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四种肺炎支原体检验方法临床应用价值比较
目的:探讨肺炎支原体(MP)咽拭子快速液体培养法、咽拭子聚合酶链反应(PCR)法和血清MP被动凝集法(MP-Ab)、免疫斑点法方法在儿童MP感染诊断治疗过程中的应用价值.方法:锦州市儿童医院2010年3～4月临床诊断MP感染的患儿138例,每个患儿取咽拭子做快速培养和PCR,同时取血清做MP-Ab和免疫斑点方法检测.对4种方法的检测结果与临床诊断治疗病例进行回顾性分析.结果:快速培养呈阳性66例,阳性率为47.8%,检验时间24小时.PCR检测阳性82例,阳性率59.4%,检验时间8小时.MP-Ab检测阳性116例,阳性率84.0%,检验时间4小时.免疫斑点法阳性103例,阳性率74.0%,检验时间1小时.结论:临床医生应根据每种检验的敏感性及送检时患者的病程选择合适的检验方法.
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免疫斑点法早期诊断结核性脑膜炎实验研究
目的 建立免疫斑点法检测结核杆菌抗原,探讨应用免疫斑点法对早期快速诊断结核性脑膜炎的应用价值.方法 以D(λ)值(取对数Log)为纵坐标,抗原浓度(取对数Log)为横坐标,绘制标准曲线,求出回归方程.结果 确定兔抗结核杆菌PPD多克隆抗体浓度1:200(20 μg/mL)、通用型酶标抗体浓度1:10为佳反应浓度组合;回归方程Y=0.9982X-0.9229, P＜0.001.小结核杆菌抗原检出量为3.65 ng/mL.结论 此法灵敏度高、特异性强,简便、快捷,不需特殊仪器,结果 可保存,适合我国国情,适于在广大临床实验室推广应用.
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远洋船员幽门螺杆菌抗体的血清学调查
目的调查国际远洋船员中幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染率.方法采用金标免疫斑点法检测526名远洋船员及152名对照组血清Hp抗体.结果远洋船员中幽门螺杆菌感染率为65.4%,高于对照组;船员组中国籍感染率明显高于非中国籍(P＜0.005);Hp感染率随着年龄的增长而增高.结论 Hp感染率与生活环境、生活条件、生活习惯有关.经分析认为,密切接触造成间接口-口/粪-口传播是导致中国籍船员Hp感染率增高的主要原因.
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急性化脓性脑膜炎早期诊断的实验研究
目的 建立免疫斑点法检测脑膜炎双球菌(A群)、肺炎球菌抗原,探讨应用免疫斑点法对早期快速诊断细菌性脑膜炎的应用价值.方法 建立该实验体系,以A(λ)值(取对数Log)为纵坐标,抗原浓度(取对数Log)为横坐标,绘制标准曲线,求出回归方程.结果 小脑膜炎球菌抗原检出量为36 ng/ml.小肺炎球菌抗原检出量为13.4 ng/ml.结论 初步建立了用免疫斑点法检测急性化脓性脑膜炎中脑膜炎双球菌(A群)、肺炎球菌抗原的诊断方法,具有灵敏度高、特异性强,简便、快捷,不需特殊仪器,结果可保存等优点,非常适于在广大临床实验室推广应用.
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抗可提取性核抗原抗体谱检测方法的探讨
目的 探讨3种检测抗可提取性核抗原(ENA)抗体谱试剂的敏感性、特异性和检测结果的一致性.方法 分别采用免疫印迹技术(WB)万孚试剂和免疫斑点法欧蒙试剂及海奥万信试剂同步检测131例标本中ENA抗体谱中的6种抗原(抗nRNP、抗Sm、抗SsA、抗SSB、抗Scl-70、抗Jo-1),分析检测结果的符合率.结果 欧蒙试剂检测敏感性明显高于万孚和海奥万信(P均＜0.05),3种试剂检测结果一致性除抗SSA抗体外均较高.结论 检测抗ENA抗体谱免疫斑点法优于WB法,3种试剂中以欧蒙试剂检测敏感性较高,且与临床诊断相符合.
