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Anxa2基因在胃癌组织中的表达及意义
目的 探讨Anxa2基因表达在胃癌发生、发展中的作用及其与临床病理特征的相关性.方法 应用实时荧光定量PCR方法检测50例胃癌及癌旁组织中Anxa2基因mRNA的表达水平;用Western blot方法检测20例胃癌及癌旁组织中Anxa2蛋白的表达水平;制作组织芯片,通过免疫组化染色分析139例胃癌Anxa2蛋白表达与临床病理特征的关系.结果 Anxa2 mRNA在胃癌和癌旁组织中的表达水平分别为2.072±1.477和1.271±0.907,两组差异显著(P＜0.01);胃癌组织中Anxa2蛋白的表达量(2.144±1.226)高于癌旁组织(1.269±0.736),差异显著(P ＜0.001).免疫组化显示Anxa2定位于肿瘤细胞膜,在胃癌组织中的阳性率为49.6％ (69/139),高于癌旁组织18.7％ (26/139),两者差异显著(P＜0.001),且Anxa2过表达与胃癌组织分化、淋巴结转移和临床分期密切相关(P＜0.05).结论 Anxa2过表达与胃癌的发生、发展密切相关,可能是新的治疗靶点或预后评估指标.
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Anxa2和P-gp蛋白相互作用对多药耐药乳腺癌细胞迁移与侵袭影响的研究
目的:探讨Anxa2和P-gp蛋白相互作用对多药耐药乳腺癌细胞迁移与侵袭的影响.方法:采用小干扰RNA技术下调人多药耐药乳腺癌细胞MCF-7/ADR中P-gp的表达,并筛选稳定的单克隆细胞株；利用噻唑蓝(MTT)比色法和Transwell实验研究P-gp的表达对MCF-7及其耐药细胞MCF-7/ADR的增殖、迁移和侵袭能力的影响；利用免疫沉淀和免疫荧光分析多药耐药细胞中Anxa2和P-gp的相互关系.结果:蛋白印迹法检测发现,Anxa2和P-gp在耐药乳腺癌细胞中均高表达；MCF-7/ADR与其亲本细胞MCF-7相比,迁移和侵袭能力明显增强；MCF-7/ADR细胞中P-gp的表达被抑制后,其迁移和侵袭能力显著下降,并且差异有统计学意义,P＜0.05.免疫沉淀证实,Anxa2和P-gp之间存在相互作用；免疫荧光发现,Anxa2和P-gp在细胞膜上存在很好的共定位.结论:降低P-gp的表达可以明显抑制耐药乳腺癌细胞MCF-7/ADR的迁移和侵袭能力,Anxa2和P-gp之间存在较好的共定位和相互作用.提示Anxa2和P-gp的相互作用有可能对增强多药耐药乳腺癌细胞的侵袭转移能力起到一个重要的作用.
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ANXA2、VEGF在HepG2肝癌细胞系中的表达及意义
目的 探讨ANXA2、VEGF在HepG2肝癌细胞系中的表达及意义.方法 应用Transwell(细胞体外侵袭实验)、WesternBlot检测在不同5-Fu剂量干扰下,HepG2肝癌细胞系中ANXA2、VEGF的表达及细胞侵袭力的变化.结果 Transwell检测HepG2肝癌细胞随着5-Fu剂的增加侵袭力明显降低,各剂量组间差异具有统计学意义(P＜0.05);WesternBlot方法检测HepG2肝癌细胞中ANXA2、VEGF蛋白质的表达随着5-Fu剂量的增加逐渐下降,各剂量组间差异具有显著统计学意义(P＜0.01),且两者具有相关性r=0.856.结论 ANXA2、VEGF在HepG2肝癌细胞系的侵袭转移机制中可能具有协同促进作用.
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MDR1和Anxa2在乳腺癌组织中的表达与侵袭转移的关系研究
目的:探讨乳腺癌组织中多药耐药基因 (MDR1) 和膜联蛋白 (Anxa2) 表达的相关性及其与乳腺癌转移的关系.方法:应用荧光定量PCR的方法检测20例配对的乳腺导管内癌、100例乳腺浸润性导管癌、70例癌旁正常组织中MDR1和Anxa2 mRNA的相对表达情况.结果:MDR1 mRNA在乳腺导管内癌中的表达水平明显高于癌旁正常组织 (P=0.005),乳腺浸润性导管癌组织中mRNA的表达明显高于癌旁正常组织 (P=0.017) 和导管内癌 (P=0.019 6).Anxa2 mRNA在乳腺导管内癌中表达与癌旁正常组织相比无显著性差异 (P=0.188 9),但是在乳腺浸润性导管癌组织中的表达明显高于导管内癌 (P=0.000 8) 和癌旁正常组织 (P<0.000 1); MDR1和Anxa2 mRNA的表达升高均与患者出现淋巴结转移有关 (P<0.01); 2种基因在乳腺浸润性导管癌中的表达呈正相关 (P<0.000 1).结论:在肿瘤进展过程中,MDR1和Anxa2 mRNA表达上调与乳腺癌的淋巴结转移有关,二者之间表达具有正相关提示肿瘤细胞的多药耐药的获得和肿瘤侵袭转移之间有着密切联系.
