首页 > 文献资料
-
Pro167位点突变型CTX-M-14超广谱β-内酰胺酶的动力学特征
目的 对Pr0167位点突变型CTX-M-14超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的动力学特征进行分析与评价.方法 以携带CTX-M-14基因的大肠埃希菌临床株为模板,克隆目的 基因,重组工程菌,并表达CTX-M-14型ESBL.进而采用基于重叠延伸PCR法的定点突变技术,将CTX-M-14型ESBL的167位点Pro(P)分别突变为Gly(G)、Gln(Q)、Ser(S)和Thr(T),重组构建P167G、P167Q、P167S和P167T四株突变型的CTX-M-14工程菌.表达与纯化野生型、重组型和突变型CTX-M-14型ESBL,检测其水解β-内酰胺类抗菌素的酶动力学参数(Kcat、Km和Km).结果 对野生型与重组型CTX-M-14型ESBL的酶动力学参数进行配对t检验,结果显示两者Kcat(t=1.796,P=0.123)、Km(t=0.559,P=0.596)、Kcat/Km(t=0.893,P=0.406)间的差异无统计学意义(P>0.1).与重组CTX-M-14型ESBL相比,P167S突变型酶对头孢他啶的Km值大幅降低,为突变前的1/16(8.39/134.85);Kcat和Km值分别为突变前的2.87倍(1.81/0.63)和43.6倍(0.218/0.005);且对青霉素、氨苄西林、头孢唑啉、头孢呋辛、头孢曲松和头孢噻肟的Kcat/Km值都呈现出显著减小的趋势(P<0.05).与重组CTX-M-14 ESBL相比,P167Q和P167G突变型酶对头孢他啶的Kcat值亦大幅减小(P<0.01),而P167T突变型对头孢他啶的酶动力学参数无明显变化.结论 重组型与野生型CTX-M-14 ESBL之间各项酶动力学参数的差异无统计学意义(P>0.1).而P167S位点的突变,不仅增强了CTX-M-14型ESBL对头孢他啶的亲和力,也加快了酶-底物复合物的转换速率.通过对Pr0167位点4种突变型酶的动力学参数比较,初步说明突变型CTX-M ESBL对头孢他啶所具备的高水解活性机制,不能简单地归结于Pro167位点被小侧链氨基酸残基取代而导致酶活性中心空间扩大的解释.
-
胃肠外科超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌的耐药基因分型研究
目的：通过对医院胃肠外科患者体液中超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠杆菌耐药基因分型检测，探究胃肠外科室内的耐药基因流行特点。方法收集300例在2015年8月—12月住院患者样本，通过VIT EK-2 Com-pact全自动细菌鉴定及药敏分析系统筛选高耐药ESBLs大肠杆菌；通过PCR技术对耐药基因鉴别和扩增；将耐药基因亚型测序，通过序列比对方法对耐药基因亚型进行确认。结果筛选发现120株耐药ESBLs大肠杆菌菌株；其中14株高耐药ESBLs大肠杆菌PCR鉴定发现ESBLs大肠杆菌耐药基因的主要类型是CTX-M 型，测序发现其亚型主要为CTX-M-14（64．3％）、CTX-M-15（28．6％）和CTX-M-123（7．1％）。结论本研究发现胃肠外科住院患者体液内存在的大肠杆菌超广谱耐药基因 ESBLs主要为CTX-M 型，其亚型为CTX-M-14、CTX-M-15和C T X-M-123。
-
尿培养产CTX-M大肠埃希菌的种系分型与毒力特点分析
目的 分析尿培养产CTX-M大肠埃希菌的种系分型,耐药及毒力特点,为临床治疗提供参考依据.方法收集医院2014年尿培养大肠埃希菌,采用环扩散法测定细菌的敏感性, 分析细菌产ESBLs的情况;依据PCR对菌株的CTX-M编码基因的检验结果,将细菌分为产CTX-M组和非产CTX-M组,对比分析两组之间在抗菌药物耐药性和毒力基因之间的差异.结果 162株尿培养大肠埃希菌之间无遗传相关性,126株ESBLs阳性菌株中,有91株细菌产CTX-M,其中,57株产CTX-M大肠埃希菌属于D型,16株属于B2型;产CTX-M组细菌的耐药率显著高于不产CTX-M组细菌(除外亚胺培南)(P<0.05).结论 产CTX-M大肠埃希菌是医院尿路感染的主要致病菌,以D型为主,耐药率显著增高,且与毒力基因iutA、chuA和traT密切相关,是尿路感染患者临床治疗的一个潜在威胁.
