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甲状腺原发性Burkitt淋巴瘤临床病理观察
目的 甲状腺原发性Burkitt淋巴瘤非常罕见,对其临床病理特点进行探讨.方法 对1例患有甲状腺Burkitt淋巴瘤的9岁男童进行详细的临床资料和病理形态学观察,并采用MaxVision法进行免疫组化染色、EBER原位杂交和c-myc基因FISH检测.结果 甲状腺组织内见中等大小异型淋巴细胞弥漫浸润,可见明显“星空”现象.肿瘤细胞CD20、CD10、bcl-6、CD43和CD38(+),CD3、CD5、bcl-2和TDT均(-),Ki-67阳性率＞95％.FISH检测有c-myc基因位点的染色体断裂重组.EBER分子原位杂交(-).结论 本例为原发于甲状腺的散发型Burkitt淋巴瘤,与EBV感染无关.需要与弥漫性大B细胞性淋巴瘤、结外黏膜相关淋巴组织边缘区淋巴瘤和B淋巴母细胞性淋巴瘤/白血病进行鉴别.
关键词： Burkitt淋巴瘤 甲状腺 免疫表型 c-myc基因 EBER -
单底物显色法在免疫组化和原位杂交联合技术中的应用
免疫组化是用各种特异性抗体检测细胞内各种抗原物质,原位杂交是用一段已知序列的核苷酸片段来检测细胞内是否存在欲检测物质的DNA或RNA.这两种技术分别在蛋白水平和分子水平达到检测目的,是病理科日常技术工作中相对较成熟而常用的方法.虽然将这两项实验操作结合起来应用的双标记技术能够极大提高工作效率[1,2],但是需要不同的显色试剂,本文以鼻咽活检组织病理诊断为例,用一种显色方法在同一切片上检测细胞角蛋白(CK)和EB病毒(EBER),同时观察两种指标的表达情况,现将其应用介绍如下.
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淋巴瘤患者EBV感染状态的调查
本研究调查北京大学第一医院2008年1月至2012年4月淋巴瘤患者的EBV感染状态.选取2008年1月-2012年4月于我院行外周血EBV DNA检测或病理EBER检测的淋巴瘤患者,收集此人群的性别、年龄、病理类型、外周血EBV DNA、病理EBER结果等信息,研究不同类型淋巴瘤的EBV阳性率,和EBV阳性组与EBV阴性组的特征差异,应用Kaplan-Meier生存分析法和Cox生存分析法分析EBV阳性对总生存率的影响.结果表明,169例淋巴瘤患者中,结外NK/T细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤、外周T细胞淋巴瘤患者病理EBER阳性率高(分别为84.8％、72.7％、40.0％),弥漫大B细胞性淋巴瘤病理EBER阳性率较低(16.7％),老年EBV(+)弥漫大B细胞淋巴瘤外周血EBV阳性率为50％,10例霍奇金淋巴瘤中有1例患者进行病理EBER检测,结果为阳性,外周血EBV阳性率为10％,EBV阳性患者中的T细胞淋巴瘤比例明显增多(P=0.000),B症状发生率也明显升高(P=0.005),所有EBER阳性病例中外周血EBV阳性与阴性患者OS差异有显著统计学意义,多因素回归分析表明外周血EBV阳性是淋巴瘤患者预后不良的独立危险因素(P =0.027).结论:EBV与结外NK/T细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤、外周T细胞淋巴瘤等密切相关.外周血EBV阳性是淋巴瘤患者预后不良的独立危险因素.
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HE切片褪色后行EBER原位杂交检测方法的探讨
目的 探讨将HE切片褪色后行EB病毒编码的小RNA(EBER)原位杂交检测的方法.方法 收集40例EBER原位杂交检测阳性病例的HE切片作为实验组,相同蜡块的连续切片作为对照组,分别进行EBER原位杂交检测.结果 实验组中,38张切片的组织结构全部完整,2张骨髓穿刺切片中的骨小梁脱片,但剩余组织组织结构保持完整.所有40张切片均杂交阳性,阳性信号位于细胞核,呈棕黄色,定位准确、清晰可读,杂交背景干净.阳性细胞数目及强度与对照组无差别.结论 将HE切片褪色后行EBER原位杂交检测,方法简单、可靠,在病理诊断中有一定的应用价值.
