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卵巢癌细胞培养上清诱导CD4+CD25-T细胞分化为CD4+CD25+调节性T细胞
目的研究卵巢癌细胞培养上清液是否能诱导外周血CD4+CD25-T细胞转变为CD4+CD25+调节性T细胞.方法将外周血CD4+CD25-T细胞分离后,对照组用CD3和CD28单抗活化,实验组在对照基础上加用卵巢癌细胞株SKOV3培养上清,72 h后分离各组的CD25+和CD25-T细胞,溴化脱氧尿嘧啶掺入标记法测定增殖能力及对静息的自体同源CD4+CD25-T细胞的增殖抑制能力,流式细胞仪测定细胞糖皮质激素诱发型TNF受体(glucocorticoid-induced TNFR,GITR)与CTLA-4分子的表达,RT-PCR检测细胞Foxp3 mRNA的表达.结果与对照组相反,实验组的CD4+CD25+T细胞具有免疫抑制功能,自身增殖能力下降,GITR和CTLA-4分子的表达和CD4+CD25+调节性T细胞相似,并被诱导表达转录因子Foxp3 mRNA.结论卵巢癌细胞分泌的可溶性物质能诱导外周血CD4+CD25-T细胞转化为CD4+CD25+调节性T细胞.
关键词： 卵巢癌 CD4+CD25+调节性T细胞 CTLA-4 GITR FOXP3 -
全身照射预处理供体对异基因大鼠肝移植的作用及对受体内CD4~+CD25~+调节性T细胞的影响
目的 探讨全身照射(TBI)预处理诱导大鼠肝移植术后急性排斥反应的发生机制,及CD4~+ CD25~+调节性T细胞的变化在诱导免疫耐受中的作用.方法 以雄性Lewis、DA大鼠为供、受体,随机分为正常对照组、同种肝移植组、自发免疫耐受组、急性排斥反应组.观察各组受体的生存时间及生存率,检测受体术后外周血中ALT、TB含量、Foxp3~+ CD4~+ CD25~+ 调节性T细胞和T细胞亚群上GITR的表达,检测受体术后第14天移植肝的病理变化和受体脾脏CTL杀伤活性.结果 自发免疫耐受组,术后经历短暂排斥反应终获得免疫耐受并长期存活.急性排斥反应组,在术后第17～21天死亡,与其他组相比,外周血血清中ALT、TB含量明显升高,而Foxp3~+ CD4~+ CD25~+调节性T细胞比例明显降低.TBI预处理大鼠供肝致受体外周血中CD3~+ CD4~+ T细胞上GITR表达降低,CD3~+CD8~+T细胞上GITR表达增加,提高CTL的杀伤活性.结论 通过TBI清除供体大鼠肝移植物中携带的旁路淋巴细胞,致受体外周血中Foxp3~+ CD4~+ CD25~+调节性T细胞表达降低,而使CD3~+ CD8~+T细胞上GITR表达增加,共同诱导大鼠肝移植术后急性排斥反应发生和耐受障碍.
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FOXP3和GITR在口腔扁平苔藓及口腔鳞状细胞癌中的表达及意义
目的 研究FOXP3、GITR在口腔扁平苔藓(OLP)和口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中的表达及其意义.方法 采用免疫组化方法检测30例OLP组织、30例OSCC组织和15例口腔正常黏膜(NOM)组织中FOXP3、GITR的表达.结果 NOM组FOXP3和GITR阴性表达;OLP组和OSCC组FOXP3和GITR表达分别较NOM组显著增加(P＜0.01);OLP组和OSCC组之间FOXP3和GITR表达无显著性差异(P＞0.05);FOXP3和GITR在OLP组和OSCC组中的表达存在正相关关系.结论 在OLP的发生及发展成OSCC过程中,FOXP3和GITR均可能起着一定的作用.
