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补体C5a、C5a受体及其拮抗剂的研究进展
C5a是重要的补体活化产物之一,它与相应的C5a受体结合被激活后,参与了多种疾病的病理过程,如急性肺损伤、脓毒血症、类风湿性关节炎、肾小球肾炎等疾病.如何阻断C5a信号的下传,从而减轻炎症反应一直是免疫学研究的热点问题.目前C5a和C5a受体的拮抗剂主要分为抗C5a抗体、小分子拮抗剂、C5a反义肽、C5a突变体和细菌来源的趋化抑制蛋白等.本文着重介绍C5a和C5a受体的结构与功能,以及相关拮抗剂的研究进展.
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补体异常激活在复发性流产中的作用
复发性流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)为与同一性伴侣发生连续3次或3次以上的自然流产.补体激活的适当抑制是正常妊娠所必需的,母胎界面补体过度激活可导致胚胎死亡、RSA等妊娠并发症.流产动物模型表明补体系统由经典途径或旁路途径激活,产生的C3a、C5a趋化激活中性粒细胞或单核细胞,促使其分泌B因子、D因子,激活、放大旁路途径,形成补体激活的恶性循环.活化的中性粒细胞或单核细胞经可溶性血管内皮生长因子受体1(sFlt-1)途径和组织因子(TF)途径导致RSA等妊娠并发症.但目前对于补体异常激活的关键途径、重要补体组分及致RSA的机制尚不清楚,有待于进一步的研究.
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补体C5a对低氧脑损伤大鼠分泌IL-6的调节作用研究
目的 观察大鼠低氧脑损伤环境下补体C5a对大脑皮质细胞分泌IL-6的调节作用.方法 选用成年体质量均等的雄性大鼠54只,分为1％低氧建模组(A组)18只、4％低氧建模组(B组)18只和常氧量对照组(C组)18只.各组在相应环境下处理3h后,采用real-time PCR技术,检测建模大鼠给予抗C5a单克隆抗体以及外源性C5a后IL-6分泌水平.结果 A、B组较C组补体C5a水平明显升高(P均＜0.05),IL-6水平降低.给予等量抗C5a单克隆抗体后,A组IL-6明显低于B、C组.给予外源性C5a后,A组IL-6水平明显高于B、C组.结论补体C5a在大鼠低氧脑损伤时对IL-6分泌有调节作用.
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梗阻性黄疸患者血清补体C5a水平与肝纤维化标志物的相关性
目的 探讨梗阻性黄疸患者梗阻解除前后血清补体C5a水平的变化情况及其与肝纤维化标志物的相关性.方法 收集2012年6月-2014年6月在本院行经内镜逆行胰胆管造影的梗阻性黄疸患者164例,选取20例健康人作为对照组.检测血清补体C5a水平和Ⅳ型胶原、Ⅲ型前胶原、层黏连蛋白、透明质酸4项肝纤维化标志物水平.组间比较采用t检验,相关性分析采用线性相关分析.结果 梗阻性黄疸患者血清补体C5a水平较健康对照人群升高[(89.7±30.2)vs (62.2±21.1) ng/L,t=2.213,P=0.016),并与梗阻病程密切相关(r=0.954,P=0.003).解除梗阻后血清补体C5a水平降至(66.2±26.3) ng/L,与解除前相比差异有统计学意义(=1.998,P=0.021).解除梗阻前与血清补体C5a水平呈同步升高相关性的有Ⅳ型胶原(r=0.976,P＜0.001)、Ⅲ型前胶原(r =0.972,P＜0.001)、层黏连蛋白(r=0.915,P=0.039)和透明质酸(r=0.962,P=0.002);解除梗阻后与血清补体C5a水平呈同步下降相关性的有Ⅳ型胶原(r=0.965,P=0.001)、Ⅲ型前胶原(r=0.912,P=0.003)和透明质酸(r=0.875,P=0.023).结论 补体C5a可能参与梗阻性黄疸所致肝纤维化的发生过程.