-
阴沟肠杆菌流行菌株产超广谱β-内酰胺酶分析
目的 研究江苏苏中地区阴沟肠杆菌流行株产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的状况.方法 采用改良的双纸片法(MDDT)进行ESBLs的初筛;以ESBLs引物 (CTX-M、CTXM-1、CTX-M-2、CTX-M-9、SHV、TEM、VEB、PER型)进行PCR扩增,对扩增产物进行序列分析.结果 MDDT初筛结果证明该菌株产超广谱β-内酰胺酶, CTX-M型ESBLs引物有扩增产物,序列分析表明该株阴沟肠杆菌携带CTX-M-3型ESBLs.结论 江苏苏中地区阴沟肠杆菌流行株产CTX-M-3型ESBLs,是造成该流行株对三代头孢菌素耐药的重要原因.
关键词： 阴沟肠杆菌 产超广谱β-内酰胺酶 CTX-M -
郑州地区大肠埃希菌中CTX-M型超广谱β-内酰胺酶的基因型分布
TX-M型别者2株;CTX-M型ESBLS中,CTX-M-1(43株)、CTX-M-14(56株)、CTX-M-25(7株)及CTX-M-38(5株).结论 郑州地区大肠埃希菌CTX-M型ESBLs以CTX-M14型为主,且同一菌株町有多种CTX-M酶型.
-
产CTX-M酶肠杆菌科细菌耐药性及其相关耐药基因研究
目的 了解产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肠杆菌科细菌的阳性率、耐药性以及基因型分布.方法 采用纸片扩散法检测临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对18种抗菌药物的耐药性,用聚合酶链反应(PCR)技术检测相关耐药基因并用DNA序列分析确认基因亚型.结果 检测菌株中ESBLs阳性56株,阳性率为44.4%;检测菌株对亚胺培南全部敏感,质粒接合试验证实,CTX-M型ESBLs介导的耐药可以水平转移;产ESBLs阳性菌株中有48株扩增到CTX-M型耐药基因,其中CTX-M-3型11株,CTX-M-9型7株,CTX-M-14型25株.结论产CTX-M型ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检出率较高,以CTX-M-14型为多;碳青霉烯类抗菌药物是目前治疗产ESBLs细菌有效药物.
关键词： 肠杆菌科 产超广谱β-内酰胺酶 CTX-M 耐药性 基因型 -
郑州地区ESBLs基因型分布研究
目的 明确ESBLs在郑州地区的基因型分布.方法 收集78株临床分离产ESBLs革兰阴性杆菌,混合后提取总质粒作为模版,用特异性引物进行PCR扩增.结果 显示TEM、SHV、OXA1、OXA20、CTX-M1、CTX-M14和CTX-M25的泳道有阳性条带.结论 郑州地区目前已有TEM、SHV、OXA和CTX-M四种亚型的ESBIs流行.
-
大肠埃希菌药敏结果和产超广谱β-内酰胺酶菌株的耐药基因分析
目的 对我院2011年上半年分离出的147株大肠埃希氏菌药敏及耐药基因型进行分析,为临床合理应用抗生素,减少耐药菌株的出现提供参考依据.[方法]采用梅里埃公司的VITEK2全自动微生物分析仪,对标本进行细菌鉴定和药敏分析.对产生超广谱β-内酰胺酶(Extended-spectrum β-lactamase,ESBLs)的大肠埃希菌确证实验,采用美国临床检验室标准化委员会( Clinical and Laboratory Standards Institude,CLSI)推荐的纸片扩散法,进行确证实验.耐药基因采用多重PCR检测鉴定.[结果]147株大肠埃希氏菌,ESBLs菌株有71株,百分比为48.1%.对71株ESBLs大肠埃希氏菌的质粒进行PCR扩增,显示29株CTX-M基因阳性,检出率为40.8%;TEM 基因型菌株25株,所占百分比35.2%;SHV基因型菌株17株,所占百分比23.9%型;OXA基因型菌株11株,所占百分比15.4%.[结论]本地临床分离大肠埃希菌对抗生素敏感性,存在有一定的地域差别,这可能跟不同地区用药习惯用药历史有关.本地区ESBLs大肠埃希菌具有较高的CTX-M型ESBLs检出率.是本地区产ESBLs大肠埃希菌流行的的主要耐药基因型.
