首页 > 文献资料
-
移植前供鼠口服受鼠脾细胞对脾细胞移植后GVHD的影响研究
本研究探讨经口服受鼠脾细胞诱导耐受的供鼠细胞输注是否能减轻移植物抗宿主病(GVHD),并保留的GVL效应.以雄性DBA-2(H-2d)小鼠为供者.供鼠分别用BALB/c鼠脾细胞、DBA-2鼠脾细胞、牛血清蛋白和普通饲料喂养,隔天1次.应用单向混合淋巴细胞反应(MLR)评估诱导耐受状态.以雌性BALB/c小鼠(H-2d)为受者,给予6.0 Gy60Co γ射线全身照射,同一天输注3 X 103鼠白血病细胞,尾静脉输注源于DBA-2小鼠的2×107脾细胞.对照组不给予鼠白血病细胞输注.结果显示,接受已耐受供鼠脾细胞输注的受鼠发生GVHD较其他组轻,流式细胞术检测表明CD4+/CD8+比值增加.接种白血病细胞的受鼠活存率各组间无差别.结论:口服受鼠脾细胞耐受的供鼠,其脾细胞输注给受鼠后GVHD明显减轻,且对GVL效应无影响.
-
过继转输胚胎抗原耐受T细胞对宿主母-胎界面细胞因子表达的影响
目的探讨过继转输胚胎抗原耐受性T、B细胞对宿主孕鼠妊娠预后及母-胎界面TH1/TH2型细胞因子表达的影响. 方法♀CBA/J×♂DBA/2为自然流产模型,于孕4 d(着床期)分别腹腔注射大鼠抗小鼠CD80和CD86 McAb或大鼠同型IgG.于孕9 d,分选脾脏T细胞和B细胞,并过继转输至孕4 d的自然流产模型♀CBA/J×♂DBA/2孕鼠,孕第14天测定宿主母-胎界面组织体外培养上清液中TH1/TH2型细胞因子(IL-4、IL-10、TNF-α、IFN-γ)水平,并比较各组宿主孕鼠胚胎吸收率. 结果转输胚胎抗原耐受T细胞和转输正常妊娠模型孕鼠的T细胞均使宿主孕鼠母-胎界面IL-4和IL-10表达显著增加,而IFN-γ和TNF-α表达则显著下降,且胚胎吸收率也显著下降(P<0.05). 结论于孕早期过继转输胚胎抗原耐受T细胞和正常妊娠模型孕鼠的T细胞可通过调节宿主孕鼠母-胎界面TH1/TH2型细胞因子的平衡,从而诱导母-胎免疫耐受.
关键词： 过继转输 母-胎界面 Th1/Th2型细胞因子 胚胎吸收率 -
过继转输正常妊娠孕鼠的T细胞抑制自然流产孕鼠对胚胎的排斥
目的观察过继转输正常妊娠孕鼠的T、B细胞对小鼠自然流产孕鼠妊娠预后的影响.方法以♀CBA/J×♂BALB/c为正常妊娠模型,♀CBA/J×♂DBA/2为自然流产模型,于孕9 d,采用单向混合淋巴细胞反应分析两组孕鼠脾脏免疫细胞对父系抗原的增殖能力及上清液IL-2分泌水平,以研究孕鼠母-胎免疫耐受状态;并于孕14 d观察两种模型的胚胎吸收率.然后,应用免疫磁珠阴性分选两组孕鼠脾脏T细胞和B细胞,并将两种细胞分别转输至孕4 d(着床期)的♀CBA/J×♂DBA/2孕鼠,于孕14 d分别观察宿主孕鼠的胚胎吸收率.结果与自然流产孕鼠比较,正常妊娠孕鼠孕9 d脾脏免疫细胞对父系抗原的增殖能力及IL-2的分泌显著下降(P＜0.05),孕14 d胚胎吸收率也显著下降(P＜0.05).与转输自然流产孕鼠的T细胞相比,转输正常妊娠孕鼠T细胞的宿主孕鼠的胚胎吸收率显著下降(P＜0.05);而转输两组B细胞的宿主孕鼠的胚胎吸收率差异无显著性(P＞0.05).结论于孕早期过继转输正常妊娠孕鼠的T细胞能诱导宿主孕鼠母-胎免疫耐受,防止母体对胚胎的免疫排斥,使自然流产模型的妊娠预后达到正常妊娠水平.