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EBV相关性胃癌研究进展
目的 总结国内外对EBV相关性胃癌(epstein-barr virus associated gastric carcinoma,EBVaGC)研究的现状.方法 应用PubMed及万方数据库检索系统,以“EB病毒、胃癌、关系和EBER”为关键词,检索2009-01-2014-08相关文献,共检索到英文文献214篇,中文文献54篇.纳入标准:1)EBVaGC的研究内容;2)研究方法为原位杂交检测胃癌组织标本中EBV编码的EBERs.剔除标准:1)无原始数据的综述;2)个例报道;3)重复发表的文献.根据纳入标准和剔除标准,符合分析文献38篇.结果 EBV是早发现的人类肿瘤相关病毒,为人类疱疹病毒4型,即γ-型疱疹病毒,特异性人类嗜淋巴细胞性病毒.人类通常在婴幼儿时期就已感染了EBV,95％的健康人终身携带EBV.EBV感染靶细胞主要有潜伏感染、裂解性感染和缺损性感染.EBV感染后,在宿主中持续表达一种基因产物,包括6种核心抗体(EBNA1,2,3A,3B,3C和LP)和3种潜伏膜蛋白(LMP1,2A和2B)以及2种EBV编码的小RNA(EBER1,2),其中EBER原位分子杂交技术是检测EBV的金标准.EBVaGC组织类型以混合型为主,低分化伴淋巴细胞浸润为特征,还具有男性多发、瘤体多位于贲门和胃体部以及淋巴结转移率低等特点,并认为残胃癌(gastric remnant carcinoma,GRC)中EBVaGC的发生率较高,这可能与手术破坏了解剖结构有关.H.pylori感染与EBV相关性胃癌的发生可能有关,但目前仍存在争议.EBV的感染和p53基因的突变在胃癌发生发展过程中起协同作用.基因启动子区域异常DNA的甲基化被认为是促进胃癌发生的重要因素之一.与EBV阴性胃癌(EBV negative gastric carcinoma,EBVnGC)不同,EBVaGC预后较好,这可能有赖于人体感染EBV后的免疫反应,但其机制尚不明确.结论 EBVaGC与普通胃癌不同,男性为好发人群,贲门为好发部位,淋巴转移率低,预后较好,以后还需对EBVaGC的保护机制进行进一步的研究.
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比较恒温培养箱和原位杂交仪在EBER原位杂交中的应用
EBER是EB病毒编码的小RNA,是该病毒的表达产物,在被感染的细胞核中以高拷贝数存在。许多肿瘤性疾病与其感染密切相关,例如鼻咽癌、NK/T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、淋巴上皮瘤样癌等。近年来,临床病理诊断越来越依赖原位杂交技术检测病毒是否存在,但是实验过程耗时较长,涉及不同工作温度。目前大多商品试剂盒的主要设备是恒温培养箱,而利用原位杂交仪尚未普及。本文根据该技术的操作特点,将原位杂交仪的操作程序优化后用于该技术并将其应用效果与恒温培养箱作比较。
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NK细胞淋巴瘤样胃病一例报告并文献复习
目的 报道国内首例NK细胞淋巴瘤样胃病(lymphomatoid gastropathy),阐述其临床特征、诊疗方法、治疗选择及转归.方法 收集并分析北京协和医院诊断的一例NK细胞淋巴瘤样胃病患者的临床表现、实验室检查、治疗及转归情况.结果 患者为51岁女性,因上腹不适行胃镜检查发现胃内多发溃疡,病理发现黏膜内异型淋巴细胞浸润,免疫组化:CD3(+)、CD56(+)、CD20(-)、CD8(-)、TIA(+)、Granzyme B(-)、Ki-67 (75％).原位杂交:EBER(-).诊断为NK细胞淋巴瘤样胃病,未行放化疗,密切随访.4个月后多次复查胃镜发现溃疡自发愈合.结论 NK细胞淋巴瘤样胃病作为一种独立的疾病类型,虽然病理表现与胃肠道NK/T细胞淋巴瘤相似,但临床表现、预后完全不同.对于有这种病理改变的患者,需仔细评估其临床表现、胃镜特点,避免过度治疗.