-
儿童CTX-M型超广谱β-内酰胺酶研究进展
近年来随着广谱抗菌药物特别是第三代、第四代头孢菌素在儿科的广泛使用,细菌耐药问题日趋严重,这已成为当前儿科研究领域中的重大课题和难题.细菌在适应抗菌药物选择压力的过程中产生了超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases,ESBLs).ESBLs主要分为TEM型、SHV型、CTX-M型、OXA型及其他型,其中CTX-M型ESBLs由1990年德国的Bauemfeind首先报道,2000年后呈现全球蔓延趋势[1],在儿童患者中的分布也日渐广泛,但对该酶在儿童中的研究报道较少.现将近年来有关研究综述如下.
-
糖尿病足并发大肠埃氏稀菌感染耐药机制的研究
目的 通过对大肠埃希氏菌耐药机制分析,提高糖尿病足患者的治愈率,提供理论依据.结果 大肠埃稀氏菌22株,10株携带TEM,2株携带SHV,11株携带CTX-M基因,大肠埃希菌9株携带TEM、CTX-M两种质粒基因.结论 大肠埃稀氏菌存在多重耐药性,耐药基因以CTX-M型为主,加强耐药监测,有助于了解本地区细菌的耐药模式,对于及时有效防治疾病,延缓耐药性的发生有重要意义.
-
CTX-M酶在北京协和医院临床分离大肠埃希菌中的流行
目的了解北京协和医院临床分离产ESBLs大肠埃希菌的耐药性及所产ESBLs的等电点和基因型特征.方法对2002年11-12月间北京协和医院临床分离的22株产ESBLs大肠埃希菌采用琼脂平皿对倍稀释法测9种抗菌药的MIC;接合试验研究ESBLs基因是否定位于质粒,并对接合子进行MIC测定和ESBLs确证;等电聚焦电泳检测各菌株及其接合子所产β内酰胺酶的等电点;以PCR通用引物对接合子扩增blaTEM,blaSHV,blaCTX-M基因后测序以确定基因亚型.结果产ESBLs的22株大肠埃希菌仅1株(4.5%)对头孢噻肟敏感,远低于对头孢他啶的敏感率(86.4%,19株),对氨曲南,头孢吡肟,头孢哌酮-舒巴坦,头孢米诺,亚胺培南的敏感率从50%～100%,对环丙沙星和加替沙星的敏感率均较低(9.1%和22.7%).接合实验获得16株接合子,所有接合子均确证产ESBLs,接合子对上述7种β内酰胺类药物的药敏谱与供体菌相似,而对环丙沙星和加替沙星则全部敏感.接合子和供体菌所产的β内酰胺酶等电点主要为5.4,7.6和8.2,且这些酶均能被克拉维酸抑制.8株接合子扩增出blaTEM基因,将其中1株测序发现其与blaTEM-1(GenBank accession no.AY293072)100%同源;3株接合子扩增出blaCTX-M-3组基因,将1株测序发现其与blaCTX-M-3(GenBank accession no.AY485338)100%同源;13株接合子扩增出blaCTX-M-14组基因,将1株测序发现其与blaCTX-M-14(GenBank accession no.AF462398)100%同源.16株接合子均未扩增出blaSHV基因和blaCTX-M-5组基因.结论我院2002年11-12月间产ESBLs的大肠埃希菌中有TEM及CTX-M酶的流行,这些酶特别是CTX-M酶的存在导致大肠埃希菌对大多数β内酰胺类药物耐药,对头孢噻肟高度耐药尤为明显.
-
阴沟肠杆菌产超广谱β内酰胺酶的研究
目的了解我院2004年1-10月临床分离的83株阴沟肠杆菌中产ESBLs的情况,并对1株多重耐药菌株进行耐药机制研究.方法采用改良双纸片法(MDDT)进行ESBLs的初筛.以8对ESBLs引物(CTX-M,CTX-M-1,CTX-M-2,CTX-M-9,SHV,TEM,VEB,PER型)进行PCR扩增,对其中1株菌株(37号菌株)的扩增产物进行序列分析.结果MDDT初筛结果证明有43株菌产ESBLs,41株菌多种ESBLs引物均有扩增产物,序列分析表明37号阴沟肠杆菌携带的ESBLs为CTX-M-9,CTX-M-1样,SHV型.结论产多种ESBLs是引起该株阴沟肠杆菌对第三代头孢菌素耐药的重要原因.