-
过继转输胚胎抗原耐受T细胞改善小鼠自然流产模型的妊娠预后
正常生理妊娠类似于同种异体移植,母体免疫系统不排斥胚胎抗原归咎于复杂的母-胎免疫调节过程.这种免疫调节作用不仅发生在母-胎界面局部,而且也发生于母体外周.胎儿逃避母体免疫攻击的确切机理,以及因母体对胎儿免疫排斥所致妊娠失败的机制一直是生殖免疫学研究的热点课题.
-
口服耐受与免疫抑制药物对移植后移植物抗宿主病抑制作用比较
背景:移植物抗宿主病是导致异基因外周血造血干细胞移植失败的主要原因,口服耐受是研究治疗移植物抗宿主病的新模式.目的:探讨骨髓移植前供鼠经口服受鼠脾淋巴细胞诱导耐受是否能增加异基因骨髓移植后受鼠对供者移植物的免疫耐受,从而减轻移植物抗宿主病,并与目前常用于预防移植物抗宿主病的免疫抑制药物比较作用效果.设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察,于2008-12在东南大学医学院中心实验室完成.材料:供鼠为雄性纯种近交系小鼠C57BL/6J(H-2~b),受鼠为雌性纯种近交系小鼠BALB/c(H-2~b).方法:用主要组织相容性抗原完全不合的纯种近交系小鼠建立异基因骨髓移植,移植物抗宿主病动物模型,小鼠共分5组,分别给予不同的急性移植物抗宿主病预防方案:①口服耐受组:移植前口服受鼠脾淋巴细胞相当于10 μg蛋白,隔天1次,共3次.②雷帕霉素组:1.5 mg/(kg·d)灌胃,从移植后第1天(+1 d)开始用药.③环孢索Al+甲氨蝶呤组:环孢素A 1.5 mg/(kg·d)腹腔注射,从移植后+1 d开始用药,当小鼠的胃肠功能逐渐恢复后,改为环孢素A 5 mg/(kg·d)灌胃,甲氨蝶呤0.4 mg/(kg·d)腹腔注射,移植后+1,+3,+6,+11 d用药.④空白对照组:移植后未用药.⑤辐照不移植组:照射后未予骨髓移植.主要观察指标:各组小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病的出现情况及免疫耐受指标差异.结果:移植后小鼠出现典型的移植物抗宿主病症状,空白对照组小鼠死亡高峰在移植后第14-18天,死亡率接近100%.口服耐受组、雷帕霉素组和环孢素A+甲氨蝶呤组小鼠急性移植物抗宿主病症状明显减轻,平均生存时间较空白对照组显著延长(P<0.05);小鼠急性移植物抗宿主病病理表现减轻,口服耐受组病理变化少于其他各组;流式细胞仪监测CD4~+/CD8~+比值增加,CD4~+CD25~+细胞增加,口服耐受组增加明显;ELISA检测移植物抗宿主病产生相应细胞因子减低,且口服耐受组明显减轻.MTT结果显示,口服耐受组免疫耐受显著增强,淋巴细胞增殖明显降低.结论:口服耐受可以显著抑制体外T淋巴细胞增殖效应,增强小鼠对骨髓移植的免疫耐受,减轻移植物抗宿主病症状和病理损害程度,延长平均生存时间;与目前常用于预防移植物抗宿主病的免疫抑制药物比较,减轻移植物抗宿主病的作用更强.