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多发性硬化患者外周血CD4+CD25high T细胞上4-1BB和GITR的表达
目的:以往研究表明4-1BB和GITR均可表达于CD4+CD25+调节T细胞(regulatory T cell,Tr),在由该细胞群维持的自身耐受中起着重要作用.另有研究报道人外周血CD4+CD25high T细胞与该Tr的功能活性更为接近,且在多发性硬化(multiple sclerosis,MS)患者中的效应功能明显降低,但目前对其是否与上述两类分子的表达有关尚不清楚,因此我们检测了MS患者外周血CD4+CD25high T细胞上4-1BB、GITR的表达,旨在发现该调节T细胞群是否有上述分子的异常表达.方法:用流式细胞仪检测了未治疗MS、其他神经系统疾病患者、正常对照组外周血CD4+CD25high T细胞表面4-1BB、GITR的表达.结果:与正常对照比较,MS患者CD4+CD25highT细胞4-1BB的表达明显减少(P＜0.05),而在CD4+CD25-T细胞的表达则与正常对照无明显差别(P＞0.05).三组间CD4+CD25high T细胞及其GITR的表达亦无显著差别(P＞0.05).结论:本研究发现MS患者CD4+CD25highT细胞上4-1BB的表达减少,而GITR的表达则较正常对照组则无显著差别,我们的结果提示该细胞群免疫活性的降低可能与其4-1BB的表达下调有关,而GITR则在CD4+CD25high T细胞的免疫调节过程中可能发挥着次要或精细调节的作用.
关键词： GITR 4-1BB 多发性硬化 外周血 CD4+CD25+调节T细胞 -
雌激素受体beta亚型单独活化对CBA/J小鼠Treg细胞的抑制作用
目的:研究雌激素受体beta亚型(ERβ)单独活化对CBA/J小鼠Treg细胞的调节作用.方法:应用流式细胞术检测Oil组、E2组、DMSO组、DPN组小鼠胸腺CD4+ CD25+ Foxp3-GITR+细胞及CD4+ CD25+ Foxp3+ GITR+细胞占CD4+T细胞百分比、小鼠脾脏CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞占CD4+T细胞百分比、外周脾表达GITR的Treg细胞百分比及Treg细胞中GITR的平均荧光强度.结果:E2组与Oil组之间、DPN组与DMSO组之间小鼠胸腺CD4+ CD25+ Foxp3-GITR+细胞及CD4+ CD25+ Foxp3+ GITR+细胞占CD4+T细胞百分比无明显变化.与DMSO相比,DPN组的CD4+ CD25+ Fxop3+ Treg细胞占CD4+T细胞百分比明显下降(P＜0.05),表达GITR的Treg细胞下降(P＜0.05),Treg细胞中GITR的平均荧光强度下降(P＜0.05).然而,与Oil组相比,E2组上述指标并无明显变化.结论:DPN单独激活ERβ后虽然不影响胸腺nTreg细胞的发育,却对CBA/J小鼠外周脾脏的Treg细胞起明显的抑制作用,提示ERβ单独激活可能促进自身免疫性疾病的发生、发展.
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衰老对小鼠脾CD4~+CD25~+T细胞的影响
目的 比较年轻鼠和老年鼠脾CD4~+CD25~+T细胞的数量及功能变化.方法 采用流式细胞分析法,检测脾CD4~+CD25~+ T细胞比例及其Foxp3和GITR表达;通过3H-TdR掺入测定脾CD4~+CD25~+T细胞的功能.结果 老年鼠脾CD4~+CD25~+T细胞的百分数明显增加,但是其抑制功能明显降低,并且表面GITR表达降低.结论 随着年龄的增加,小鼠脾CD4~+CD25~+T细胞抑制功能降低.
关键词： CD4~+CD25~+T细胞 年龄 FOXP3 GITR -
桑椹三仙胶治疗慢性特发性血小板减少性紫癜患者前后调节性T细胞及GITR表达的变化
目的:探讨桑椹三仙胶治疗慢性特发性血小板减少性紫癜(CITP)患者前后CD4+ CD25+调节性T细胞( CD4+ CD25+ Treg)及其糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)水平的变化.方法:采用流氏细胞术测定桑椹三仙胶治疗前后CITP病人及正常对照组外周血调节性T(Treg)细胞及GITR表达的影响.结果:CITP组疗前CD4+ CD25+ Treg在外周血单个核细胞中的比例及其GITR表达较正常对照组均明显降低,具有显著性差异(P＜0.01)；桑椹三仙胶治疗后CD4+ CD25+ Treg水平与治疗前相比明显上升,具有显著性差异(P＜0.01)；治疗后GITR表达较治疗前有所上升,但与无显著性差异(P＞0.05).CD4+ CD25+ Treg、GITR表达水平在治疗后虽有所提高,但与正常组比较,仍差异显著(P＜0.01).结论:CITP患者CD4+ CD25+ Treg细胞的免疫抑制作用受损可能是本病发生的机制之一.通过纠正CD4+ CD25+ Treg细胞及其抑制性标志物的表达抑制T淋巴细胞异常活化和增殖可能是桑椹三仙胶治疗CITP的机制之一.
