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人p27kip1基因腺相关病毒载体的构建
目的 克隆人肿瘤转移抑制基因p27kip1,利用基因重组技术,构建其腺相关病毒载体,为进一步研究骨肉瘤的基因治疗建立一个平台.方法 从人正常胎盘组织中提取总RNA,RT-PCR获取p27kip1基因(ORF)cDNA序列,并将其克隆至腺相关病毒载体pAAV-MCS,构建人p27kip1基因腺相关病毒载体.结果 人胎盘组织抽提总RNA,并通过RT-PCR获得目的 基因ORF,经TA克隆后,将目的 基因连人pAAV-MCS中,送测序结果 无误.结论 成功构建的重组质粒pAAV-MCS-p27kip1,将为进一步研究p27kip1蛋白的生物学效应提供基础,为p27kip1基因应用于骨肉瘤的治疗提供实验依据.
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乳腺癌组织中PTEN和p27kip1蛋白的表达及其相互关系
目的:探讨PTEN和p27kip1在乳腺癌组织中的表达规律及其相互关系.方法:采用免疫组化SP法检测64例乳腺癌组织中PTEN和p27kip1蛋白的表达.结果:乳腺癌组织PTEN(34/64)和p27kip1(33/64)蛋白表达显著低于正常乳腺组织(15/15),P值分别为0.008 2和0.007 8.有腋淋巴结转移、远处转移及ER阴性组PTEN表达分别为13/33、3/11和16/38,明显低于无腋淋巴结转移(21/31)、无远处转移(31/53)和ER阳性组(18/26),P值分别为0.024 0、0.006 3和0.034 75.p27kip1在乳腺癌有腋淋巴结转移、远处转移及ER阴性组的表达分别为7/33、2/11和8/38,明显低于无腋淋巴结转移(15/31)、无远处转移(20/53)和ER阳性组(14/26),P值分别为0.023 0、0.044 0和0.007 1.两者表达均与肿瘤大小无关.两种蛋白表达水平具有显著的相关性,P=0.004 1.结论:PTEN、p27kip1表达异常与乳腺癌转移及恶性程度密切相关,两种基因蛋白表达强度一致,显示其在乳腺癌演进中具有协同作用.
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子宫内膜癌组织中基因p16和p27kip1的表达及其临床意义
目的 研究p16,p27kip1在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组化技术对65例子宫内膜癌组织进行表达检测,结合临床病理学指标进行分析.结果 p16,p27kip1在65例子宫内膜癌组织的阳性表达率分别是47.7%和41.5%.p16,p27kip1在65例子宫内膜癌组织的阳性表达率均与组织学分级密切相关,在组织分化好者阳性表达率显著高于组织分化差者(均P＜0.05).结论 p16,p27kip1在子宫内膜癌的发生、发展中起着重要的调控作用.p16和p27kip1的缺失表达与子宫内膜癌的生物学行为密切相关,对判断子宫内膜癌的预后和指导临床治疗均有重要意义.
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p27kip1基因与肿瘤关系的研究进展
该文对 p 27 kip1基因与肿瘤关系的研究进展进行阐述,为研究肿瘤发生、发展、诊断及治疗提供了一定的科学依据 .
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p57Kip2和p27Kip1基因mRNA在胃癌组织中的表达及意义
目的:研究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p57Kip2和p27Kip1基因mRNA在胃癌组织中的表达及意义.方法:采用RT-PCR技术,分别检测p57Kip2和p27Kip1基因mRNA在108例胃癌组织及60例癌旁组织中的表达.结果:p57Kip2基因mRNA在胃癌组织中阳性表达率为28.70%,显著低于癌旁组织中的阳性表达率56.67%(P＜0.05),p57Kip2基因mRNA相对含量检测胃癌组织为0.59±0.17,显著低于癌旁组织1.63±0.21(P＜0.05);p27Kip1基因mRA在胃癌组织中阳性表达率为23.15%,低于癌旁组织中的阳性表达率31.67%(P＞0.05),p27Kip1基因mRNA相对含量检测胃癌组织为1.53±0.23,稍高于癌旁组织1.46±0.35(P＞0.05).结论:胃癌组织中p57Kip2和p27Kip1基因蛋白表达的降低与转录机制有关,并在胃癌的发生中存在不同的抑癌途径或不同的调控机制.