-
5－氮－2′－脱氧胞苷诱导的调节性T细胞转输对自然流产孕鼠妊娠结局的影响
目的：研究过继转输5－氮－2′－脱氧胞苷（5－aza－2′－deoxycytidine，5AzaD）诱导的 CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞（inducible regulatory T cells，iTregs）对自然流产孕鼠妊娠预后的影响。方法：以60例雌性CBA／J×雄性DBA／2J小鼠自然流产模型为研究对象，随机选取20例孕鼠经免疫磁珠分选脾脏CD4＋T细胞，应用5AzaD对CD4＋CD25－T细胞进行体外处理得到iTregs，通过流式细胞术检测表观修饰前后Tregs细胞中Foxp3的表达。分别向妊娠第1天和第4天的流产孕鼠体内输注iTregs作为治疗组，于妊娠14天比较各组孕鼠的胚胎吸收率。结果：经5AzaD修饰后，iTregs占CD4＋T细胞的比例为（41．50±8．03）％。治疗组中妊娠第1天和第4天过继转输iTregs孕鼠的胎盘吸收率分别为10．47％和21．69％（P＜0．05）。结论：对CD4＋CD25－T细胞的表观修饰可能解决自然调节性T细胞来源不足的问题，在妊娠早期转输5AzaD诱导的iTreg细胞更有利于维持正常妊娠。
-
过继转输的胚胎抗原耐受T细胞在妊娠小鼠体内细胞因子及协同刺激分子的表达特征
目的:分析过继转输的小鼠胚胎抗原耐受T细胞内细胞因子及细胞表面协同刺激分子的表达特征.方法:以♀CBA/J×♂DBA/2为自然流产模型,将自然流产模型CBA/J孕鼠于孕4天(着床期)分别腹腔注射大鼠抗小鼠CD80和CD86mAb或大鼠同型IgG.于孕9天,应用免疫磁珠阴性分选两组孕鼠的脾脏T细胞,将T细胞进行碳氧氢化荧光素双乙酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)体外荧光标记,再分别过继转输至孕4天的CBA/J×DBA/2孕鼠.在宿主孕鼠孕第9天,处死小鼠取脾细胞,用流式细胞术分析在DBA/2父系抗原刺激下过继转输的T细胞细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ及协同刺激分子CD28和CTLA-4的表达.结果:与过继转输的胚胎抗原非耐受T细胞相比,过继转输的胚胎抗原耐受T细胞IL-10的表达显著增加,IL2和IFN-γ的表达则显著下降(P＜0.05),IL-4的表达无明显改变(P＞0.05);细胞表面CD28的表达显著下降,而CTLA-4的表达却显著增加(P＜0.05).结论:过继转输的小鼠胚胎抗原耐受T细胞内Th2型细胞因子和表面CTLA-4表达上调,而Th1型细胞因子和表面GD28的表达则下降.胚胎抗原耐受T细胞通过Th2型细胞因子表达优势和协同刺激信号降调节,在母-胎免疫耐受的维持中发挥着重要作用.
-
过继转输的胚胎抗原耐受T、B细胞在受体孕鼠体内的归巢和分析
目的:观察过继转输的胚胎抗原耐受T、B细胞在受体孕鼠体内的归巢和分布,以探讨免疫耐受T细胞在诱导受体母-胎免疫耐受中的作用机制.方法:于孕4天(着床期)给小鼠自然流产模型CBA/J×DBA/2孕鼠腹腔注射抗CD80和CD86 mAb,以诱导母-胎免疫耐受.孕9天应用免疫磁珠分选孕鼠脾脏T、B细胞,并用CFSE体外荧光标记.将标记的T、B细胞分别转输至孕4天的CBA/J×DBA/2孕鼠,36小时后在双光子共聚焦显微镜下观察T、B细胞在受体体内脾脏、子宫引流淋巴结及母-胎界面组织中的分布.结果:过继转输的T、B细胞分布在孕鼠体内脾脏和子宫引流淋巴结,但并不留驻在母-胎界面.结论:过继转输的胚胎抗原耐受T细胞定居于外周免疫器官,从而介导受体孕鼠对相应父系抗原的免疫耐受.
-
CD4~+CD25~+CCR6~+调节性T细胞在小鼠乳腺癌模型中对CD8~+T细胞的抑制作用
目的:观察CD4~+CD25~+CCR6~+调节性T细胞(简称CCR6~+Tregs)体内对CD8~+T细胞功能的抑制作用,并探讨其与肿瘤免疫逃逸的关系.方法:建立4T1乳腺癌细胞荷瘤裸鼠模型,FACS分选CCR6~+Tregs,检测其Foxp3的表达;FACS分选4T1特异性CD8~+T细胞,CFSE标记后分别与CCR6~+Tregs或CCR6-Tregs共同过继转输入4T1荷瘤裸鼠体内,观察荷瘤裸鼠肿瘤生长情况和小鼠存活时间;FACS检测肿瘤组织中CD8~+T细胞的增殖、细胞因子IFN-γ的产生和颗粒酶B的表达情况.结果:CCR6~+Tregs和CCR6-Tregs均高表达Foxp3;CCR6~+Tregs和CD8~+T细胞共转输组4T1荷瘤裸鼠肿瘤的生长明显快于CCR6-Tregs共转输组和CD8~+T细胞单转输组,同时该组荷瘤裸鼠生存时间也明显缩短(P<0.05);CCR6~+Tregs和CD8~+T细胞共转输组CD8~+T细胞的增殖、IFN-γ的产生和颗粒酶B的表达均明显低于CCR6-Tregs共转输组和CD8~+T细胞单转输组(P<0.05).结论:CCR6~+Tregs在体内可以有效抑制CD8~+T细胞的功能,其在肿瘤免疫逃逸和肿瘤发生、发展中发挥重要作用.
