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髓系细胞触发受体1在巨噬细胞应答牙龈卟啉单胞菌免疫反应中的表达
目的 研究髓系触发细胞受体1(triggering receptors expressed on myeloid-1,TREM-1)是否参与巨噬细胞对牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)的先天免疫反应,以进一步分析TREM-1在牙周病发病中的作用.方法 分离培养小鼠腹腔巨噬细胞,空白对照组以含10％胎牛血清的RPMI 1640培养液培养,实验组加入Pg刺激;实时荧光定量PCR分析TREM-1基因转录水平的变化,流式细胞术检测其蛋白水平的变化;采用LP-17多肽(10、100和1000 μg/L)特异性阻断TREM-1的作用,酶联免疫吸附测定法检测培养液中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-αα)和白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)水平的变化.结果 细菌刺激巨噬细胞2h后,TREM-1基因转录水平上调(7.99±1.11)倍;细菌刺激24 h后,流式细胞检测显示TREM-1蛋白表达水平上调:平均荧光强度空白对照组为(7.05±1.85),实验组为(13.17±2.33);100和1000 μg/L的LP-17多肽阻断TREM-1后,TNF-α和IL-6的分泌下降.结论 TREM-1促进了巨噬细胞对Pg的先天免疫反应,参与了牙周病的发病过程.
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髓系细胞触发受体1的研究进展
髓系细胞触发受体1（TREM-1）主要在中性粒细胞和单核巨噬细胞中表达，能诱导中性粒细胞和单核细胞分泌肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β等促炎因子，在炎症的级联放大反应中发挥重要作用。 TREM-1表达上调在败血症休克及其他感染中对细胞因子应答的激活起重要作用，阻断TREM-1的表达，可以减轻细菌引起的全身高炎症综合征动物模型的炎性反应，并提高存活率。该文对TREM-1的信号转导机制和天然配体进行总结，并探讨其作为分子靶点治疗疾病和作为生物标志物诊断疾病和判断预后的作用。
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髓系细胞触发受体-1与血清淀粉样蛋白A在慢性阻塞性肺疾病急性加重中的临床价值研究
慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)在全球范围内患病率极高,急性加重是其就诊、住院治疗及医疗开支的主要原因.目前的研究对细菌感染在急性加重患者中的作用意见不一,如能为抗菌治疗在慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)提供早期、快速的客观依据将极有价值.髓系细胞触发受体1及血清淀粉样蛋白A是新近发现的标志物,两者在感染与非感染性炎症、细菌感染与非细菌感染性炎症中表达的不同,将为AECOPD疾病严重程度的评估、细菌感染的鉴别提供重要依据.
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髓系细胞触发受体1结合多肽与脓毒症炎症反应
目的 研究髓系细胞触发受体1(triggering receptor expressed on myeloid cell-1,TREM-1)结合多肽对脓毒症小鼠保护作用.方法 经噬菌体表面展示肽库筛选出的TREM-1结合多肽,42只健康雄性Balb/c小鼠随机分为空白组,脂多糖(LPS)组,对照1(多肽)组,对照2(LPS+TREM-1单抗)组,对照3(LPS+多肽+TREM-1单抗)组,早期治疗(LPs+LPS前1h多肽)组,延迟治疗(LPS+LPS后4 h多肽)组,各组分别于设定时间点麻醉处死小鼠,取肝组织提mRNA行逆转录、荧光定量PCR检测TREM-1、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)mRNA表达水平,并取肺组织病理组织学观察.结果 LPS能增加小鼠肝细胞TREM-1 mRNA表达,早期治疗组可抑制LPS引起的肝组织TNF-α、IL-1β mRNA增加且能减轻LPS导致的肺病理组织炎症反应而延迟治疗组并未见以上抑制作用,此抑制作用能为TREM-1单抗所拮抗.结论 LPS诱导的脓毒症可见TREM-1 mRNA表达上调.TREM-1结合多肽对脓毒症小鼠具有保护作用,阻断TREM-1介导的全身炎症反应综合征可能足其发挥作用的机制.
