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降钙素基因相关肽受体及其活性修饰蛋白mRNAs在大鼠中脑导水管周围灰质的表达
目的观察降钙素基因相关肽(CGRP)、降钙素受体样受体(CRLR)、孤儿受体RDC-1(RDC-1)和受体活性修饰蛋白(RAMPs)等,在正常大鼠中脑导水管周围灰质(PAG)的表达.方法用实时定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,以大鼠β-actin为内参,分别记录CGRP、CRLR、RAMP1、RAMP2、RAMP3和RDC-1 mRNAs PCR产物的CT值,计算每一样品对应其内参的相对含量. 结果大鼠PAG区域,脑组织CGRP、CRLR、RAMP1和RAMP2mRNAs均出现特异性DNA扩增产物.其中CGRP和RAMP1 mRNAs表达水平较高,CRLR mRNA次之,RAMP2 mRNA较弱;而RAMP3和RDC-1未出现特异性DNA扩增产物. 结论大鼠PAG区域脑组织存在CGRP,CRLR,RAMP1和RAMP2mRNAs的特异性表达;它们共同参与生理过程的调节.
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降钙素基因相关肽家族的受体活性修饰蛋白
降钙素基因相关肽家族中的降钙素、胰淀粉样酶、两种降钙素基因相关肽和肾上腺髓质素具有相似的结构。受体活性修饰蛋白(RAMP)是新近从蟾蜍卵细胞中发现并克隆出来的蛋白质。受体活性修饰蛋白是具有单一跨膜功能域的蛋白，可调节降钙素受体样受体(CRLR)向细胞膜的转运和识别配体的特异性。不同的RAMP可与降钙素受体样受体或降钙素受体结合表现为对不同配体具有亲和的、不同的受体表型而决定了体内的生物学效应。RAMP1 转运的是末端糖基化的成熟的CRLR蛋白，使CRLR表现为功能性的降钙素基因相关肽（CGRP）受体表型； RAMP2转运的CRLR是核心糖基化的未成熟的CRLR蛋白，使CRLR表现为功能性的肾上腺髓质素（Adm）受体表型。RAMP亦可与降钙素受体作用产生Amylin 受体表型。
关键词： 降钙素基因相关肽家族 受体活性修饰蛋白 降钙素受体样受体 受体表型 -
Intermedin及其受体系统在单侧输尿管梗阻大鼠肾组织的表达
目的 观察大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型中肾组织intermedin (IMD)及其受体系统-降钙素受体样受体(CRLR)/受体活性修饰蛋白(RAMP)表达的变化.方法 健康雄性Wistar大鼠48只,随机分为假手术组和UUO组,分别于术后1、3、7、14 d随机选取6只,留取梗阻侧及假手术侧肾组织.HE、Masson染色观察肾组织病理变化;Real-Time RT-PCR检测肾组织中IMD、CRLR、RAMP1、RAMP2、RAMP3的mRNA表达;免疫组织化学法检测肾组织中IMD、CRLR、RAMP1、RAMP2、RAMP3的蛋白表达.采用析因设计的方差分析进行统计学分析.结果 肾脏组织病理染色结果显示,假手术组术后各时间点肾小球、肾小管均未见明显损伤;与假手术组相比,UUO组肾脏病理改变明显,肾间质纤维化程度随梗阻时间延长逐渐加重(P＜0.05);Real-Time RT-PCR及免疫组织化学结果显示,IMD、CRLR和RAMP1、RAMP2、RAMP3的mRNA及其蛋白质表达从UUO术后1d开始升高(与假手术组比较P＜0.05),分别于术后3d(RAMP2和RAMP3)和术后7d(IMD、CRLR和RAMP1)达到高峰,以后逐渐下降.结论 IMD及其受体系统在UUO大鼠肾组织表达上调,提示IMD可能在肾脏间质纤维化中发挥重要作用.
