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鼻咽癌患者中缺氧诱导因子2α表达的临床意义
目的 探讨组织中缺氧诱导因子2α(HIF-2α)的表达在鼻咽癌诊治中的临床价值.方法 应用免疫组织化学方法检测51例初诊鼻咽癌组织和20例鼻咽炎性组织中HIF-2α的表达.结果 鼻咽癌组织HIF-2α阳性表达率明显高于鼻咽慢性炎性组织(P＜0.01);Ⅰ和Ⅱ期鼻咽癌患者组织中HIF-2α的表达明显低于Ⅲ和Ⅳ期鼻咽癌患者(P＝0.039);T1及T2患者鼻咽癌组织的HIF-2α表达阳性率明显低于T3及T4患者鼻咽癌组织的HIF-2α表达阳性率(P＝0.026);有颈部淋巴结转移患者鼻咽癌组织的HIF-2α表达阳性率明显高于无颈淋巴结转移患者的HIF-2α表达阳性率(P＝0.015).结论 HIF-2α的高表达在鼻咽癌的发生、发展过程中有重要作用,检测HIF-2α的表达对于鼻咽癌的诊断、分期具有一定的临床价值,但仍需积累更多的临床资料进行深入研究.
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siRNA沉默HIF-2α基因影响人肝癌细胞株HepG2增殖与侵袭机制探讨
目的 恶性肿瘤在生长过程中会出现肿瘤内部缺氧微环境,缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)和缺氧诱导因子2α(hypoxia-inducible factor 2α,HIF-2α)等因子能够适应细胞内缺氧微环境,并对多种基因进行调控,促进肿瘤细胞增殖、迁移侵袭以及放化疗抵抗等.本研究旨在探讨siRNA沉默HIF-2α后对人肝癌细胞株HepG2增殖、侵袭和细胞周期素D1 (Cyclin D1)表达的影响.方法 200 μmol/L氯化钴(CoCl2)诱导细胞模拟缺氧,作为低氧组,HIF-2α siRNA转染缺氧环境下HepG2细胞,分为低氧+HIF-2α siRNA组、低氧+Control siRNA组,Real-timePCR、蛋白质印迹法检测转染48 h后各组细胞中HIF-2a、Cyclin D1的mRNA和蛋白表达,MTT法检测HepG2细胞增殖,流式细胞术观察细胞周期分布,侵袭试验观察细胞侵袭能力.结果 转染特异性HIF-2α siRNA于HepG2细胞后,低氧+ HIF-2α siRNA组HIF-2α和Cyclin D1 mRNA相对表达量分别为0.557±0.082和0.352±0.049,显著低于低氧组1.127±0.069和0.740±0.068,t值分别为13.092和11.391,均P＜0.001;HIF-2α和Cyclin D1蛋白相对表达量分别为0.018±0.005和0.338±0.054,显著低于低氧组0.077±0.010和0.613±0.047,t值分别为12.728和9.411,均P＜0.001;低氧+HIF-2α siRNA组HepG2细胞在24、48、72、96和120 h的A值分别为0.335±0.045、0.485±0.080、0.631±0.063、0.772±0.055和0.651±0.080,显著低于低氧组0.512±0.061、0.726±0.054、0.836±0.072、0.867±0.077和0.785±0.063,均P＜0.001;低氧+HIF-2a siRNA组穿膜细胞数(37.83±4.920)显著低于低氧组(86.17±7.030),t=13.806,P＜0.001;合成期(S期)与合成后期(G2/M期)细胞比率分别为(21.168±2.007)％和(18.187±5.500)％,均低于低氧组(26.048±3.558)％和(27.843±3.193)％,t值分别为2.926和3.719,P值分别为0.015和0.004,G0/G1期细胞比率为(60.645±4.199)％,显著高于低氧组(46.108±4.556)％,t=5.748,P＜0.001.结论 HIF-2α基因表达水平下降可抑制HepG2细胞增殖侵袭和改变细胞周期分布,可能与下调Cyclin D1的表达有关.