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探讨髓系细胞触发受体-1在慢性阻塞性肺疾病急性加重期中的临床应用
目的 探讨髓系细胞触发受体-1(triggering receptor expressed on myeloid cell-1,TREM-1)在慢性阻塞性肺疾病急性加重期(acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD)的临床应用.方法 随机抽取在我院门诊或住院部诊治的COPD稳定期患者共40例(n=40),按GOLD(肺功能)分级:轻度5例,中度16例,重度13例,极重度6例.全部患者均于稳定期、急性加重期测定TREM-1、降钙素原(PCT),急性加重期行痰细菌培养及痰病毒PCR检查.结果 AECOPD患者TREM-1水平均较稳定期升高,PCT阳性,差异具有统计学意义(P＜0.05).痰细菌培养结果阳性患者TREM-1水平、PCT阳性率较阴性患者均升高,差异具有统计学意义(P＜0.05).痰病毒PCR结果阳性AECOPD患者血清TREM-1水平、PCT阳性率差异无统计学意义.结论 TREM-1在AECOPD中是一个敏感的炎症标志物,可作为早期诊断AECOPD的客观指标.在细菌感染相关的AECOPD患者中TREM-1水平升高,但病毒感染相关者无变化,联合PCT可用于判断细菌感染相关的AECOPD,有利于指导临床抗生素的用药.
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TREM-1、TNF-α和IL-8在单核细胞源性泡沫细胞中的表达
目的:探讨髓系细胞触发受体1(TREM-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素8(IL-8)在巨噬细胞源性泡沫细胞产生过程中的表达情况.方法:人单核细胞株(U937)经佛波酯 (PMA) 诱导贴壁后,分为PMA诱导组、低密度脂蛋白(LDL)诱导组及氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导组.应用RT-PCR法检测上述3组细胞中TREM-1 mRNA表达;用ELISA法检测上述3组细胞培养上清中TNF-α和IL-8含量.结果:与PMA诱导组、LDL组细胞比较,ox-LKL组细胞TREM-1 mRNA表达水平均明显增高 (P<0.05);ox-LDL组培养上清中TNF-α、IL-8含量明显高于LDL组及PMA诱导组(P<0.05).结论:TREM-1、TNF-α和IL-8在动脉粥样硬化(AS)发生发展中可能存在相互诱导、相互协同作用,共同参与AS的形成.
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沉默髓系细胞触发受体1基因对神经病理性痛大鼠的影响
目的 探讨髓系细胞触发受体 1 (triggering receptor expressed on myeloid cells 1 , TREM1)在大鼠神经病理性痛中的作用及可能机制.方法 成年雄性 SD大鼠,体重 220~300 g,取鞘内置管成功大鼠48 只,随机分为四组(n=12):对照组(S组)、神经病理性痛组(CCI 组)、TREM1 shRNA组(RNAi组)和阴性慢病毒组(Virus组).采用慢性坐骨神经压榨性损伤法(CCI)制备神经病理性痛模型.RNAi 组于造模前 1 周鞘内注射 pGLVU6/RFP/Puro-shRNA 30 μl (1×109 IU/ml);Virus组、CCI组和 S组分别鞘内注射等量阴性慢病毒和生理盐水.于造模前 1 d和造模后1 、3 、7 、1 4 d测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).于造模后 1 4 d痛阈测定结束后,处死大鼠,取 L4-5节段脊髓组织,采用 Western blot 法测定脊髓 TREM1、TLR4、MyD88、IκBα和 p-NF-κB p65 蛋白含量,RT-PCR法测定脊髓 IL-1β、TNF-α和 IL-6 mRNA 表达量.结果 与 S 组比较,CCI组和 Virus组TREM1 蛋白含量明显增加(P<0.05);与CCI组比较,RNAi组 TREM1 蛋白含量明显降低(P<0.05).与 S 组比较,CCI 组、RNAi 组和 Virus 组造模后各时点 MWT 和 TWL明显降低(P<0.05);脊髓 TLR4、MyD88 和 p-NF-κB p65 蛋白含量明显增加,IκBα蛋白含量明显降低(P<0.05);IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA表达量明显升高(P<0.05).与CCI组比较,RNAi组大鼠造模后各时点 MWT 和TWL明显升高(P<0.05);脊髓TLR4、MyD88 和 p-NF-κB p65 蛋白含量明显降低,IκBα蛋白含量明显增加(P<0.05 );IL-1β、TNF-α和 IL-6 mRNA 表达量明显降低(P<0.05).结论 干扰TREM1 基因可以缓解大鼠神经病理性痛,其机制可能与抑制 TLR4/MyD88/NF-κB 通路有关.
