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过表达HSF1及ASK1基因对H2O2刺激后心肌细胞内ROS水平的影响
目的 研究热休克因子1(HSF1)及凋亡信号调节激酶1(ASK1)对过氧化氢(H2O2)刺激后心肌细胞内活性氧簇水平(ROS)变化的影响.方法 对不同组培养心肌细胞分别单独转染质粒HSF1,ASK1,及共转染HSF1+ASK1,48h待其充分表达后用1 mmol/LH2O2刺激心肌细胞30m in,检测细胞内ROS水平,并与相应转染后未刺激组及未转染的对照组比较,观察ROS水平的变化.结果 (1)所有H2O2刺激组心肌细胞内ROS水平均高于相同转染条件下的非刺激组(P＜0.05);(2)相同H2O2刺激条件下,各组ROS水平:HSF1组低于对照组(P＜0.05),ASK1组与对照组无显著差异,HSF1+ASK1组与单转HSF1组相比有升高的趋势;(3)相同H2O2刺激条件下,各组刺激后比刺激前ROS水平增高的幅度:HSF1组低于对照组(P＜0.05),ASK1组与对照组无显著差别,HSF1+ASK1组与单转HSF1组相比有升高的趋势.结论 在H2O2刺激条件下,HSF1可通过降低心肌细胞内的ROS水平来发挥细胞保护作用,而ASK1对细胞内ROS水平无影响,但其可干扰HSF1对ROS的抑制作用.
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高碘对大鼠胸主动脉平滑肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响
目的 探讨不同浓度碘对体外培养大鼠胸主动脉平滑肌(A7r5)细胞的凋亡及凋亡相关蛋白硫氧还原蛋白1(TRX-1)和凋亡信号调节激酶1(ASK-1)表达的影响.方法 将处于对数生长期的细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、750、1 500、3 750、6 000、7 500 mg/L的含碘化钾培养液中培养24 h.采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长情况,采用蛋白杂交(Western-blot)法检测A7r5细胞内TRX-1和ASK-1蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,碘化钾暴露浓度为6 000～7 500 mg/L时,A7r5细胞的存活率均降低,差异均有统计学意义(P＜0.01);且A7r5细胞的存活率随着碘化钾暴露浓度的升高而下降.与对照组相比,不同浓度碘化钾暴露A7r5细胞内的TRX-1蛋白表达水平较低,ASK-1蛋白表达水平较高,差异均有统计学意义(P＜0.01);且随着碘化钾暴露浓度的升高,A7r5细胞内的TRX-1蛋白表达水平呈下降趋势,ASK-1蛋白的表达水平呈上升趋势.结论 高浓度碘暴露可引起大鼠胸主动脉平滑肌细胞活性的下降,减弱抑凋亡蛋白TRX-1的表达,增强促凋亡蛋白ASK-1的表达,从而诱导大鼠胸主动脉平滑肌的凋亡.
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刺芒柄花素对单侧输尿管梗阻大鼠ASK1、JNK蛋白表达的影响
目的 探讨刺芒柄花素对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠凋亡信号调节激酶1(ASK1)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白表达的影响.方法 制备单侧输尿管梗阻诱导肾间质纤维化动物模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、依那普利组及刺芒柄花素高、中、低剂量(100、50、25 mg/kg)组;术后14 d处死大鼠并采集血清检测血清肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)水平;采用HE染色观察大鼠肾脏的病理改变及评定肾小管损伤指数;Masson染色观察肾间质胶原沉积的面积;采用Western blotting免疫印迹法检测肾组织ASK1、JNK蛋白表达水平;采用TUNEL法检测肾小管上皮细胞的凋亡.结果 与模型组比较,各治疗组大鼠血清Scr、BUN水平均显著降低(P＜0.05、0.01);肾小管损伤指数、肾间质胶原分布相对面积均显著降低(P＜0.05、0.01);肾组织ASK1、JNK蛋白表达水平显著降低(P＜0.05、0.01);肾小管上皮细胞凋亡指数显著降低(P＜0.05、0.01).刺芒柄花素高剂量组各项指标优于依那普利组.结论 刺芒柄花素能够抑制UUO模型大鼠ASK1、JNK蛋白表达水平,阻止细胞凋亡,从而减缓梗阻性肾病病理进程的发生和发展.
