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循环肿瘤细胞及游离DNA甲基化在肝细胞癌患者中的研究进展
随着对肿瘤认识的不断深入,人们发现在原发肿瘤形成和生长的早期阶段,肿瘤细胞即可以脱离原发肿瘤组织释放到外周血形成循环肿瘤细胞,同样在肿瘤形成的早期阶段就会出现肿瘤细胞的坏死和凋亡,这些凋亡或坏死的肿瘤细胞也可以释放其DNA入外周血形成血浆或血清游离的DNA,因此对肿瘤患者循环肿瘤细胞及游离DNA的分析被认为是实时的“液相活检”,肿瘤患者中的循环肿瘤细胞具有非常强的异质性,我们可以根据其物理和生物学性质采用不同的技术对其进行富集和检测;可以借助现代分子生物学手段对循环游离DNA进行提取,并对其遗传学和表观遗传学的异常改变进行分析,这可为肿瘤的早期诊断、疗效评估、复发监测及预后判断提供重要的信息.本文结合本课题组的研究重点,就循环肿瘤细胞及游离DNA及其甲基化在肝细胞癌患者的研究进行综述.
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循环游离DNA在多发性肌炎和皮肌炎中的作用
目的:研究循环游离DNA(cfDNA)在多发性肌炎(PM)和皮肌炎(DM)中的作用.方法:使用PicoGreen试剂盒检测61例PM/DM患者、34例系统性红斑狼疮(SLE)患者和48例健康对照的血浆cfDNA浓度,并与患者的血清学指标做相关性分析.结果:cfDNA浓度在PM/DM组是247.1 ±61.09ng/ml,显著高于健康对照组(197.1±31.36ng/ml,P＜0.01),显著低于SLE组(281.9±82.21 ng/ml,P＜0.01).cfDNA与血沉和血清球蛋白呈显著正相关(P＜0.01,P＜0.05),与C3呈显著负相关(P＜0.01).结论:cfDNA可能与PM/DM疾病活动度相关.
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血浆游离DNA水平升高源于NETosis并与活动性狼疮肾炎相关
目的 探讨SLE患者血浆游离DNA(cfDNA)水平与LN的相关性,分析患者血浆cfDNA升高的可能原因.方法 实验纳入了54例SLE患者和43名健康对照者.SLE患者中,37例合并有LN,26例为活动性LN患者,11例为缓解期LN患者.血浆cfDNA的测定采用Picogreen试剂盒;低密度粒细胞(LDGs)的测定采用流式细胞术.采用单因素相关及多元线性回归分析LN与cfDNA的关系并分析cfDNA升高的影响因素.结果 SLE组的cfDNA水平显著高于健康对照组[(237±40) ng/ml和(188±41) ng/ml,P＜0.01].在SLE中,LN组的cfDNA水平显著高于非LN组[(247±47) ng/ml和(214±31) ng/ml,P=0.028);而且活动性LN的cfDNA水平明显高于缓解期LN[(254±50) ng/ml和(216±29) ng/ml,P=0.035).进一步分析发现SLE患者血浆cfDNA水平与尿蛋白定量(24 h)呈正相关(r=0.350,P=0.013),与血清白蛋白(r=-0.500,P＜0.01)和内生肌酐清除率(Ccr)(r=-0.354,P=0.044)呈负相关.LDGs在SLE患者中的比例显著高于健康对照组[(8.3±12.9)％和(1.2±0.7)％,P=0.004],并且与血浆cfDNA水平呈正相关(r=0.636,P=0.002);中性粒细胞计数与cfDNA呈正相关(r=0.599,P＜0.01).结论 LDGs和中性粒细胞过度形成中性粒细胞胞外网状陷阱(NETs)是SLE患者cfDNA水平升高的主要原因之一.血浆cfDNA的水平与LN的活动性相关,提示NETs标记物和活动性LN存在联系,更特异的血清NETs标记物有望成为活动性LN的临床标志.
