萼甲素的可能代谢转化途径.结论蓝萼甲素在大鼠肝微粒体和胆汁中可被代谢转化,主要代谢产物为羟基化蓝萼甲素.
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中国内江猪与中国人肝微粒体酶的比较研究
目的 比较中国内江猪与中国人肝微粒体酶的差异,以期从药物代谢角度评价内江猪作为异种移植供体的可能性.方法 通过Ca2+沉淀法分离肝微粒体,测定4月龄中国内江猪和中国正常成人肝微粒体中细胞色素P450(CYP450)、b5(CYb5)的含量及氨基比林N-脱甲基酶(ADM)的活性.结果 4月龄中国内江猪肝CYP450为(0.473±0.109) nmol/mg蛋白,CYb5为(0.403±0.107) nmol/mg蛋白,ADM的活性为(1.662±0.083) nmol/(mg蛋白·min);均与中国正常人[分别为(0.349±0.089) nmol/mg蛋白,(0.275±0.083) nmol/mg蛋白,(1.269±0.215) nmol/(mg蛋白·min)]存在差异(P<0.05),分别高出正常人35.5%、46.5%、31.0%.结论 中国内江猪肝脏中CYP450、CYb5含量及ADM活性较中国正常人高,药物的代谢可能较正常成人快,因此,中国内江猪肝脏代替人的肝脏代谢药物是可行的.
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N3-邻甲苯甲酰基-氟脲嘧啶(TFU)对人肝癌细胞生长抑制作用及代谢检测
目的:考察TFU通过缓慢释放5-FU抑制人肝癌细胞生长,分析TFU代谢转化特点.方法:以96孔板接种人肝癌细胞SMMC-7721,加入不同剂量TFU,每隔24 h取培养板,取细胞培养液,以HPLC法检测TFU和5-FU水平,并以MTT法测肿瘤细胞生存率.培养板加入肝微粒体酶,重复上述检测HPLC方法和MTT实验,比较加入肝微粒体酶前后培养液中TFU和5-FU水平,分析TFU通过缓慢释放5-FU抑制人肝癌细胞生长.结果:TFU对人肝癌细胞SMMC-7721抑制作用弱,加入肝微粒体酶后抑制作用增强.HPLC检测上清液中TFU和5-FU水平发现,TFU可能通过肝微粒体酶的介导作用,缓慢释放出5-FU并维持较长时间药物水平,这种代谢释放特点与TFU对肿瘤细胞生长抑制率有密切相关性.结论:TFU可能在肝微粒体酶介导下,通过缓慢水解方式释放出5-FU,维持对肝癌细胞较长时间的抑制生长作用.
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不同诱导方法制备大鼠肝微粒体酶及其活性的比较
目的:通过比较4种方法诱导制备的大鼠肝微粒体酶(S9)的蛋白含量及活化效果,探讨有效的肝微粒体酶诱导方法.方法:分别采用多氯联苯、苯巴比妥联合β-萘黄酮、注射用苯巴比妥钠联合β-萘黄酮、苯巴比妥作为诱导剂制备大鼠肝S9.采用Lowry法测定S9蛋白含量,通过Ames试验和中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL细胞)体外染色体畸变试验对4种S9的活化效果进行比较.结果:上述4种方法制备的S9蛋白含量依次为30.29、34.15、33.31、28.02 mg/mL,均不超过40 mg/mL.Ames试验和染色体畸变试验中,与不加S9组比较,4种S9在阳性组中均显示出明显的活化作用(P＜0.01).前3种S9所得阳性结果无明显差异,以苯巴比妥作为单独诱导剂的活化作用较前三者弱,差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论:在本试验条件和范围下,以多氯联苯、苯巴比妥联合β-萘黄酮、注射用苯巴比妥钠联合β-萘黄酮作为诱导剂可以成功制备大鼠肝S9,并具有较好的活性,联合诱导法可替代多氯联苯诱导法.
