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UDP-糖基供体的生物合成途径分析
糖基化是生物体中重要的生化反应，它可发生于大分子化合物，如蛋白质的糖基化[1]；也可发生于小分子化合物，如各种天然产物苷元的糖基化[2]。执行化合物糖基化反应的催化酶为糖基转移酶。糖基转移酶的底物分为糖基受体和糖基供体。糖基受体可以为生物大分子化合物如蛋白质、核酸，还可以为小分子化合物如各种植物或微生物的次生代谢产物[3-5]。糖基受体通常含一些活性基团，如羟基、氨基、羧基、巯基等用于形成糖苷键，同时有少数糖基转移酶还可以催化 C-C键的形成，生成碳苷类化合物[6-7]。糖基供体为糖的活化形式，通常糖基供体中存在一个或多个高能磷酸键，这些高能磷酸键在糖基转移酶执行催化反应时能通过能量转移而形成化合物与糖的糖苷键。常见糖基供体为尿苷二磷酸糖（UDP-糖）、胸腺苷二磷酸糖（TDP-糖）、鸟苷二磷酸糖（GDP-糖）、一磷酸糖等。这些糖基供体之间可以通过不同的代谢酶进行相互转化（图1）。
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GDP对柴胡皂甙(Ⅰ)促大鼠胰腺腺泡酶分泌和升高[Ca2+]i的影响
目的：研究鸟苷二磷酸(GDP)对柴胡皂甙(Ⅰ)[SA(Ⅰ)]刺激大鼠胰腺腺泡酶分泌和胞内钙离子升高的影响.方法：分离大鼠胰腺腺泡细胞，用链球菌溶血素-O(SLO)通透细胞膜，检测腺泡分泌蛋白量标志腺泡酶分泌功能.用钙离子荧光指示剂Huo-3和荧光光谱测定胞内钙离子浓度.·结果：GDP可抑制SA(Ⅰ)促胰腺腺泡的酶分泌作用，抑制作用随剂量增加而加强；SA(Ⅰ)10μmol/L以双峰值为特征使[Ca2+]i显著上升；GDP 5 mmol/L，导致[Ca2+]i逐步升高且两个峰值消失.细胞通透以后，与正常细胞相比，SA(Ⅰ)刺激的30min酶分泌的累积量下降了57％；GDP 5 mmoL/L使SA(Ⅰ)刺激的早期酶分泌速率进一步降低.结论：GDP通过抑制细胞[Ca2+]i的升高抑制了SA(Ⅰ)刺激的胰腺腺泡酶分泌作用.
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不同的毒簟碱配体对在sr9昆虫细胞内表达的M2AChR-Gilα融合蛋白的作用
目的:表达M2AChR-Gilα融合蛋白,检测不同配体或镁离子对M2AChR与Gilα间相互作用的影响.方法:两步PCR建立M2AChR-Gilα融合DNA,并在Sf9细胞内表达.[3H]QNB和[3sS]GTPγs结合实验检测M2AChR-Gilα融合蛋白功能.结果:M2AChR-Gilα的表达水平为(20.12±0.14)nmol@g-1protein.不同配体的存在使融合蛋白中Gilα与GDP的亲和力发生变化.乙酰胆碱,卡巴胆碱,McN-A-343,毛果芸香碱和阿托品存在以及无配体存在时,GDP的IC50值(95%可信区间)分别是178(148-214)μmoL/L,158(126-199)μmol/L,66(56-78)μmol/L,62(55-72)μmol/L,5.0(4.6-5.5)μmol/L和15.9(14.3-17.6)μmol/L.在卡巴胆碱的作用下,Gilα随Mg2+浓度增加而减小对GDP的亲和力,而阿托品使Gilα不受Mg2+浓度的影响,始终保持对GDP的高亲和性.结论:杆状病毒-Sf9细胞系统表达的M2AChR-Gilα具备M受体配体结合特性和组分间的偶联功能.M2AChR-Gilα对GDP的亲和性决定于M2受体配体的性质,分析GDP亲和力的大小有利于筛选和鉴别M2亚型特异性药物.Mg2+离子是M2AChR-Gilα与低亲和性GDP结合必需的阳离子.