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从液体活检谈进展期胰腺癌的合理治疗
液体活检在进展期胰腺癌诊断、治疗中的优势在于创伤小,便于重复采样,在很大程度上接近病理学诊断的敏感度和特异度.循环肿瘤细胞(CTCs)和循环游离DNA(cfDNA)是液体活检的重要组成部分,在胰腺癌的个体化诊疗中具有重要临床应用前景.规范检测技术、合理解读检测结果,将是液体活检指导胰腺癌个体化治疗的基础;动态监测cfDNA和CTCs的变化,将为找寻胰腺癌复发、转移标记物以及胰腺癌治疗新靶点提供线索.
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游离核酸在肿瘤液体活检中的应用及临床意义
随着分子生物学技术的不断发展,以检测游离核酸作为无创分子诊断标志物的液体活检技术得以实现,且日益受到关注.与传统分子诊断技术相比,液体活检技术主要以游离核酸为检测对象,具有更全面地反映肿瘤特性、克服肿瘤异质性难题以及可以非侵入性多次取样等优点,既可以减轻患者痛苦,也提高了对肿瘤特性及其负荷评估的准确性.游离核酸无创分子标志物的研究在肿瘤早期诊断、治疗监测和预后评价等方面具有重要的临床意义.本文对游离核酸作为肿瘤液体活检标志物的临床意义及其初步应用的研究进展进行综述.
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循环游离DNA在胰腺癌中的临床应用进展
循环游离DNA (circulating free DNA,cfDNA)是指游离于细胞外的核酸片段.肿瘤患者中相当一部分比例的cfDNA来源于肿瘤细胞,称之为循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA,ctDNA),其中包含了来源于肿瘤的突变和基因变异信息.而新的、更加高效的检测技术的开发使得ctDNA发展成为新的标志物.本文就ctDNA在肿瘤早期诊断、预后、疗效评估及跟踪新的突变中的应用作一综述,重点概述其在胰腺癌中的临床应用.
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血浆循环游离DNA浓度及完整性对肺癌和肺结核鉴别诊断的价值
目的 用实时荧光定量PCR (RT-PCR)检测肺癌、肺结核患者及健康人血浆循环游离DNA (cf-DNA)浓度及完整性,探讨其对肺癌和肺结核鉴别诊断的价值.方法 收集49例肺结核患者、46例肺癌患者和47例健康对照者静脉血标本.用RT-PCR技术定量检测各组血浆cf-DNA中ALU115和ALU247浓度及完整性(ALU115/ALU247),化学发光微粒子免疫分析技术检测血浆糖链抗原(CA125)浓度;用Kruskal-WallisH非参数检验比较总体差异,用Mann-Whitney U检验进行两两比较;绘制ROC曲线评价各项指标的诊断效能.结果 肺结核组、肺癌组和健康人对照组间血浆cf-DNA中ALU115浓度(K-Wx2=96.716,P=0.000)、ALU247浓度(K-W x2=25.228,P=0.000)、血浆cf-DNA完整性(K-Wx2 =75.283,P=0.000)差异均有统计学意义;肺结核患者较健康对照者血浆cf-DNA ALU115浓度(Z=-6.754,P=0.000)、ALU247浓度(Z=-4.570,P=0.000)和cf-DNA完整性(Z=-2.950,P=0.000)均升高;肺癌患者较健康对照者血浆cf-DNA ALU115浓度(Z=-8.245,P=0.000),ALU247浓度(Z=-4.088,P=0.000)和cf-DNA完整性(Z=-7.753,P=0.000)亦有明显升高;肺癌组较肺结核组血浆cf-DNA ALU115浓度(Z=-6.192,P=0.000)和cLDNA完整性(Z=-7.753,P=0.000)均明显升高.肺癌组血浆cf-DNAALU115浓度和cf-DNA完整性(ALU115/ALU247)的ROC曲线下面积(AUCROC)、敏感性、特异性分别0.931和0.934、100％和87％、72.9％和90.6％,均高于CA125 (0.739,60.9％,86.5％),而ALU247(0.610,43.5％,79.2％)均低于CA125.结论 RT-PCR检测血浆cf-DNA中ALU115和ALU247浓度及完整性可作为肺癌和肺结核辅助诊断的分子生物学指标.
