首页 > 文献资料
-
年龄和离体翻译后修饰对兔α-晶状体蛋白分子伴娘活性的影响
目的探讨年龄和离体翻译后修饰对兔α-晶状体蛋白分子伴娘活性的影响.方法(1)用凝胶过滤法分离幼年、成年和老年3个组兔水溶性晶状体蛋白,观察不同年龄兔α-晶状体蛋白抑制β-low晶状体蛋白凝集和变性作用的程度差异.(2)孵育α-晶状体蛋白使之氧化和糖基化,观察修饰和未修饰的α-晶状体蛋白抑制β-low晶状体蛋白凝集和变性作用的程度差异.结果 (1)3个年龄组α-晶状体蛋白抑制热诱导β-low晶状体蛋白凝集和变性作用的程度差异有显著意义(F=29.100,P<0.01),成年组兔α-晶状体蛋白的抑制作用强于老年组,弱于幼年组,差异有显著意义(q=4.192 4,4.333 9;P<0.05).(2)离体氧化和糖基化修饰的α-晶状体蛋白抑制β-low晶状体蛋白凝集和变性的作用均弱于未修饰的α-晶状体蛋白,差异有显著意义(q=26.917 1,11.640 4;P<0.01).结论 (1)随着年龄的增加,兔α-晶状体蛋白的分子伴娘活性呈下降趋势.(2)离体翻译后修饰可使兔α-晶状体蛋白的分子伴娘活性下降.
-
α-晶状体蛋白分子伴娘功能的初步研究
α-晶状体蛋白作为晶状体的主要结构蛋白,具有分子伴娘特性,对长期维持晶状体的透明具有重要意义[1,2].为探讨其作用机制,我们对比观察了透明晶状体皮质和核、年龄相关性白内障不同年龄患者晶状体和不同混浊程度晶状体中α-晶状体蛋白对过氧化氢酶热凝聚的抑制作用.
-
糖基化对牛α-晶状体蛋白分子伴娘功能的作用
α-晶状体蛋白作为晶状体的主要结构蛋白,是维持晶状体结构和屈光特性的重要物质,其分子伴娘功能对保护晶状体透明具有决定性作用.糖基化可修饰α-晶状体蛋白,影响其分子伴娘功能,参与年龄相关性白内障和糖尿病性白内障的形成[1,2].本研究通过观察6-磷酸果糖(fructose-6-phosphate,F6P)和核糖对α-晶状体蛋白的修饰和影响,证实糖基化在白内障形成中的作用机制.
-
兔α-晶状体蛋白的分子伴娘功能的研究
目的 了解兔α-晶状体蛋白是否具有分子伴娘功能。方法 凝胶过滤法分离水溶性晶状体蛋白在55℃高温条件下,观察α-晶状体蛋白是否能抑制β-low晶状体蛋白的凝集和变性;观察α-晶状体蛋白是否能抑制糖基化诱导的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)的失活,均以牛血清白蛋白(BSA)作为对照。结果 α-晶状体蛋白能抑制热诱导的β-low晶状体蛋白的凝集和变性;α-晶状体蛋白亦能抑制糖基化诱导的G6PD的失活;而牛血清白蛋白却无此作用。结论 α-晶状体蛋白具有分子伴娘功能
关键词： α-晶状体蛋白 β-low晶状体蛋白 分子伴娘 6-磷酸葡萄糖脱氢酶 -
热休克蛋白和细胞凋亡
热休克蛋白(HSP)是普遍存在于生物体细胞中的一个蛋白质家族,是在热休克状态下启动一系列特殊基因编码合成的蛋白质.HSP能保护细胞并促进细胞从各种刺激所造成的损伤中自身修复,具有多种生物学功能.如帮助蛋白折叠、装配、向内质网易位及分解错装的蛋白等分子伴娘功能[1,2]、参与抗原提呈[3]、免疫调控[4]、预防和控制感染[5]、抗肿瘤[6]及参与自身免疫病的发生[1,7]等生理和病理作用.HSP和细胞凋亡均为目前国际上研究的热点,但有关二者的相关性报道甚少,本文就近年来的研究进展情况介绍如下.
-
采用蛋白质工程技术将a B晶状体蛋白导入心肌细胞的初步研究
目的: 采用蛋白质工程技术将a B晶状体蛋白(a B-crystallin,a BC)导入心肌细胞,以深入研究其保护心肌缺血损伤的分子机理,并为将其应用于防治心肌缺血损伤奠定基础.方法: 将人a BC的全长cDNA基因克隆至具有细胞膜通透能力的膜移位序列(membrane-translocat ing sequence,MTS)的下游,构建含GST-MTS-a BC融合蛋白基因的原核表达质粒,转染大肠杆菌DH5a.经IPTG诱导表达后,裂解细菌,谷胱甘肽亲和层析分离纯化GST-MTS-a BC融合蛋白,采用Xa因子切除GST,纤维素-DEAE-52离子交换层析分离纯化MTS-a BC.在检测其分子伴娘活性的基础上,采用异硫氰荧光索(FITC)对MTS-a BC进行标记,加入新生大鼠心肌细胞培养基中,采用荧光显微镜观察其在心肌细胞中的分布.结果: 1.重组的GST-MST-a BC质粒经EcoRI酶切后,可见一4.9 kb的载体及690 bp的a BC基因插入片段 . 经测序证实,重组质粒中的GST-MTS-a BC融合蛋白的序列处于同一阅读框架.2.GST-MTS-a BC原核表达质粒导入DH5a,阳性克隆经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示50 kD的GST-MTS-a BC诱导表达带.用谷胱甘肽亲和层析能分离该诱导表达组分.分离的GST-MTS-a BC被Xa因子切成二段,其一为23 kD的MTS-a BC:另一为26 kD的GST.Western免疫印迹分析证实,GST-MTS- a BC及MTS-a BC均能为人a BC抗体识别.3.MTS-a BC能使变性聚集的肌动蛋白重新解聚,其分子伴娘功能与HSP25大小相当. F ITC标记的MTS-a BC能进入心肌细胞中,而同样标记的a BC及牛血清白蛋白(BSA)均不能进入细胞.讨论: 本研究将12个氨基酸残基组成的具有膜通透能力的MTS的碱基顺序与a BC的全长cD NA序列融合,在大肠杆菌中表达出了MTS-a BC.这种融合蛋白不但具有a BC的分子伴娘功能 , 而且能导入心肌细胞.结论: 1.克隆、表达并纯化了具有分子伴娘活性的MTS-a BC.借助MT S的介导作用,能将a BC导入心肌细跑.2. a BC导入心肌细胞的成功,为进一步研究其保护心肌缺血损伤的分子机理提供了研究工具,并为将其应用于防治心肌缺血损伤奠定了基础.
-
人眼α-晶体蛋白分子伴娘活性的研究
目的了解不同年龄人α-晶体蛋白分子伴娘活性,进一步探索α-晶体蛋白的分子伴娘活性与年龄相关性白内障形成间的关系.方法(1)用凝胶过滤法分别分离成年人及老年人水溶性晶体蛋白.在55℃高温条件,观察不同年龄人α-晶体蛋白对β-low晶体蛋白的凝集和变性的抑制程度差异.结果(1)两组不同年龄的人α-晶体蛋白对热诱导的β-low晶体蛋白的凝集和变性的抑制程度有差异,成年人α-晶体蛋白对热诱导的β-low晶体蛋白的凝集和变性的抑制作用比老年人α-晶体蛋白强.结论(1)随着年龄的增加,人α-晶体蛋白的分子伴娘活性呈下降趋势.
