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湖北贝母的研究进展
湖北贝母有悠久的应用历史,现已是贝母主流品种之一.其主要含有10种甾体生物碱,以及二萜及二萜聚体等成分.药理作用可松驰气管平滑肌和镇咳、祛痰、平喘作用,毒性很低.湖北贝母的现代研究与传统中医经验一致,已被收载于<中国药典>2000年版中,值得进一步发展.
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贝母类药材湖北贝母Fritillaria hupehensis系统位置的探讨——来自ITS,rpl16,matK序列的证据
湖北贝母为传统中药,然而《Flora of China》将其基原植物湖北贝母Fritillaria hupehensis归并于天目贝母F.monantha项下.该实验采用分子系统学方法,以川百合Lilium davidii为外类群,用核基因ITS序列和叶绿体基因rpl16序列、matK序列等3个片段对湖北贝母及其近缘类群天目贝母F.monantha、安徽贝母F.anhuiensis等进行联合建树分析,对湖北贝母植物的系统位置进行了探讨,为湖北贝母药材的安全使用提供分子证据.结果显示,分子系统树上,3种贝母各自的居群聚为一支,之后天目贝母与安徽贝母聚为一支,后与湖北贝母聚为一支.表明湖北贝母与天目贝母的亲缘关系可能要远于安徽贝母与天目贝母之间的关系,因此不适宜将湖北贝母归并于天目贝母.
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湖北贝母的HPLC指纹图谱分析
目的建立湖北贝母的指纹图谱分析方法.方法采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法以Hypersil ODS(250 mm×4.6 mm ID,5 μm)为色谱柱;流动相:甲醇(含0.05%三乙胺)-水梯度洗脱;流速:1.0 mL·min-1;记录时间:60 min;以蒸发光散射检测器(ELSD)检测,检测条件:漂移管温度75 ℃,氮气流速1.9 L·min-1.结果用梯度洗脱得到的色谱图各色谱峰分离较好,达到指纹图谱要求.结论为更好的控制湖北贝母的内在质量提供了可靠的分析方法.
关键词： 湖北贝母 指纹图谱 高效液相色谱-蒸发光散射法 -
川贝母的真伪鉴别
贝母之名始载于<神农本草经>,列为中品.<本草纲目拾遗>将川贝与浙贝分开,谓川贝味甘而补肺,不若用象贝治风火痰嗽为佳,治虚寒咳嗽以川贝为宜.<轩岐救正伦·伪药必辨>指出,当时有以浙贝母伪充川贝母的情况.可见自古即以川贝母为贝母中的佳品.贝母类药材品种多,<中国药典>分别收载有浙贝母、川贝母、平贝母、伊贝母、湖北贝母等品种.除浙贝母外,在全国一些地方经常有其他贝母(如平贝母、伊贝母等)混充川贝母使用的情况.另外,贝母类药材因规格大小不同及生态产地不同而有异,其个头较小的容易与川贝母混淆.
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湖北贝母茎叶中的生物碱类成分研究
目的 对湖北贝母Fritillaria hupehensis茎叶中生物碱类化学成分进行了研究.方法 采用硅胶柱色谱分离化学成分,IR、MS、1H--MR和13C-NMR以及与对照品对照等方法进行结构鉴定.结果 从湖北贝母茎叶中分离并鉴定了8个生物碱类化学成分,分别是浙贝乙素(peiminine,Ⅰ)、湖贝甲素(hupehenine,Ⅰ)、湖贝新(hupehenisine,Ⅰ)、湖贝啶(hupehenidine,Ⅳ)、鄂贝新(ebeiensine,Ⅴ)、浙贝甲素(peimine,Ⅵ)、湖贝苷(hupehemonoside,Ⅵ)和湖贝甲素苷(hupeheninoside,Ⅶ).结论 化合物Ⅰ～Ⅶ均为首次从湖北贝母茎叶部位分离得到.