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人体循环游离DNA应用的研究进展
循环游离DNA(circulating cell-free DNA,ccfDNA)系存在于人及动植物体液中、在细胞外部处于游离状态的DNA分子.目前对其的研究均集中于肿瘤及妇产科学方面.本文对ccfDNA的生物学性质及在肿瘤学和妇产科学中应用的研究进展进行综述.
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循环游离DNA完整性检测的临床应用研究进展
循环游离DNA(ccfDNA)是一种新的肿瘤标志物.现普遍认为细胞凋亡产生DNA短片段,长度为185 ～ 200 bp；而肿瘤细胞坏死产生的DNA片段,由于不完全消化而呈现长度多样化,以长链DNA片段为主.ccfDNA完整性检测广泛应用于多种肿瘤.DNA完整性一般以DNA长、短片段扩增产物的浓度比值来表示,其对肿瘤早期诊断、肿瘤分期、分级、放疗和化疗疗效监测等有重要意义.本文就ccfDNA完整性检的检测方法及其临床应用作一综述.
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循环游离DNA检测及其临床应用进展
循环游离DNA(circulating cell-free DNA,cfDNA)是指存在于人体血液循环中的、游离于细胞外的高度片段化DNA.在特定情况下(如肿瘤患者、孕妇、接受器官移植的患者等),一小部分来自“异源性”细胞的cfDNA(如肿瘤细胞、胎儿细胞、或供体细胞)可以作为基因检测的标志物.基于cfDNA检测的“液态活检”技术在产前诊断、肿瘤的筛查、早期诊断、治疗监测和预后评估等多个方面受到极大的关注.该文就cfDNA的产生与特征、检测方法、检测指标、临床应用等作一总结及论述.
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血液循环游离DNA联合甲胎蛋白对肝细胞癌诊断价值的荟萃分析
目的 通过荟萃(meta)分析评价循环游离DNA结合甲胎蛋白对于肝细胞癌的诊断价值.方法 通过检索pubmed、web of science、Cochrane library、中国知网、中国生物医学文献数据库、维普数据库等多个数据库,检索建库至2018年5月间使用循环游离DNA结合甲胎蛋白作为诊断肝癌的文献,采用Stata 14.0软件进行分析.结果 文章纳入10篇文献,包括838例HCC患者、702例非HCC患者;循环游离DNA结合AFP检测肝细胞癌的合并敏感性、特异性分别为0.80(95％CI:0.70～0.87)和0.95(95％CI:0.90～0.98),阳性似然比和阴性似然比分别为15.9(95％CI:7.6～36.6)和0.21(95％CI:0.13～0.32),诊断比值比为76(95％CI:28～228);ROC曲线下面积(AUCROC)为0.95(95％CI:0.93～0.97).结论 循环游离DNA联合甲胎蛋白对诊断肝癌具有更高的准确性,可以作为早期肝癌筛查的指标,并且定量分析比定性分析诊断准确性更高.
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循环游离DNA在结直肠癌中的临床应用进展
结直肠癌是胃肠道常见的恶性肿瘤之一.近年来随着高危人群筛查的开展及内镜技术的发展,结直肠癌早期诊断率有所提高,但多数患者出现明显症状时已处于中晚期,预后较差.循环游离DNA(cfD NA)作为一种新型潜在肿瘤标记物近年来得到广泛关注,其在结直肠癌早期诊断、化疗方案的选择、疗效评估及预后判断等方面中具有重要的临床应用前景.本文就cfDNA在结直肠癌中的临床应用进展作一综述.