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缺氧诱导因子2α对含CUB结构域蛋白1的调控及在肝癌转移中的作用
目的：探讨缺氧诱导因子2α（ HIF?2α）对CUB结构域蛋白1（ CDCP1）的调控及其在肝癌转移中的作用。方法采用小干扰RNA（ siRNA）和慢病毒转染的方法敲减和稳定过表达HIF?2α的肝癌细胞系MHCC97H，采用Western blot和实时荧光定量PCR检测CDCP1 mRNA和蛋白的表达，采用Transwell侵袭实验检测HIF?2α对细胞侵袭能力的影响，采用免疫组化染色方法检测肝癌组织标本中CDCP1的表达。结果 HIF?2α和CDCP1均能在乏氧条件下被诱导，且CDCP1在乏氧条件下的活化依赖于HIF?2α的表达。在肝癌细胞中，CDCP1在转录和翻译水平均受到 HIF?2α的调控，过表达HIF?2α后，CDCP1 mRNA的表达水平为5．92±0．28，高于阴性对照组（1．00±0．12），差异有统计学意义（P＜0．05）；敲减 HIF?2α48 h 和72 h 后，MHCC97H 细胞中 CDCP1 mRNA 的表达水平分别为0．25±0．04和0．18±0．02，均低于对照组（分别为1．00±0．18和1．00±0．19），差异均有统计学意义（均P＜0．05）。 CDCP1的表达与患者的无瘤生存有关（P＜0．05）。结论 CDCP1的表达与肝癌的进展有关， CDCP1的表达受HIF?2α的调控。通过靶向抑制HIF?2α和（或） CDCP1的表达可能对肝癌转移起到一定的抑制作用。
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HIF2α与细胞通透性关系的研究进展
细胞通透性改变是炎性反应、组织缺氧以及细胞代谢障碍等多种疾病的重要病理过程,HIF2α是细胞缺氧应答反应中重要的调节因子,可对多种基因的表达进行调控.HIF2α可通过不同的信息调控途径,参与调节不同组织细胞通透性变化的病理性过程.
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吉西他滨热化疗灌注联合TACE对肝癌患者疗效及肿瘤细胞因子水平的影响
目的：探讨吉西他滨热化疗灌注联合经导管动脉化疗栓塞术（ TACE）治疗肝癌的疗效及其对血管内皮生长因子（VEGF）、可溶性白细胞介素2受体（sIL-2R）、缺氧诱导因子2α（HIF-2α）水平的影响。方法选取2012年1月至2013年1月湖北医药学院附属人民医院肿瘤科收治的84例中晚期肝癌患者为研究对象，采用随机数字表法将患者分为联合治疗组和热灌注化疗组，各42例。热灌注化疗组给予吉西他滨热化疗灌注治疗，联合治疗组在此基础上联合 TACE 治疗，两组患者均完成8个周期的治疗。比较分析两组患者的近期疗效、不良反应、远期生存率以及治疗前后两组患者血清VEGF、sIL-2R、HIF-2α水平。结果联合治疗组近期的总有效率[85.7％（36／42）]及疗效均高于热灌注化疗组[52.4％（22／42）]，差异均有统计学意义（χ2＝10.918，P ＜0.05；Z ＝5.092，P ＜0.05）；联合治疗组无进展生存期为（18.9±3.8）个月，热灌注化疗组为（12.8±3.1）个月，比较差异有统计学意义（t＝8.118，P＝0.000）；联合治疗组总生存率、无瘤生存率高于热灌注化疗组（76.2％比35.7％、52.4％比19.0％），而复发率低于热灌注化疗组（11.9％比33.3％），差异有统计学意义（P＜0.05）；两组患者化疗不良反应发生情况比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；治疗后，两组患者血清VEGF、sIL-2R、HIF-2α水平较治疗前降低，且联合治疗组血清 VEGF、sIL-2R、HIF-2α水平较热灌注化疗组更低，差异均有统计学意义（ P＜0.01）。结论吉西他滨热化疗灌注联合 TACE 能有效提高肝癌的治疗效果，延缓病情进展，提高患者远期生存率，且不增加不良反应，其作用机制可能与其抑制VEGF、sIL-2R、HIF-2α的表达有关。
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缺氧诱导因子2α在宫颈鳞癌组织中的表达及其意义