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p27Kip1和细胞周期蛋白D1在胃癌中的表达及其预后意义
目的:研究p27Kip1 、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)在胃癌组织中的表达水平以及与生物学行为的关系和对预后评价的意义.方法:以免疫组化方法检测92例胃癌组织中p27Kip1、cyclin D1蛋白的表达水平.结果:本组92例胃癌中,p27Kip1蛋白阳性39例,占42.4%;cyclin D1蛋白表达阳性44例,占47.8%;胃癌组织中,p27Kip1蛋白水平与胃壁浸润深度、TNM分期、病理组织学分级、区域淋巴结转移均相关(P＜0.05);cyclin D1蛋白表达与病理组织学分级负相关(P＜0.05);p27Kip1与cyclin D1蛋白阳性表达显著相关(P＜0.05);单变量生存分析结果,p27Kip1高表达组三年、五年生存率分别为77.1%、57.8%,明显高于低表达组的33.7% 、26.3%(P=0.007),多变量分析显示p27Kip1是一个独立的预后指标(P=0.0003).结论:p27Kip1可作为反映肿瘤恶性表型的指标,对胃癌预后具有一定的价值;cyclin D1是胃癌发生、发展过程中早期的分子事件;p27Kip1在胃癌进展中起着比cyclin D1更重要的作用.
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胃癌中P27Kip1、P53表达与其浸润、转移和预后的关系
目的:研究胃癌组织中P27Kip1和P53的表达与胃癌浸润、转移和预后的关系.方法:用免疫组化(二步法)检测100例胃癌组织中的P27Kip1蛋白和P53蛋白的表达.结果:P27Kip1蛋白阳性表达检测率44%;P53蛋白阳性表达检测率49%.在胃癌浸润浆膜组、淋巴结转移组和5年内死亡组中P27Kip1低表达与P53高表达均与相应组比较差异有显著性(P<0.05).单变量生存分析结果显示P27Kip1高表达组5年生存率为70.59%,显著高于低表达组54.55%和阴性组26%;P53高表达组5年生存率为19.23%,显著低于低表达组43.75%和阴性组53.19%.多变量Cox回归模型分析显示P27Kip1、P53均是判断胃癌独立的预后指标,但低P27Kip1表达对患者预后差的相对危险度(RR=3.06)显著大于高P53表达对患者预后差的相对危险度(RR=2.33).结论:P27Kip1低表达与P53高表达的癌细胞常更能浸润与转移,使患者生存率明显降低.P27Kip1和P53是判断胃癌预后的独立指标,其中P27Kip1表达降低对胃癌预后的影响作用更大.
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外源性p27Kip1基因转染对人乳腺癌MCF-7细胞株细胞周期和增殖的影响
目的:探讨外源性p27Kip1基因对人乳腺癌MCF-7细胞株细胞周期和增殖的影响.方法:应用脂质体转染法将含人野生型p27Kip1基因质粒DNA转染乳腺癌MCF-7细胞,免疫细胞荧光化学方法验证p27Kip1基因转染MCF-7细胞后蛋白表达情况;流式细胞仪检测细胞周期的变化;细胞计数法绘制细胞生长曲线,观察外源性p27Kip1对乳腺癌细胞MCF-7生长的影响.结果:免疫细胞荧光化学方法证实p27Kip1基因转染MCF-7细胞后存在蛋白表达;流式细胞仪检测结果提示,细胞周期出现G0/G1期阻滞;细胞计数法绘制细胞生长曲线显示细胞增殖明显抑制.结论:外源性p27Kip1基因对乳腺癌MCF-7细胞生长和细胞周期有明显抑制作用.
