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AC133抗原联合 EpCAM 识别转移性结直肠癌干细胞的研究
目的：利用AC133抗原联合EpCAM检测人结直肠癌组织中结直肠癌干细胞，并初步观察其生物学特性，为后续结直肠癌干细胞研究提供实验基础。方法利用新鲜结直肠癌组织，无血清悬浮成球培养，流式细胞检测AC133、EpCAM 的表达情况，Balb/C小鼠移植观察其成瘤情况。组间比较采用t检验，以P＜0．05为差异有统计学意义。结果从人原代结肠腺癌中分离、纯化AC133＋EpCAM ＋结直肠癌干细胞，结直肠癌原代细胞中AC133＋EpCAM ＋细胞比例为1．5％～35％（平均4．8％）。单克隆形成实验证实结直肠癌组织中存在肿瘤干细胞。其比例为2．18±0．15％，分离获得的AC133＋EpCAM ＋细胞能在无血清培养基中“成球”，在血清诱导下能贴壁分化；将AC133＋EpCAM＋细胞移植在Balb/C裸鼠体内，表现出很强的致瘤性，移植瘤中AC133＋EpCAM ＋细胞比例为4．9％～40．2％（平均17．2％）。结论人结肠腺癌组织中存在AC133＋EpCAM ＋细胞群，具有和普通干细胞相类似的无限增殖、自我更新和分化能力，可为人结直肠癌干细胞的后续研究提供实验基础。
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低氧训练对大鼠心肌组织血管内皮祖细胞标记AC133表达的影响
目的:探讨低氧训练对大鼠心肌组织血管内皮祖细胞标记AC133表达的影响.方法:健康雄性SD大鼠16只,随机分为2组:对照组、高住高练组.高住高练组采用10周递增负荷跑台运动训练,每周训练6天,运动量由第1周的速度为15m/min、持续时间为25min递增至第10周速度为28m/min、持续时间为50min,每周二、四、六在相当于海拔1500m的低氧环境中训练,并且在低氧环境中居住,低氧程度由第1周相当于海拔1800m递增至第10周相当于海拔3600m.采用免疫组织化学方法检测CD34,定位心肌组织微血管;采用免疫组织化学及免疫电镜方法,检测微血管上AC133蛋白表达.结果:CD34可较好地标记心肌组织微血管;对照组大鼠心肌组织微血管内皮上有微弱的AC133蛋白表达,高住高练组大鼠心肌组织微血管内皮上有较多的AC133蛋白表达.结论:大鼠心肌内皮祖细胞归巢参与血管新生可能是低氧训练促进心肌血管新生的机制之一.
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脐带血AC133+细胞体外扩增及生物学特性的研究
目的研究脐带血(UCB)AC133+细胞体外扩增及其生物学特性,动态观察AC133+细胞的免疫表型变化,以了解AC133+抗原与CD34抗原的关系.方法将从新鲜UCB标本中纯化的AC133+细胞接种于无血清无基质的悬浮体系,分别于培养0、7、10、14天检测扩增潜能、免疫表型和集落形成等指标.结果①自早期的AC133+CD34-、AC133+CD34+、CFC-HPP、CFU-GEMM、AC133+及CD34+细胞群至各系定向祖细胞等各阶段造血干/祖细胞(HSPC)均得到持续显著的扩增;②AC133+和CD34+细胞的比例随培养时间的延长而迅速降低,AC133+细胞在CD34+细胞中的比例亦明显下降(从99%降至50%),但同一时点AC133/CD34亚群比例均呈现出AC133+CD34-＜AC133+CD34+＜AC133-CD34+＜AC133-CD34-的趋势.结论我们建立的短期培养体系能够有效支持UCB各阶段HSPC的有效扩增;AC133是较CD34更为原始的HSPC抗原标记.