关键词： NK细胞淋巴瘤样胃病 NK/T细胞淋巴瘤 消化道 EBER -
不同部位和类型恶性淋巴瘤与EBV感染相关性研究
目的:对不同部位和类型的恶,陛淋巴瘤中EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)的感染情况进行检测和分析,探讨EBV感染可能与恶性淋巴瘤的病因关系.方法:收集恶性淋巴瘤组织标本127例,其中鼻腔及鼻咽淋巴瘤60例,胃淋巴瘤30例,表浅淋巴结淋巴瘤37例.组织病理学诊断为非霍奇金淋巴瘤(NHL)108例,霍奇金淋巴瘤(HD)19例.采用原位分子杂交方法检测淋巴瘤组织中EBV编码的小RNA(EBER),确定EBV在恶性淋巴瘤细胞中的存在.结果:108例NHL(包括鼻腔及鼻咽、胃、表浅淋巴结部位),EBER检测46例阳性,阳性率为42.6%.鼻腔/鼻咽NHL的EBER阳性率为58.3%(35/60),其中NK/T细胞淋巴瘤29例,EBER阳性19例,阳性率为65.5%(19/29);B细胞淋巴瘤31例,EBER阳性16例,阳性率为51.6%(16/31).胃部NHL的EBER阳性率为30.0%(9/30),其中B细胞淋巴瘤28例,EBER阳性9例,阳性率为32.1%(9/28);T细胞淋巴瘤2例,均为EBER阴性.表浅淋巴结NHL 18例,EBER阳性2例,阳性率为11.1%(2/18);表浅淋巴结HD 19例,EBER阳性5例,阳性率为26.3%(5/19).结论:本组资料非霍奇金淋巴瘤EBV感染阳性率(42.6%)略高于霍奇金淋巴瘤EBV感染阳性率(26.3%),差异无显著性意义(P＞0.05).鼻腔及鼻咽NHL的EBV感染阳性率(58.3%)高于胃NHL(30.0%)和表浅淋巴结NHL(11.1%)(P＜0.05).研究提示各类型淋巴瘤与EBV感染均有密切关系,且存在部位依赖性.
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应用EBER-RNA探针原位杂交技术检测鼻咽癌组织中的EB病毒
目的 用EBER-RNA探针原位杂交技术检测鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)组织中的Epstein-Barr(EB)病毒.方法 收集苏州地区非角化性鼻咽癌组织46例,慢性鼻咽炎组织4例作为对照,应用EBER-RNA探针原位杂交技术检测鼻咽癌中的EB病毒.结果 46例非角化性鼻咽癌组织中EB病毒表达均为阳性,4例慢性鼻咽炎组织中EB病毒表达均为阴性.结论 EBER-RNA探针原位杂交技术是检测鼻咽癌EB病毒的重要技术方法.
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N2～3期鼻咽癌EGFR、VEGF、EBER表达与放化疗敏感性的关系
[目的]探讨N2～3期鼻咽癌EGFR、VEGF、EBER表达与放化疗敏感性间的关系.[方法]采用免疫组织化学方法研究143例经病理确诊的鼻咽癌患者组织EBER、EGFR和VEGF表达.定量PCR和酶联免疫吸附法(ELISA)检测92例N2～3期鼻咽癌患者血浆EB病毒游离DNA (EBV/DNA)、EGFR、VEGF的表达水平,并对92例N2～3期鼻咽癌随访2年.[结果]N2～3期鼻咽癌EBER、EGFR及VEGF表达阳性率分别为97.8％(90/92)、95.7％(88/92)和35.9％ (33/92).EBER表达与远处转移、复发及临床缓解相关,VEGF和EGFR表达强度与远处转移均呈正相关.N2～3期鼻咽癌患者血浆EBV/DNA、EGFR、VEGF治疗前与同步放化疗后比较差异均有统计学意义(P均＜0.05).血浆中EGFR和VEGF表达水平与远处转移相关.[结论]血浆和组织中EGFR和VEGF表达水平均可能与鼻咽癌远处转移相关.
