首页 > 文献资料
-
淋巴细胞HLA-A mRNA方法学建立及在乙型肝炎病毒感染患者中的应用
目的 建立外周血淋巴细胞HLA-A mRNA的检测方法,探讨其在慢性乙型肝炎、肝炎后肝硬化、肝癌患者中的应用价值.方法 改良法提取人外周血淋巴细胞RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)一步法扩增HLA-A mRNA,琼脂糖凝胶电泳结果采用Bandscan软件分析相对灰度值,半定量HLA-A的基因表达.结果 半定量HLA-A所得平均相对灰度值在慢性乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组、正常对照组分别为0.54±0.21、0.34±0.27、0.22±0.16、0.95±0.19.慢性乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组均明显低于正常对照组(P＜0.05),慢性乙型肝炎组与肝癌组,肝硬化组与肝癌组相比差异有统计学意义(P＜0.05),慢性乙型肝炎组与肝硬化组有下降趋势.结论 成功建立检测HLA-A基因的RT-PCR一步法,从基因转录水平上证实慢性乙型肝炎、肝炎后肝硬化、肝癌患者外周血淋巴细胞HLA-A下调,且与相应患者细胞免疫功能减弱密切相关.
-
聚合酶链反应方法检测外周血淋巴细胞HLA-A mRNA方法学的建立及在肾移植中的初步应用
目的 通过建立检测宿主外周血淋巴细胞(PBL)表面HLA-AmRNA表达程度的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-FQ-PCR)方法,检测肾移植患者移植后外周血淋巴细胞表面HLA-A mRNA的表达程度,探讨其在诊断移植后早期排斥反应的发生的价值及机体免疫状态的关系.方法 以6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)作内参照,用Taqman探针荧光定量技术,建立检测PBL HLA-A mRNA的RT-FQ-PCR方法;并检测35例随访移植患者的不同时间的60个标本和60名正常人的阈循环数(Ct),然后用REST软件分析PBL HLA-A mRNA的表达水平.结果 正常人和51个移植标本的PBL HLA-A mRNA对G6PDH的相对表达量分别为0.036±0.012和0.026±0.015(双侧t=1.981,P＜0.05),提示服用免疫抑制药(目前临床用药剂量均偏大)后患者PBL HLA-A mRNA表达减弱,机体免疫状态低,无排斥反应发生但易导致感染、肿瘤等并发症的产生;其中9个移植标本的PBL HLA-A mRNA对G6PDH的相对表达量为0.042±0.017(双侧t=2.002,P＜0.05),提示较其他51例移植标本患者PBL HLA-A mRNA表达增强的患者,经病例回访查询发现该5例移植患者在这期间有排斥反应(根据临床表现、肾功能检查、影像学及核医学检查的临床排斥反应期)的发生,其中1例在移植后6个不同时间的标本显示2次有增高,每次经治疗后均降低.结论 建立的宿主PBL HLA-A mRNA RT-FQ-PCR检测方法简便、特异、重复性好、可信度高,可用于肾移植后PBLHLA-A mRNA表达水平的检测,评估机体的免疫状态,预测排斥反应的发生.
-
HLA-A Bw4表位与HIV-1病毒载量和CD+4T淋巴细胞计数关系的研究
目的 研究含Bw4表位的HLA-A抗原在HIV-1感染者疾病进展中的作用.方法 应用高分辨率人类白细胞抗原(HLA)分型方法对340例HIV-1感染者进行HLA-A和HLA-B位点的等位基因分型,确定Bw4表位的携带情况,分析HLA-A和HLA-B携带Bw4表位与感染者CD4+4T淋巴细胞计数和血浆病毒载量的关系.结果 与不携带Bw4者(0Bw4)(CD+4T淋巴细胞计数:中位数294个/μ1,病毒载量:中位数6.29×104拷贝/m1)相比,1Bw4-A基因型者和2Bw4-AA基因型者的CD+4T淋巴细胞计数水平(分别为307和308个/μ1)基本相当,而病毒载量(分别为1.53×105和2.68×105拷贝/ml)有增高趋势.与不携带Bw4表位的感染者相比,仅在HLA-B抗原中含Bw4表位的HIV-1感染者的CD+4T淋巴细胞计数(417:个/μ1)显著增高(P=0.013),而病毒载量(2.10×104拷贝/ml)显著降低(P=0.007).结论 含有Bw4表位的HLA-B抗原在HIV-1感染中具有延缓疾病进展的作用,而含有Bw4表位的HLA-A抗原对HIV-1感染者未见保护性作用.
