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鹅Ⅰ型禽副粘病毒GPMV/QY97-1株HN基因的克隆和序列分析
在华南地区进行鹅病病因的调查过程中,从患病鹅群中分离到一株对鹅和鸡都有致病力的病毒,初步判定该病毒属于Ⅰ型禽副粘病毒,命名为GPMV/QY97-1株.以GPMV/QY97-1毒株的基因组RNA为模板,通过RT-PCR方法,扩增出血凝素-神经氨酸酶(HN)基因3′端和5′端的cDNA片段,分别将其克隆至pGEM-T Easy载体中,对其进行序列测定.序列分析表明,HN基因的cDNA全长为2 024nt,编码571个氨基酸.序列中含有13个半胱氨酸残基和6个潜在的糖基化位点,其HN基因及编码蛋白结构与新城疫病毒株相符.将GPMV/QY97-1株HN基因序列和推导的氨基酸序列与新城疫病毒株的HN基因相应序列做比较后发现,它们的核苷酸序列同源性分别在89.6%～83.6%,氨基酸序列同源性在93.3%～87.9%.在同源性比较的基础上,进一步绘制了Ⅰ型禽副粘病毒株HN基因的系统发育树.这对于Ⅰ型禽副粘病毒毒力基因的功能分析和该病的分子流行病学调查有着重要意义.
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鹅源新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因的序列分析
新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)是副粘病毒科腮腺炎病毒属的成员,基因组全长15 186个核苷酸(nt),编码6种结构蛋白,即基质蛋白(M)、核衣壳蛋白(NP)、磷蛋白(P)、大蛋白(L)、血凝素-神经氨酸酶蛋白(HN)及融合蛋白(F),其中HN和F位于病毒囊膜表面,前者负责识别细胞受体并介导病毒对细胞的吸附,后者则参与病毒的穿透、细胞融合和溶血等过程.NDV可以感染多种禽类,尤其是感染鸡以后可致严重发病,造成重大的经济损失;现有的文献记载一般认为水禽如鸭、鹅对NDV具有较强的抵抗力[1],感染后症状轻微或不表现临诊症状[2].然而1997年以来,我国华东地区部分省市陆续爆发一种被称为"鹅的禽副粘病毒感染"或"鹅副粘病毒病"的传染病[3,4],对养鹅业构成较大威胁.在本病的研究过程中,从江苏、浙江、广东等地的患病鹅群分离到数株NDV,并证实NDV是本病的一种主要病原[5].为进一步研究这些鹅源NDV的生物学特征,探讨其致病机理,我们测定了与NDV致病性和毒力密切相关的囊膜糖蛋白HN的基因序列,并对其进行了比较分析.
关键词： 鹅 新城疫病毒 血凝素-神经氨酸酶基因 序列分析 -
半胱胺对成年鹅血浆中生长抑素和某些代谢激素的影响
目的:研究半胱胺(CS)对成年鹅生长抑素(SS)和某些代谢激素的影响.方法:14只装有翅静脉瘘管的成年杂交鹅(川白×太湖),经瘘管采取对照期和处理(一次性添喂100 mg/kg bw的半胱胺)后第1、3、5、7 d的血样,用RIA双抗法测定其中激素的含量.结果:实验期第1、3、5和7 d的生长抑素的含量均显著低于对照期(1.89±0.10 μg/L).促甲状腺激素较对照期(2.45±0.31 mIU/L)在第1 d显著下降21.63 %(P<0.05),第3、5 d均降低18.37%(P>0.05),第7 d基本回复正常(P>0.05). 实验期1、3、5和7 d的T4 较对照期(5.41±0.98 μg/L)显著升高(P<0.01);实验期第3 d的T3水平较对照期(1.05±0.06 μg /L)高36.19 %(P<0.01);同样,胰岛素在实验期的第5 d显著高于对照期(P<0.05).结论:CS能够降低成年鹅血液中SS含量,使T4、T3和胰岛素水平升高,提高了机体的代谢水平,同化作用加强,从而有利于生长.
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半胱胺对鹅胰液分泌及胰酶活性的影响
目的:研究半胱胺对鹅胰液分泌及胰酶活性的影响.方法:12只装有胰腺～十二指肠长久性瘘管的成年鹅.试验采用自身对照,试验期在日粮中一次性添加半胱胺(100 mg/kg bw).连续收集计量胰液并测定胰酶活性.结果:①半胱胺使鹅胰液的分泌速率较对照期显著上升(240.16%,P<0.01),其中白天升高234.45 %,夜间增高了253.70 %.②试验期单位容积胰蛋白酶的活性较对照期升高了49.05 %(P<0.01),而胰脂肪酶和胰淀粉酶的活性却较对照期分别降低了25.44 %和21.95 %,且变化幅度具有昼夜的差别.③试验期胰腺每小时分泌胰蛋白酶、胰脂肪酶和胰淀粉酶的总活性较对照期分别升高406.88%(P<0.01)、153.58 % (P<0.01)和166.59 %(P<0.01),白天增加的幅度较夜晚大.结论:半胱胺能促进鹅胰液的分泌,增加胰液中蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶分泌的总量,从而提高鹅对饲料的消化能力,适应机体生长对营养的需求.