关键词： 乳腺癌细胞株MCF-7 p27kip1基因 细胞周期 细胞增殖 -
细胞周期蛋白p27和Cyclin D1在胃癌中的表达及其临床意义
目的 通过研究细胞周期蛋白p27、Cyclin D1在胃癌组织中的表达水平,探讨其与胃癌生物学行为的关系.方法 免疫组化S-P法检测50例胃癌组织中p27Kip1、Cyclin D1蛋白的表达水平.患者术前均行电子纤维镜检查,并经病理证实为胃癌.每例标本均含原发癌组织和周围正常组织,对照组周围正常组织距离癌组织5cm以上.患者术前均未接受任何抗肿瘤治疗.结果 50例胃癌中,癌组织p27Kip1蛋白阳性22例,占44.0%,与正常组织比较显著降低(P＜0.001);Cyclin D1蛋白表达阳性24例,占48.0%,与正常组织比较显著升高(P＜0.001);p27Kip1蛋白表达水平与胃壁浸润深度、TNM分期、病理组织学分级、区域淋巴结转移均相关(P＜0.05);而与肿瘤大小、部位、患者的年龄无显著相关性(P＞0.05).Cyclin D1蛋白表达与病理组织学分级相关(P＜0.05);p27Kip1与Cyclin D1两者蛋白阳性表达无显著相关性(P＞0.05);结论 (1)p27Kip1蛋白表达可作为反映肿瘤恶性程度的指标,在一定程度上可反映胃癌病人的预后;(2)Cyclin D1蛋白表达与胃癌病理组织学分级呈相关性,其过表达可能与胃癌的发生有关;(3)胃癌组织中p27Kip1与Cyclin D1蛋白阳性表达两者无相关性;
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p27KIP1和CyclinE表达与喉鳞状细胞癌生物学行为的关系
目的 探讨p27KIP1和CyclinE基因蛋白与喉鳞状细胞癌(LSCC)生物学行为的关系。方法采用免疫组化法检测60例LSCC、40例喉不典型增生病变和20例喉正常粘膜中p27KIP1和CyclinE基因蛋白的表达。结果 p27KIP1和CyclinE阳性表达主要定位于细胞核；在LSCC、喉不典型增生病变和喉正常粘膜中p27KIP1阳性表达率分别为：58.3％(35／60)、67.5％(27／40)和90.0％(18／20)(P＜0.05)；CyclinE阳性表达率分别为：45.0％(27／60)，20.0％(8／40)，5.0％(1／20)(P＜0.001)。LSCC中颈淋巴结转移组和非淋巴结转移组，淋巴结转移阳性组p27KIP1阳性表达率明显低于阴性组(P＜0.01)；淋巴结转移组CyclinE阳性表达率明显高于非淋巴结转移组(P＜0.01)。p27KIP1与CyclinE表达显著相关性(P＜0.01)。结论p27KIP1和CyclinE异常表达可能是喉癌发生中早期分子事件，对喉癌发生发展起重要作用。
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p14ARF和p27KIP1基因甲基化与鼻咽癌的临床相关性研究
目的 探讨鼻咽癌组织中p14ARF和p27KIP1基因启动子区甲基化状态在鼻咽癌早期分子诊断和治疗中的作用.方法 应用甲基化特异性PCR方法对65例鼻咽癌组织(鼻咽癌组)和30例正常鼻咽上皮组织(对照组)中的p14ARF和p27 KIP1基因启动子区甲基化状态进行检测.结果 鼻咽癌组中p14ARF和p27KIP1基因启动子区甲基化阳性率分别为18.5％(12/65)和61.5％ (40/65),两者总检出率为67.7％ (44/65)；而对照组中均未检测到p14ARF和p27KIP1基因启动子区甲基化；鼻咽癌组中p14ARF和p27KIP1基因启动子区甲基化与其临床分期和病理特征均无明显相关性(P＞0.05).同时,p14ARF基因甲基化和p27 KIP1基因甲基化无明显相关性(r =0.05,P＞0.05).结论 p14ARF和p27KIP1基因甲基化可能是鼻咽癌早期分子事件,可作为鼻咽癌发生的早期诊断指标及甲基化基因治疗的靶点.