-
吉兰-巴雷综合征患者人类白细胞抗原A、B的基因分型
目的 研究经典型吉兰-巴雷综合征(GBS)——急性炎性脱髓鞘性多神经根神经病(AIDP)和其亚型——急性运动轴索型神经病(AMAN)易患性与人类白细胞抗原(HLA)-A、B等位基因分型的关系,从免疫遗传学角度探讨自身内在因素在GBS不同亚型发病中的可能作用.方法 以改良快速盐析法自静脉血中抽提基因组DNA,采用聚合酶链反应-顺序特异性引物法(PCR-SSP),结合琼脂糖凝胶电泳对31例AIDP患者、33例AMAN患者和132名健康对照进行HLA-A、B位点等位基因分型.结果 AIDP组HLA-A33频率(22.6%)较对照组(4.5%)升高,相对危险度(RR)为6.1,校正概率值Pc＝0.011;AMAN组HLA-B35、B15频率(34.5%,51.7%)较对照组(6.9%, 20.8%)升高,RR分别为7.1、4.1,Pc分别为0.000 8、0.015.结论 AIDP和AMAN与健康对照比较,有着不同的HLA等位基因分布.HLA-A33与AIDP易患性相关联,HLA-B15、B35与AMAN易患性相关联.推测AIDP和AMAN发病机制、病理改变的差异与在免疫应答、调控等各环节有关键作用的HLA的型别有关.
-
HLA-A*02等位基因分型技术及汉族HLA-A*02多态性研究
建立高分辨率的套式PCR-SSP,对17个HLA-A*02等位基因分型.利用国际标准分型细胞进行特异性鉴定,并在54例A*02阳性的无血缘关系汉族健康人中应用.共检测到5个A*02亚型,显示出较高多态性:其中A*0211(n=2)首次在东方人群检测到;A*0201频率高,占有48.2%;其余依次为A*0206、A*0207和A*0203.套式PCR-SSP既适用于移植供体选择,又可用于人类进化研究.
-
HLA-A和HLA-B的多态性与先兆子痫
Objective: To investigate the association between the polymorphism of HLA-A, HLA-B genes and pre-eclampsia. Methods: HLA-A, HLA-B genotyping was performed by polymerase chain reaction sequence-specific primer (PCR-SSP) in 119 preeclampsia patients, 117 normal pregnant women and their neonates. Results: The study showed that 16 HLA-A and 39 HLA-B alleles were obtained in pre-eclamptic patients and normal pregnant women. 15 HLA-A and 37 HLA-B alleles were obtained in their neonates. No significant difference was found in maternal or neonatal HLA-A, HLA-B alleles be-tween pre-eclampsia group and control group (Pc>0. 05). The frequencies of HLA-A11, HLA-A24,HLA-B13, HLA-B14, HLA-B15, HLA-B52 maternal/fetus genetic assoications were significantly different between pre-eclampsia group and control group (P<0. 05). Conclusion: Some HLA-A, HLA-B maternal/fetus special bindings may be associated with the susceptibility or protective of pre-eclampsia.
-
山东汉族关节病性银屑病与HLA-A、B等位基因相关性研究
3等位基因频率(分别为0.6%和6.7%,Pc<0.01)明显低于对照组.B*27等位基因频率在关节病性银屑病脊柱受累组为80%,无脊柱受累组为22%(两组比较,P<0.01);外周附着点受累组为63%,无外周附着点受累组为23%(P<0.05).7例B*13/27杂合体阳性者中5例(71%)有脊柱炎合并外周关节炎,而36例B*13/27杂合体阴性者中有8例(22%),两组比较,x2=6.73,P<0.05.结论 HLA-B*27与山东汉族关节病性银屑病相关.
-
三种白癜风抗原肽HLA-A* 0201四聚体的构建和临床初步应用
目的:体外构建三种白癜风抗原肽HLA-A * 0201复合物四聚体,并用其检测白癜风患者外周血中抗原特异性细胞毒性CD8+T细胞(CTL).方法:取原核表达HLA0201*-BSP和β2M蛋白,分别同MelanA 26-35、gp100 209-217、tyrosinase 1-9三种白癜风抗原肽进行体外复性折叠,形成可溶性抗原肽HLA-A*0201复合物,经BirA酶作用并通过凝胶过滤层析法纯化得复合物单体,再与藻红蛋白标记的链霉亲合素按4:1比例耦合成四聚体,并采用斑点印迹法对上述构建的四聚体进行鉴定.运用流式细胞术检测分析该四聚体结合白癜风患者外周血中特异性CTL的能力.结果:斑点印迹检测显示三种具有天然构象的生物素化的白癜风抗原肽HLA-A*0201四聚体复合物构建成功;流式细胞术检测结果显示所制备的四聚体可与白癜风患者血液中抗原特异性CTL结合.结论:成功制备了三种具有完整构象的生物素化白癜风抗原肽HLA-A* 0201四聚体,此四聚体均可检测白癜风抗原特异性CTL.