关键词： 血小板减少性紫癜 桑椹三仙胶：调节性T细胞 GITR -
FOXP3和GITR/GITRL mRNA在类风湿关节炎和结直肠癌患者外周血中的表达研究
探讨FOXP3和糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor,GITR)及其配体(GITRL)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)和结直肠癌患者中的表达变化及GITR与FOXP3表达的相关性.运用实时荧光定量RT-PCR方法,检测55例健康体检者、55例RA患者、50例结直肠癌患者的外周血单个核细胞(peripheral blood monocytes,PBMC)中FOXP3、GITR和GITRL的基因表达水平.结果:在RA患者组FOXP3、GITR和GITRL均显著低于健康对照组(P＜0.01),经过转换后的mRNA表达水平分别为对照组的18.5%、7.5%和1.7%,GITR和FOXP3的表达水平呈显著正相关(r=0.86,P＜0.01);而在结直肠癌患者组,FOXP3的表达水平显著高于对照组(P＜0.01),表达水平为对照组的173.7%,GITR和GITRL的表达水平显著低于对照组(P＜0.01),mRNA表达水平为对照组的45.7%和50.1%,GITR和FOXP3的表达有一定的相关性(P=0.046).RA和结直肠癌患者均存在调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)异常.在RA中,GITR表达趋势与FOXP3一致,均反映Treg数量或功能降低.但在结直肠癌患者中,两者表达不尽一致.
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供者凋亡细胞静脉输注在异种肝移植中所产生体液免疫机理
目的 以贵州香猪为供者、中国猕猴为受体的异种肝移植模型,采用静脉输注异种异基因骨髓及凋亡细胞的方法预处理受体,研究凋亡细胞对异种肝脏移植免疫排斥反应的影响,探讨异种肝脏移植免疫耐受的机制.方法 受者猕猴随机分为A、B、C组, A组为阴性对照组, n=6;B组为实验对照组, n=28, 在接受RIC之后,再接受供者贵州香猪的异种异基因骨髓(BM)静脉输注;C组为实验组, n=36, 在接受RIC之后,再接受供者贵州香猪的BM和凋亡细胞同时静脉输注.观察各组受体的生存期,检测受体术后外周血中ALT、TB含量、Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞和T细胞亚群上GITR的表达,检测受体术后第14天移植肝的病理变化和术后第14天受体脾脏CTL杀伤活性.结果 C组肝移植术后经历短暂排斥反应,终可获免疫耐受并长期存活,其外周血中Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞表达比例在术后第14天渐恢复正常,受体外周血中CD3+CD4+T细胞上GITR表达降低, CD3+CD8+T细胞上GITR表达增加,提高CTL的杀伤活性;B组受体在术后第17～21天死亡,与A、C组相比,外周血血清中ALT、TB含量明显升高,而Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞比例明显降低.结论 供者凋亡细胞静脉输注在异种肝移植中所产生体液免疫耐受的机理,可能是通过诱导受体外周血中CD3+CD4+T细胞上GITR表达降低, CD3+CD8+T细胞上GITR表达增加,提高CTL的杀伤活性来实现的.
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CD4+CD25+调节性T淋巴细胞及相关标记物的研究进展
机体免疫系统在抗致病菌感染免疫应答和对自身物质的免疫耐受中,以免疫抑制为主要功能的CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(TR)发挥了重要的平衡调节作用.其缺乏或功能性的缺陷与自身免疫性和炎症性疾病的发展以及机体内环境稳定密切相关[1-3].