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急性冠脉综合症患者血浆cf-DNA含量和完整性检测及其临床应用价值
目的：探讨血浆cf-DNA的含量、完整性与ACS患者的关系及其对ACS的诊断价值。方法：提取62例ACS患者和39例正常对照者血浆cf-DNA，采用基于ALU序列的SYBR Green I实时荧光定量聚合酶链反应方法检测cf-DNA长、短片段（247bp、115bp）含量，并以ALU115作为cf-DNA总水平、以ALU247/115指数作为cf-DNA完整性指标，应用ROC曲线评估cf-DNA和cTnI对ACS的诊断价值，并分析cf-DNA与肌钙蛋白I（ cTnI）、肌酸激酶同工酶（ CK-MB）、肌红蛋白（ Mb）的相关性。结果：ACS患者血浆cf-DNA含量[532.0（257.4～986.0） ng/mL]显著高于正常对照者[55.0（12.6~128.4） ng/mL]，差异有统计学意义（ P<0.05）。血浆cf-DNA含量与cTnI（ r=-0.32）、CK-MB（ r=-0.20）、Mb（ r=-0.34）无相关性。 ACS患者ALU247/115指数[0.68（0.48～0.95）]显著高于正常对照者[0.36（0.26～0.53）]，差异有统计学意义（ P<0.05）。cf-DNA含量、完整性曲线下面积（0.880、0.820）高于cTnI（0.736），差异有统计学意义（ P<0.05）。结论：血浆cf-DNA含量、完整性与ACS相关。 qPCR方法检测血浆cf-DNA的含量及其完整性对ACS的辅助诊断具有一定的价值。
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非小细胞肺癌患者循环肿瘤DNA的研究进展
循环游离DNA以细胞外游离形式存在于血液中,可由正常细胞和癌细胞释放.非小细胞肺癌(NSCLC)患者血液中游离DNA水平高于正常人,且循环游离DNA可以反映癌组织的基因突变,甲基化状态,拷贝数改变,杂合子丢失等特征,是肺癌诊断、治疗、预后检测中具有巨大潜力的生物学指标.本综述简要介绍了循环游离DNA的生物学特性,并对近年来循环游离DNA基因改变检测在NSCLC中的临床应用进行阐述.
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循环游离DNA检测在结直肠癌诊治中应用的研究进展
循环游离DNA(ccf-DNA)是指存在于血液、游离于细胞之外的DNA片段.ccf-DNA检测正逐渐成为肿瘤筛查、早期诊断、预后评估以及抗癌治疗有效性监测的重要方法.通过相对无创方法获得的ccf-DNA可代替通过有创手段获得的结直肠癌(CRC)活检标本.ccf-DNA作为一种无创潜在肿瘤标志物在CRC早期诊断、疾病进展、疗效监测中有较高的应用价值.
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循环游离DNA甲基化研究进展
循环游离DNA是存在于人体外周循环中的游离DNA.循环游离DNA甲基化与多种恶性肿瘤相关,其作为分子标志物有自身特性和优势.本文就循环游离DNA的来源和生物学特性、甲基化改变及其作为相关肿瘤标志物、检测方法等研究进展作一综述.
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循环游离DNA在前列腺癌中的研究进展
循环游离DNA(cell-free D)NA,CF-DNA)可由正常细胞和肿瘤细胞释放,其中肿瘤细胞来源的游离DNA又叫做循环肿瘤DNA(circulating-tumor DNA,CT-DNA),以细胞外游离形式存在于血液、尿液等体液中.在前列腺癌(PCa)患者中,CF-DNA的浓度明显高于健康对照组,而且存在与原位肿瘤相似或完全相同的基因突变、超甲基化、基因不稳定性等变化特征,对肿瘤的早期诊断、术后检测以及对靶向药物的疗效评估都有着潜在作用,是新兴的肿瘤标志物研究热点.本综述简要阐述CF-DNA的生物学特性、检测以及作为肿瘤标志物的新进展.