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不同部位和不同类型恶性淋巴瘤患者EBV感染情况分析
目的 分析不同部位和不同类型恶性淋巴瘤患者EBV感染情况.方法 收集恶性淋巴瘤标本90例,其中鼻腔/鼻咽淋巴瘤30例,肠道淋巴瘤30例,浅表淋巴结淋巴瘤30例.组织病理学诊断为非霍奇金淋巴瘤(NHL)68例,霍奇金淋巴瘤(HL)22例.应用多种抗体标记T淋巴细胞(CD3、CD45RO、CD56)和B淋巴细胞(CD20、CD79α)、免疫组化染色(Supervision二步法).采用EBV寡核苷酸探针(EBER)确定EBV在恶性淋巴瘤细胞中的存在.结果 NHL EBV感染阳性率(42.6%)略高于霍奇金淋巴瘤EBV感染阳性率(27.3%),但差异无显著性意义(P ＞0.05).鼻腔及鼻咽部NHL的EBV感染阳性率(66.7%)高于肠道NHL(23.3%)和浅表淋巴结NHL(25%)(P＜0.05).肠道T细胞淋巴瘤EBV感染阳性率(50%)高于肠道B细胞淋巴瘤EBV感染阳性率(16.7%,P＜0.05).结论 不同类型和部位淋巴瘤患者的EBV感染率存在不同.
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非特指性外周T细胞淋巴瘤中EBER、 LMP1的表达及与预后的关系
目的 探讨非特指性外周T细胞淋巴瘤(peripheral T-cell lymphoma,not otherwise specified,PTCL-NOS)中EBER、LMP1的表达及与患者预后的关系.方法 采用原位分子杂交(in situ hybridization,ISH)技术和免疫组化法分别检测81例PTCL-NOS及59例对照组[48例血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(angioimmunoblastic T-cell lymphoma,AITL)和11例结外NK/T细胞淋巴瘤(extranodal NK/T cell lymphoma,ENK/TCL)]中EBER和LMP1的表达,并分析EBER表达与PTCL-NOS患者临床病理特征及预后的关系.结果 (1)81例PTCL-NOS中,EBER阳性率为43.2％ (35/81);35例EBER阳性的PTCL-NOS病例中免疫组化得分1分+2分者共29例,占EBER阳性病例的82.9％(29/35),3分+4分者共6例,占17.1％ (6/35).EBER表达与PTCL-NOS患者年龄、性别、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平及临床分期均无明显相关性(P＞0.05).(2)81例PTCL-NOS组织中,LMP1蛋白阳性率为22.2％(18/81).LMP1蛋白表达与EBER表达具有一致性,但EBER阳性率明显高于LMP1 (P ＜0.05).(3)33例PTCL-NOS获得临床随访资料,随访时间1～63个月,中位生存期为23个月,总生存率为33.3％(11/33).Kaplan-Meier生存曲线分析显示,EBER阳性组的生存率明显低于EBER阴性组(P＜0.05).结论 EB病毒(EBV)感染可能是PTCL-NOS发生、发展中重要但非根本性的因素.EBER-ISH检测EBV感染具有较高的敏感性和特异性.EBV感染对PTCL-NOS患者的预后判断具有重要意义.
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炎性假瘤样滤泡树突细胞肉瘤6例临床病理特征及预后分析
目的 探讨炎性假瘤样滤泡树突细胞肉瘤(inflammatory pseudotumor-like follicular dendrtic cell sarcoma,IPT-like FDCS)的临床病理学特征.方法 回顾性分析6例IPT-like FDCS的临床病理资料、免疫表型及EBER原位杂交结果,并追踪患者预后.结果 6例IPT-like FDCS中女性4例,男性2例,年龄40～78岁,平均62.3岁.临床表现无特异性,4例患者为体检时发现,1例患者有腹胀、消瘦症状,1例患者有腰背部疼痛症状.3例患者肿瘤位于脾脏,2例位于肝脏,1例位于腹膜后.肿瘤直径3.5～14 cm(平均7.8 cm),肿瘤通常与周围组织分界较清晰.肿瘤组织由圆形、卵圆形及梭形细胞组成,细胞异型性不明显,呈编织状、漩涡状或席纹状排列,其间见多量炎细胞混杂.免疫表型:肿瘤细胞表达CD21/35、vimentin及Clusterin.EBER原位杂交显示瘤细胞散在阳性.所有患者均经手术完整切除肿瘤,术后随访3～48个月,6例中5例患者无瘤生存,1例患者随访4年后(无复发和转移)失访.结论 IPT-likeFDCS是一种好发于女性的少见低度恶性肿瘤,常见的发病部位是脾脏和肝脏,与EB病毒感染有关,其生物学行为相对惰性,手术完整切除肿瘤是佳治疗方式.
