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艰难梭菌A毒素致细胞圆缩化和致死活性的相关性研究
艰难梭菌(Clostridium difficile)是人假膜性结肠炎和抗生素相关性腹泻的主要致病因子.其产生A、B两种与疾病有关蛋白毒素,其中由于A毒素具有肠道毒性而被认为是引起疾病的主要致病因子[1].A毒素的相对分子质量(Mr)很大,在未变性的状态下为(520～540)×103,在变性状态下降解为(220～240)×103左右,没有亚基分离.A毒素有肠道毒性、细胞毒性、小鼠致死活性、血球凝集活性、血管通透亢进等生物学活性.A毒素是一种可溶性蛋白,它通过受体介导的内吞作用进入细胞,诱导许多种哺乳动物组织和细胞发生细胞病变效应[1,2].A毒素对细胞的影响非常复杂,对A毒素的细胞毒性研究一般都是以细胞骨架变化引起的细胞形态变化即细胞圆缩化为敏感指标的,但是有报道认为细胞圆缩化后并不一定死亡[3].而国内虽然对艰难梭菌的分离、毒素精制、诊断方法及试剂方面有所研究,但还未对A毒素的细胞毒性展开工作.为此,我们采用非洲绿猴肾细胞Vero、人甲状腺乳头癌细胞TPC-1、人喉癌细胞HEP2、人肺癌细胞A549、人结肠癌细胞SW1116、人肝癌细胞SMMC7721等6种细胞系,探讨了在A毒素致细胞圆缩化和细胞致死活性之间的关系.
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凋亡素基因对人喉癌细胞Hep-2的抑制效应研究
鸡贫血病病毒(chicken anemia virus,CAV)主要以诱导细胞凋亡方式破坏宿主细胞,VP3基因被认为是CAV的主要功能基因,其具有细胞核定位信号域和DNA结合域,能够以非p53依赖性途径特异性诱导肿瘤细胞凋亡,而对正常细胞无作用,且其凋亡诱导作用不受Bcl-2的抑制,相反Bcl-2还能增强其功能[1].
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重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子溶瘤2型单纯疱疹病毒注射液(Vero细胞)的药效学分析
目的 分析重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)溶瘤2型单纯疱疹病毒(oncolytic herpes simplex virus type 2,OH2)的体内、外药效.方法 按不同感染复数(MOI)=0.002、0.01、0.05、0.25、1.25分别感染人结肠癌细胞(LoVo)和人喉癌细胞(Hep2),MTT法检测OH2在体外的溶瘤作用.经BALB/c-nu正常小鼠右侧肋腹皮下分别注射LoVo细胞和Hep2细胞,当肿瘤平均体积＞100 mm3时,试验组于肿瘤内分别注射高、中、低剂量的OH2(1×107、1×106、1×105 CCID50/mL),同时设阳性对照组(5 mg/mL的5-FU)及阴性对照组(DMEM/F12培养基),于第0、3和6天进行注射.首次注射后第0、3、6、9、12、15、18天测量肿瘤长径(a)和宽径(b),计算肿瘤体积(tumor volume,TV)及相对肿瘤增殖率.结果 OH2在较小浓度下(MOI分别为0.168和0.063)即可较好地杀伤LoVo和Hep2细胞.与阴性对照组比较,两种肿瘤模型的OH2高、中、低剂量组及阳性对照组均有显著抑瘤效果(P＜0.05);LoVo肿瘤模型中,OH2高剂量组的抑瘤效果明显优于中、低剂量组(P＜0.05);Hep2肿瘤模型中,OH2高、中、低剂量组的抑瘤效果差异无统计学意义(P＞0.05).结论 OH2在体外和体内实验中均显示较好的溶瘤作用,具有新生物药开发前景,为临床前研究提供了实验依据.
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STIM1RNA干扰对人喉癌细胞增殖和凋亡的影响
目的:研究STIM1 RNA干扰对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡、体外侵袭及迁移的影响.方法:采用STIM1干扰慢病毒转染人喉癌Hep-2细胞,实时定量PCR和Western blot验证STIM1干扰效果,CCK-8法分析细胞增殖情况,分别使用Transwell小室侵袭、划痕实验检测细胞体外侵袭和迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot分析caspase-3、Bax、Bcl-2、MMP9、VEGF蛋白表达水平.结果:人喉癌Hep-2细胞STIM1干扰慢病毒转染后,干扰组STIM1基因mRNA和蛋白表达均明显减少.与对照组比较,STIM1干扰后,细胞增殖、体外侵袭、迁移能力均明显减弱(均P＜0.05);STIM1干扰后Hep-2细胞凋亡率相比对照组显著增大,STIM1干扰促进Hep-2细胞凋亡与上调caspase-3、Bax蛋白表达、下调Bct-2蛋白表达水平有关;STIM1干扰抑制Hep-2细胞侵袭迁移与下调MMP9、VEGF蛋白表达有关.结论:STIM1 RNA干扰可抑制人喉癌Hep-2细胞增殖活性和体外侵袭、迁移能力,且促进喉癌细胞凋亡.