关键词： 肾脏 纤维化 Intermedin 降钙素受体样受体 受体活性修饰蛋白 -
钙化大鼠心血管组织肾上腺髓质素及其受体系统的变化
目的:探讨钙化大鼠心血管组织肾上腺髓质素(adrenomedullin, ADM)生成和ADM及其受体系统--降钙素受体样受体(calcitonin receptor-like receptor, CRLR)与受体活性修饰蛋白(receptor activity modifying protein, RAMPs)基因表达的改变及其病理意义.方法:放射免疫法测定血浆、心肌和血管组织ADM含量;半定量RT-PCR方法测定心肌和血管ADM、降钙素受体样受体(CRLR)和RAMP2/3 mRNA水平.结果:与对照组大鼠比较,钙化大鼠心肌和主动脉钙含量分别高342 %和606 %(P<0.01);心肌和主动脉碱性磷酸酶活性分别高66.5 % (P<0.05)和82.7 % (P<0.01).钙化组大鼠血浆、心肌和血管ADM含量分别较对照组高58 %(P<0.01),14.3 %(P<0.01)和27.8 %(P<0.05);心肌ADM、CRLR和RAMP2 的mRNA水平较对照组分别高 90.6 %,157.5 %和119.6 %(均P<0.01), 而RAMP3 mRNA水平较对照组低14.1 %(P<0.01);血管组织ADM、CRLR、RAMP2 和RAMP3 的mRNA水平较对照组分别高37.7 %(P<0.01),41.4 %(P<0.01), 60.1 %(P<0.05)和13 %(P< 0.01).心血管组织中ADM与其受体系统mRNA变化水平有一定的相关性.结论:钙化大鼠心血管组织ADM生成增加,ADM、CRLR和RAMP2/3基因表达亦有不同程度的变化,提示ADM 及其受体系统可能参与心血管钙化的调节过程.
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缺血/再灌注损伤心肌Intermedin及其受体mRNA表达水平的动态变化
目的 利用大鼠在体心肌缺血/再灌注(I/R)损伤模型,观察再灌注过程中缺血区和非缺血区心肌Intermedin(IMD)及其受体mRNA的表达水平.方法 结扎左前降支冠状动脉制备大鼠心肌在体I/R损伤模型,检测血流动力学指标和血浆LDH活性,RT-PCR法检测IMD及其受体mRNA表达水平.结果 与对照组相比,I/R组大鼠心功能显著降低,血浆乳酸脱氢酶活性显著升高.缺血区心肌CRLR和RAMP2的mRNA表达水平分别在再灌注12 小时和24小时显著下调,RMAP1和RAMP3的mRNA表达水平分别在再灌注6 小时和 24小时显著上调;非缺血区心肌CRLR和RMAP3的mRNA表达水平显著上调,RAMP1和RAMP2的mRNA表达水平无显著变化.I/R组大鼠心肌IMD的mRNA表达水平在缺血区和非缺血区均显著上调.结论 IMD及其受体系统是重要的内源性心血管保护系统,在拮抗心肌I/R损伤中发挥重要作用.
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受体活性修饰蛋白病理生理作用的研究进展
受体活性修饰蛋白(RAMPs)是一种具有单一跨膜功能域的蛋白,它可以与降钙素基因相关肽家族(CGRP)受体、降钙素受体(CTR)及降钙素受体样受体(CRLR)等Ⅱ型G蛋白偶联受体(GPCRs)相互作用,形成稳定的异二聚体在细胞膜上表达.不同的RAMPs可与降钙素受体样受体(CRLR)或降钙素受体(CTR)结合,形成对配体具有特异性亲和的不同受体表型,从而决定受体的生物学效应.此外,RAMPs还能与其他GPCRs相互作用,表明RAMPs在G蛋白偶联受体功能调节中具有更为广泛的作用.RAMPs对GPCRs的调节依赖于它的分子基础.RAMPs的研究为GPCRs受体功能及CGRP信号转导的研究提供了新思路.
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细胞外钙受体相互作用蛋白的研究进展
细胞外钙受体(CaR)为G蛋白偶联受体超家族中的成员,它的大部分作用是以Gαi,Gαq和Gα12/13为中介的,但由G蛋白α亚基介导的作用并不能完全解释CaR的生物学效应.与CaR相互作用蛋白如抑制蛋白、G蛋白受体激酶、受体激活修饰蛋白、丝蛋白、钾通道、小窝蛋白等结构和信号蛋白赋予CaR独特的信号转导特征,并能够更充分说明CaR在不同组织和细胞中所发挥的作用.本文将对上述几种与其相互作用蛋白及它们所产生的生物学效应做一综述.
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受体活性修饰蛋白研究进展
受体活性修饰蛋白(receptor activity-modifying proteins,RAMPs)属于单跨膜蛋白家族,分三个结构域,RAMP的N端和跨膜区决定本身的功能和受体表型,胞内C端对于配体的信号传导和受体循环有重要作用.目前发现有三个成员:RAMP1、RAMP2和RAMP3.RAMPs通过改变G蛋白偶联受体的糖基化.作用于配体结合区域来调节受体表型.RAMP1与降钙素受体样受体(calcitonin receptor like receptor,CRLR)结合表现出降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)受体表型;RAMP2和RAMP3与CRLR结合则对肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)表现高亲和力,与降钙素受体(calcitonin receptor,CTR)结合则作为胰淀粉样酶(amylin,AMY)受体.由此可见,RAMPs不仅调节受体与配体结合,还影响细胞内的蛋白相互作用调节细胞内信号传导来影响细胞的增殖、迁移、分化等生物学特性.RAMPs还对心血管系统的病理生理有重要调节作用.
