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富血小板血浆诱导脂肪干细胞成骨作用的实验研究
目的 探讨在体外培养中富血小板血浆(PRP)对脂肪干细胞的增殖及诱导成骨的影响.方法 从Wistar大鼠自体动脉血中提取PRP,配制成条件培养液,并作用于培养状态的脂肪干细胞,MTT法检测细胞的增殖情况,Kaplow法染色检测细胞碱性磷酸酶表达情况,碱性磷酸酶活性检测,茜素红染色鉴定钙结节形成情况.结果 脂肪干细胞经诱导培养后,PRP诱导组较对照组增殖明显(P＜0.01),碱性磷酸酶活性较对照组增高明显(P＜0.01),PRP诱导组碱性磷酸酶染色阳性,茜素红染色可见钙结节形成.结论 体外培养时,PRP可促进脂肪干细胞的增殖并能诱导成骨分化,从而为骨组织工程提供一种新的方法.
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脂肪干细胞的研究及应用进展
脂肪组织是人类身体内用脂肪形式作储存能源的松散结缔组织,主要由脂肪细胞所组成.脂肪细胞的脂肪质含有脂肪滴,可以被分类为单胞性脂肪细胞及多胞性脂肪细胞两种.2001年.Zuk等[1],通过脂肪抽吸术,在吸出的人体脂肪悬液中第一次分离得了多向分化的干细胞,并发现它能够分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、血管内皮、肝、胰、神经等细胞系类型,具有易获得、易扩增、不易衰老等特点.
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大鼠脂肪干细胞与不同去细胞神经支架的体外相容性比较
目的:观察大鼠脂肪干细胞与2种不同去细胞神经支架的体外相容性,为周围神经组织工程寻求合适的种子细胞载体.方法:将大鼠脂肪干细胞与传统去细胞神经支架和改良法去细胞神经支架体外复合培养,采用倒置显微镜和扫描电镜观察细胞在2种支架上的生长、黏附情况,测定细胞活性及细胞吸附率,并与空白对照组比较.结果:脂肪干细胞可在2种去细胞神经支架上生长、黏附,在改良法去细胞神经支架上的细胞吸附率优于传统去细胞神经支架.结论:脂肪干细胞与2种去细胞神经支架均有较好的体外组织相容性,改良法去细胞神经支架可作为更有效的周围神经组织工程细胞载体.
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不同浓度地塞米松诱导脂肪干细胞成骨分化的实验研究
目的 地塞米松是MSCs成骨诱导分化的基础试剂,探讨诱导脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)成骨分化过程中地塞米松的优选浓度,为进一步骨组织工程研究提供理论依据. 方法 3月龄清洁级健康新西兰大白兔5只,雌雄不限,体重2～3kg.取腹股沟区皮下脂肪4～6mL,采用胶原酶消化离心贴壁法分离培养ADSCs,取第3代细胞进行实验.倒置相差显微镜观察细胞形态变化；联合CD44、CD106免疫荧光染色和成脂诱导分化鉴定ADSCs.调整细胞密度为1×105个/mL,分别用普通培养液(A组)及含0(B组)、1×10-9(C组)、1×10-8(D组)、1×10-7(E组)、1×10-6(F组)、1×10-s mol/L(G组)地塞米松的成骨诱导培养液对ADSCs进行培养.MTT法检测细胞增殖情况；RT-PCR检测诱导细胞骨钙素(osteocalcin,OC)和核心结合因子α1(core binding factor α1,Cbfα1)的表达；测定ALP活性及矿化面积百分率;对矿化结节行茜素红染色. 结果 ADSCs形态多为梭形、多角形,呈“漩涡状”排列；表面抗原分子CD44呈阳性,CD106呈阴性,成脂诱导后可观察到细胞内有脂滴形成,油红O染色呈阳性.MTT检测显示随地塞米松浓度升高,吸光度(A)值呈下降趋势；其中成骨诱导5、7d时,D、E组A值比较差异有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR检测示,成骨诱导7 dOC和Cbfα1 mRNA的表达分别在E组和D组达高峰；成骨诱导14 d ALP活性和矿化面积百分率均在D组达高峰,随后逐渐下降.D、E组间OC和Cbfα1 mRNA的表达量、ALP活性及矿化面积百分率比较差异均无统计学意义(P＞0.05),与其余各组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).成骨诱导14d,G组细胞均死亡；茜素红染色除A、G组外均呈阳性. 结论 成骨培养液中地塞米松浓度为1×10-8 mol/L时,能在减少对细胞增殖抑制的同时,更有效地诱导ADSCs成骨分化.