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PTEN、p27kip1、VEGF在子宫内膜癌中的表达及意义
目的探讨抑癌基因PTEN、p27kip1、VEGF在子宫内膜癌中的表达、意义及三者之间的相关性.方法采用免疫组化SP法检测32例子宫内膜腺癌,13例子宫内膜不典型增生和10例正常子宫内膜石蜡切片中PTEN、p27kip1及VEGF的表达.结果子宫内膜腺癌组织与子宫内膜不典型增生、正常子宫内膜组织比较,PTEN、p27kip1阳性表达率明显降低,差异有非常显著性(χ2=11.09,χ2=9.466, P<0.01),VEGF表达率明显增加,差异有非常显著性(χ2=21.253, P<0.01).PTEN表达与肿瘤分化、肌层浸润程度、淋巴结转移有关(P<0.05),与临床分期无关(P>0.05).在子宫内膜腺癌组织中,PTEN与p27kip1表达呈正相关(r=0.744,P<0.01),与VEGF表达呈负相关(r=-0.738, P<0.01).结论 PTEN、p27kip1的失表达与VEGF的过表达在子宫内膜腺癌的发生发展中起着一定的作用,PTEN与p27kip1、VEGF的异常表达密切相关,三者的联合检测有助于子宫内膜癌的早期诊断.
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Jab1和p27kip1基因在喉鳞状细胞癌组织和喉癌Hep-2细胞中的表达及意义
目的:探讨Jab1和p27kip1基因在喉鳞状细胞癌组织和喉癌Hep-2细胞中的表达及意义.方法:采用免疫组织化学方法检测50例喉鳞状细胞癌组织和10例癌旁正常组织中Jab1和p27kip1的表达.采用人工合成Jab1 siRNAⅡ用脂质体2000包裹后转染Hep-2细胞,用RT-PCR方法分析转染后喉癌细胞中Jab1和p27kip1基因的表达情况.结果:Jab1和p27kip1蛋白的阳性表达定位为细胞核中,Jab1在人喉鳞状细胞癌组织中高表达,正常喉黏膜中不表达或弱表达;p27kip1在人喉癌组织中弱表达,正常喉黏膜中强表达；两者呈负相关.Jab1 siRNAⅡ可降低Jab1 mRNA表达,并且随着时间的延长,Jab1 mRNAⅡ在Hep-2细胞中的表达逐渐减弱,而p27kip1 mRNA的表达则无明显变化.结论:Jab1在人喉鳞状细胞癌组织中表达增强,正常喉黏膜中不表达或弱表达；p27kip1则正好相反.两者在喉癌中的表达呈负相关.Jab1 siRNAⅡ可以特异性降低Jab1 mRNA在喉癌Hep-2细胞中的表达,为进一步研究Jab1基因在喉癌中的作用奠定了基础.
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外源性P27kip1基因转染诱导前列腺癌细胞凋亡的实验研究
目的探索前列腺癌基因治疗的新途径.方法用脂质体介导p27kip1基因转染前列腺癌PC-3M细胞,SABC免疫组化法检测癌细胞外源性p27kip1基因表达;MTT比色分析检测癌细胞体外生长活性;流式细胞仪(FCM)分析细胞周期改变;DNA Ladder、吖啶橙-溴化乙啶荧光染色法检测细胞凋亡.结果发现外源性p27kip1基因转移后,前列腺癌细胞p27kip1蛋白水平显著增强(P＜0.01),体外生长抑制12.24%～36.52%(P＜0.01),出现G0/G1期细胞周期阻滞及凋亡性"亚G1期"峰,电泳可见典型的"梯状"条带,凋亡比率为18.5%(P＜0.01).结论转染外源性p27kip1基因能增强对细胞周期的负性调节,显著诱导前列腺癌细胞凋亡,是前列腺癌基因治疗的潜在途径.