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肾上腺髓质素和降钙素基因相关肽受体在血管平滑肌细胞的脱敏受体活性修饰蛋白的作用
新近研究发现, 肾上腺髓质素(adrenomedullin, ADM)和降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide, CGRP)均能与降钙素受体样受体(calcitonin receptor-like receptor, CRLR)结合, 其配体特异性由受体活性修饰蛋白(receptor activity-modifying protein, RAMP)调控.本工作在离体培养的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)上观察ADM和CGRP受体脱敏现象, 以探讨CRLR/RAMP假说在心血管组织方面的意义.用无血清培养基(serum-free medium, SFM)和含有10-8 mol/L ADM、 CGRP和肾上腺髓质素前体原N-末端20肽(proadrenomedullin N-terminal 20 peptide, PAMP)的SFM培养, 再用10-8 mol/L ADM或CGRP和磷酸二脂酶的抑制剂异丙基次黄苷(isobutyryl methyxanthine,IBMX)与VSMCs进行第二次孵育, 然后收集细胞, 测定VSMCs cAMP含量.10-8 mol/L ADM、 CGRP和PAMP单独与VSMCs孵育, VSMCs cAMP含量分别较SFM组高191% (P<0.01)、 385% (P<0.01) 和 67%(P<0.05); 预先用10-8 mol/L ADM或CGRP与 VSMCs 孵育可降低随后的CGRP刺激VSMCs 产生cAMP, 分别较单次CGRP 孵育少 44% (P<0.05) 和48% (P<0.01); 预先用100 nmol/L蛋白激酶A (PKA)抑制剂 H-89处理VSMCs, 可完全阻断ADM和CGRP预处理诱导的第二次CGRP刺激的VSMCs cAMP含量减少.表明VSMCs对CGRP的脱敏过程是通过PKA途径实现的.预先用ADM、 CGRP处理VSMCs后, 用ADM第二次孵育, 细胞内 cAMP含量与单次ADM孵育无明显改变; PKA抑制剂H-89与VSMCs孵育, 无论对单次ADM刺激或对ADM和CGRP处理的第二次刺激的 cAMP生成均无影响.用PAMP处理VSMCs后, ADM和CGRP的第二次刺激的VSMCs cAMP水平无明显改变(P>0.05). 结果提示, 在离体培养的大鼠VSMCs, ADM受体不脱敏而CGRP受体对预先用ADM和CGRP处理后的激动剂的第二次刺激都脱敏, 表明ADM和CGRP的脱敏现象不一致.
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内源性中叶素可减轻血管紧张素Ⅱ诱导的乳鼠心肌细胞肥大
目的 研究内源性中叶素(IMD)与心肌细胞肥大间的相互作用关系.方法 血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)孵育乳鼠心肌细胞构建心肌肥大模型.应用Western blot及放射免疫法测定心肌细胞IMD产生和分泌,实时定量PCR(Real-time PCR)方法检测心肌细胞IMD及其受体系统降钙素受体样受体/受体活性修饰蛋白(CRLR/RAMPs)基因表达的变化.并以[3H]-亮氨酸([3H]-Leu)摄入及脑钠素(BNP)基因表达作为心肌细胞肥大的指标.结果 AngⅡ孵育下调心肌细胞IMD生成、表达,并影响其受体系统的基因表达.反过来,利用IMD抗体及其受体阻断剂阻断内源性IMD的生物学效应可增强AngⅡ诱导的心肌细胞肥大反应.结论 内源性IMD及其受体系统参与了心肌肥大的发生、发展,对其生成、表达的干预有可能成为今后防治心肌细胞肥大的新途径.