-
CTX-M型ESBLs的研究进展
ESBLs是指由细菌质粒介导的能水解氧亚氨基β内酰胺类抗生素,并可被β内酰胺酶抑制剂所抑制的一类酶,它是导致革兰阴性细菌对新型广谱β内酰胺类抗生素耐药重要的机制[1].由于第三代头孢菌素的不合理应用,使产ESBLs的细菌种类不断增加,具ESBLs表型的基因种类也不断增加,到目前为止,ESBLs的种类已超过200种,其中TEM型132种、SHV型53种、CTX-M型34种和OXA型11种[2].本文对CTX-M型ESBLs的研究情况做一综述.
-
超广谱β内酰胺酶CTX-M型新进展
产生β内酰胺酶是细菌对β内酰胺类抗生素耐药重要的机制［1，2］。随着新一代β内酰胺类抗生素如第三代头孢菌素，单酰胺菌素等在临床上的大量使用，细菌产生的β内酰胺酶也越来越复杂，迄今为止已有190余种［3］。其中质粒介导的超广谱β内酰胺酶(ESBL)引起大家广泛的注意，现已发现ESBL近百种，其中TEM型的67种，SHV型的24种，OXA型的8种，更有近发现的CTX-M型也已有12种。它们耐药谱宽，耐药程度高，传播范围广，几乎遍布世界各地。
-
食源性CTX-M型超广谱β-内酰胺酶
超广谱β-内酰胺酶介导的细菌耐药性发展迅速,已成为临床上抗生素应用的重要限制.我国以CTX-M型ESBLs为常见.CTX-M介导的细菌耐药性的传播与近年来头孢类药物的大量使用有密切的关系,而其中非医源性传播则可能与食物链有关.
-
北京与杭州地区耐三代头孢菌素的宋内志贺菌的耐药机制研究
目的:研究耐三代头孢菌素的宋内志贺菌耐药机制,为感染性腹泻的正确治疗提供依据.方法:分别收集解放军302医院和杭州某医院腹泻患者大便培养分离的宋内志贺菌272例,采用K-B法检测10种抗生素的药物耐药性,进一步用PCR方法扩增耐药基因.结果:北京地区ESBLs阳性的菌43例,占20.3％ (43/212)；杭州地区ESBLs阳性的菌32例,占53.3％(32/60).北京地区以携带CTX-M1群和CTX-M9群居多,占62.8％ (27/43)；杭州地区携带CTX-M9群占81.3％ (26/32)、CTX-M1群占12.5％(4/32).两地区均未检出CTX-M2、CTX-M8、SHV、OXA、PER基因.结论:北京与杭州地区耐三代头孢菌素宋内志贺菌以携带CTX-M基因为主,流行亚型为CTX-M-14、CTX-M-15like.其中杭州地区携带CTX-M-79和CTX-M-65的宋内志贺菌在世界属首次检出.
-
湖北地区产CTX-M型超广谱β内酰胺酶肺炎克雷白菌基因型与耐药特征研究
目的 了解湖北地区产CTX-M型超广谱β内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷白菌的流行基因型和耐药特征.为医师合理使用抗生素提供理论依据.方法 临床分离的无重复产ESBLs肺炎克雷白菌70株,采用NCCLS表型筛选和确证实验检测ESBLs,PCR-RFLP检测blaCTX-M及分型,KB纸片法检测产CTX-M酶株对9种抗菌药的体外抗菌活性,质粒接合实验,随机扩增多态性DNA分型法(RAPD)进行克隆株的DNA同源性分析.结果 CTX-M型ESBLs有26株(46%),均为CTX-M-1亚型,其中CTX-M-3型常见;产CTX-M菌株对多种抗生素耐药,但对亚胺培南的敏感性为100%;CTX-M型ESBLs介导的耐药可水平转移,DNA同源性分析显示其为不同的克隆株.结论 亚胺培南可作为治疗产CTX-M型ESBLs的首选药物,产CTX-M型ESBLs菌株的传播机制以质粒介导的为主.应加强湖北地区产CTX-M型ESBLs菌株的分子流行病学检测.