目的：探讨缺氧诱导因子2α（HIF-2α）在宫颈鳞癌组织中的表达及其意义。方法：通过原位杂交（ISH）技术检测102例宫颈鳞癌组织、66例CIN组织和40例正常宫颈组织中HIF-2αmRNA的表达情况及其与宫颈鳞癌临床病理参数的关系。结果：HIF-2αmRNA在宫颈鳞癌组织中的阳性表达率均显著高于正常宫颈组织和CIN组织（P<0.05），并且HIF-2αmRNA在宫颈鳞癌组织中的阳性表达与淋巴结转移（χ2=6.766， P=0.009）和临床分期（χ2=11.639，P=0.001）相关，而与年龄、病理组织学分化程度、浸润深度无关（P>0.05）。结论：HIF-2αmRNA在宫颈鳞癌组织中表达上调，可能与宫颈鳞癌的发生和演进有关。
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缺氧诱导因子2α和胸苷磷酸化酶在肾透明细胞癌中的表达及意义
目的：探讨肾透明细胞癌中胸苷酸磷酸化酶（TP）和缺氧诱导因子2α（HIF-2α）的表达水平与临床病理指标及预后的关系。方法采用免疫组化技术检测43例肾透明细胞癌组织中TP和HIF-2α的表达。结果 TP和HIF-2α主要表达在肾透明细胞癌肿瘤细胞胞核中。TP在43例肿瘤组织均有表达，TP的表达和肾透明细胞癌的a分期、远处转移和微血管密度有关（P＜0.05），而与淋巴结转移无关（P＞0.05）。HIF-2α阳性表达21例，阳性表达率为48.84％。HIF-2α的阳性表达与肾透明细胞癌的远处转移有关（P＜0.05），而与分期、淋巴结转移和微血管密度无关（P＞0.05）。TP和HIF-2α表达呈正相关（r=0.837，P＜0.001）。结论检测TP的表达对肾透明细胞癌患者的预后有指导意义。HIF-2α和TP共同参与了肾透明细胞癌的侵袭和转移。
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拉喹莫德抑制成骨细胞中缺氧诱导因子2α的表达及其功能
背景：由于骨折会诱导骨细胞缺氧，使骨细胞中的氧张力明显下降，现已证明，其中低氧诱导因子2α是机体在低氧状态下调剂机体功能的一种重要氧依赖转录激活因子，其介导骨折发生时多种炎性因子的释放。
目的：探讨拉喹莫德对成骨细胞中缺氧诱导因子2α的表达和功能的影响。
方法：缺氧处理前分别在蛋白酶体抑制剂MG132或N-乙酰基-亮氨酰-亮氨酰-正亮氨酸存在和不存在的情况下，用10-100μmol/L的拉喹莫德处理小鼠成骨细胞MC3T3-E1(克隆14)。然后分别在体积分数1%或21%氧张力下进行1-24 h的预处理。
结果与结论：①缺氧诱导因子2α在成骨细胞缺氧中表达明显增高。而拉喹莫德可以抑制成骨细胞中缺氧诱导因子2α及其目标基因在小鼠成骨细胞(MC3T3-E1细胞)中的表达。②拉喹莫德以蛋白酶依赖、von Hippel-Lindau(VHL)蛋白不依赖的方式促进缺氧诱导因子2α的降解，可打断缺氧诱导因子2α和它的分子伴侣热休克蛋白90之间的相互作用，促进缺氧诱导因子2α和激活的蛋白酶C受体之间的相互作用。③结果显示拉喹莫德可能通过影响缺氧诱导因子2α蛋白的折叠和成熟从而促进其降解，可通过改变与伴侣蛋白热休克蛋白90和RACK1的功能性相互作用来抑制成骨细胞中的缺氧诱导因子2α。 -
下调HIF-2α基因对低氧诱导的肝癌细胞体外生物学行为的影响
目的:探讨下调缺氧诱导因子2α(Hypoxia-inducible factor 2α,HIF-2α)基因对人肝癌细胞株HepG2低氧状态下增殖、凋亡、细胞周期分布和迁移侵袭力的影响.方法:选取氯化钴(CoCl2)诱导的人肝癌细胞株HepG2作为研究对象,构建HIF-2α siRNA特异性载体,转染低氧环境下的HepG2细胞,Real-time PCR和Western blot方法分别检测转染前后细胞中HIF-2α mRNA和蛋白表达,MTT方法检测转染前后HepG2细胞增殖,流式细胞术检测转染前后HepG2细胞凋亡和细胞周期分布,Transwell试验检测转染前后HepG2细胞侵袭迁移能力.结果:低氧诱导下,肝癌HepG2细胞HIF-2α表达显著增多;特异性转染HIF-2α siRNA于低氧环境下的HepG2细胞后,HIF-2α mRNA和蛋白表达水平均受到明显抑制、细胞增殖能力降低,凋亡率升高,分布于G0/G1期细胞比率升高,合成期(S)及合成后期(G2/M)细胞比率降低,细胞体外侵袭迁移能力受到明显抑制(P<0.05).结论:低氧环境下肝癌HepG2细胞表达HIF-2α增多,特异性siRNA可通过下调低氧环境下HepG2细胞中HIF-2α基因表达,抑制HepG2细胞增殖、侵袭迁移,改变细胞周期分布并诱导其凋亡.