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膜联蛋白A2在脑胶质瘤组织中的表达及其与细胞凋亡的相关性
发生于脑组织的胶质瘤恶性程度高,临床进展快,预后差,目前尚无有效的根治方法[1].虽然手术治疗目前仍是一种比较有效的治疗手段,但因为不能根治,所以临床治疗的效果并不十分理想.因此找寻脑胶质瘤的靶点治疗方法十分重要.膜联蛋白A2(ANXA2)是一种钙离子介导的具有磷脂结合性质的蛋白质,表达于人体内皮细胞、单核/巨噬细胞、骨髓细胞和某些肿瘤细胞中,定位于细胞核、细胞质及细胞质膜外表面,参与细胞膜形成、膜转运、胞吞、胞吐、细胞增殖、信号转导、分化及凋亡等重要的细胞生命活动.ANXA2的异常表达与肿瘤的发生发展密切相关,本文探讨在脑胶质瘤组织中的表达及其与细胞凋亡的相关性.
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Anxa2,Stat3在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义
目的:探讨膜联蛋白A2(Anxa2)和细胞信号转导和转录激活因子3(Stat3)在口腔鳞癌组织中的表达及其临床意义.方法:选择口腔鳞癌石蜡标本80例为实验组,20例正常口腔黏膜组织为对照组.应用免疫组织化学法检测Anxa2和Stat3蛋白的阳性表达,并进行结果判定,采用x2和Spearman等级相关分析法分析二者表达差异性及其相关性.结果:Anxa2、Stat3在病例组中的阳性表达率,分别为81.3％(65/80)、87.5％(70/80),明显高于对照组中的表达率,25.0％(5/20)、30.0％(6/20),且差异有统计学意义(P＜0.05),Anxa2和Stat3蛋白表达水平与口腔鳞癌的分期、淋巴结转移及分化程度有密切关系 Spearman等级相关分析Anxa2和Stat3在口腔鳞癌组织中蛋白的表达呈正相关(r=0.302,P＜0.01).结论:Anxa2、Stat3在OSCC的发生和转移过程中均具有重要的作用,且二者间也有相互作用的关系.
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Gal-1,ANXA2和PRPH在SD大鼠耳蜗核的表达
目的:采用同位素相对标记和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)技术分析耳蜗核(cochlear nucleus,CN)区域特异性膜蛋白.方法:出生60d的雄性SD大鼠分为4组,分别是CN、下丘(inferior colliculus,IC)、上橄榄核(superior oliver complex,sOC)、大脑其余部位(Rest).提取这4个部位组织的细胞膜蛋白,再采用iTRAQ技术检测出CN区域特异性蛋白.通过Uniprot检索这些蛋白的功能和参与的生物代谢过程.结果:本实验终得到17种CN区域特异性膜蛋白.对CN区域蛋白进行基因本体(gene ontology,GO)分析发现,这些蛋白主要参与生物调节与发育.UNIPROT检索发现3种蛋白与神经系统功能相关,即半乳糖凝集素-1 (galectin-1,Gal-1)、膜联蛋白A2 (annexin-A2,AXNA2)和外周蛋白(periphefin,PRPH).Gal-1与神经生长发育相关;AXNA2参与多种生物调节过程;PRPH与神经退行性病变相关.其中,Gal-1可促进轴突生长、调节突触可塑性且具有神经保护作用;AXNA2可能参与了神经递质释放过程,且有神经营养作用;PRPH在高表达时具有神经毒性,和神经丝蛋白共同参与神经退行性病变.结论:Gal-1、ANXA2和PRPH在耳蜗核中高度表达,可能与中枢信息处理相关,这为进一步研究中枢听觉处理障碍发病机制提供了一定的理论基础.