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C3a、C5a、MDA、SOD表达在婴幼儿体外循环心肌损伤中作用
目的 探讨婴幼儿体外循环(CPB)术后心肌损害机理及预防方法.方法 20例行CPB手术的先天性心脏病患儿分别在CPB转流前、CPB转流结束后20 min(简称术后20 min)、术后2 h、术后6 h、术后12 h测定动脉血浆补体3a(C3a)、补体5a(C5a)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌酸激酶(CK)、肌钙蛋白(cTnI)及乳酸脱氢酶(LDH)浓度.结果 与CPB转流前比较,术后20 min及2、6、12 h血浆C3a、C5a浓度降低(P＜0.05),血浆CK、LDH浓度升高(P＜0.05);术后20 min、2 h血浆IL-6浓度逐渐增高(P＜0.05),术后6、12 h逐渐下降,但仍高于CPB转流前(P＜0.05);血浆TNF-α浓度术后20 min增高(P＜0.05),术后2 h开始逐渐下降;血浆CK-MB术后2 h升高(P＜0.05),术后6、12 h逐渐下降,但仍高于CPB转流前(P＜0.05);术后2 h血浆cTnI升高(P＜0.05);血浆MDA浓度术后20 min和2 h降低(P＜0.05),术后6 h明显增高(P＜0.05),术后12 h降低(P＜0.05);血浆SOD浓度术后2、6、12 h明显降低(P＜0.05).结论 婴幼儿CPB术后12 h心肌功能明显受损,其机理可能与CPB术后再灌注损伤补体激活及氧自由基释放导致心肌及内皮损伤有关.
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药疹患者血清Th22细胞相关细胞因子和补体蛋白水平变化研究
目的：了解药疹患者治疗前后血清中Th22细胞相关因子及补体相关指标表达水平的变化，探索其在药疹发生发展中的可能作用。方法35例药疹患者，以1∶1的比例匹配性别、年龄一致的健康对照者，分别采集药疹患者治疗前后及对照组外周血5 ml。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和流式液相多重蛋白定量技术（CBA）检测血清中白细胞介素22（IL?22）、IL?13、肿瘤坏死因子α（TNF?α）及补体蛋白C3a、C4a、C5a。结果治疗前，药疹患者血清中IL?22[（40.85±14.56）ng/L]、IL?13[（869.94±463.39）ng/L]、TNF?α[（1.03±0.64）ng/L]及补体C3a[（55.21±32.98）ng/L]、C4a[（285.11±123.91）ng/L]、C5a表达水平[（279.68±127.72）ng/L]明显高于对照组（分别为29.09±8.66、372.92±151.75、0.44±0.31、42.44±14.26、237.00±63.57和215.98±65.38 ng/L），差异均有统计学意义（t值分别为5.549、6.071、4.321、2.832、2.257、2.495，均P<0.05）。治疗后，药疹患者血清IL?22[（32.72±11.77）ng/L]、IL?13[（456.21±123.22）ng/L]、TNF?α[（0.64±0.39）ng/L]、C3a[（45.47±21.11）ng/L]、C4a[（241.86±84.12）ng/L]、C5a表达水平[（239.61±103.51）ng/L]均低于治疗前，差异均有统计学意义（t值分别为4.443、5.197、3.572、3.213、2.728、4.772，均P≤0.01），且除IL?22、IL?13水平仍高于对照组外（P<0.05）， TNF?α及补体C3a、C4a、C5a水平与对照组差异无统计学意义（均P>0.05）。相关性分析显示，药疹患者治疗前血清补体C3a与C4a（r=0.660）、C5a（r=0.404），C4a与C5a（r=0.501）表达水平呈正相关，均P<0.05，IL?22表达水平与补体C3a水平呈负相关（r=-0.490，P=0.005），与TNF?α表达水平呈正相关（r=0.573，P=0.005）。结论Th22细胞相关细胞因子及补体活化在药疹发生发展过程中可能起重要作用，且IL?22可能参与补体蛋白的调控。
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rhC5a对外周血单个核细胞PKC活性的影响
目的:观察外周血单个核细胞(PBMC)在rhC5a诱导后蛋白激酶C(PKC)活性变化及其特点.方法:将PBMC与rhC5a置体积分数为0.05的CO2中37℃孵育,按一定时间间隔收集细胞,然后测定PKC活性.结果:PBMC经rhC5a诱导后PKC活性呈双峰型增高.结论:C5a细胞内信号转导过程与PKC活化有关.