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TREM-1在宫内感染新生大鼠的表达及意义
目的 探讨髓系细胞触发受体l(TREM-1)在宫内感染新生大鼠中的表达及其诊断价值.方法 30只SD孕鼠随机分为正常对照组(A组,6只)和宫内感染模型组(B组,24只),腹腔注射脂多糖0.5 mg/kg建立宫内感染模型,并分别于幼鼠出生后1、3、7、14d留取外周血及脑、肺组织.采用Western blot法和免疫荧光法检测脑组织和肺组织中TREM-1表达,ELISA法检测外周血TREM-1和TNF-α水平.结果 A组未见明显的TREM-1阳性染色细胞表达.与A组相比,B组新生大鼠脑组织、肺组织中TREM-1蛋白表达以及外周血中TREM 1、TNF-α水平在生后1d明显升高,3d达到峰值,14d逐渐降低.TREM-1和TNF-α表达水平呈正相关(r=0.794,P＜0.01).结论 宫内感染后,新生大鼠脑、肺组织及外周血中TREM-1表达明显升高,且与TNF α水平密切相关,有望成为早期诊断脓毒症的有用指标之一.
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髓系细胞触发受体1的信号传导在小鼠内毒素性急性肺损伤中的研究
目的 通过特异性激活或阻断髓系细胞触发受体1(TREM-1),观察其在小鼠内毒素性急性肺损伤(ALI)中的信号传导通路.方法 小鼠随机分为生理盐水对照组、ALI组、单抗组和LP17组.腹腔注射脂多糖(LPS)复制小鼠ALI模型.ALI造模2h后,单抗组小鼠腹腔注射抗TREM-1mAb(250μg/kg),LP17组尾静脉注射LP17人工合成肽(3.5 mg/kg).采用免疫组化法测定各组6、12、24、48 h肺组织中核转录因子κB (NF-κB)活性的表达；采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定各时点血清及肺组织匀浆中肿瘤坏死因子α( TNF-α)、白细胞介素10(IL-1O)、可溶性TREM-1(sTREM-1)和TREM-1的含量；观察各组各时点肺组织形态学改变,比较肺组织病理Smith评分.结果 在造模后予以抗TREM-1 mAb特异性激活TREM-1,可显著提高48 h时间点NF-κB在肺组织中的表达,导致肺组织及血清中促炎因子大量生成,肺组织病理Smith评分上升.在造模后予以LP17人工合成肽特异性阻断TREM-1则可导致肺组织NF-κB活性程度下调,下调促炎因子,同时小幅度上调抗炎因子,使肺组织病理Smith评分下降.结论 TREM-1表达可通过NF-κB激活途径促进炎症因子的生成,启动炎症反应,导致ALI的肺部病理改变.
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急性肺损伤小鼠肺泡巨噬细胞TREM1 mRNA的表达及意义
目的: 研究脂多糖(LPS)致急性肺损伤(ALI)小鼠肺泡巨噬细胞(AM)髓系细胞触发受体1 (TREM1)mRNA的表达及意义.方法:48只小鼠分成对照组和实验组,对照组腹腔注射生理盐水,实验组腹腔注射LPS诱导ALI模型;于灌注后3、6、12及24 h,采用荧光定量逆转录(RT-PCR)方法检测支气管肺泡灌洗液中提取的AM中TREM1 mRNA表达水平,用ELISA法检测支气管肺泡灌洗液上清液中的TNFα、可溶性TREM1(sTREM1)水平,并分析TREM1 mRNA与sTREM1和TNFα表达水平的相关性.结果:各对照组AM均表达TREM1 mRNA,但各时间点比较差异无统计学意义(P>0.05);观察组TREM1 mRNA、TNFα及sTREM1的表达均在3 h时上升致高,之后下降;TREM1mRNA与sTREM1及TNFα的表达水平呈正相关(r=0.783,P<0.001;r=0.472,P<0.05).结论:ALI小鼠支气管肺泡灌洗液、及其AM中TREM1 mRNA表达水平升高,TREM1 mRNA升高与sTREM1、TNFα呈正相关.