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p21cip1和p27kip1基因遗传多态与食管癌及贲门癌发病风险的关联
背景与目的:有研究表明p21cip1和p27kip1的基因多态性与乳腺癌、肺癌、前列腺癌等肿瘤易感性有关.本研究分析中国北方高发区人群食管鳞状细胞癌(ESCC)和贲门腺癌(GCA)与p21cip1和p27kip1基因多态性之间的关系.方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测299例ESCC患者、256例GCA患者及437名健康对照人群p21cip1 3'非翻译区和p27kip1第109位密码子基因多态性分布情况.结果:ESCC患者组p21cip1T等位基因型频率(42.8%)显著高于健康对照组(36.7%)(P=0.02),ESCC和GCA患者组p27kip1 V等位基因型频率(分别为96.8%和96.1%)均显著高于健康对照组(92.9%)(P值分别为0.00和0.02).ESCC患者组p21cip1基因型频率分布与健康对照组相比有显著性差异(P=0.04),与C/C和C/T基因型相比,T/T基因型可显著增加ESCC的发病风险(校正OR=1.93,95%CI=1.12～3.94).ESCC和GCA患者组p27kip1基因型频率分布与健康对照组相比均有显著性差异(P分别为0.00和0.01),与V/G和G/G基因型相比,V/V基因型可显著增加ESCC和GCA的发病风险(校正OR分别为2.44和2.01,95%CI分别为1.21～4.02和1.12～3.68).当按吸烟和上消化道肿瘤家族史状况进行分层分析时发现,与V/G和G/G基因型相比,V/V基因型可显著增加吸烟人群患ESCC和GCA(校正OR分别为2.24和2.61,95%CI分别为1.14～4.03和1.25～3.82)以及有家族史人群患ESCC的发病风险(校正OR=2.04,95%CI=1.04～3.43).两基因联合分析显示,携带p21 cip1T/T和p27kip1 V/V基因型可显著增加患食管癌和贲门癌的发病风险(校正OR分别为3.78和2.56,95%CI分别为1.46～5.89和1.06～4.78).结论:在中国北方人群中,p21ip1基因多态性可能与食管癌的易感性有关,p27kip1基因多态性可能与食管癌和贲门癌的易感性有关,而且这两个基因的多态性可能在食管癌和贲门癌发病中起联合作用.
关键词： p21 cip1基因 p27kip1基因 单核苷酸多态性 食管肿瘤 胃肿瘤 -
p27KIP1表达与大肠癌转移及预后的关系
p27KIP1是新近发现的一种肿瘤抑制基因,在细胞周期调控中属细胞周期依赖激酶抑制剂(CDKI),能抑制细胞从G1期到S期的转化,抑制肿瘤的发生和进展.我们采用免疫组化SP法,研究大肠癌中P27kip1的表达并探讨其临床意义.
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SU11248对鼻咽癌CNE-2细胞增殖的影响及其机制
目的 研究苹果酸舒尼替尼(SU11248)对鼻咽癌细胞CNE-2增殖的影响,并探讨其作用机制.方法 用SU11248处理体外培养的鼻咽癌细胞株CNE-2,采用MTT法检测SU11248对CNE-2细胞增殖能力的影响；经2.5pg/mL SU11284作用不同时间后采用实时荧光定量PCR、Western blot法分别检测CNE-2细胞中P27KIP1、cyclin G1 mRNA和蛋白的表达情况.结果 SU11248可抑制CNE-2细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性,半数抑制浓度(IC50)约为2.5 μg/mL.SU11248作用CNE-2后cyclin G1 mRNA和蛋白呈时间依赖性降低(P＜0.05),而P27KIP1 mRNA和蛋白呈时间依赖性升高(P＜0.05).结论 SU11248能明显抑制CNE-2细胞增殖,可能通过上调P27KIP1、下调cyclin G1而发挥作用.
关键词： 鼻咽癌 苹果酸舒尼替尼 p27kip1基因 cyclin G1基因