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大鼠补体C5a蛋白真核、原核表达载体的构建以及体外表达的鉴定、纯化和生物学活性分析
目的:构建带His标签的大鼠补体C5a蛋白真核表达载体pIRES2-EGFP-C5a和原核表达载体pET-21a-C5a,分别观察其体外表达情况,将C5a蛋白纯化后分析其生物学活性.方法:以RT-PCR方法从大鼠肝细胞中扩增出大鼠补体C5a基因全长cDNA序列,在序列的N端添加6个组氨酸His标签后,插入含增强绿色荧光蛋白的真核表达质粒pIRES2-EGFP,用脂质体法转染HEK293细胞,免疫印迹法检测C5a蛋白的表达水平;以真核表达质粒pIRES2-EGFP-C5a为基础,将大鼠补体C5a基因亚克隆至原核表达载体pET-21a,体外检测C5a蛋白的表达情况,之后再行Ni2+螯合亲和层析柱纯化C5a蛋白.以C5a刺激中性粒细胞,流式细胞仪检测细胞内活性氧的生成;C5a刺激大鼠肾小球系膜细胞(GMC)不同时间,RT-PCR测定其产生IL-6和TNF-α的水平.结果:RT-PCR扩增出了大鼠补体C5a基因;并成功构建了pIRES2-EGFP-C5a重组质粒,体外成功转染入HEK293细胞,并在荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白的表达,但免疫印迹法未能检出C5a蛋白的表达;另成功构建了pET-21a-C5a原核表达载体,并在体外用免疫印迹法检测到了C5a蛋白表达.另用亲和层析纯化得到了带His标签的C5a蛋白,证实C5a能促进中性粒细胞呼吸氧爆发.结论:成功构建了大鼠补体C5a真核和原核表达载体.构建的原核表达载体可测到C5a蛋白的表达,且C5a蛋白具有相应的生物学活性.
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尿C5a在IgA肾病病情监测及预后判断中的作用
目的 探讨尿C5a在IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)病情监测及预后判断中的作用.方法 经肾活检组织病理确诊IgAN患者153例(IgAN组),按照Lee氏病理分级分为5个亚组(Ⅰ～Ⅴ组);以38例狼疮性肾炎为阳性对照(狼疮组),28例体检健康者为阴性对照(健康组).采用ELISA法测定各组尿C5a水平,分析IgAN组患者尿C5a水平与各临床指标、病理分级及预后的关系.结果 IgAN组尿C5a[(2.34±2.27)μg/L]明显高于狼疮组[(1.65±0.88)μg/L]和健康组[(0.15±0.09)μg/L](P＜0.05),且IgAN各亚组(Ⅰ～Ⅴ组)尿C5a水平[(1.29±0.98)、(1.66±1.33)、(1.89±1.40)、(3.35±3.06)、(5.75±2.96)μg/L]随IgAN病理分级增加而升高(P＜0.01);Spearman相关分析显示,IgAN患者尿C5a与血肌酐(r=0.515,P=0.000)、估测肾小球滤过率(r=-0.295,P=0.005)、尿蛋白(r=0.299,P=0.001)明显相关;以尿C5a均值(1.47 μg/L)作为分界点,将IgAN患者分为低水平组(78例)和高水平组(76例),随访期间2组分别有1例和10例进入终点事件,Kaplan-Meier生存曲线显示高水平组肾脏生存率低于低水平组(P＜0.01),Cox回归分析显示,高水平尿C5a是IgAN患者肾病进展的危险因素(95％CI:3.517～48.204).结论 尿C5a水平与IgAN疾病损伤严重程度相关,高水平尿C5a提示IgAN预后不良.
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急性肺损伤和成人呼吸窘迫综合征的预防性和针对性治疗进展
急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是机体受到创伤、休克以及严重感染等因素打击后,引起的呼吸窘迫和顽固性低氧血症.成人呼吸窘迫综合征(adult respiratory distress syndrome,ARDS)是肺内严重的急性炎症反应,属于ALI的严重阶段,其特征是肺泡-毛细血管屏障的损伤和肺泡内富含蛋白性渗出物的聚集导致的气血交换功能异常[1-2].美国每年ARDS发病率约为80/10万,常见于老年人[3].一项来自中国22个大型综合医院ICU的流行病学调查显示ARDS是导致严重脓毒症或脓毒性休克患者死亡的独立危险因素[4].
