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PPARγ激活物对体外肥大心肌细胞的影响
目的:探讨PPARγ激活物吡格列酮和15脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)对体外肥大心肌细胞的影响.方法:新生大鼠的原代培养心肌细胞,以血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激建立体外肥大心肌细胞模型,并用不同浓度的吡格列酮和15d-PGJ2作用于上述细胞.采用RT-PCR法检测肥大心肌细胞特征性基因心钠肽(ANP)和脑钠肽(BNP)的mRNA表达,以3H-亮氨酸掺入实验检测心肌细胞蛋白合成速率,并分析心肌细胞表面积.结果:所建立的肥大心肌细胞模型呈现心肌细胞表面积、ANP和BNP的mRNA表达以及蛋白合成速率均为增加;而吡格列酮和15d-PGJ2可以逆转这些变化,并呈一定的剂量依赖性.结论:PPARγ激活物吡格列酮和15d-PGJ2对体外心肌细胞肥大有抑制作用,提示PPARγ途径介入了心肌肥大的发生发展过程.
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15脱氧前列腺素J2对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制
目的 研究15脱氧前列腺素J2(15-deoxy-Δ12,14-prostaglandin J2,15d-PGJ2)对体外培养的人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 不同浓度的15d-PGJ2干预体外培养的HepG2细胞,采用MTT比色法检测细胞增殖能力,3H-TdR掺入实验检测细胞DNA合成速率,RT-PCR和Western blot检测PPARγmRNA和蛋白表达情况,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期;使用GW9662和/或转染pSG5-PPARγ 真核表达质粒来观察PPARγ通路在15d-PGJ2抑制HepG2细胞增殖中的作用,并使用pGCsi-PPARγ转染观察PPARγ沉默后15d-PGJ2对HepG2细胞增殖作用的影响;后采用凝胶迁移电泳实验(EMSA)检测NF-κB的DNA结合活性.结果 15d-PGJ2作用于HepG2细胞后能够导致使细胞增殖受到抑制、DNA合成速率减慢,并诱导了细胞凋亡,此作用呈一定的剂量依赖关系;在上述过程中,G0/G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少,但PPARγmRNA和蛋白的表达并没有显著变化.GW9662可以部分拮抗15d-PGJ2的增殖抑制作用,但转染pSG5-PPARγ可以逆转GW9662的作用;15d-PGJ2在20μmol/L时对pGCsi-PPARγ转染的HepG2细胞仍可以表现出增殖抑制效应,EMSA结果表明其在50μmol/L时明显抑制了NF-κB的DNA结合活性.结论 15d-PGJ2能够抑制HepG2细胞的增殖、诱导其凋亡并干扰细胞周期,表现出明显的抑瘤作用,此过程涉及PPARγ依赖途径和非依赖途径,而其中PPARγ非依赖途径可能与其抑制NF-κB的作用有关.
关键词： 肝细胞癌 过氧化体增殖物激活型受体γ 15脱氧前列腺素J2 细胞增殖 凋亡 细胞周期 核因子-κB -
PPARγ激动剂对腹膜透析相关性急性腹膜炎大鼠PPARγ、Toll样受体4表达及STAT1信号活化的影响
目的 观察过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮和15脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)对脂多糖(LPS)诱导大鼠腹膜透析相关性急性腹膜炎模型腹膜组织PPARγ、Toll样受体4(TLR4)表达、STAT1活化及腹腔局部炎性反应的影响.方法 24只雄性sD大鼠随机分成4组,每组6只.对照组:腹腔注入4.25%葡萄糖乳酸盐腹膜透析液(简称腹透液,90 ml/kg);LPS组:LPS 1 mg/kg腹腔注入4 h后,再注入腹透液;罗格列酮+LPS组(罗格列酮组):罗格列酮20 mg·kg-1d-1灌胃预处理3 d,注入LPS及腹透液;15d-PGJ2+LPS组(15d-PGJ2组):15d-PGJ2 0.3 mg·kg-1 d-1腹腔注入预处理3 d,注入LPS及腹透液.注入腹透液4 h后处死大鼠,留取腹水、壁层及脏层腹膜组织.ELISA法检测腹水中IL-6浓度.常规行腹膜组织Masson染色和腹水自细胞计数.RT-PCR检测腹膜组织PPARγ、TLR4 mRNA的表达;Western印迹法检测腹膜组织PPARγ、TLR4、磷酸化(p)-STAT1、STAT1蛋白的表达.结果 LPS组大鼠腹水IL-6浓度[268.53(201.87～335.19)ng/L]高于对照组[147.62(130.60-164.64)ng/L)](P<0.01);罗格列酮组大鼠腹水IL-6浓度[110.20(77.60-142.80)ng/L1低于LPS组(P<0.05).与对照组比较,LPS组大鼠腹膜组织明显水肿,腹膜组织PPARγ、TLR4 mRNA及蛋白表达均显著增强(P<0.05).与LPS组相比,罗格列酮组大鼠腹膜组织水肿明显减轻,PPARγ、TLR4 mRNA表达显著增高(P<0.05),但其蛋白表达显著减弱(P<0.05).15d-PGJ2组大鼠腹膜组织水肿明显减轻,PPARγ mRNA及其蛋白表达均显著减弱(均P<0.05),TLR4mRNA表达显著增强(P<0.01),但其蛋白表达减弱(P<0.05).各组间腹水白细胞计数差异无统计学意义.罗格列酮、15d-PGJ2均明显上调LPS诱导的p-STATI表达(P<0.01).结论 罗格列酮和15d-PGJ2可负性调节LPS诱导的大鼠急性腹膜炎性反应,并对LPS信号通路中相关功能蛋白起一定的调控作用.
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15脱氧前列腺素J2对同型半胱氨酸诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用
目的:探讨15脱氧前列腺素J2(15 d-PGJ2)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的抑制作用和对细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)的作用.方法:用不同浓度的Hcy和15 d-PGJ2对大鼠VSMCs进行刺激,以3H-TdR掺入方法观察15 d-PGJ2对Hcy诱导大鼠VSMCs增殖的抑制作用,以Western印迹方法分析ERK1/2蛋白表达和ERK1/2磷酸化水平.结果:15 d-PGJ2可明显抑制Hcy诱导的大鼠VSMCs增殖,但对Hcy诱导的ERK1/2磷酸化无明显作用.结论:15 d-PGJ2可能通过MAPK/ERK1/2信号途径的下游步骤抑制Hcy诱导的大鼠VSMCs增殖.