-
外周血单个核细胞表面HLA-A和HLA-B在结直肠肿瘤中的表达
目的 检测外周血单个核细胞表面(PBMC)HLA-A和HLA-B在结直肠肿瘤患者中的表达,并探讨其在肿瘤发生发展中的作用.方法 以Beta-actin为内参照,实时荧光定量RT-PCR方法检测结直肠肿瘤患者(结直肠肿瘤组,n=50)、结直肠良性病变患者(良性病变组,n=35)和健康体检者(正常对照组,n=42)外周血单个核细胞HLA-A和HLA-B mRNA的表达,并比较结直肠肿瘤不同TNM分期中HLA-A和HLA-B mRNA的表达.三组平均年龄相近.用Rest( relative expression software tool)软件计算相对表达率(Ratio).结果 正常对照组PBMC的HLA-A和HLA-B mRNA相对表达率分别为0.99±0.47,1.13±0.60;结直肠良性病变组相对表达率分别为0.76±0.59,0.84±0.57;结直肠肿瘤组分别为0.38±0.31和0.39±0.35.结直肠肿瘤组PBMC的HLA-A mRNA和HLA-B mRNA相对表达率低于正常对照组和结直肠良性病变组(P<0.001).结直肠肿瘤组HLA-A mRNA在TNM不同分期之间的表达无统计学差异(P>0.05);HLA-B mRNA在TNMⅠ期患者中的表达高于Ⅱ期和Ⅳ期(P<0.05),在其他不同分期之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 结直肠肿瘤患者外周血单个核细胞HLA-A和HLA-B与其细胞免疫相关,在抗肿瘤免疫中起重要作用.
-
HLA配型在肾移植中的临床应用
目的:探讨HLA配型在肾移植中的临床应用价值.方法:采用单克隆抗体一步法和顺序特异引物聚合酶链反应技术(PCR-SSP),对78例肾移植受者进行随机性HLA-A、B、DR位点配型.结果:能配上2个以上位点者有59例,占75.6%.供受者之间2～3个位点错配与4～5个位点错配,在移植肾功能延迟恢复及肌酐恢复正常所需时间上,均有显著的统计学差异.结论:HLA配型具有快速、准确的特点,能为肾移植受者选择佳供体,适合于临床应用.
-
肾移植术后5年内移植肾功能丧失与受者HLA多态性的相关性分析
目的 研究肾移植术后5年内移植肾功能丧失与HLA多态性的相关性.方法 以2000年1月至2009年2月间的肾移植受者为对象,其中移植肾功能丧失的受者50例(移植肾功能丧失组),移植肾功能正常的受者701例(对照组).采用序列特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)技术进行HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1基因低到中分辨水平分型,对存在易感基因的样本采用聚合酶链反应-碱基序列分析(PCR-SBT)技术进行HLA高分辨分型.应用SPSS统计软件分析两组间HLA分布的差异.结果 移植肾功能丧失组共表达47个HLA基因,HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1位点分别表达16、19和12个基因,其中基因表现型频率(PF)≥0.1的HLA基因多,占总基因数的42.55％(20/47),0.1＞PF≥0.05和PF＜0.05的HLA基因分别占34.04％(16/47)和23.40％(11/47).移植肾功能丧失组HLA-DRB1* 17(03)的频率显著高于对照组(基因型频率分别为0.213和0.062,Pc=0.000),PCR-SBT检测携带HLA-DRB1* 17(03)的样本,发现移植肾功能丧失组受者该基因的高分辨分型100％(19/19)为DRB1* 03:01,对照组中98.81％(83/84)为DRB1* 03:01,移植肾功能丧失组DRB1* 03:01的频率显著高于对照组[Pc=0.000,比值比=4.564,95％可信区间为(2.466,8.444)].结论 肾移植术后5年内移植肾功能丧失的受者中,HLA-DRB1* 03:01等位基因的频率显著增高,说明HLA-DRB1* 03:01等位基因本身可能就是导致移植肾5年内功能丧失的易感基因.