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造血干细胞表面标志物AC133的研究进展
AC133是近几年才发现的分子质量为119 ku的新型糖蛋白,主要选择性表达于成人骨髓、胎肝、脐带血及外周血等造血组织的CD34+造血干、祖细胞(HSPC),而不表达于血管内皮细胞.AC133抗原是继CD34之后发现的又一重要的HSPC表面标志,并且可能更优于CD34原始细胞标志,具有很好的应用前景.本文就AC133的研究进展作一综述,重点介绍其抗原结构、抗体的制备和分析、表达、与其他抗原关系及应用前景.
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AC133和EpCAM在人肺腺癌中的表达及双阳性细胞的分选
目的:通过双重免疫荧光染色法检测人肺腺癌组织标本中AC133以及上皮细胞黏附分子(EpCAM)的表达,并以流式细胞术分选AC133+EpCAM+细胞,为后续人肺腺癌干细胞研究提供实验基础.方法:取人肺腺癌组织标本,冰冻切片,进行双重免疫荧光染色,通过激光共聚焦显微镜检测腺癌组织内AC133和EpCAM的表达.以胶原酶和分散酶将新鲜肺腺癌组织标本制为单细胞悬液,滤除其中的胶原并去除红细胞后,以AC133和EpCAM共同标记单细胞,上流式细胞仪进行分选.结果:在人肺腺癌标本中具有AC133和EpCAM的表达;通过流式细胞术可分选到AC133和EpCAM共表达细胞.结论:验证了人肺腺癌组织中AC133和EpCAM的表达情况;通过流式细胞术分选获得AC133和EpCAM双标记阳性细胞,可为人肺腺癌干细胞的后续研究提供实验基础.
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Syndecan-1在神经干细胞的表达及其与AC133的关系
目的研究syndecan-1(CD138) 在人的胚胎神经干细胞上的表达及其与AC133的关系.方法采用免疫荧光标记和流式细胞仪分析,通过CD138、AC133直标单克隆抗体(mAb)观察神经干细胞细胞膜上CD138和AC133荧光标记阳性率;同时通过双重免疫荧光标记法,观察神经干细胞细胞膜上共表达CD138和AC133的百分比.结果神经干细胞上均表达CD138和AC133分子,同时,表达AC133分子的神经干细胞约有50%左右表达CD138分子.结论在神经干细胞的早期已有CD138分子的表达,其对神经干细胞的生长、分化等作用值得进一步研究.
关键词： Syndecan-1(CD138) AC133 单克隆抗体 -
翼状胬肉组织中CD_(34)、AC133、STRO 1、C KIT的表达
目的 评估源自骨髓的干细胞与翼状胬肉发病的相关性,探寻翼状胬肉的发病机制.方法 选择翼状胬肉头部达到瞳孔缘的病例12例(12眼),其中男6例,女6例;年龄51～66岁;原发性翼状胬肉8例,复发性翼状胬肉4例,均长于鼻侧.对照组材料来自同一眼球、距翼状胬肉边缘约10mm的正常球结膜组织.采用EnVision免疫组织化学法检测骨髓干细胞标志物来源的CD_(34)、AC133、STRO 1、C KIT的表达.结果 光镜下可见翼状胬肉组织中有大量带有骨髓干细胞或祖细胞阳性标志物来源的细胞,翼状胬肉组织头部阳性表达更强.4种阳性细胞的分布及细胞形态类似.C KIT阳性表达细胞聚集于翼状胬肉上皮基底组织和基质组织.上皮基底部阳性细胞呈圆形或椭圆形,而在基质组织中呈纺锤形且主要分布于血管周围.CD_(34)阳性表达细胞主要分布于翼状胬肉组织上皮基底层,在血管内皮也有阳性表达,类似于C KIT,但比C KIT上皮层组织阳性细胞少.细胞形态在上皮基底部呈圆形或椭圆形.AC133阳性表达细胞主要分布于上皮层,基质和血管内皮中也有阳性表达,形态类似CD_(34)和C KIT.STRO 1阳性表达细胞的分布不同,主要见于基质层,阳性细胞形态呈纺锤形,而上皮层中未见表达.各种因子的表达在原发性和复发性翼状胬肉间无明显差别.对照组切片中标志物的表达均呈阴性.结论 带有源自骨髓干细胞阳性标志物的细胞在翼状胬肉的发病和术后复发过程中可能起重要作用.