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哮喘小鼠肺组织Nuocytes增多与GITR-GITRL表达的关系
目的：检测哮喘小鼠肺组织中Nuocytes相关指标和GITR-GITRL的表达，探讨哮喘时Th2极化微环境的改变。方法：选择8只Balb／c小鼠，随机分为2组，模型组于第1天，第11天用OVA致敏，第22至26天用2％OVA溶液雾化激发，对照组用PBS处理；采用流式细胞术检测小鼠肺组织内GITR表达和Nuocytes细胞数量；qRT-PCR法检测Foxp3、RORα、ICOS、ST2、IL-5、IL-13和GITR及其配体GITRL的mRNA表达水平；对GITR-GITRL和Nuocytes及其相关分子的表达水平进行相关性分析。结果：与对照组相比，模型组小鼠肺组织中Nuocytes细胞数和GITR表达均升高，且GITRL、Foxp3、RORα、ICOS、ST2以及IL-5和IL-13 mRNA表达水平均明显上调；GITR与RORα和ST2、IL-5、IL-13的表达水平均呈正相关。结论：哮喘小鼠肺组织中Nuocytes和GITR-GITRL表达增高，提示哮喘时GITR-GITRL上调的T细胞免疫应答可能与Th2主导的免疫失衡和Nuocytes极化相关。
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真核表达质粒pDisplay-hGITRaa1-165构建及其在COS-7细胞中的表达
目的:构建含有人GITR胞外段的真核表达质粒pDisplay-hGITRaa1-165,并检测其在真核细胞内的表达.方法:将带有信号肽的GITR基因片段克隆至真核表达载体pDisplay,经酶切鉴定及测序分析,脂质体介导法转染COS-7细胞,通过蛋白质印迹法检测其在COS-7细胞内的表达水平. 结果:所构建的真核表达质粒pDisplay-hGITRaa1-165转染COS-7细胞后,在其培养上清中检测到目的蛋白的表达.结论:成功表达pDisplay-hGITRaa1-165蛋白,为GITR的生物学功能研究奠定了基础.
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卵巢癌患者CD8+T细胞中调节性T细胞相关分子标志物的表达率及临床意义
目的:检测卵巢癌患者组织及外周血CD8+T细胞中调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)相关分子标志物的表达率,探讨其在卵巢癌发生发展中的临床意义.方法:用流式细胞术检测31例卵巢癌患者、31例卵巢良性肿瘤患者和31例健康对照者的外周血,以及14例卵巢癌组织和12例卵巢良性肿瘤组织CD8+T细胞中Foxp3、CD25、CD28、CTLA-4及GITR的表达率.结果:Foxp3和CTLA-4在卵巢癌组织CD8+T细胞中的表达率显著高于卵巢良性肿瘤组织(P＜ 0.05);CD28在卵巢癌组织CD8+T细胞中的表达率显著低于卵巢良性肿瘤组织(P＜0.05).卵巢癌患者外周血CD8+T细胞中Foxp3、CD25、CTLA-4的表达率显著高于卵巢良性肿瘤患者和健康对照者(P＜0.05),CD28的表达率显著低于卵巢良性肿瘤患者和健康对照者(P＜0.05).结论:卵巢癌组织及外周血CD8+ Treg所占的比例显著高于卵巢良性肿瘤组及健康对照组,且CD8+T细胞中Foxp3的表达率可能对了解卵巢癌进展状况有一定帮助.
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乙型肝炎患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞4个分子表达的研究
目的 研究慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者和乙型肝炎病毒携带者(asymptomatic HBV carriers,ASC)外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+ regulatory T cells,Tregs)4个表型分子的表达情况,并分析其可能的作用.方法 收集50例CHB患者、28例ASC和24例健康献血者的外周静脉血,密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,应用MACS免疫磁珠和AutoMACS分离系统分选CD4+CD25+ Tregs,提取CD4+CD25+ Tregs总RNA,逆转录成cDNA后,采用SYBR Green I荧光标记技术进行定量PCR检测待测分子的表达水平.结果 荧光定量PCR结果显示,4个待测分子中,CCR5、CTLA-4F和Foxp3的表达水平在各研究组之间差异均无统计学意义(均P ＞0.05);GITR在CHB组外周血CD4+CD25+ Tregs中的表达水平明显高于健康对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05),而GITR的表达水平在CHB组和ASC组之间及ASC组和健康对照组之间差异均无统计学意义(均P ＞0.05).结论 CHB组患者外周血CD4+CD25+ Tregs的GITR表达水平显著增高,提示GITR在HBV感染过程中可能对外周血CD4+CD25+ Tregs的功能起着重要的调控作用.
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GITR抗体介导增强NK细胞杀伤活性的实验研究
目的 探讨糖皮质激素诱导的TNF受体家族相关受体(glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptorfamily related receptor,GITR)的抗体通过抑制Treg细胞的功能,进而增强NK细胞杀伤活性来对L615白血病细胞产生杀伤作用.方法 通过不同的给药方式将L615白血病小鼠设立为4个实验组,提取实验分组后的小鼠脾脏中NK细胞作为效应细胞,以L615白血病细胞作为靶细胞,在体外观察了NK细胞的杀伤活性变化情况,并运用RT-PCR,进一步观察了体现NK细胞杀伤活性的几个相关指标的变化.结果 GITR抗体可以明显增强小鼠脾脏中NK细胞的杀伤活性,具体表现为同NK细胞活性密切相关的3个指标穿孔素(Perforin),γ干扰素(IFN-γ),Fas的表达量明显增加.结论 GITR抗体能够通过Treg细胞的调节增强NK细胞的杀伤活性,进而有效的抑制L615白血病细胞.