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格瑞林对慢性心力衰竭大鼠心肌组织中细胞凋亡信号调节激酶1表达的影响
目的:探讨格瑞林对CHF大鼠心肌组织中ASK1表达的影响.方法:采用结扎左冠状动脉前降支建立大鼠CHF模型,通过HE染色观察大鼠心肌细胞形态变化,免疫组织化学观测ASK1在大鼠心肌组织中表达的变化.结果:CHF模型治疗组心肌损伤较CHF模型组明显减轻,差于假手术对照组；CHF模型治疗组ASK1阳性表达区面积与总面积之比低于CHF模型组(P＜0.05),高于假手术对照组(P＜0.01).结论:格瑞林可抑制心肌组织中ASK1的表达,改善心功能,抑制心肌重塑,延缓CHF的进程.
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凋亡信号调节激酶1在扩张型心肌病大鼠中的表达及其与左心室射血分数的相关性
目的 探讨凋亡信号调节激酶1(ASK1)在多柔比星诱导的扩张型心肌病(DCM)模型大鼠左心室心肌的表达变化及其与左心室射血分数(LVEF)的相关性.方法 选择SPF级Wistar大鼠120只,按随机数字表法分为对照组(n=15)和模型组(n=105).模型组大鼠用多柔比星经腹腔注射,对照组用9 g/L盐水腹腔注射,每周3次,间隔2周后再重复1周,共6次,8周末确定DCM大鼠模型.分别于第8周末、12周末抽取模型组及对照组大鼠检测其LVEF,并应用凋亡细胞原位标志与半定量分析法及Western blot技术分别检测其心肌凋亡细胞阳性指数(AI)及心肌ASK1.结果 对照组、8周末模型组、12周末模型组AI分别为0.53±0.27、16.13±1.72、19.54 ±2.24,8周末模型组、12周末模型组明显高于对照组,3组间比较差异有统计学意义(F=18.98,P＜0.05).对照组、8周末模型组和12周末模型组大鼠心室肌ASK1相对表达量分别为0.169 ±0.010、0.649 ±0.071、0.781±0.077,3组间比较差异有统计学意义(F=27.72,P＜0.01).对照组、8周末模型组及12周末模型组LVEF(％)分别为75.41 ±2.02、53.25±3.74、39.21±6.13,3组间比较差异有统计学意义(F=154.87,P＜0.01).12周末模型组大鼠心肌ASK1相对表达量与LVEF呈负相关(r=-0.86,P＜0.01).结论 DCM大鼠心肌ASK1的表达明显增多.ASK1介导的凋亡信号调节途径可能参与DCM的病理生理过程.
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急性百草枯中毒患儿外周血CD4+ T淋巴细胞肌醇依赖酶1、凋亡信号调节激酶1及c-Jun氨基末端激酶水平变化的意义
目的 探讨急性百草枯(PQ)中毒患儿外周血CD4+T淋巴细胞肌醇依赖酶1(IRE1)、凋亡信号调节激酶1(ASK1)及c-Jun氨基末端激酶(JNK) mRNA水平的变化.方法 选择2014年6月至2016年6月于天津市儿童医院就诊的急性PQ中毒患儿30例,其中男18例,女12例;年龄2～ 14岁.记录患儿的一般临床资料及实验室检查资料,误服后2 ～20 h采集外周静脉血标本.选取同期来天津市儿童医院体检的健康儿童30例为健康对照组,男18例,女12例;年龄2～14岁.分离外周血CD4+T淋巴细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)测定外周血CD4+T淋巴细胞IREt、ASK1及JNK mRNA的相对表达水平.PCR产物行琼脂糖凝胶电泳鉴定特异性.数据采用SPSS 13.0软件进行分析.结果 30例患儿均有口腔黏膜溃烂、恶心、呕吐、腹痛,少尿、无尿19例,消化道出血16例,头痛、头晕12例,胸闷、憋气、呼吸困难11例,抽搐8例,黄疸5例.PQ中毒组IRE1、ASK1及JNK mRNA相对表达水平均明显高于健康对照组(1.70 ±0.16比1.02 ±0.18、3.56±0.85比1.05 ±0.31、5.22 ±0.87比1.01 ±0.33,t =15.26、15.21、24.78,均P＜0.01).结论 PQ中毒患儿外周血CD4+T淋巴细胞IRE1、ASK1及JNK mRNA相对表达水平升高,可能与PQ所致氧化应激和免疫激活有关,通过内质网应激形成复杂的细胞因子网络,导致CD4+T淋巴细胞凋亡,影响多脏器衰竭的发生、发展.