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HIF-2α及ABCG2在人乳腺癌细胞微球体裸鼠移植瘤组织中的表达及其意义
目的:研究缺氧诱导因子2α (HIF-2α)及三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)在原代无血清悬浮培养人乳腺癌细胞微球体(MSs)裸鼠移植瘤组织中的表达,并探讨MSs具有高动物成瘤性的可能机制.方法:原代乳腺癌组织无血清悬浮培养法获得MSs,将其植入裸鼠体内观察成瘤情况,同时采用人乳腺癌MCF-7细胞悬液种植于同一裸鼠的右侧背部作为实验对照.免疫组织化学法观察移植瘤组织中HIF-2α及ABCG2的表达,Western blotting及RT-PCR技术检测HIF-2α及ABCG2蛋白及mRNA在移植瘤组织中的表达水平.结果:原代MSs具有较强的动物成瘤性.免疫组织化学法,在移植瘤组织中HIF-2α与ABCG2均有表达.Western blotting及RT-PCR,HIF-2α及ABCG2蛋白在MSs移植瘤组织中的表达量明显高于MCF-7细胞移植瘤及瘤旁组织中的表达量(P＜0.05)；HIF-2α mRNA及ABCG2 mRNA在MSs移植瘤组织中的表达量明显高于MCF-7细胞移植瘤组织及瘤旁组织中的表达量(P＜0.05).结论:HIF-2α与ABCG2在MSs裸鼠移植瘤中高表达,推测其为导致MSs具有高动物成瘤性的可能机制.
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HIF-2α在非小细胞肺癌组织中的表达及其与微血管密度、Ki67和GST-π的关系
目的：探讨缺氧诱导因子2α（HIF-2α）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达，分析其与血管生成、细胞增殖和化疗耐药的关系。方法：选取112例 NSCLC 患者癌组织和20名正常人肺组织，采用免疫组织化学 EnVision 法检测癌组织和正常肺组织中 HIF-2α、CD31、Ki67和 GST-π的表达，分析 HIF-2α表达与微血管密度（MVD）、Ki67和 GST-π表达的关系。结果：NSCLC 组织中 HIF-2α阳性表达率显著高于正常肺组织（P ＜0.05），在112例 NSCLC 标本中 HIF-2α表达率为47.3％（53／112）。HIF-2α蛋白高表达 NSCLC 组 MVD为31.1±14.7，明显高于 HIF-2α蛋白低表达 NSCLC 组（24.3±15.8），差异有统计学意义（P ＜0.05）。在HIF-2α高表达组，Ki67高表达者占54.7％（29／53），明显高于 HIF-2α蛋白低表达组（27.1％，16／59），差异有统计学意义（r ＝0.281，P ＝0.003）。 HIF-2α高表达与 GST-π表达无明显相关性（r ＝0.122，P ＝0.202）。结论：HIF-2α可能通过促进 NSCLC 的血管生成、增强肿瘤细胞的增殖能力在 NSCLC 发生发展中起重要作用，而其与化疗耐药可能无关。
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肝癌肝动脉化疗栓塞治疗对缺氧诱导因子2α表达的影响及其临床意义
目的:探讨采用肝动脉化疗栓塞(transarterial chemoembolization,TACE)治疗的肝癌患者肝癌组织中缺氧诱导因子2α(hypoxia inducible factor 2 alpha,HIF-2α)的表达及其临床意义.方法:采用30例TACE治疗后手术切除的肝癌患者(研究组)的肝癌组织标本以及30例直接手术切除的肝癌患者(对照组)的肝癌组织标本,采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、蛋白质印迹法(Western blot)、免疫组织化学(IHC)方法检测肝癌组织中HIF-2α的表达水平并分析其临床意义.结果:研究组肝癌组织中HIF-2α的mRNA和蛋白水平显著高于对照组(P＜0.05)；肝癌组织中HIF-2α蛋白表达水平与肝癌患者的总体生存时间相关(95％可信区间为0.442～0.972,P＜0.05),而与无瘤生存时间无关(P＞0.05).结论:TACE治疗可使肝癌组织中HIF-2α表达水平显著上升,其表达水平与恶性表型相关.