关键词： 抗可提取性核抗原抗体 免疫印迹法 免疫斑点法 -
间接免疫荧光法筛查抗核抗体与特异性抗体检测的临床意义分析
目的 探讨间接免疫荧光法(IIF)筛查抗核抗体与特异性自身抗体检测的临床意义和应用.方法 收集389例疑似自身免疫病(AID)患者血清,分别采用IIF、免疫斑点法(IDT)和免疫印迹法(IBT)进行检测分析.结果 IIF检测阳性率为89.5％,IBT阳性率为85.1％,两者阳性符合率为81.7％.检测结果显示,IBT的灵敏度为91.4％(318/348),特异度为68.3％ (28/41),误诊率为31.7％(13/41),漏诊率为8.6％ (30/348).IDT和IBT检测5项的阳性率分别为69.7％和71.5％.结论 IIF检测可用于初筛,其滴度的变化可提示疗效；IDT检测五项特异性自身抗体,快捷经济；IBT检测13项特异性自身抗体,可有效减少漏诊.三种方法联合检测可减少误差.
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抗ENA多肽抗体的检测及临床意义
目的:探讨抗ENA多肽抗体对自身免疫病诊断价值及临床意义.方法:用免疫斑点法对161例系统性红斑狼疮患者进行6种可提取性核抗原(ENA)自身抗体的检测.结果:161例患者中有113例患者检出至少一种自身抗体,其中SLE特异性抗体抗Sm阳性率为40.7%,抗nRNP的阳性率为24.3%.抗SSA抗、SSB的阳性率分别为23%和14.7%.结论:显示抗ENA多肽抗体在CTD的诊断、分型治疗及预后有重要价值.
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RT-PCR-RFLP技术在登革病毒感染早期诊断中的应用
目的 建立疑似登革病毒感染的病原快速鉴定分型方法,并对2004年我院收治的一例疑似登革感染患者进行确诊.方法 用免疫层析法(ICT)检测DV-IgM抗体、免疫斑点法(DIBA)检测DV-IgG抗体对疑似登革病毒感染患者进行动态监测;用登革病毒通用引物通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增患者血清中的登革病毒核酸,用限制性内切酶BstnⅠ酶切,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析鉴定分型.结果 发病第5天患者DV-IgM抗体开始呈弱阳性,第9天DV-IgM抗体滴度达到1:8,第13天DV-IgM抗体滴度开始下降;发病第9天患者DV-IgG抗体呈弱阳性,第12天DV-IgG抗体滴度达到1:8.用RT-PCR-RFLP检测疑似登革病毒感染患者早期血标本,确定2004年我院收治的一例患者为登革Ⅰ型病毒感染所致.结论 利用RT-PCR-RFLP技术对登革病毒进行分型鉴定具有敏感、特异、快速的优点,与登革热抗体检测结合起来应用可缩短疑似登革感染的确诊时间、降低检测成本,具有很好的社会效益和经济效益.
关键词： 登革病毒 免疫层析法 免疫斑点法 RT-PCR-RFLP -
两种抗 ENA 抗体检测方法的结果观察
目的：：观察免疫斑点法和免疫印迹法测定抗 ENA 抗体结果的差异性。方法：选取美国 GenBio 公司生产的自身抗体检测试剂盒(免疫斑点法)和广州万孚公司生产 ENA 试剂盒(免疫印迹法),同时检测433例样本中的抗 ENA 抗体,结果采用 McNemar检验,比较这两种方法的检测性能。结果：(1)成组χ2检验：免疫斑点法和免疫印迹法的检测结果有相关性(P =0.000)；(2)McNemar检验：免疫斑点法和免疫印迹法检测结果之间有差异(P =0.000)；(3)Kappa 检验：免疫斑点法和免疫印迹法检测结果的一致性有统计学意义,但一致性程度一般(Kappa=0.664,P =0.000)。结论：在临床检测抗 ENA 抗体时,对于弱阳性结果、不典型的结果好用另一种方法来检测,再结合其它指标来综合判断,才能准确地发出检验报告。
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免疫斑点法检测不孕者抗卵巢抗体的临床应用
抗卵巢抗体(antiovaeian antividies,AoAb)引起不妥症是近年来引入关注的问题,抗卵巢抗体是一种靶抗原在卵巢颗粒细胞、卵母细胞、黄体细胞和间质细胞内的自身抗体.AoAb的检测方法有免疫荧光抗体法、放免法和ELISA法.我们在人卵巢抗体的基础上,建立免疫斑点法(IDA)检测不孕和流产患者血清中AoAb.