关键词： 百草枯 肌醇依赖酶1 凋亡信号调节激酶1 c-Jun氨基末端激酶 内质网应激 -
缺氧诱导因子-1和凋亡信号调节激酶1在肝癌细胞SMMC-7721缺氧时化疗耐药形成中的作用
目的 研究不同氧气条件下肝癌细胞HIF-1和ASK1表达水平在化疗过程中的变化.方法 噻唑蓝(MTT)比色法检测肝癌细胞生长情况和药物中效浓度(IC50).逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测HIF-1α和ASK1表达水平,比较氧气、化疗药物、HIF-1抑制等因素对他们表达的影响.结果 化疗对肝癌细胞常氧时抑制效果较缺氧时更明显,常氧和缺氧IC50存在明显差异.缺氧时两者表达水平均升高,HIF-1α在IC50缺氧组中翻译水平高,ASK1在IC50常氧组中翻译表达多.结论 HIF-1α可能在缺氧时通过对ASK1蛋白水平的抑制实现肝癌细胞化疗耐药形成.
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丝氨酸苏氨酸激酶受体相关蛋白在肿瘤发生发展中的作用研究进展
丝氨酸苏氨酸激酶受体相关蛋白(STRAP)由Datta教授先发现并命名.起初发现STRAP能够与转化生长因子-β(TGF-β)受体和Smads家族蛋白中的Smad7相互作用而负性调节经典的TGF-β信号通路转导.由于Smad依赖的TGF-β信号通路能够抑制细胞生长,而且许多研究报道STRAP在多肿瘤组织中表达上调,比如结肠癌、肺癌及乳腺癌等.因此,早期的生物学功能研究结果表明STRAP具有促癌基因的特性.随着研究深入,人们发现STRAP作为WD40超家族蛋白成员之一,不仅仅起到促肿瘤生长的作用,而且具有多样化的生物学功能.WD40结构域具有的转角平台结构为STRAP与其他蛋白相互作用提供了作用平台,为STRAP调节多种蛋白的功能提供了结构基础.由于STRAP自身不具有酶活性,使得STRAP调节的生物过程都是通过与其他蛋白相互作用实现的.在本文中我们将对STRAP在肿瘤中的作用研究进展进行系统综述.
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凋亡信号调节激酶1在紫花牡荆素诱导结肠癌细胞凋亡中的作用
目的:研究紫花牡荆素诱导人结肠癌细胞凋亡作用及其作用机制.方法:体外培养人结肠癌HT-29细胞.碘化丙啶(P)I染色流式细胞术(FCM)和细胞凋亡ELISA试剂盒检测细胞凋亡.荧光探针二氯荧光素(DCFH-DA)标记FCM测定细胞内活性氧的含量.Western blot和小干扰RNA转染用于探索其分子机制.结果:紫花牡荆素以浓度依赖性的方式诱导结肠癌HT-29细胞系细胞凋亡.紫花牡荆素引起活性氧(ROS)的产生,并激活HT-29细胞的凋亡信号调节激酶1(ASK1).N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理HT-29细胞有效地抑制ASK1活性,减弱紫花牡荆素处理引起的细胞凋亡.ASK1特异小干扰RNA能显著减弱紫花牡荆素诱导HT-29细胞凋亡作用.结论:紫花牡荆素通过刺激活性氧形成活化ASK1诱导结肠癌HT-29细胞凋亡.
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柿叶黄酮对肿瘤坏死因子α诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡信号调节激酶1表达的影响
目的:观察柿叶黄酮对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的大鼠血管平滑肌细胞凋亡信号调节激酶1的影响.方法:体外培养SD大鼠血管平滑肌细胞,应用柿叶黄酮与TNF-α共同进行作用并设立对照进行比较,采用非放射性的MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态.利用Western blotting蛋白免疫印迹法测定血管平滑肌细胞凋亡信号调节激酶1蛋白的表达情况.结果:各组的细胞增殖率分别为对照组0.817±0.074;TNF-α 20 ng/ml组1.865±0.093;柿叶黄酮50 μg/ml组0.905±0.044;TNF-α20 ng/ml联用柿叶黄酮50 μg/ml组1.247±0.061.统计分析显示TNF-α20 ng/ml能明显刺激血管平滑肌细胞的增殖.柿叶黄酮单独作用对血管平滑肌细胞细胞增殖率无影响;柿叶黄酮对TNF-α诱导血管平滑肌细胞增于有明显的抑制作用,TNF-α对血管平滑肌细胞的凋亡信号调节激酶1蛋白的表达有显著的增强作用,这种作用部分可以被柿叶黄酮所抑制.结论:柿叶黄酮能明显抑制由TNF-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞凋亡信号调节激酶1蛋白的表达.