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Intermedin1-53保护异丙基肾上腺素诱导的心肌损伤
目的在异丙基肾上腺素(isoproterenol, ISO)诱导的大鼠急性心肌损伤的模型上探讨Intermedin1-53(IMD1-53)对心肌损伤的保护作用.方法用ISO建立大鼠缺血损伤模型, 观察IMD1-53对心脏功能和心肌组织损伤影响;半定量RT-PCR检测心室肌降钙素受体样受体(calcitonin receptor-like receptor,CL)、受体活性修饰蛋白(receptor-activity-modifying protein,RAMP)1/2/3 的mRNA表达水平;放射免疫法测定心肌cAMP的含量和放射配基法测定心肌浆膜IMD受体结合位点.结果与对照组比较ISO组大鼠的左室内压变化速率(±LVdp/dtmax)分别降低23%和44%(均P<0.01),左室舒张末压(left ventricular end-diastolic pressure, LVEDP)增高7.8倍(P<0.01),心室肌CL、RAMP1/2/3的mRNA水平均明显上调(除RAMP2 P<0.05,均P<0.01),ISO组心肌浆膜IMD受体Bmax值升高118%[(83.05±5.75)vs(38.10±1.85)pmol·g-1Pro,P<0.01];与单纯ISO组比较,IMD可呈剂量依赖性减轻心内膜下心肌缺血损伤,改善心功能,高剂量Intermedin治疗组大鼠优于低剂量组.结论 ISO诱导的缺血损伤心肌的IMD受体上调,而IMD1-53对心肌缺血损伤具有明显的保护作用.
关键词： Intermedin 异丙肾上腺素 降钙素受体样受体 受体活性修饰蛋白 cAMP -
受体活性修饰蛋白的研究进展
受体活性修饰蛋白(RAMPs)与不同的G蛋白偶联受体(GPCRs)相互作用可形成稳定的异二聚体在细胞膜表达并决定受体表型.RAMPs与降钙素基因相关肽家族(CGRP)受体、降钙素受体(CTR)及降钙素受体样受体(CRLR)相互作用,可使CTR和CRLR表现为不同的CGRP家族成员受体表型.此外,RAMPs还能与其他Ⅱ型GPCRs相互作用,显示RAMPs在G蛋白偶联受体功能调节中具有更为广泛的作用.RAMPs对GPCRs的调节依赖于它的分子基础.RAMPs的发现为G蛋白偶联受体功能及细胞信号转导的研究提供了新思路.
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受体表型调节蛋白--受体活性修饰蛋白
细胞质膜受体识别配体的特异性,不仅决定于受体的结构,而且还与膜上某些调节蛋白的功能有关.近发现的受体活性修饰蛋白(RAMP)的I型膜蛋白家系(RAMP1,RAMP2,RAMP3)分别决定受体呈现不同的表型,如RAMP1与降钙素受体样受体(CRLR)结合表现为降钙素基因相关肽(CGRP)的功能性受体表型,RAMP2或RAMP3与CRLR结合表现为肾上腺髓质素(ADM)的功能性受体表型.不同的配体CGRP家族成员与不同的受体表型结合,通过受体成分蛋白(RCP)调节参与下游的信号转导,发挥不同的生物学效应.RAMPs还参与受体失敏与内化的过程,不同RAMPs之间存在相互作用,调节配体在病理生理过程中发挥作用.RAMPs对CGRP家族受体表型的调控具有重要的生理和病理意义.
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肾上腺髓质素受体研究进展
肾上腺髓质素(ADM)是一种多功能调节肽,体内分布广泛.ADM实现其多种生物学功能的物质基础是其受体的多样性及其调控的复杂性.ADM受体主要有CGRP1受体和孤儿G-蛋白偶联受体RDC-1、L1及降钙素受体样受体.ADM受体表型不仅取决于受体本身结构,还取决于受体活性修饰蛋白的调控及信号通路中受体成分蛋白的调节.此外,血循环中的ADM结合蛋白也从ADM的生物利用度及其与受体的相互作用等方面影响其生物学效应.
关键词： 肾上腺髓质素 受体 受体活性修饰蛋白 受体成分蛋白 肾上腺髓质素结合蛋白 -
慢性应刺激致高血压大鼠下丘脑肾上腺髓质素特异性受体组件基因表达变化
目的 探讨慢性应激致高血压过程中肾上腺髓质素特异性受体组件降钙素受体样受体、受体活性修饰蛋白2和受体活性修饰蛋白3在下丘脑的动态变化.方法 将48只大鼠分为对照组(18只)和应激组(30只),应激组给予噪声加足底电击刺激,分别在刺激开始后的第1、5、10和第15 d以及停止刺激后的第5和第10 d处死动物,分离下丘脑,抽提总RNA,用逆转录聚合酶链式反应检测降钙素受体样受体、受体活性修饰蛋白2和受体活性修饰蛋白3的基因表达变化.结果 与对照组相比较,应激组动物降钙素受体样受体基因表达10 d内逐渐上调(1.236±0.040 比 0.941±0.041,P<0.01),而后表达下调,在应激第15 d明显低于于对照组(0.860±0.041比0.938±0.042,P<0.05).受体活性修饰蛋白2 mRNA表达在应激第1和第5 d显著升高(0.975±0.023比0.880±0.035和1.160±0.045比0.897±0.036,P<0.05或P<0.01),在第5 d达到高峰,而后开始下调,在应激第15 d和应激结束后5 d低于对照组(0.670±0.021比0.897±0.041,0.719±0.039比0.910±0.032,P<0.01).受体活性修饰蛋白3 mRNA表达在应激第1 d显著升高(1.197±0.053比0.870±0.039,P<0.01),而后开始逐渐下调,在应激第10、15 d后开始明显低于对照组的表达水平(P<0.05或P<0.01).应激结束后10 d受体活性修饰蛋白3 mRNA表达水平仍低于对照组,但无统计学差异.结论慢性应激所致血压升高变化过程中伴随下丘脑中肾上腺髓质素特异性受体组件mRNA表达的不同时段特异性改变,提示其可能参与应激致高血压过程.