-
NK细胞肿瘤免疫治疗技术的挑战
自然杀伤(NK)细胞具有以MHC I非依赖识别机制和快速杀伤病变细胞能力、低移植物抗宿主反应(GVHD)风险、可采用异体细胞回输、体内存活周期短和无细胞因子风暴等长期和不可预期风险较低等特点和优势,使其在肿瘤免疫治疗中展现出巨大的应用潜力.虽然外周血单个核细胞(PBMC)来源NK细胞相比干细胞来源NK和NK细胞系在安全性和肿瘤杀伤能力上相对更好,但细胞制备技术的效率、稳定性和安全性仍有待完善;NK细胞被认为是较理想的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)载体,但外周血来源NK细胞转染效率较低,影响了CAR-NK的研发进程.由于NK细胞来源和培养技术的多样性,使细胞制品的活性不一,虽然NK细胞在抗血液肿瘤治疗中表现相对突出,但对实体瘤的治疗效果仍有待验证.总之,NK细胞应用开发近年已取得显著进步,但仍面临生产技术和临床疗效等诸多挑战.
-
过继妊娠诱导的CD4+CD25+调节性T细胞治疗不明原因复发性流产
目的 观察过继转输正常妊娠诱导的CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)对不明原因流产的作用机制及妊娠预后的影响.方法 以雌性CBA/J×雄性BALB/c为正常妊娠模型,以雌性CBA/J×雄性DBA/2J为自然流产模型,磁珠分选雌性CBA/J小鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞并流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析细胞纯度.将未孕CD4+CD25+Treg细胞和正常妊娠孕14d的CD4+CD25+Treg分别转输至流产模型孕4d(着床期)的雌性CBA/J孕鼠,于孕14d分别观察宿主孕鼠的胚胎吸收率并测定宿主外周血和母胎界面组织体外培养上清液中Th1Th2/Th3型细胞因子(IFN-γ/TGF-βI/IL-10)水平.结果 与对照组比较,过继转输正常妊娠诱导的CD4+CD25+Treg细胞的宿丰孕鼠的胚胎吸收率(11.32%)显著下降;外周血TGF-β 1/IFN-γ中位数(438)和IL-10/IFN-γ中位数(14)显著增加;母胎界而上TGF-β 1中位数(5899.02pg/mL)和IL-10中位数(158.85pg/mL)显著增加,IFN-γ中位数(18.46 pg/mL)显著下降.结论 孕早期过继转输正常妊娠诱导的CD4+CD25+Treg细胞疗法能诱导宿主母胎免疫耐受并调节细胞因子表达,有利于妊娠维持的Th2、Th3应答偏移.
关键词： 小鼠妊娠模型 CD4+CD25+调节性T细胞 过继转输 胚胎吸收率 细胞因子 -
口服耐受后过继转输动物模型的建立方法
目的:探讨经口服受鼠脾淋巴细胞诱导耐受的供鼠淋巴细胞输注是否能减轻移植物抗宿主病(GVHD).方法:以雄性DBA-2小鼠(H-2d)为供者,分别用BALB/C鼠脾淋巴细胞、DBA-2鼠脾淋巴细胞、牛血清蛋白、普通饲料隔天喂养,单向混合淋巴细胞反应(MLR)评估诱导耐受状态.以雌性BALB/C小鼠(H-2d)为受者,给予6.0 Gy 60Coγ射线全身照射,尾静脉输注来自于DBA-2小鼠的2×107脾淋巴细胞.结果:耐受供鼠cpm值低于非耐受组,接受已耐受供鼠脾淋巴细胞输注的受鼠,发生GVHD较其他组轻.结论:经口服耐受的过继转输动物模型的实验方法有效可行.