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致鹅败血症粪肠球菌溶血素激活因子基因克隆及序列分析
目的 了解粪肠球菌溶血素激活因子(CylA)基因的遗传变异情况.方法 根据GenBank上已发表的粪肠球菌CylA基因序列设计2对特异性引物,对临床分离的4株致鹅败血症粪肠球菌CylA基因进行克隆及序列测定,并与国外从人体分离的和国内从猪体分离的各4株致病性粪肠球菌的CylA基因,用LaSergene 7.0软件进行同源性比对和构建系统进化发育树.结果 鹅源4株茵CylA基因均长1 239bp,有1个完整的开放阅读框,编码412个氨基酸；序列中无缺失和插入,仅有l处未引起其编码氨基酸变异的无义突变.其余8株菌CylA基因及推导的氨基酸变异程度均不大.4株鹅源菌CylA基因推导的氨基酸同源性为100％；与国外人源菌和国内猪源菌CylA基因推导的氨基酸遗传距离也较近,同源性为98.6％～100％.结论 粪肠球菌CylA基因高度保守,有可能成为检测诊断和免疫预防的靶基因.
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调查分析河南省肉禽和蛋禽中弓形虫的感染状况
目的:调查分析河南省肉禽和蛋禽的弓形虫感染状况.方法:随机抽取1152份家禽血液样品,其中鸡462份、鸭212份、鹅181份和鸽297份.提取样品中白细胞DNA并使用巢式PCR检测弓形虫529重复序列.结果:1152份家禽血液样品中检测出175份弓形虫阳性,阳性率为15.19％.四种家禽都有弓形虫感染,其中鹅的阳性率高(24.31％),鸽的阳性率低(5.39％).结论:河南省鸡、鸭、鹅、鸽四种家禽均有弓形虫感染,家禽感染率比同时期人的感染率(3.47％)高,提示禽肉和禽蛋是人感染弓形虫的风险因素.
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传染性法氏囊病病毒不同分离株vp2基因部分核酸序列分析
根据已报告的传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)cDNA序列,设计引物,用RT-PCR扩增CH(鸡)、DU(鸭)、GE(鹅)和SP(麻雀)四种不同源IBDV分离株的vp2基因高变区.核酸序列测定分析表明,四种不同源IBDV分离株vp2基因高变区的同源性为97%,推导编码蛋白氨基酸序列的同源性98%,两个亲水区和七肽区的氨基酸序列完全一致.本研究结果提示,自然感染IBDV的鸭、鹅和麻雀不仅可成为病毒携带者或传染源,而且在病毒变异中起一定作用.
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胆酸止咳片中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量测定
目的 建立高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法测定胆酸止咳片中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量.方法 采用Agilent SB C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),柱温30 ℃,流动相为甲醇-乙腈-0.1%甲酸溶液(62:14:24),流速0.8 mL·min-1,检测器为ELSD,漂移管温度为85 ℃,氮气流速为2.3 L·min-1.结果 猪去氧胆酸含量在0.427 0～6.405 0 mg范围内有良好线性关系,平均加样回收率为99.7%,RSD＝1.9%(n＝9);鹅去氧胆酸含量在0.218 6～3.279 0 mg范围内有良好线性关系,平均回收率为97.5%,RSD＝1.2%(n＝9).结论 该方法简便,结果准确,重复性好,可用于胆酸止咳片的质量控制.
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鹅流感病毒唾液酸受体分布特点及病毒吸附模式
目的:探讨鹅流感病毒唾液酸(SA)受体分布特点、病毒吸附模式及其作用.方法:凝集素组织化学法检测鹅呼吸道和消化道流感病毒SA受体的分布,荧光素Alexa488标记禽流感病毒H9N1和人流感病毒H1N1吸附鹅呼吸道和消化道组织.结果:鹅呼吸道和消化道以表达SAα-2,3半乳糖(Gaal)受体为主,SAα-2,3Gal受体在鹅呼吸道气管、支气管、次级支气管和副支气管、消化道结肠以及泄殖腔呈阳性表达,而SAa-2,6Gal受体缺乏或仅弱表达.禽流感病毒H9N1吸附鹅呼吸道气管、支气管、次级支气管和副支气管、消化道结肠以及泄殖腔,但人流感病毒H1N1仅少量病毒吸附副支气管、结肠以及泄殖腔.结论:鹅呼吸道和消化道同时表达SAα-2,3Gal受体,有助于禽流感病毒复制部位由消化道扩展到呼吸道以及各亚型禽流感病毒之间的基因重配,提示鹅在禽流感病毒的起源和进化中可能起重要作用.