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湖北贝母镇咳、祛痰、平喘药效部位的筛选
目的以镇咳、祛痰、平喘为药效学指标,跟踪湖北贝母活性部位.方法以不同溶剂提取湖北贝母浸膏,经药理筛选得到佳提取溶剂的组分.再分别以酸碱法和溶剂法对佳提取溶剂的组分浸膏进行分离,得到活性部位.结果50%乙醇是好的提取溶剂;综合分析不同部位的镇咳、祛痰、平喘活性实验结果,样品C即酸碱法的氯仿部位(主要含生物碱)效果较好.结论酸碱法的氯仿部位(即总生物碱)是其镇咳、祛痰、平喘综合活性较好的部位,实验结果与文献关于贝母呼吸系统活性在生物碱部位的报道相一致.
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湖北贝母药材的质量标准研究
目的:建立湖北贝母药材的质量标准,为该药材的质量控制提供可靠的参考方法.方法:采用薄层色谱法,以湖贝甲素为对照品,建立其薄层鉴别方法;采用HPLC-ELSD建立湖北贝母药材的高效液相特征图谱及贝母素乙含量测定的分析方法,并对10批不同产地湖北贝母药材的总灰分、酸不溶性灰分、杂质、浸出物、水分、重金属含量进行测定.结果:10批不同产地湖北贝母药材的薄层色谱中与对照品湖贝甲素相应的位置上,显相同颜色的斑点,薄层色谱检出14个共有色谱条带.在高效液相色谱中检出4个共有特征峰,不同批次湖北贝母特征图谱相似度均大于0.9,但相对峰面积差异明显.HPLC含量测定方法学结果表明贝母素乙分离度良好,在60 ～ 2400 mg·L-具有良好的线性关系,R2 =0.999 2(n=14),加样回收率为101.50％,RSD为3.35％.结论:该方法简便、高效、重现性好,为综合控制湖北贝母药材的质量提供了可行的分析方法.
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湖北贝母体外抑菌活性研究
目的:研究湖北贝母不同提取物和总生物碱及单体生物碱的体外抑菌活性.方法:通过醇提法和萃取法得到湖北贝母的不同提取物和总生物碱,采用二倍稀释法测定该提取物和总生物碱及单体生物碱对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、枯草芽孢杆菌和乙型溶血性链球菌的体外小抑菌浓度(MIC).结果:湖北贝母95％乙醇提取物的抑菌作用强于60％乙醇提取物;湖北贝母总生物碱及单体生物碱对革兰氏阳性菌的抑菌作用强于革兰氏阴性菌.结论:湖北贝母醇提物和总生物碱以及单体生物碱均有一定的抑菌活性.
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大孔吸附树脂分离纯化湖北贝母总生物碱的研究
目的:研究湖北贝母总生物碱的纯化方法.方法:采用50%乙醇提取,D101型大孔吸附树脂分离纯化的方法.结果:提取物中的湖北贝母总生物碱含量达到74%.结论:D101型大孔吸附树脂适合分离纯化湖北贝母总生物碱.
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湖北贝母的本草考证及其品质评价
湖北贝母Fritillaria hupehensis Hsiao et K.C.Hsian，主产于湖北省恩施自治州及重庆市奉节县等地，栽培和使用历史悠久，为湖北及四川、重庆市的地方常用药材。湖北贝母味苦、凉，具有清热润肺、化痰止咳的功效，用于治疗热痰咳嗽、阴虚肺燥、痰核瘰疬、痈疽肿毒等证［1］。四川省和湖北省分别于1980年和1985年以湖北贝母载入《四川省中草药标准》和《湖北省药品标准》，1991年载入《中华人民共和国卫生部药品标准》。湖北贝母形状大小差异较大，小粒者，其形状及大小与川贝母极相似，俗称尖贝母；大粒者似浙贝母，俗称大贝母，易误作浙贝母入药。故仅以形状大小不同区分两种贝母，并不恰当，笔者对湖北贝母进行了本草考证，并根据现代研究资料进行品质评价，力图为正确使用湖北贝母提供一定依据。
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湖北贝母总生物碱平喘作用及其机理的研究
目的 研究湖北贝母总生物碱对豚鼠的平喘作用及其机理.方法 采用豚鼠整体动物引喘和豚鼠离体气管螺旋条的实验方法,分别研究湖北贝母总生物碱对乙酰胆碱-组胺(Ach-Histamine)整体动物的平喘作用、对离体气管平滑肌基础张力的影响及对各种致痉剂收缩气管平滑肌的抑制作用.结果 湖北贝母总生物碱在4 mg/kg剂量下灌胃给药1 h后,能明显延长Ach-Histamine所致豚鼠哮喘的引喘潜伏期,表现出良好的平喘效应;对豚鼠离体气管平滑肌的基础张力无显著影响;对Histamine和5-HT引起的收缩也无明显的抑制作用;但对于Ach引起的收缩,湖北贝母总生物碱在2.5 mg/L的浓度时即呈现出显著的抑制作用(P<0.01),对20 μmol/ L Ach的IC50为13.130 4 mg /L;湖北贝母总生物碱可使Ach量效累积曲线向右平移,而大效应不降低.结论 湖北贝母总生物碱对豚鼠具有较强的平喘作用,其机理可能与竞争性拮抗气管平滑肌M受体从而扩张气管平滑肌作用有关.