关键词： 肾移植 肾功能衰竭 HLA-A抗原 HLA-B抗原 HLA-DRB1抗原 -
基因芯片与血清学方法用于120份供、受者 HLA-A分型的比较
目的 比较基因芯片和血清学方法用于汉族的移植供、受者白细胞抗原Ⅰ类A抗原(HLA-A)分型的准确性和临床实用性.方法 采集供、受者的外周血共120份,再将每份血样分为2部分,分别采用血清学和基因芯片方法检测HLA-A抗原分型,对两种方法分型结果不同的样本,采用序列特异引物聚合酶链反应技术(PCR-SSP)检验.通过比较分型结果和操作方法,评价两种方法的准确性和临床实用性.结果 血清学分型总耗时3 h,基因芯片分型总耗时4.5～5 h,共有112份样本分型成功,其中两种方法结果一致的有91份,不一致的有21份.经验证,基因芯片分型错误2份,总误差率为2%;血清学分型错误19份,其中5份抗原误差,14份空白误差,总误差率为17%.结论 基因芯片分型准确性明显优于血清学,随着芯片性能的不断完善,将来可能完全取代血清学方法,并具有广阔的应用前景.
-
肾移植围手术期检测MICA及其抗体的临床进展
近几年来,对主要组织相容性复合体Ⅰ类A链相关抗原(MICA)的研究成为肾移植领域新的热潮.MICA可能引起急慢性排异,并导致慢性移植肾失功,本文对肾移植围手术期检测MICA及其抗体的进展作一综述.
-
湖南籍汉族女性HLA-A/B单倍型分析
目的:调查分析湖南籍汉族女性人群中HLA-A,B位点单倍型基因频率.方法:采用微量淋巴细胞毒试验法对50例无血缘关系的湖南籍汉族女性HLA-A,B位点多态性进行检查,通过比较连锁不平衡参数来推测单倍型.结果:居单倍型基因频率前3位的是A11-B60,A2-B60,A24-B48,而A2-B52,A11-B13,A24-B52等3种单倍型有显著的连锁不平衡.结论:湖南籍汉族女性HLA-A,B位点抗原,特别是B抗原的分布与国内其它地区汉族人群及湖南地区汉族人群(男女混合)比较有其特殊性.A2-B52,A1一B13,A24-B52三种单倍型有显著的连锁不平衡,可能为湖南籍汉族女性特有的单倍型.
-
抗HLA-A*0201重链卵黄抗体的制备及初步鉴定
目的制备高效价特异性鸡卵黄免疫球蛋白(Yolk immunoglobulin,IgY)抗体.方法用纯化HLA-A*0201重链抗原加完全福氏佐剂免疫岭南黄鸡,经水稀释法初步纯化浓缩后,用ELISA鉴定其免疫学活性,测定纯化后蛋白含量,并用SDS-PAGE进行分析鉴定.结果获得ELISA效价为1×106的抗重链IgY抗体,蛋白含量为9.77 mg/ml.经SDS-PAGE分析,出现2条蛋白带,纯度达90%以上.结论用重链抗原加福氏佐剂免疫种鸡制备的IgY抗体产量多、效价高,为结合HLA-A*0201复合体诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞活化奠定了基础.
-
HLA新等位基因A*33:44序列分析
目的 鉴定1例人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)新等位基因.方法 应用双链及单链测序法进行基于序列的分型(sequence based typing,SBT),通过群体调查了解该等位基因的群体分布频率.结果 该等位基因HLA-A* 33:44,与A*33:03:01第4外显子相差1个核苷酸,使第866位碱基由G变为A,第265个密码子由GGT变为GAT,相应氨基酸由甘氨酸变为天门冬氨酸.与IMGT/HLA数据库中的HLA-A等位基因的序列进行对比,该突变为新的单核苷酸多态性位点.结论 该新HLA等位基因在中国汉族人群中的分布频率小于0.0003,并被世界卫生组织HLA因子命名委员会命名为HLA-A* 33:44(序列注册号为HQ873871).研究新等位基因的序列可为HLA基因相关研究和应用提供信息.
-
HLA配型在肾移植中的应用
人类白细胞抗原(HLA)是导致移植物排斥反应的主要抗原,为了探讨HLA配型对同种异体肾移植效果的影响.我科自1997年2月至今应用HLA配型肾移植156例,效果满意,报道如下.
-
回族和维吾尔族人群HLA-A、HLA-B多态性调查
人类白细胞抗原(human leukoeyte antigen,HLA)存在于人体有核细胞的表面,在不同种族、不同个体间呈现高度多态性[1].HLA个体遗传学差异的本质是在编码其抗原产物的基因水平上.