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体外培养脑胶质瘤细胞株中CD133表达的研究
目的 探讨与脑胶质瘤干细胞相关的CD133表型.方法 将无血清培养中的胶质瘤干细胞与含血清贴壁培养的胶质瘤细胞中CD133的表达进行对比.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及实时荧光定量PCR检测信使RNA(mRNA)水平的表达,流式细胞术及免疫荧光染色法检测蛋白水平的表达,激光共聚焦扫描成像进行CD133蛋白的亚细胞定位.结果 所有胶质瘤细胞中均存在CD133 mRNA及蛋白的表达.AC133抗体所识别的糖基化CD133-AC133分子仅分布于无血清培养中的胶质瘤干细胞,阳性细胞比例为31.8％ ～99.9％,且定位于此类细胞膜表面.AC133阴性的胶质瘤干细胞及含血清贴壁培养胶质瘤细胞中CD133蛋白的表达位于细胞内,阳性细胞比例约为22.2％～88.6％,其亚细胞定位为内质网和/或高尔基体.结论 细胞表面AC133分子,而非CD133 mRNA及细胞内CD133蛋白标记了一类胶质瘤干细胞亚群,但无血清培养环境下也存在AC133呈阴性表达的胶质瘤干细胞亚群.
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CD133在AC133阳性脑胶质瘤干细胞分化中的表达
目的 探讨CD133 mRNA及蛋白表达与胶质瘤细胞未分化状态的相关性.方法 对富含AC133表达的胶质瘤干细胞进行了2周诱导分化,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测分化前后CD133 mRNA表达,Western blot法检测CD133总蛋白表达,流式细胞学检测细胞表面及细胞内AC133蛋白表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养基上清中AC133蛋白的表达.结果 AC133表达随胶质瘤干细胞分化出现显著下调(P＜0.05),CD133 mRNA定量表达在NCH421k干细胞中分化前为1.08 ±0.39,血清环境下分化为1.08±0.51,血清+1μmol/L全反式维甲酸(ATRA)分化下为1.07 ±0.54,差异无统计学意义(P＞0.05),在NCH441干细胞中分别为2.61±1.72、2.53±1.18、2.18±1.73,差异也无统计学意义(P＞0.05).CD133总蛋白表达在分化前后无显著改变.结论 细胞表面AC133是相对于CD133 mRNA及蛋白,能够更敏感地反映胶质瘤细胞未分化状态的指标.
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大鼠局灶脑缺血后AC133抗原表达的初探
目的探讨AC133抗原在脑缺血再灌注脑组织中是否表达.方法采用大鼠大脑中动脉缺血再灌注线栓法模型,将成年SD雄性大鼠随机分为(1)正常组,(2)假手术组,(3)动物模型组,分别取缺血再灌注2、3、4、7 d作为观察点,每个观察点6只大鼠,共36只大鼠,根据神经功能评分纳入实验,并采用免疫组化染色法检测脑组织AC133抗原表达.结果大脑缺血再灌注后4 d AC133蛋白在大脑半球梗死区周围的部分中、小血管内皮细胞胞浆染色阳性,而再灌注后2、3、7 d无阳性表达.结论大鼠脑缺血再灌注4 d脑梗死边缘区域部分血管内皮细胞AC133抗原表达阳性.AC133抗原可能参与大脑局灶缺血后的血管内皮功能.