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湖北贝母有效部位提取工艺的研究
目的 优选湖北贝母有效部位即总生物碱的佳提取工艺.方法 采用正交实验设计,测定不同提取条件所得总生物碱的含量及收率,结合各实验样品药理效应强弱的评价,优选出湖北贝母有效部位的佳提取工艺.结果 当提取条件为以50%EtOH提取3次,1 h/次,4倍体积/次时,湖北贝母有效部位总生物碱的收率高,其镇咳和平喘的综合药效强,经过稳定性验证后,将该工艺确定为湖北贝母有效部位的佳提取工艺.结论 该研究以化学指标和药效指标相结合的方法来优选湖北贝母有效部位的佳提取工艺,相对单纯化学指标来说更为科学和可信,可以有效防止以单纯化学指标优选出的工艺与药理效应不一致时的偏差,使优选出的工艺真正为活性导向下药材有效部位的佳提取工艺.
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湖北贝母中生物碱在蒸发光散射检测器中响应因子一致性考察
目的 考察湖北贝母中生物碱在蒸发光散射检测器(ELSD)中的响应因子是否一致,进而利用ELSD响应因子的一致性建立湖北贝母的含量测定方法,同时测定湖贝甲素、贝母素乙和贝母素甲的含量.方法 采用Thermo Acclaim 120C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相:乙腈-0.02％二乙胺溶液(74∶26),流速1.0 ml·min-1,检测器为Alltech2000ES ELSD,漂移管温度为93℃,载气流速为2.4L·min-1,对数外标两点法定量.结果 通过测定3种生物碱的线性方程,考察其响应因子.3种物质的线性方程间无显著性差异(P＞O.05).结论 湖北贝母中生物碱成分在ELSD中的响应因子一致,可尝试用“一测多评”的质量评价模式用于湖北贝母药材的质量控制.
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湖北贝母中3种生物碱含量的高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定
目的 利用高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定湖北贝母中湖贝甲素、贝母素乙和贝母素甲的含量.方法 Agilent ZORBAX SB-C18 (4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相:乙腈-0.02％二乙胺溶液(75:25),流速1.0 ml· min-1,检测器为Alhech 2000 ELSD,漂移管温度为88℃,载气流速为2.2L·min-1,对数外标两点法定量.结果 湖贝甲素在0.304～3.648μg范围内呈线性,回收率为100.25％,RSD为2.16％;贝母素乙在2.132 ～ 25.584 μg范围内呈线性,回收率为97.65％,RSD为1.89％;贝母素甲在0.297～3.562 μg范围内呈线性,回收率为96.82％,RSD为1.93％.结论 测定方法分离好,重现性分离度均符合要求,可用于湖北贝母药材的质量监控.4
关键词： 湖北贝母 湖贝甲素 贝母素乙 贝母素甲 高效液相色谱-蒸发光散射检测法 -
湖北贝母与川贝母随机扩增引物DNA的鉴别
目的 为鉴定湖北贝母,准确区分湖北贝母和暗紫贝母(正品贝母)寻找一种新的鉴别手段.方法 采用随机扩增引物DNA(RAPD)法,筛选适于鉴别湖北贝母、暗紫贝母的随机引物.结果 总共筛选了20条随机引物,得到一条引物S1能准确区分湖北贝母、暗紫贝母,并且其特异性非常高.结论 可利用随机引物S1通过RAPD进行DNA指纹图谱研究准确区分湖北贝母、暗紫贝母.
