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健康婴儿体内的无毒脆弱拟杆菌的分离及鉴定
目的 对分离到的1株无毒脆弱拟杆菌进行鉴定.方法 2012年7月从健康足月新生儿的粪便中分离得到1株脆弱拟杆菌,观察其形态特征、培养特征,并进行生理生化鉴定、药敏试验及16s rRNA序列测定和分析.急慢性毒性试验检测毒性.结果 分离得到的菌株在细菌形态、培养特性、生理生化反应结果与脆弱拟杆菌相似.经BLASTN序列比对,所分离菌株与脆弱拟杆菌标准株NCTC9343同源性达99％.药敏实验提示,新分离菌株对头孢拉定、阿莫西林、庆大霉素、磺胺甲噁唑、甲氧苄啶不敏感,急慢性毒性试验提示无毒性.结论 分离的细菌为1株无毒的脆弱拟杆菌.
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战创伤涂膜剂对厌氧菌体外抗菌实验研究
目的 测定战创伤涂膜剂对产气荚膜梭菌(有芽孢菌)和脆弱拟杆菌(无芽孢菌)标准菌株的低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和低杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC).方法 应用培养基将涂膜剂、氯已定甲硝唑乳膏稀释至不同浓度,分别加入产气荚膜梭菌和脆弱拟杆菌悬液,控制菌液浓度为105 cfu/ml,厌氧培养后观察细菌生长情况,确定两药的MIC和MBC并进行比较.结果 涂膜剂体外对脆弱拟杆菌、产气荚膜梭菌MIC均为1 μg/ml,MBC分别为1μg/ml、2μg/ml.氯已定甲硝唑乳膏对脆弱拟杆菌、产气荚膜梭菌MIC分别为4μg/ml、1μg/ml,MBC为8μg/ml、2μg/ml.两药杀菌率均＞99％.结论 涂膜剂对有芽孢和无芽孢类厌氧菌有良好的抑菌、杀菌作用.
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替硝唑对厌氧菌体外抗菌活性的观察研究
目的 测定替硝唑对产气荚膜梭菌(有芽孢菌)和脆弱拟杆菌(无芽孢菌)标准菌株的低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和低杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC).方法 应用培养基稀释替硝唑至不同浓度,然后分别加入产气荚膜梭菌及脆弱拟杆菌悬液,菌液浓度为105 cfu/ml,厌氧培养后观察细菌生长情况,确定MIC和MBC.结果 替硝唑对脆弱拟杆菌、产气荚膜梭菌的MIC均为1μg/ml,MBC均为2 μg/ml.结论 替硝唑对有芽孢和无芽孢类厌氧菌都有良好的抑菌、杀菌作用.
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产肠毒素脆弱类杆菌聚合酶链反应检测
背景:产肠毒素脆弱类杆菌(ETBF)能导致家畜、儿童和成人腹泻,已引起广泛关注,但国内尚未见相关报道.目的:通过ETBF聚合酶链反应(PCR)检测,调查不同人群粪便标本中ETBF的阳性率.方法:建立ETBF PCR检测,评估其敏感性和特异性,并检测正常对照组和腹泻组的ETBF阳性率.结果:PCR的敏感性为1×104 CFU/ml,常见肠道正常菌群和致病菌均为阴性.正常对照组(475例)和腹泻组(498例)的ETBF阳性率分别为3.6%和6.4%(f=0.042).其中成人对照组和成人腹泻组的阳性率分别为2.3%和5.7%(P=0.047),儿童对照组和儿童腹泻组的阳性率分别为5.1%和7.3%(P=0.33).结论:ETBF PCR检测具有较好的敏感性和特异性,ETBF可能为腹泻的致病因素之一.
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髓系细胞触发受体1慢病毒载体对脆弱拟杆菌脓毒症小鼠促炎因子表达的影响
目的 了解髓系细胞触发受体1(TREM-1)基因重组慢病毒短发夹RNA(vshRNA)载体对脆弱拟杆菌脓毒症小鼠促炎因子表达及小鼠存活率的影响.方法 (1)构建TREM-1 vshRNA载体.经实验确定脓毒症小鼠模型制作条件:腹腔注射2.5×10<9CFU/mL灭活脆弱拟杆菌0.5 mL,刺激12 h.(2)115只小鼠按随机数字表法分为健康对照组(3只)和脓毒症模型组、绿色荧光蛋白(GFP)干扰组、TREM-1干扰组、TREM-1半量干扰组.后4组每组28只,先分别经尾静脉注射等渗盐水、GFP vshRNA、TREM-1 vshRNA 2×108TU、TREM-1 vshRNA 1×108TU;1 h后,将该4组小鼠制成脓毒症模型,健康对照组注射等体积等渗盐水.12 h后处死5组小鼠(每组3只),取血检测血浆TNF-α、IL-1β和IL-6含量;取肝组织标本检测TREM-1 mRNA及其蛋白的表达水平.后4组小鼠每组所余25只用于观察腹腔注射后72 h的存活率.(3)另建立脓毒症小鼠模型125只,其中100只分别于腹腔注射后1、2、4、6 h尾静脉注射TREM-1 vshRNA 2×108TU(每时相点25只),余下25只尾静脉注射等渗盐水为对照组.计算尾静脉注射后72 h小鼠存活率.结果 (1)与脓毒症模型组比较.TREM-1干扰组、TREM-1半量干扰组小鼠血浆TNF-α、IL-1β、IL-6含量均下降(P<0.05),以TREM-1干扰组下降明显.GFP干扰组中各促炎因子含量与脓毒症模型组接近(P>0.05).(2)与GFP干扰组比较,TREM-1干扰组及其半量干扰组小鼠肝组织TREM-1 mRNA表达均明显下调(P<0.01),以TREM-1干扰组尤为明显(P<0.05).各组小鼠TREM-1蛋白表达情况与此一致.(3)脓毒症模型组、GFP干扰组小鼠腹腔注射后72 h存活率均为16%.TREM-1干扰组及其半量干扰组分别为76%和44%(P<0.05或P<0.01).(4)另建立的125只脓毒症小鼠模型中,对照组及腹腔注射后1、2、4、6 h组其尾静脉注射后72 h存活率分别为16%、72%、56%、40%、16%,其中1、2、4 h组明显高于对照组(P<0.05或P<0.01).结论 运用TREM-1 vshRNA干扰技术,可有效降低脆弱拟杆菌脓毒症小鼠肝组织TREM-1表达水平,抑制炎性反应,提高小鼠存活率.