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ANXA2-siRNA转染对胃癌耐药细胞药物敏感性的影响及机制
目的 研究ANXA2-siRNA转染对胃癌耐药细胞药物敏感性及信号通路激活的影响.方法 采用ANXA2-siRNA转染SGC-7901/DDP胃癌耐药细胞,通过RT-PCR和Western blot检测胃癌耐药细胞中耐药相关基因GST以及Bax的表达变化,应用MTT药敏实验检测胃癌耐药细胞对化疗药物敏感性的变化.采用Western blot检测ANXA2-siRNA转染SGC-7901/DDP胃癌耐药细胞后,MAPK及PI3K/Akt信号通路激活中P38、P38磷酸化水平、AKT以及AKT磷酸化水平的变化情况.结果 ANXA2-siRNA转染SGC7901/DDP细胞后,无论在RNA水平还是蛋白水平上,耐药相关基因GST的表达水平显著降低,而Bax的表达水平明显上调.与空白对照组和空白-siRNA组细胞相比,ANXA2-siRNA转染SGC7901/DDP细胞对化疗药物DDP和5-FU的IC50值显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).与空白对照组和空白-siRNA组细胞相比,ANXA2-siRNA转染SGC7901/DDP细胞后,MAPK信号通路中,P38表达无明显变化,但P38磷酸化水平下降明显.在PI3K/Akt信号通路中,AKT表达无明显变化,但AKT磷酸化水平下降明显.结论 ANXA2-siRNA转染胃癌耐药细胞能够下调耐药相关基因的表达,降低胃癌细胞的耐药性,可能是通过影响MAPK及PI3K/Akt信号通路中P38和AKT磷酸化过程实现的.
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抗ANXA2单克隆抗体的制备及初步鉴定
目的 制备ANXA2特异性单克隆抗体(McAb),为研究ANXA2的生物学功能和检测该蛋白提供有力的抗体工具.方法 用经IPTG诱导表达的基因重组PGEX-4T-1-ANXA2抗原免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法筛选抗ANXA2杂交瘤细胞,用ELISA法鉴定所得单抗腹水的效价及Western blot鉴定McAb特异性.单抗纯化和Eu3+标记后,分别包被聚苯乙烯板及作为铕标单抗,利用时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)筛选出检测ANXA2蛋白的佳配伍单抗.结果 经细胞融合、筛选、克隆化,获得了16株可分泌高效价单抗的杂交瘤细胞,间接ELISA显示16株McAb与空载体PGEX-4T-1均未发生交叉反应,抗体特异性良好,16株抗体腹水效价为1∶8000～1∶256 000,培养上清效价为1∶256～1∶512,纯化的腹水单抗经配对试验,2D6和9H9-Eu3+配对佳.结论 获得16株能稳定分泌高特异性抗ANXA2的杂交瘤细胞,能用于后续研究.
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RNAi技术对人脑微血管内皮细胞ANXA2基因表达水平的影响
目的 研究RNAi技术对人脑微血管内皮细胞(Human brain microvascular cells,HBMEC)ANXA2基因表达水平的影响.方法 将化学合成三对siRNA采用riboFECTTM CP转染试剂介导法转染HBMEC,应用荧光定量PCR法检测RNA干扰后ANXA2 mRNA表达量,得出抑制率.应用Westem-blot检测RNA干扰后对ANXA2蛋白表达的影响.结果 成功将siRNA转染HBMEC,荧光定量PCR吉果显示,在转染24 h后,各干扰组与阴性组比较ANXA2基因表达量明显下调(P＜0.01),Western-blot显示siRNA-ANXA2-2、siRNA-ANXA2-3转染前后ANXA2蛋白的表达水平明显受到抑制.结论 合成的ANXA2 siRNA能有效抑制ANXA2蛋白的表达、降低ANXA2 mRNA水平,对ANXA2有高效和特异的沉默作用,以ANXA2为靶点的RNA干扰技术可望成为鉴定HBMEC有关EV71膜受体的新策略.
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慢病毒介导的 Annexin A2基因沉默对胃癌 AGS 细胞基因表达谱的影响
目的：探讨膜联蛋白 A2（Annexin A2，ANXA2）基因沉默对 AGS 胃癌细胞基因表达谱的改变。方法：通过慢病毒干扰 AGS 细胞 ANXA2的表达，用人基因表达谱芯片筛选 ANXA2调控的下游基因。结果：通过基因表达谱芯片筛选出 ANXA2沉默后的共同差异表达基因100个，其中58个上调的基因，42个下调的基因。根据 KEGG 与 BIOCARTA 中所有 Pathway 的基因信息，将差异基因进行富集分析。筛选到的 ANXA2调控的重要相关基因包括 FGA、FGB、SERPINB2、CD55、PLAUR、MET、RAP1A 和 ETS1。Western blot 进一步验证结果显示，沉默 ANXA2后，AGS 细胞中 RAP1A 表达水平降低，MAP2K1的蛋白表达亦降低。结论：pGC - LV -ANXA2 siRNA 可以有效地下调胃癌 AGS 细胞 ANXA2基因的表达。RAP1A 和 MAP2K1可能是 AGS 胃癌细胞中 ANXA2参与 MAPK 信号通路的潜在下游调控基因。