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癌旁肝组织中缺氧诱导因子2α预测原发性肝细胞肝癌切除术后复发预后的价值
目的 探讨肝癌以及癌旁肝组织中缺氧诱导因子2α(HIF-2α)预测原发性肝癌切除术后复发和预后的价值.方法 从1999年至2006年我所968例原发性肝癌患者中随机选取105例制成组织芯片,随访至2010年3月.采用免疫组织化学方法染色并半定量分析肝癌以及相应的癌旁组织中HIF-2α的表达,分析HIF-2α高低组主要临床相关资料的差异,并评价其与患者复发、预后的相关性.结果 肝癌中HIF-2α表达高低和预后无显著相关性.肝癌癌旁肝组织中HIF-2α阴性患者57例,1,3,5年生存率(92.7％,74.5％,58.6％)、无瘤生存率(80.1％,58.6％,44.6％)和早期复发(19例)显著好于癌旁HIF-2α阳性患者(46例)的总体生存率(75.4％,50.3％,41.0％)、无瘤生存率(55.1％,35.3％,22.9％)和早期复发(25例).两组患者的临床病理特征的差异无统计学意义.多因素结果提示癌旁HIF-2α高表达为术后总体生存和无瘤生存的独立预后因素.结论 HIF-2α可有效预测原发性肝癌切除术后患者的复发和预后.
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HIF-2α通过内质网应激途径诱导LO2细胞凋亡
目的 探讨缺氧诱导因子2α(HIF-2α)在缺氧诱导LO2肝细胞凋亡中的作用及其机制.方法 构建HIF-2α特异性的沉默干扰RNA(siRNA)并转染LO2细胞,分别在常氧及缺氧条件下培养细胞,采用流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测内质网应激及细胞凋亡相关蛋白的表达.结果 与常氧条件相比,缺氧处理后HIF-2α表达、细胞凋亡、内质网应激与凋亡相关蛋白表达均明显增加,而siRNA能有效抑制上述指标的增加过程.结论 缺氧条件下HIF-2α通过内质网应激途径引发LO2细胞凋亡,可能是缺氧性肝脏疾病治疗的一个潜在靶点.
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缺氧诱导因子-2α与MMP-2启动子结合位点的确定
目的 探讨缺氧诱导因子-2α (hypoxia inducible factor-2α, HIF-2α)与基质金属蛋白酶-2 (matrixmetallo proteinases-2, MMP-2)基因中缺氧反应元件(hypoxia-response element, HRE)的体外结合,并确定该结合位点.方法 采用凝胶滞留电泳迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)鉴定HIF-2α与MMP-2基因中HRE的体外结合;同时利用染色质免疫沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay, CHIP)进一步验证并确定该结合位点.结果 成功预测2条MMP-2启动子区潜在的HIF-2α结合位点,分别为-217 ～-204、-1 029～-1 007;探针标记效率检测结果显示,正义链和反义链标记效率均为50％以上,可用于EMSA实验;结果显示,MMP-2启动子区存在HIF-2α的结合位点,位于-217 ～-204.CHIP结果显示,实验组和对照组均扩增出约bp MMP-2启动子中含HRE区域的片段,提示HIF-2α蛋白与MMP-2启动子中的HRE区域存在活体内结合的关系.结论 HIF-2α与MMP-2基因中的HRE存在体内外结合.