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治疗糖尿病肾病的活血化瘀法抑制补体激活
目的:探讨治疗糖尿病肾病的活血化瘀疗法与补体激活的关系.方法:将50例患者随机分为治疗组与对照组;治疗组予以西医常规疗法结合中医益气养阴补肾活血法汤药治疗,对照组予以西医常规治疗.观察2组治疗前、后临床症状的症候积分变化和凝血酶原时间、尿补体C5a、尿微量白蛋白排泄率、空腹血糖及不良反应等.结果:治疗组临床总有效率为92.0%,对照组临床总有效率为76.0%,2组比较,差异无显著性意义(p＞0.05).2组治疗后临床症候积分均较治疗前明显减少,差异有显著性意义(p＜0.05);组间比较,差异有显著性意义(p＜0.05),提示治疗组症状改善较对照组明显.治疗后2组尿微量白蛋白排泄率均较治疗前明显下降,组间比较,差异有显著性意义(p＜0.05),提示治疗组下降幅度较对照组更为明显.治疗组经治疗后凝血酶原时间明显延长,尿补体C5a明显减少,并与对照组有明显差异(p＜0.05).结论:活血化瘀法对早期糖尿病肾病具有较好疗效,可能的机制是通过抑制凝血酶活性,从而抑制了补体的激活.
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补体C5a受体1拮抗剂对小鼠上行性泌尿道感染的保护作用
目的 探讨补体C5a受体1(C5aRl)拮抗剂对小鼠上行性泌尿道感染的保护作用.方法 (1)雌性C57BL/6小鼠被随机分为实验组与对照组,每组各38只,采用尿道插管推注大肠杆菌(E.coli)法制作上行性泌尿道感染模型.实验组于造模前2h或造模后3h给予腹腔注射C5aR1拮抗剂(W54011或PMX53);对照组给予生理盐水或多肽.分别于感染后24h、48 h评估小鼠膀胱和肾脏感染情况:平板涂布法检测膀胱及肾组织细菌量;实时定量PCR法检测肾脏各炎性因子mRNA的表达;HE染色检查肾组织炎性细胞浸润及损伤程度.(2)原代培养肾小管上皮细胞,随机分为拮抗剂组和对照组,细胞实验检测和比较两组肾小管上皮细胞的细菌黏附量.结果 与对照组相比,造模前给予C5aR1拮抗剂的W54011亚组和PMX53亚组小鼠,感染后48 h膀胱和肾组织细菌量降低(均P＜ 0.01);W54011亚组小鼠肾组织病理评分降低(均P＜ 0.05);感染后24 h肾脏炎性因子,包括:趋化因子(C-X-C序列)配体1(CXCL-1)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达降低(均P＜0.05).与对照组相比,造模后给予C5aR1拮抗剂的PMX53亚组小鼠,感染后48 h膀胱和肾组织细菌量降低(均P＜ 0.01).细胞实验结果显示,与对照组比较,W54011组和PMX53组黏附于细胞上的细菌量减少(均P＜ 0.05).结论 C5aR1拮抗剂可改善泌尿道感染组织病理改变,减轻肾脏炎性反应和减少黏附于肾小管上皮的细菌量.C5aR1可能成为预防及治疗泌尿道感染的有效靶点.
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糖尿病肾病患者补体C5a与单核细胞趋化蛋白-1、血清晚期糖基化终末产物的相关性
目的 通过对不同尿白蛋白排泄率(UAER)糖尿病患者补体C5a与单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、晚期糖基化终末产物(AGEs)的联合检测,探讨三者在糖尿病肾微血管病变发生和发展中的作用及相互之间的关系.方法 糖尿病患者90例,根据UAER的不同分为3组:正常白蛋白尿组(N-UA1b组,UAER<20 μg/min);微量白蛋白尿组(M-UA1b组,20 μg/min≤UAER<200 μg/min);临床白蛋白尿组(C-UA1b组,UAER≥200 μg/min);同期体检中心入选30例作为健康对照(NC组).所有受试对象均测定血浆及尿补体C5a、血浆及尿MCP-1和血清AGEs.结果 4组间血C5a和血MCP-1水平比较差异无统计学意义(P>0.05);糖尿病各组尿C5a、尿MCP-1水平及血清AGEs水平与NC组比较明显升高,且随着UAER增加,尿C5a、尿MCP-1水平及血清AGEs水平逐渐增高,差异均有统计学意义(P<0.05);尿C5a、尿MCP-1、血清AGEs与UAER水平的相关系数分别为0.991、0.771、0.516,均呈正相关;尿C5a与尿MCP-1及血清AGEs水平的相关系数分别为0.928、0.712,均呈正相关;血浆C5a与UAER、尿C5a、血浆MCP-1、尿MCP-1及血清AGEs无相关性.结论 补体活化、细胞外基质聚集和蛋白质非酶糖基化可能在糖尿病肾微血管病变发生和发展中起协同作用.