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全自动免疫组化仪在EBER原位杂交中的应用体会
临床上普遍采用免疫组化法来检测EB病毒,但免疫组化检测操作步骤繁琐,易受环境及人为因素的影响且结果不稳定等.随着科学技术的发展,各大中型医院病理科的仪器设备自动化程度越来越高,并且伴随医院规模的扩大,病理工作量不断增长,传统的手工操作已经逐步被全自动化仪器取代.目前全自动免疫组化仪主要应用于常规免疫组化工作,而原位杂交方面的应用尚未普及.福建医科大学附属协和医院病理科自2013年引进BenchMark全自动免疫组化仪,并进行EBER原位杂交检测,工作中取得了良好的效果,现将应用体会介绍如下.
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原位杂交检测HPV与EBER中常见问题与对策
原位杂交检测与免疫组化相比,有自己独特的优势,其可提供分子水平的诊断结果,具有高度的特异性,成为病理辅助诊断的重要依据之一.在病毒感染、肿瘤异常基因等鉴别,特别在诊断某些人类疾病,无法得到可靠抗体时,不失为一种较好的检测方法,现已被有效地应用到现代病理学研究及诊断中.原位杂交操作步骤多,存在不稳定因素和人为差异,可出现不同类型的假阳性与假阴性.如何提高制片质量,正确发挥原位杂交优势,笔者现将目前病理科常用的石蜡原位杂交(HPV、EBER试剂盒购自福建泰普生物公司)检测过程中总结的几点经验建议介绍如下.
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细胞蜡块在淋巴结细针针吸标本免疫组化和EBER检测中的应用
细针吸取细胞学(fine needle aspiration cytology,FNAC)是一种简便快速、创伤性小并较为准确的细胞病理学诊断方法.该方法通过细针吸取采集标本,对人体实质性器官的肿瘤及非肿瘤性病变的诊断及筛查有极大的临床意义.由于其具有诊断准确、快速、简单易行、创伤性小等特点,很容易被广大患者接受.传统做法通过离心、涂片、染色的切片进行基本初筛,目前应用很广泛,但仍存在诸多不足之处,尤其在免疫细胞化学和原位杂交检测中,如EB病毒检测(EBER检测)应用中,传统涂片的细胞有时较少,易出现假阴性;涂片厚薄不均而致阳性物质定位不清出现假阳性;更不能连续切片及永久性保留标本[1];细胞学涂片面积大,容易造成试剂浪费;细胞蜡块可弥补上述不足.细针穿刺微小组织的双重包埋制片法已有报道[2].因此,本文采用细针吸取的细胞标本利用Histogel(组织胶)-石蜡双重包埋切片法,效果良好,提高了淋巴组织病变的确诊率,为临床提供较为准确、及时的治疗方案.现报道如下.