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siRNA干扰缺氧诱导因子-2α对乳腺癌细胞增殖能力的影响
目的 探讨缺氧诱导因子-2α(hypoxia-inducible factors-2α,HIF-2α)siRNA对乳腺癌细胞MCF-7增殖能力的影响及相关机制.方法 采用CoCl2处理细胞,建立细胞缺氧模型,应用RNA干扰技术沉默MCF-7细胞中HIF-2α的表达;运用RT-PCR技术检测转染后MCF-7细胞中HIF-2α mRNA的表达;绘制细胞生长曲线,观察细胞生长速度和倍增时间;通过流式细胞术观察细胞周期分布的改变;采用RT-PCR技术检测增殖相关基因的表达.结果 细胞缺氧模型建立成功.RNA干扰结果显示:缺氧+siRNA组HIF-2α mRNA的表达与单纯缺氧组相比明显降低(P<0.05);细胞生长曲线结果显示:缺氧+siRNA组与单纯缺氧组相比,细胞生长速度明显减慢,倍增时间显著延长(P均<0.05);细胞周期结果显示:缺氧+siRNA组与单纯缺氧组相比,S期和G2/M期细胞比例显著减少(P<0.05);RT-PCR结果显示:缺氧+siRNA组与单纯缺氧组相比,p21基因表达上调(P<0.05),Cyclin B基因表达下调(P<0.05).结论 HIF-2α siRNA可抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖能力,可能与p21基因表达上调、Cyclin B基因表达下调有关.
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缺氧诱导因子2α在肝癌中的表达及其与血管生成、上皮间质转化的关系
目的：研究缺氧诱导因子2α( HIF-2α)在肝细胞肝癌中的表达情况及其与血管生成和上皮间质转化( EMT)的关系。方法收集正常肝组织15例、肝癌组织和相应的癌旁组织各63例,采用免疫组化染色法检测HIF-2α的表达,分析其表达与肝癌临床病理特征及生存预后之间的关系；同时分析肝癌组织中HIF-2α、白细胞分化抗原34( CD34)、波形蛋白( Vimentin)的表达,探究 HIF-2α的表达与血管生成、EMT的关系。结果免疫组化染色法显示 HIF-2α在肝癌组织中主要在胞质表达,显著高于癌旁组织及正常肝组织( P<0．001)。 HIF-2α的表达与肿瘤大径、肿瘤 TNM 分期、Edmondson分级及包膜和血管侵犯有关,与患者年龄、性别、乙肝表面抗原表达、甲胎蛋白( AFP)、Child-Pugh分级、肿瘤结节数目及肿瘤内坏死无关。相关性分析显示HIF-2α的表达与微血管密度(MVD)有关(t =5．919,P <0．001),与Vimentin的表达无关(r =1．013,P =0．209)。生存分析显示,高表达组术后总体生存率明显低于低表达组(P <0．001)。多因素分析显示瘤内坏死、肿瘤血管侵袭和 HIF-2α表达是影响肝癌患者总生存率的独立危险因素。结论HIF-2α可促进肝癌血管生成,但可能不参与EMT,可作为判断肝癌患者预后的指标之一。
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小分子干扰RNA下调HIF-2α基因表达对人肝癌细胞HepG2体外凋亡的机制
目的 探讨小分子干扰RNA下调缺氧诱导因子-2α基因表达对人肝癌细胞株HepG2体外凋亡的影响,并研究其可能的分子机制.方法 采用不同浓度的氯化钴诱导细胞模拟缺氧,设计合成的特异性缺氧诱导因子-2αsiRNA转染缺氧环境下HepG2细胞48 h后,采用逆转录聚合酶链式反应、免疫蛋白印记方法检测细胞中缺氧诱导因子-2αmRNA和蛋白表达,流式细胞术观察细胞凋亡率,半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-9试剂盒检测细胞中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-9活性;免疫蛋白印记法检测凋亡相关因子B淋巴细胞/白血病-2、白血病-2相关x蛋白的表达.结果 低氧环境下,缺氧诱导因子-2α表达上调;特异性缺氧诱导因子-2αsiRN A转染HepG2细胞48 h后,转染组缺氧诱导因子-2αmRNA和蛋白表达下调(P<0.05);流式细胞术显示细胞凋亡率升高(P<0.05),活性检测显示半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-9活性升高,免疫蛋白印记法检测显示白血病-2表达下调,x蛋白表达上调(P<0.05).结论 特异性缺氧诱导因子-2αsiRNA可针对性的下调HepG2细胞中缺氧诱导因子-2α的表达,促进HepG2细胞体外凋亡,这一过程可能与下调白血病-2表达、上调x蛋白的表达及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-9活性有关.