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GITR抗体介导增强NK细胞杀伤活性的实验研究
目的 探讨糖皮质激素诱导的TNF受体家族相关受体(glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor family related receptor,GITR)抗体通过调节Treg细胞和NK细胞的功能对L615白血病细胞增殖的影响,了解NK细胞对白血病细胞的杀伤活性.方法 通过不同的给药方式将L615白血病小鼠设立为4个实验组,提取实验分组后的小鼠脾脏中NK细胞作为效应细胞,以L615白血病细胞作为靶细胞,在体外观察了NK细胞的杀伤活性变化情况,并运用RT-PCR进一步观察了体现NK细胞杀伤活性的几个相关指标的变化.结果 GITR抗体可以明显增强小鼠脾脏中NK细胞的杀伤活性,表现为同NK细胞活性密切相关的3个指标穿孔素(Perforin)、γ干扰素(IFN-γ)、Fas的表达量明显增加.结论 GITR抗体能够通过Treg细胞的调节增强NK细胞的杀伤活性,进而有效的抑制L615白血病细胞.
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急性髓系白血病细胞诱导免疫耐受及其机制的研究进展
急性髓细胞白血病(AML)是一种血液系统恶性克隆性疾病.虽然经过化疗和自体造血干细胞移植部分可以获得完全缓解,但仍有部分患者经常复发,总体五年生存率很差,原因可能与AML细胞诱导形成免疫耐受有关.研究发现AML细胞可以通过表达白血病相关抗原以及TGF-β等细胞因子诱导免疫耐受,CD40、CD80分子表达缺失以及CD4+CD25+T调节细胞的增加在AML细胞诱导免疫耐受中也发挥重要的作用.近研究发现,吲哚胺-2,3-加双氧酶(IDO)以及糖皮质激素诱导肿瘤坏死因子受体相关蛋白(GITR)与AML细胞免疫耐受有相关性.本文就AML细胞如何诱导免疫耐受从IDO、GITR 及CD4+CD25+T调节细胞三个方面进行综述.
关键词： 急性髓细胞白血病 免疫耐受 IDO GITR CD4+CD25+T调节细胞 -
SLE患者外周血中Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞的分析
目的:分析SLE患者外周血中Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞和T细胞亚群上GITR的表达,以初步阐述其在SLE患者免疫稳态调节中的作用和意义.方法:以流式细胞术检测SLE患者外周血中Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞和T细胞亚群上GITR的表达.结果:稳定期及活动期SLE患者外周血中Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞比例显著低于健康对照(P＜0.05),且活动期SLE患者Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞比例高于稳定期SLE患者(P＞0.05).SLE患者外周血CD3+CD4+T细胞和CD3+CD8+T细胞上GITR表达显著增加(P＜0.05);随着疾病活动性增加,CD3+CD4+T细胞上GITR表达降低(P＞0.05),CD3+CD8+T细胞上GITR表达增加(P＞0.05).结论:SLE患者外周血中Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞表达降低,而患者T细胞亚群上GITR表达增加,其共同作用在诱导SLE患者外周耐受障碍中具有重要意义.
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GITR/GITRL系统在免疫调节中的作用
糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor, GITR) 是肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)中的第18个成员, 是胸腺来源的CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell, Treg)上的一个表面分子, 其配体为GITRL.
关键词： 糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体 GITR GITRL 免疫调节 -
FOXP3、GITR和GITRL在口腔扁平苔藓患者外周血中的表达
目的:研究FOXP3和GITR/GITRL基因在口腔扁平苔藓(OLP)患者外周血中的表达水平.方法:采用实时荧光定量RT- PCR的方法,检测30例OLP患者和15例健康人外周血中FOXP3、GITR和GITRL的基因表达水平.结果:OLP组FOXP3、GITR和GITRL mRNA表达量均显著低于健康对照组(P＜0.01)；结果经2- ΔΔCT转换后,OLP组FOXP3、GITR和GITRL mRNA表达水平分别是健康对照组的23.4％、18.1％和20.9％；FOXP3和GITR的表达水平呈正相关关系(r=0.491,P＜O.05).结论:FOXP3和GITR/GITRL mRNA的表达异常,影响了调节性T细胞(Treg)的功能.
关键词： 口腔扁平苔藓 实时荧光定量RT- PCR FOXP3 GITR GITRL