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应用组织芯片技术检测淋巴瘤患者EB病毒表达及意义
目的 探讨福建地区淋巴瘤与EB病毒(EBV)感染的关系.方法 应用组织芯片结合原位杂交技术检测121例淋巴瘤患者EB病毒的表达.结果 霍奇金淋巴瘤(HL)EBER(epstein-barr virus early RNA,EBER)阳性者均为经典型HL,检出率为52.2%(24/46);HL各型中检出率以LD型高,3例均为阳性,MC型检出率83.3%(15/18),NS型和LP型分别为35.7%(5/14)和14.3%(1/7);非霍奇金淋巴瘤(NHL)中T细胞淋巴瘤检出率40.0%(20/50),其中鼻型结外NK/TCL检出率高达100%(9/9),结内、结外T细胞淋巴瘤检出率分别为18.2%(6/33)、82.4%(14/17),两组之间EBV感染率有明显差异(P<0.01).结论 福建地区淋巴瘤的发病与EB病毒的感染有一定的关系,其中以HL中MC和LD及NHL中的T-NHL与EB病毒的关系较为密切.而且T细胞淋巴瘤EBV感染有部位和类型倾向性的特点.
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胃癌、胃淋巴瘤与EB病毒感染的相关性研究
目的 对胃癌、胃淋巴瘤中EB病毒(EBV)的感染情况进行检测和分析,探讨EBV感染可能与胃肿瘤的病因关系. 方法 采用原位分子杂交(ISH)技术检测109例胃癌和30例胃淋巴瘤组织中EBV编码的小RNA(EBER),确定EBV在胃癌和胃淋巴瘤细胞中的存在. 结果 EBER阳性存在于胃癌细胞核和胃淋巴瘤细胞核内.胃癌组织中EBER阳性率为11.0% (12例/109例),胃淋巴瘤组织中EBER阳性率为30.0%(9例/30例).胃淋巴瘤EBV阳性率高于胃癌(P=0.022).但EB病毒感染在病人不同年龄、性别、肿瘤部位、组织学类型、临床分期和淋巴结转移中的差异没有统计学意义(P>0.05). 结论 EB病毒感染可能参与某些胃癌和胃淋巴瘤的发生与进展.
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广西地区成熟T和NK细胞淋巴瘤与EB病毒感染的关系
目的 探讨成熟T和NK细胞淋巴瘤与EB病毒(EBV)感染的关系.方法 用原位杂交法检测184例成熟T和NK细胞淋巴瘤EBER(EBV编码的小RNA)表达情况,统计不同类型成熟T和NK细胞淋巴瘤与EBV感染相关性.结果 184例成熟T和NK细胞淋巴瘤EBER阳性率为69％,EBER表达与组织学类型和发生部位有关(P ＜0.001),不同类型淋巴瘤EBER表达率不同:结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤(ENKCL)为100％,EBER阳性细胞数超过30％；血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AITL)为83％,阳性细胞数不到10％,阳性细胞多为反应性B细胞；外周T细胞淋巴瘤,非特殊型(PT,NOS)为40％；肠病相关性T细胞淋巴瘤(EATL)为28％；间变性大细胞淋巴瘤(ALCL) ALK+为18％.结外成熟T和NK细胞淋巴瘤EBER表达率显著高于结区的(P＜0.01),两组EBER阳性细胞及其分布也不同.结外EBER表达率为81％,阳性细胞多为肿瘤细胞,阳性细胞多超过30％；而结内者表达率为43％,阳性细胞多为母化的肿瘤细胞或反应性B淋巴细胞,阳性细胞不到10％.结论 结外成熟T和NK细胞淋巴瘤发生与EBV感染密切相关,而结内成熟T和NK细胞淋巴瘤EBV感染可能为继发感染.检测肿瘤组织EBER表达有助于成熟T和NK细胞淋巴瘤的诊断和治疗.
关键词： 成熟T和NK细胞淋巴瘤 原位杂交法 EBER -
血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤患者EB病毒感染情况及其临床意义
目的 探讨血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤患者的EB病毒感染情况及其临床病理学意义.方法 回顾性分析2008年1月至2011年12月经常规外检及会诊确诊的血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤62例,进行常规形态学和免疫学表型分析,采用原位杂交方法检测EB病毒编码小RNA(EBV-EBER)的表达情况,并随访患者.结果 62例血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤患者中,EBV-EBER阳性者26例(42％).EBV-EBER表达与患者年龄大于60岁以及治疗反应密切相关(P=0.025、0.049),而与患者的总体生存时间、临床B症状及Ann Arbor分期无关(均P＞0.05).结论 血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤患者EB病毒感染不影响总体生存时间,但影响患者对治疗的反应.