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缺氧诱导因子2α和血管内皮生长因子在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及意义
目的 探讨缺氧诱导因子2 α(HIF-2α)蛋白和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及意义.方法 收集临床宫颈组织蜡块共208例,其中宫颈鳞状细胞癌102例,宫颈上皮内瘤样病变(CIN) 66例,正常宫颈组织40例.通过免疫组织化学方法检测各组织中HIF-2α蛋白和VEGF蛋白的表达,并分析HIF-2α蛋白与宫颈鳞状细胞癌临床病理参数的关系,HIF-2α蛋白和VEGF蛋白表达的相关性及HIF-2α蛋白和VEGF蛋白的表达与微血管密度(MVD)的关系.结果 HIF-2α蛋白在正常宫颈组织、CIN和宫颈鳞状细胞癌中表达阳性率分别为0.0％、18.2％、73.5％,VEGF蛋白在正常宫颈组织、CIN和宫颈鳞状细胞癌中表达阳性率分别为7.5％、21.2％、68.6％;HIF-2α蛋白和VEGF蛋白在3种组织中的表达阳性率差异均有统计学意义(P＜0.05).HIF-2α蛋白在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达与淋巴结转移、浸润深度和临床分期有关(P＜0.05),而与年龄和病理组织学分化程度无关(P ＞0.05);HIF-2α蛋白和VEGF蛋白表达呈正相关(P ＜0.05);MVD在HIF-2α蛋白、VEGF蛋白阳性组的表达均高于其阴性组的表达(P＜0.05).结论 HIF-2α可能通过调控VEGF的表达而促进宫颈鳞状细胞癌的发生和发展,并可能成为宫颈鳞状细胞癌治疗的一个新的分子靶点.
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缺氧性肺动脉高压大鼠肺组织丝裂原活化蛋白激酶、磷酸肌醇3-激酶和缺氧诱导因子2α表达的变化
目的 探讨大鼠低氧性肺动脉高压(HPH)形成过程中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)和缺氧诱导因子2α(HIF-2α)表达的变化.方法 40只成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组和低氧3天、7天、14天、21天组(H3、H7、H14、H21组),每组8只,低氧组复制HPH大鼠模型.测各组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、右心室肥大指数(RVHI)、管壁面积与血管总面积比值(WA%)、管腔面积与血管总面积比值(LA%);免疫组织化学或Western blot检测磷酸化ERK(p-ERK)、磷酸化JNK(p-JNK)、磷酸化P38(p-P38)、磷酸化Akt(p-Akt);原位杂交和免疫组织化学检测HIF-2α的表达.结果与对照组比较,H7组大鼠mPAP开始上升 (P<0.05),H14组达高水平并维持于此水平.缺氧14天后出现肺血管重塑,RVH I改变.与对照组比较,p-ERK和p-Akt在H3组表达上升 (P＜0.05),且在H3组、H7组、H14组和H21组肺小动脉内膜、中膜表达均为阳性.而p-P38、p-JNK蛋白在对照组与低氧组表达均不明显.HIF-2α mRNA在对照组表达弱阳性,在H14组表达升高.HIF-2α蛋白在对照组表达不明显,H7组表达达高峰,H14组和H21组维持在高水平.相关分析表明p-ERK和p-Akt均与HIF-2α蛋白(内膜)和mPAP、RVHI呈正相关(P＜0.01).结论 p-ERK、p-Akt与HIF-2α均在大鼠HPH的发病机制中发挥作用.p-ERK和p-Akt可能通过在蛋白表达水平上调HIF-2α,进而上调下游目标基因,从而参与HPH发生发展.