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三种登革热抗体检测方法的临床对比研究
目的比较酶联免疫吸附法(ELISA)、免疫斑点法(DIBA)和免疫层析法(ICT)检测登革热抗体的敏感性、特异性及其他优缺点.方法用ELISA、DIBA和ICT同时检测登革热患者和流行性出血热、疟疾、乙脑、流感、钩体等其他发热患者的DV-IgM/IgG抗体,比较测试结果.结果用ICT法(澳大利亚PANBIOLimited)检测登革热患者DV-IgM的阳性率为60.4%(32/53),DV-IgG无1例阳性;检测非登革感染发热患者DV-IgM的假阳性率为14.7%(5/34),DV-IgG无1例阳性.用ELISA法(德国GMBH)检测登革热患者DV-IgM的阳性率为66.0%(35/53),DV-IgG的阳性率为70.2%(40/57);检测非登革感染发热患者DV-IgM的假阳性率为35.3%(12/34),DV-IgG的假阳性率为8.8%(3/34).用ELISA法(澳大利亚PANBIO Limited)检测登革热患者DV-IgM的阳性率为75.5%(40/53),DV-IgG的阳性率为49.1%(28/57);检测非登革感染发热患者DV-IgM的假阳性率为11.8%(4/34),DV-IgG无1例阳性.用DIBA法(新加坡Genelabs Diagnostics)检测登革热患者DV-IgM的阳性率为84.9%(45/53),DV-IgG的阳性率为64.9%(37/57);检测非登革感染发热患者DV-IgM的假阳性率为47.1%(16/34),DV-IgG无1例阳性.结论通过比较显示,ICT法检测DV-IgM抗体适合在登革热爆发流行期间用作疫区基层医疗单位的早期初筛试验;ELISA法检测DV-IgM/IgG抗体适合在普查及大批量标本检测时使用;DIBA法检测DV-IgM抗体不适合作为初筛试验;DIBA法检测DV-IgG抗体适合在登革热散发期间使用,可作为登革病毒感染的确证实验.
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两种方法测定抗核抗体的比对研究
目的观察酶联免疫吸附测定(ELISA)法和免疫斑点法测定抗核抗体(ANA)结果的差异性.方法 选取美国GenBio公司生产的自身抗体检测试剂盒(免疫斑点法)和美国宙斯公司生产的ANA试剂盒(ELISA法),同时检测356例样本中的ANA,结果采用McNemar检验,比较这两种方法的差异性.以间接免疫荧光法为标准,比较这两种方法的灵敏度、特异度.结果 (1)成组χ2检验:免疫斑点法和ELISA法检测结果有相关性(P=0.000).(2)McNemar检验:两种方法检测结果的差异有统计学意义(P=0.001).(3)Kappa检验:两种方法检测结果的一致性有统计学意义,但一致性一般(Kappa=0.686,P=0.000).(4)免疫斑点法的灵敏度为61.5%,特异度为99.0%;ELISA法的灵敏度为78.5%,特异度为96.6%.结论 两种方法检测ANA,其中一种为阳性时,另一种方法也多为阳性,但两种方法检测的一致性程度一般.ELISA法的灵敏度要高于免疫斑点法,免疫斑点法的阳性预测值要高于ELISA法.
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化学发光法检测抗可提取核抗原抗体的临床应用研究
目的 研究全自动、全定量和随机上样的化学发光法(CLIA)在针对抗可提取核抗原抗体(anti-ENA)检测结果在结缔组织病(CTD)的临床诊断价值,为临床实验室检测anti-ENA的方法学选择提供参考.方法 同时利用CLIA、免疫斑点法(ID)和多重流式免疫分析法(MFI)对323例CTD患者、123例非结缔组织病组(Non-CTD)及70例健康对照组(NCs)开展针对抗核糖核蛋白/史密斯(RNP/Sm)抗体、抗史密斯(Sm)抗体、抗干燥综合征抗原A(SSA/Ro60)抗体、抗干燥综合征抗原B(SSB/La)抗体、抗组氨酰tRNA合成酶(Jo-1)抗体、抗硬皮病70(Scl-70)抗体和抗核糖体P蛋白(Rib-P)抗体的平行检测;分析CTD患者各抗体与ID和MFI检测结果一致性.使用ELISA方法就比对不同方法学差异样本进行复测验证.结果 在NCs组中,CLIA法检测anti-ENA的阳性检出率均低于2％;在Non-CTD组中,各抗体阳性检出率均低于10％.在CTD中,CLIA分别与ID和MFI开展方法学比对分析.与ID相比,除抗SS-A抗体(71.21％)外,其他抗体一致性均大于85％;与MFI相比,除抗SSB抗体(69.66％)和抗Sm抗体(73.07％)外,其他抗体一致性均大于75％.针对抗Sm抗体,不同方法学差异样本进行ELISA方法学的重复验证,以其结果作为参考依据,再次开展一致性分析,总体一致性分别提升至96.28％;CLIA及MFI诊断效能分析中,抗Sm抗体的曲线下(AUC)面积分别为0.516 3及0.814 9,抗SSB抗体AUC面积分别为0.738 0及0.747 0.结论 与ID和MFI相比较,CLIA在NCs中检测anti-ENA时具有好的检测特异度,且与上述两种检测方法在CTD中的检测结果具有较好的一致性和符合率.由于不同检测方法在检测anti-ENA时灵敏度及特异度均存在一定差异,未来实验室方法学的选择时,应结合样本的临床诊断信息及方法学的具体特点(包括自动化程度、检测线性范围、样本随机上样和检测项目灵活组合)等方面综合判断.