关键词： 湖北贝母 暗紫贝母 随机扩增引物DNA(RAPD) -
湖北贝母茎叶非生物碱成分的研究
目的 研究湖北贝母茎叶部分非生物碱部位的化学成分.方法 对湖北贝母茎叶部分的乙醇提取物进行萃取分离,分成生物碱部位和非生物碱部位,应用溶剂极性梯度从非生物碱部位获得了几个化学部位,并应用硅胶柱层析对醋酸乙酯部位进行分离纯化,从中分离出5个单体化合物,应用质谱、氢谱、碳谱等现代波谱技术加以鉴定.结果 鉴定得到5个化合物,分别为CH3(CH2)26CH3、CH3(CH2)24OH、CH3(CH2)20 COOH、β-谷甾醇(β-sitosterol)和胡萝卜苷(daucosterol).结论 5个化合物均为首次从湖北贝母茎叶部分分离所得,其中前3个化合物为首次从贝母属植物中获得.
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不同环境对湖北贝母总生物碱含量与指纹图谱的影响
目的 确定湖北贝母生长的佳生长年限、规格及施肥方案,为湖北贝母GAP研究提供基础资料.方法 对不同生长年限、规格及施用不同肥料的湖北贝母采用酸性染料比色法,在415 nm波长下测定紫外吸收,比较其总生物碱含量.采用高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)检测法,梯度洗脱得到指纹图谱,比较色谱图及单体生物碱的含量. 结果一年生大粒的湖北贝母总生物碱含量高,为0.526%(P＜0.05),一年生小粒样品湖贝甲素含量高,为0.069%,浙贝甲素以一年生大粒的贝母含量高,为0.065%(P＜0.05).不施肥组的湖北贝母总生物碱、湖贝甲素、浙贝甲素含量均为高,分别是0.551%,0.060%,0.042%.结论 在其他条件相同的情况下,一年生大粒且不施肥组的湖北贝母品质要优于其他组的湖北贝母.
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顶空气相色谱法测定湖北贝母提取物中的有机溶剂残留量
目的:建立湖北贝母提取物中D101型大孔吸附树脂有机溶剂残留量的检测方法.方法:采用顶空气相色谱法,以HP-1(30 m×0.25 mm,0.25μm)毛细管柱分离、氢火焰离子化检测器检测.结果:6种大孔吸附树脂残留溶剂在16 min内能很好的分离;该方法的精密度RSD均小于6.0%;加样回收率为90.8%～105.8%;峰面积与浓度均有良好的线性关系.结论:该方法操作简便、准确可靠,可控制湖北贝母提取物中D101型大孔树脂有机溶剂残留量.
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不同产地的湖北贝母中湖贝甲素的含量测定
目的考察不同产地的湖北贝母中湖贝甲素的含量,确定湖北贝母的佳产地.方法采用双波长薄层扫描法对7种不同产地的湖北贝母中湖贝甲素的含量进行了测定.结果不同产地的湖北贝母中湖贝甲素的含量差异很大,以恩施石窑、板桥,巴东绿葱坡所产的含量较高,其中恩施石窑、板桥所产的含量高.结论恩施石窑、板桥可以定为湖北贝母的佳产地.
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湖北贝母的净制工艺研究
目的 优选湖北贝母的佳净制工艺.方法 采用正交试验法,以多种指标综合评价湖北贝母,从而确定佳净制工艺.结果 湖北贝母的佳净制工艺为:水处理工艺,加水量1倍,水洗次数2次,时间2min;干燥工艺,温度50℃,时间为5h,翻动2次.结论 本研究制定的湖北贝母的净制工艺稳定可行.