-
多重-PCR检测CTX-M超广谱β-内酰胺酶基因
目的建立一种多重PCR方法在肠杆菌中检测所有组的CTX-M基因.方法设计两组引物可分别在两个区域检测所有CTX-M组的大多数blaCTX-M基因.一条四组CTX-M基因的共同保守区引物与另外四条逆向引物或五条逆向引物一起同时使用可分别检测出每一组特异性CTX-M基因.PCR反应混合物体积25 ul含每条引物25 pM.对6株标准菌株(产CTX-M-26的肺炎克雷伯菌1株,分别产CTX-M-3,CTX-M-9及CTX-M-15的大肠杆菌各1株,产CTX-M-14的大肠杆菌2株)和90株临床分离株进行CTX-M检测.结果已知携带CTX-M的菌株作为标准均获得预期PCR产物,对90株临床分离株应用多重-PCR扩增,有68株获得阳性结果.进一步测序及分析显示,这些基因均为编码CTX-M-15超广谱β-内酰胺酶的基因.结论我们已成功设计一种多重PCR在单一反应管可同时检测多种CTX-M基因无须多次PCR反应.此方法可以快速准确检测出ESBLs表型阳性菌中CTX-M基因.
关键词： 多重 多聚酶链反应(PCR) CTX-M 超广谱β-内酰胺酶 基因 -
住院患者产CTX-M型ESBLs和KPC的大肠埃希菌感染分布与耐药基因分析
目的：了解住院患者产 CTX-M 型超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和碳青霉烯酶（KPC）大肠埃希菌感染的临床分布与耐药情况。方法收集某院2011—2012年临床送检标本分离的多重耐药大肠埃希菌，采用微量肉汤稀释法检测抗菌药物低抑菌浓度（MIC）；聚合酶链反应（PCR）扩增 ESBLs 和 KPC 基因，确定 CTX-M 和 KPC 基因型别及 MLST 分型。结果48株多重耐药大肠埃希菌中单产 ESBLs 45株（93．75％），携带 bla CTX-M 基因者44株（91．67％），其中 bla CTX-M-1组基因20株（41．67％）、bla CTX-M-9组基因32株（66．67％），同时携带两组基因者8株（16．67％）。经基因测序确定的基因亚型有 CTX-M-14（65．91％，29／44）、CTX-M-55（31．82％，14／44）、CTX-M-15（11．36％，5／44）、CTX-M-3（2．27％，1／44）、CTX-M-24（2．27％，1／44）和 CTX-M-65（2．27％，1／44），其中 CTX-M-14＋CTX-M-55（11．36％，5／44）、CTX-M-14＋CTX-M-15（4．55％，2／44）和 CTX-M-55＋CTX-M-65（2．27％，1／44）。产 ESBLs＋KPC 菌株中2株（4．17％）经 PCR 扩增均携带 bla KPC 和 bla CTX-M 基因，经测序分析1株为 CTX-M-14＋KPC-2，1株为 CTX-M-3＋KPC-2。ST131（53．66％）是主要的 MLST 型别，检测到 ST648、ST405、ST167、ST1193等 ST 型。结论该院大肠埃希菌产 ESBLs 基因型中 CTX-M-14、CTX-M-55和 CTX-M-15亚型常见，存在多种不同亚型；ST131是主要的 MLST 型别，检测到产 KPC-2型碳青霉烯酶菌。
-
革兰阴性杆菌产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶调查研究(首次发现产blaCTX-M-14的斯氏普罗威登斯菌)
目的 调查某院临床分离的革兰阴性(G-)杆菌产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)株的流行情况,并确定其基因型.方法 收集2004年10月-2005年7月临床标本分离的多重耐药G-杆菌233株,按美国临床实验室标准化研究所(CLSI)推荐的方法进行ESBLs表型确证试验,聚合酶链反应(PCR)法对表型阳性株进一步进行CTX-M酶基因型的扩增,对PCR产物测序并确定其基因型.结果 从大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、产气肠杆菌、弗劳地柠檬酸杆菌和斯氏普罗威登斯菌中检出CTX-M型ESBLs,首次从斯氏普罗威登斯菌中检出CTX-M-14型ESBLs.结论 该地区多种G-肠杆菌科细菌携带CTX-M型ESBLs,斯氏普罗威登斯菌也能产生CTX-M型ESELs.