关键词： 糖尿病肾病 补体C5a 单核细胞趋化蛋白-1 血清晚期糖基化终末产物 -
补体C5a对肾移植排斥反应中IL-17产生的调节作用
目的：探讨肾移植排斥反应中促炎性细胞因子白细胞介素17（IL-17）和补体活化产物C5a的表达情况，以及C5a对IL-17表达的可能调节作用。方法流式细胞术（FCM ）检测肾移植患者外周血中IL-17＋ T细胞的频率和C5a刺激后人肾小管上皮细胞系中的 HK2细胞IL-17的表达情况；ELISA检测肾移植患者血清C5a水平的变化；免疫组织化学检测并比较正常肾组织和发生排斥反应移植肾组织中IL-17的表达和补体C5b-9的沉积；免疫细胞化学检测HK2细胞在重组C5a刺激前、后IL-17表达的差异。结果同种异基因肾移植术后，肾移植患者外周血中IL-17＋ T 细胞百分率明显升高，患者血清C5a水平较术前显著增加（P＜0．01）；发生排斥反应的肾组织中IL-17表达与C5b-9的沉积较正常肾脏组织均有明显的上调，二者呈正相关；加入重组的C5a刺激后，HK2细胞IL-17的表达水平显著上调。结论肾移植排斥反应中补体活化产物C5a可能对IL-17的产生起正向调节作用。
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重度子痫前期病人血清补体C3a、C5a水平及其与肾功能损害的关系
目的 探讨重度子痛前期病人血清补体C3a、C5a水平与肾功能损害的关系.方法 重度子痫前期病人68例(子痫前期组),采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测血清补体C3a、C5a水平,并检测血清尿素氮 (BUN)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)、胱抑素-C(Cys-C)及24 h尿蛋白总量,计算肌酐清除率(CCr).以同期正常单胎足月妊娠孕妇60例为对照组.结果 子痫前期组血清C3a、C5a、BUN、Cr、UA、Cys-C水平及24 h尿蛋白总量明显高于对照组,差异有显著性(t=2.02～31.35,P＜0.05);子痫前期组CCr较对照组明显减低,差异有显著性(t=16.02,P＜0.05).子痫前期组血清C3a、C5a水平与BUN、Cr无明显相关性(P＞0.05);与UA、Cys-C及24 h尿蛋白总量呈明显正相关(r =0.245～0.491,P＜0.05),与CCr呈明显负相关(r=-0.267、-0.281,P＜0.05).结论 重度子痫前期病人血清补体C3a、C5a水平升高,并且与肾功能损害有关.
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补体激活与重度子痫前期发病的关系
目的 检测重度子痫前期孕妇血清中补体C3a、C5a及血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体(AT1-AA)水平变化,从而探讨补体激活与重度子痫前期发病的相关性.方法 选取重度子痫前期孕妇30例,正常孕妇30例作为对照,采用ELISA法检测两组血清中C3a、C5a及AT1-AA的表达水平,并分析C3a、C5a与AT1-AA的相关性.结果 重度子痫前期孕妇血清中C3a、C5a、AT1-AA水平明显高于对照组(t=2.582～4.681,P＜0.05);重度子痫前期孕妇血清中C3a、C5a与AT1-AA水平呈正相关(r=0.283、0.543,P＜0.05).结论 孕妇体内补体C3a、C5a激活可能造成AT1-AA生成增加,并参与重度子痫前期的发病过程.