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生理氧环境下CD133分子在脑胶质瘤干细胞的表达
目的 通过对生理氧环境下CD133表达的研究,判断脑胶质瘤中CD133 mRNA、CD133蛋白以及糖基化CD133即AC133表达与胶质瘤干细胞表型的相关性.方法 将CD133阳性胶质瘤干细胞由含20%O2的大气氧环境转换至含1.5%O2的生理氧环境下培养,持续3 d.实时荧光定量PCR检测CD133 mRNA水平的表达,Western blot检测CD133蛋白水平的表达,流式细胞学检测细胞表面及细胞内AC133的表达,ELISA检测培养液上清中AC133的表达.结果 生理氧环境下CD133阳性胶质瘤干细胞NCH421k,NCH441及NCH440细胞表面AC133的表达相对于大气氧环境均显著上调(均P＜0.05),其蛋白荧光表达强度分别由(2 381.07±649.76)、(20 787.90±2 200.24)、(406.99±167.99)增加至(7 685.06±1 170.69)、(30 499.43±9 013.76)、(2 692.38±516.67)(n=3).AC133的上调是转录水平和翻译后水平调控共同作用的结果.结论 AC133相对于CD133 mRNA和蛋白更敏感地标记了胶质瘤干细胞.
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大鼠局灶脑缺血AC133抗原和AC133mRNA的表达初探
目前国内外研究发现自体和异体骨髓干细胞移植可增加脑梗死周围区域的血管数量[1].但在脑梗死后,机体自身内皮干细胞是否参与梗死周围区域的新血管形成尚无报道.AC133(又称CD133)是新发现的造血干祖细胞糖蛋白抗原,在已分化的内皮细胞上不表达,在内皮前体细胞表达[2],AC133蛋白和基因是否在大脑缺血脑组织表达以及局部缺血后AC133是否参与血管内皮功能等问题尚无文献提及.本研究将初探大鼠局灶脑缺血后脑组织中AC133抗原和AC133mRNA的表达.
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噬菌体展示抗体微型文库的构建
用噬菌体展示技术构建抗神经钙粘连素(N-cadherin, N-cad)分子胞外结构域、CD34分子胞外结构域及AC133分子的噬菌体展示单链抗体库.将3种分子分别表达于噬菌体表面,再以此噬菌体免疫BALB/c小鼠,提取脾总RNA,RT-PCR扩增抗体重、轻链基因cDNA并插入噬菌体表达载体,构建分别抗N-cad分子胞外结构域、CD34分子胞外结构域及AC133分子的噬菌体表达文库.然后对文库的库容量、多样性、滴度及表达能力进行鉴定.结果显示,用噬菌体展示的3种分子免疫小鼠获得成功,所构建抗体文库的库容量、多样性、滴度及表达能力均能满足进一步筛选目的抗体基因的需要,为制备相应的特异性抗体奠定了基础.
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AC133(CD133)与急性白血病
AC133(CD133)抗原是继CD34之后新发现的又一重要的造血干/祖细胞表面标志.近年发现部分造血系统恶性疾病尤其是急性白血病存在AC133表达异常,而且白血病细胞上AC133的表达可能与急性白血病的FAB分型、细胞或分子遗传学异常的发生、CD34等相关抗原表达、治疗疗效及临床预后等相关.本文对此进行综述.
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AC133
AC133是近几年才发现的膜蛋白它具有独特的5个跨膜域,是一种非常保守的蛋白,从线虫到人有很高的同源性.人类主要在血细胞表达,尤其是造血干/祖细胞.绝大部分AC133+细胞同时CD34+.AC133+细胞具有造血能力,是造血干/祖细胞的标志.AC133在急性白血病细胞中也有表达,可以作为AML的标志.AC133+细胞还可分化为树突状细胞和血管内皮细胞.虽然,AC133的功能尚不清楚,但由于它具有亮氨酸拉链和酪氨酸,其潜在的功能,如可能参与的细胞信号传导等,所以值得进一步研究.