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髓系细胞触发受体1慢病毒载体对脆弱拟杆菌脓毒症小鼠促炎因子表达的影响
目的 了解髓系细胞触发受体1(TREM-1)基因重组慢病毒短发夹RNA(vshRNA)载体对脆弱拟杆菌脓毒症小鼠促炎因子表达及小鼠存活率的影响.方法 (1)构建TREM-1 vshRNA载体.经实验确定脓毒症小鼠模型制作条件:腹腔注射2.5×10<9CFU/mL灭活脆弱拟杆菌0.5 mL,刺激12 h.(2)115只小鼠按随机数字表法分为健康对照组(3只)和脓毒症模型组、绿色荧光蛋白(GFP)干扰组、TREM-1干扰组、TREM-1半量干扰组.后4组每组28只,先分别经尾静脉注射等渗盐水、GFP vshRNA、TREM-1 vshRNA 2×108TU、TREM-1 vshRNA 1×108TU;1 h后,将该4组小鼠制成脓毒症模型,健康对照组注射等体积等渗盐水.12 h后处死5组小鼠(每组3只),取血检测血浆TNF-α、IL-1β和IL-6含量;取肝组织标本检测TREM-1 mRNA及其蛋白的表达水平.后4组小鼠每组所余25只用于观察腹腔注射后72 h的存活率.(3)另建立脓毒症小鼠模型125只,其中100只分别于腹腔注射后1、2、4、6 h尾静脉注射TREM-1 vshRNA 2×108TU(每时相点25只),余下25只尾静脉注射等渗盐水为对照组.计算尾静脉注射后72 h小鼠存活率.结果 (1)与脓毒症模型组比较.TREM-1干扰组、TREM-1半量干扰组小鼠血浆TNF-α、IL-1β、IL-6含量均下降(P<0.05),以TREM-1干扰组下降明显.GFP干扰组中各促炎因子含量与脓毒症模型组接近(P>0.05).(2)与GFP干扰组比较,TREM-1干扰组及其半量干扰组小鼠肝组织TREM-1 mRNA表达均明显下调(P<0.01),以TREM-1干扰组尤为明显(P<0.05).各组小鼠TREM-1蛋白表达情况与此一致.(3)脓毒症模型组、GFP干扰组小鼠腹腔注射后72 h存活率均为16%.TREM-1干扰组及其半量干扰组分别为76%和44%(P<0.05或P<0.01).(4)另建立的125只脓毒症小鼠模型中,对照组及腹腔注射后1、2、4、6 h组其尾静脉注射后72 h存活率分别为16%、72%、56%、40%、16%,其中1、2、4 h组明显高于对照组(P<0.05或P<0.01).结论 运用TREM-1 vshRNA干扰技术,可有效降低脆弱拟杆菌脓毒症小鼠肝组织TREM-1表达水平,抑制炎性反应,提高小鼠存活率.
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髓系细胞触发受体1在烧伤后早期患者外周血单核细胞中的表达
目的 了解髓系细胞触发受体1(TREM-1)在烧伤后早期患者外周血单核细胞中的表达情况,并探讨其意义.方法 选择8例健康志愿献血者(健康对照组)及伤后48 h内入院的29例轻、中度烧伤患者(烧伤1组),9例重度、特重度烧伤患者(烧伤2组),采集其外周血分离单核细胞.半定量反转录-PCR法检测单核细胞TREM-1 mRNA的表达,流式细胞术检测细胞表面TREM-1蛋白的表达.酶联免疫吸附测定法检测血浆中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的含量.结果 健康对照组、烧伤1组、烧伤2组外周血单核细胞中TREM-1 mRNA表达量分别为0.74±0.13、1.24±0.09、1.46±0.07,细胞表面TREM-1蛋白表达率分别为(9±4)%、(51±6)%、(71±7)%.烧伤1组、烧伤2组以上2项指标及血浆中TNF-α、IL-1 β含量均较健康对照组明显升高(P=0.000).3组受试人员血浆中TNF-α、IL-1 β的含量与TREM-1 mRNA表达水平呈显著正相关(rs=0.68、0.72,P=0.000).结论 严重烧伤后早期患者外周血单核细胞中TREM-1表达增高,这一变化与炎性因子分泌相关;TREM-1参与了烧伤后急性炎性反应的发生与发展.