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两种肺炎支原体血清学诊断方法对比分析
目的 评价肺炎支原体血清学检测方法在非典型肺炎诊断中的应用价值.方法 用ELISA间接法与金标免疫斑点法检测肺炎支原体IgM抗体,比较2种方法检验结果是否有差异.结果 ELISA间接法与金标免疫斑点法在肺炎支原体抗体检测中差异无统计学意义,(P＞0.05).结论 ELISA间接法检测MP抗体,其操作简便、快速,实验过程仅需1h,适合于临床实验室常规检查.
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抗可提取性核抗原抗体谱检测方法的对比研究
目的:比较三种检测抗可提取性核抗原(ENA)抗体谱试剂的敏感性、特异性和检测结果一致性.方法:分别采用免疫印迹法(WB)法万孚试剂及纯化抗原的免疫斑点法Trinity试剂和欧蒙试剂检测42例患者(22例SLE患者、10例RA患者和10例非自身免疫病患者)抗ENA抗体谱中的6种抗体(抗Sm抗体、抗RNP抗体、抗SSa抗体、抗SSb抗体、抗Scl-70抗体和抗Jo-1抗体),分析各抗体检测结果的符合率.结果:在SLE患者组欧蒙试剂检测抗Sm抗体、抗RNP抗体、抗SSa抗体和抗SSb抗体检测敏感性均高于万孚试剂和Trinity试剂(P＜0.05),三种试剂检测结果一致性除抗SSa抗体外均较高.这与检测抗SSa抗体的方法学有关.结论:检测ENA抗体谱免疫斑点法优于WB法,三种试剂中以欧蒙试剂检测敏感度较高,且与临床诊断相符.
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HCMV抗原、抗体和DNA的同I时检测在慢性肾盂肾炎中的意义
目的进一步探讨人巨细胞病毒(HCMV)感染与慢性肾盂肾炎的关系及同时检测HCMV抗原、抗体和DNA三项指标的意义.方法对95例慢性肾盂肾炎患者和83例正常对照,分别用免疫斑点法测尿中HCMV抗原,酶联免疫吸附测定(ELISA)测血清中HCMV抗体(IgG型),聚合酶链反应(PCR)测尿中HCMV-DNA.结果患者组HCMV抗原、抗体(IgG型)及DNA阳性率分别为55.8%,82.1%,24.2%,抗体(IgG型)S/N值(标本450 nm吸光度/阴性对照450 nm平均吸光度)为3.40±0.86,均明显高于正常对照组.三项指标的出现并非完全一致.结论HCMV感染可能与慢性肾盂肾炎有关,三项指标同时检测可能更有意义.
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重组PP150抗原用于胶体金免疫斑点技术检测抗HCMV-IgM
目的: 探索应用重组人巨细胞病毒(HCMV)PP150抗原用于免疫滴金技术检测血清中抗HCMV-IgM的诊断价值. 方法: PCR扩增HCMV pp150抗原决定簇(840～1048aa)编码基因片段,插入原核表探索应用重组人巨细胞病毒(HCMV)PP150抗原用于胶体金免疫斑点技术(CGIDA)检测血清中抗HCMV-IgM的诊断价值. 达载体pMAl-p2,转化宿主菌E.coli,诱导表达及纯化. 重组抗原CGIDA与酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒对比检测. 结果: 重组抗原CGIDA与ELISA试剂盒比较,符合率达96.0%;CGIDA检测HCMV-IgM的敏感度为74.2%,特异性为100%. 结论: 重组抗原pp150用于 CGIDA对HCMV的早期诊断,具有较好应用价值.