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凋亡信号调节激酶1上调基质金属蛋白酶-9表达促进癫痫发作
目的 研究癫痫大鼠海马凋亡信号调节激酶1(ASK1)激活水平和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达变化,探讨其在颞叶癫痫发生中的作用与机制.方法 建立锂-匹罗卡品颞叶癫痫模型,利用免疫荧光和Western blot检测ASK1磷酸化水平和MMP-9蛋白表达.应用ASK1和MMP-9抑制剂,研究ASK1对MMP-9表达的调控作用,并观察ASK1和MMP-9抑制对癫痫发作的影响.结果 癫痫大鼠海马组织ASK1磷酸化水平和MMP-9表达升高(P<0.05),并与癫痫发作过程呈时间相关性.抑制ASK1激活可显著降低MMP-9的表达(P<0.05).抑制ASK1磷酸化和抑制MMP-9表达均可有效减轻癫痫发作程度(P<0.05).结论 海马ASK1磷酸化和MMP-9表达水平在颞叶癫痫模型中明显升高,并且MMP-9表达上调由ASK1激活引起.ASK1-MMP-9信号激活在颞叶癫痫的病理进程中发挥重要作用.
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凋亡信号调节激酶1通过c-Jun氨基末端激酶通路调控高糖诱导的视网膜神经节细胞损伤
目的 研究细胞凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal-regulating kinase1,ASK1)对高糖诱导的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)损伤的保护作用及其可能的机制.方法 建立大鼠RGC细胞的分离培养和体外高糖(50 mmol/L葡萄糖)损伤模型.转染ASK1 siRNA沉默ASK1的表达.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ASK1 mRNA表达水平;Western blot检测ASK1、JNK蛋白表达量和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)磷酸化水平;MTT和CCK-8方法、Ki67染色分别检测RGC生长活力和增殖情况;Annexin-V FITC/PI方法和TUNEL检测RGC凋亡情况;试剂盒方法检测Caspase-3活性.结果 RGC高糖环境下培养4d,细胞生长活力降低明显(P＜0.05);ASK1表达水平在高糖损伤的RGC中明显上升(P＜0.05);ASK1 siRNA的转染实验结果显示:ASK1的表达水平明显下降(P＜0.05),说明沉默表达实验成功;ASK1表达被抑制后RGC的生长活力(P＜0.05)和增殖能力(P＜0.05)明显上升,RGC的凋亡(P＜O.01)和Caspase-3的活力(P＜0.01)明显降低.沉默ASK1的表达有效地降低JNK蛋白的磷酸化水平.结论 抑制ASK1的表达对RGC的高糖损伤有保护作用,其机制可能与抑制JNK通路有关.
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凋亡信号调节激酶1与心脏肥大研究进展
心脏肥大是心肌细胞对高血压、瓣膜病、急性心肌梗死及先天性心脏病等常见临床疾病的一种基本应答,是影响心血管疾病病死率和发病率的独立危险因素,其发病机制中信号转导通路的研究是当前研究热点.凋亡信号调节激酶1是有丝分裂原激活蛋白激酶的上游激酶,参与细胞的生长、分化、凋亡,近年来研究发现它与心脏肥大的发生也存在密切关系.
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微小RNA-20 a对脂多糖诱导A549细胞炎症反应的作用及机制研究
目的 探讨微小RNA-20a(microRNA-20a,miR-20a)在脂多糖诱导肺泡上皮细胞A549炎症反应中的作用及可能机制.方法 首先将miR-20a类似物(mimic)/抑制剂(inhibitor)转染至A549细胞,再用脂多糖共同刺激24 h后,用实时定量聚合酶链反应检测白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和IL-8 mRNA的表达,酶联免疫吸附法检测IL-6和IL-8蛋白的表达情况,并用Western blot检测细胞凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal regulating kinase 1,ASK1)、P38、P-P38、JNK及P-JNK蛋白的表达.结果 mimic组IL-6、IL-8 mRNA和蛋白表达水平低于mimic阴性对照组,inhibitor组IL-6、IL-8 mRNA和蛋白表达水平高于inhibitor阴性对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);mimic组ASK1、P-P38及P-JNK蛋白表达低于mimic阴性对照组,inhibitor组ASK1、P-P38、P-JNK蛋白表达高于inhibitor阴性对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 miR-20a对ASK1的靶向调控可能在急性呼吸窘迫综合征的炎症发生过程中发挥作用.