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钙化血管平滑肌细胞肾上腺髓质素及其受体系统的基因表达上调
探讨钙化的血管平滑肌细胞肾上腺髓质素生成和肾上腺髓质素受体系统-降钙素受体样受体和受体活性修饰蛋白基因表达的改变及其病理意义.采用β-甘油磷酸盐诱导培养的大鼠血管平滑肌细胞钙化;放射免疫法测定血管平滑肌细胞分泌的肾上腺髓质素含量;半定量逆转录聚合酶链反应测定细胞肾上腺髓质素、降钙素受体样受体和受体活性修饰蛋白的mRNA水平;原子吸收分光光度计测定细胞钙含量;碱性磷酸酶试剂盒测定血管平滑肌细胞碱性磷酸酶活性;β液体闪烁计数仪测定45Ca2+放射活性.结果发现,与非钙化血管平滑肌细胞比较,钙化血管平滑肌细胞内钙含量、45Ca2+摄入及碱性磷酸酶活性分别增加118%、174% 和7倍(P<0.01);钙化细胞肾上腺髓质素分泌量增高99%(P<0.01),肾上腺髓质素、降钙素受体样受体、受体活性修饰蛋白2和3的 mRNA水平分别增加78%、93.7%、91.8%和109.5%(P均<0.01).肾上腺髓质素与降钙素受体样受体、受体活性修饰蛋白2和3的 mRNA水平呈正相关,其相关系数分别为0.83、0.92和0.93 (P均<0.01).结果提示,血管平滑肌细胞肾上腺髓质素旁/自分泌功能改变可能参与血管钙化的调节过程.
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肾上腺髓质素受体及其在肾脏中的表达和调节
肾上腺髓质素(AM)是一种生物活性多肽,可以与降钙素基因相关肽受体、降钙素受体样受体和孤儿G蛋白偶联受体RDC-1、L1作用,这些受体活化后可通过激活cAMP、一氧化氮合酶等多种信号转导通路实现生理功能.近年有文献报道,肾脏疾病明显影响肾脏中AM受体--主要是受体活性修饰蛋白的表达和调节,研究其病理生理作用和机制对临床肾病的诊疗、防治及新型药物的研发具有十分重要的作用.
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受体活性修饰蛋白在心功能衰竭患者心房组织中mRNA表达初探
目的探讨受体活性修饰蛋白(receptor activity modifying proteins, RAMPs)在心力衰竭患者心耳组织中mRNA的表达情况.方法取手术患者心耳组织100 mg,提取RNA后应用半定量逆转录-PCR方法检测 mRNA含量. 结果随心功能恶化,RAMP1、RAMP2和RAMP3的mRNAs表达量增高,在心功能Ⅳ级患者RAMP1和 RAMP2 mRNA表达水平反而较心功能Ⅱ、Ⅲ级下降(P<0.05). 结论 RAMP1和 RAMP2在心功能Ⅱ、Ⅲ级患者心耳组织中表达升高,可与降钙素受体结合分别表现为降钙素基因相关肽受体表型和肾上腺髓质素受体表型,对于心功能衰竭早期代偿具有积极意义.
关键词： 受体活性修饰蛋白 心功能衰竭 降钙素基因相关肽受体 肾上腺髓质素受体 -
肾上腺髓质素受体及信号转导机制
肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)是日本学者Kitamura Kazuo等[1]于1993年在人肾上腺髓质的嗜铬细胞瘤中分离提纯的一种含52个氨基酸的活性多肽,广泛分布于人和啮齿类动物的多种组织[2,3],在调节机体稳态,尤其是心血管和肾脏功能的稳态方面有重要作用[2].