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定量分析结直肠癌患者血浆循环游离DNA的临床价值
目的 定量分析结直肠癌患者血浆游离DNA(cfDNA)水平在结直肠癌诊断及预后判断中的临床价值.方法 收集本院接受手术的结直肠癌患者手术当天血浆标本178份和正常人血浆56份.利用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测血浆cfDNA水平.利用ROC曲线评价cfDNA水平在结直肠癌各分期亚组的诊断价值.对Ⅳ期患者进行随访,分析cfDNA与患者生存期之间的相关性.结果 结直肠癌组cfDNA浓度显著高于健康体检组,差异有统计学意义[(63.07±65.38) ng/ml比(22.85±8.88) ng/ml,P=0.000)].Ⅲ～Ⅳ期结直肠癌组与健康体检组比较差异有统计学意义[血浆cfDNA浓度分别为(39.59 ±31.56)、(107.32±102.85) ng/ml比(22.85±8.88) ng/ml,均P=0.000)].血浆cfDNA水平在高、中、低分化肿瘤中分别为(29.42±18.29)、(54.69±75.05)、(9.67±103.18) ng/ml,差异有统计学意义(P=0.000).血浆cfDNA水平TNM分期密切相关.生存分析结果显示血浆cfDNA浓度与肿瘤患者总生存期(0S)明显相关.结论 血浆cfDNA水平对结直肠癌早期诊断价值有限,初次治疗时血浆cfDNA浓度是有效的预后指标.
关键词： 结直肠癌 循环游离DNA 荧光定量聚合酶链反应 -
循环游离DNA的定量检测及面临的问题
循环游离DNA (circulating cell free DNA,cfDNA)与人类疾病之间存在着密切联系.近年来,cfDNA做为一种无创检测生物标志物,展现出临床应用前景.人们针对其含量较低的特点,进行了大量研究,开发出了各种较为可靠的定量检测方法.但目前cfNA的定量检测仍然面临问题及争议,缺乏规范和标准化的流程.本文对cfDNA的来源组成、定量检测及存在的问题进行了归纳整理及分析,希望能对提高cfDNA的定量检测的可靠性提供有益的参考.
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结直肠癌患者血浆循环游离DNA的RAS突变与临床特征的关系
目的 探讨结直肠癌患者血浆循环游离DNA(cfDNA)与肿瘤组织DNA的RAS基因突变检测的一致性,以及与临床特征的关系.方法 收集71例结直肠癌患者的血浆及肿瘤组织标本.采用多重荧光PCR法检测血浆标本cfDNA的RAS的基因突变状态,并与肿瘤组织标本的相应基因突变状态对比分析.分析血浆RAS基因突变状态与患者临床特征的关系.结果 血浆cfDNA的RAS突变率为32.39%,组织DNA的RAS突变率为50.70%,两种标本的RAS突变检测的一致率为76.06%,血浆cfDNA与组织DNA的RAS突变检测结果一致(Kappa=0.523,P=0.000).血浆cfDNA检测的敏感性为58.33%、特异性为94.29%、阳性预测值为91.30%、阴性预测值为68.75%.血浆cfDNA的RAS突变状态与结直肠癌患者年龄、性别、分期(Ⅳa与Ⅳb)、原发肿瘤部位、肺转移、CEA水平、CA199水平等无明显相关性,而血浆cfDNA的RAS突变与结直肠癌患者肝脏转移有相关性(P=0.045),肝转移患者较未发生肝转移的患者突变率升高.结论 血浆cfDNA可以作为无法获得组织标本的结直肠癌患者的RAS基因检测的替代标本,具有临床应用价值,且结直肠癌患者肝脏转移cfDNA RAS突变率升高.
