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僵蚕提取液中蛋白质和草酸铵等成分的定量分析
目的对僵蚕提取液中三种形态的含氮物质、草酸盐、总离子浓度和还原性物质进行含量测定.方法采用离子交换和经典化学分析方法.结果僵蚕提取液中固形物含量为38.52%,RSD=0.92%(n=3);总氮、铵态氮和酰胺态氮含量分别为5.798%、0.868%、0.196%,蛋白质含量为29.74%,占总固形物的77.2%;草酸铵含量为3.85%(不包括0.96%的草酸根对应的其他盐),占总固形物的9.98%;总离子浓度按一价离子计为1.099 mol/L;能被高锰酸钾在酸性条件下氧化的还原性物质含量相当于1.015 mol/L的草酸盐浓度,其中阳离子型、阴离子型和非离子型还原物质浓度占总还原物质的摩尔百分率分别为7.84%、64.16%和不低于28.0%.结论本研究为进一步研究僵蚕提取液的抗凝作用和药理作用机理奠定了一定的物质基础.
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僵蛹发酵方法改进的研究
目的 改进中药僵蛹的发酵方法,以提高其活性成分草酸铵的含量.方法 以蚕蛹为发酵基质,通过接入白僵菌液体菌种制备形成僵蛹.以草酸铵的含量为主要考察指标,结合基质转化率,研究不同接种量对发酵工艺的影响,并与生药僵蚕中草酸铵的含量进行比较.结果 与空白对照比较,随着白僵菌接种量的加大,僵蛹中草酸铵的含量增加,其中以接种量为 20%时含量达大,为 7.72%,在 5% ~ 25%接种量范围内,僵蛹中草酸铵的含量均高于四个不同产地生僵蚕的含量.结论 该固体发酵法简单、易行、可控,不易污染杂菌,能有效地提高活性成分草酸铵的含量,制备形成的僵蛹某种程度上可作为僵蚕的代用品.
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鹅管石药材的质量探讨
目的 探讨鹅管石药材的质量标准.方法我们选用10批鹅管石药材样品,采用严格的操作方法,进行性状比较和理化鉴别,每批做3遍.结果 用稀盐酸、氢氧化钙、草酸铵和醋酸试剂对钙盐的鉴别为明确.结论 腔肠动物树珊瑚科栎珊瑚Balanophyllia SP.或笛珊瑚Sysingora SP.的石灰质骨骼为鹅管石药材的正品.
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复方苷草酸铵致荨麻疹型药疹1例
患者,女,15岁,学生.主因左前臂热牛奶烫伤9 d,创面皮疹伴瘙痒3 d就诊.查体:左前臂可见约1%烧伤创面.创面布满针头至栗粒大小丘疱疹,部分皮疹糜烂,有少量渗出,无出血.丘疹间表皮生长良好.其它皮肤无异常,无发热.诊断为左前臂烧伤,创面湿疹.湿疹是多种内外因素激发引起的一种Ⅳ型变态反应.经常因创面瘙痒,搔抓而诱发.入院后给予2%硼酸水湿敷创面,每日4次,每次2 h.同时给予静脉滴注复方苷草酸铵注射液.
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中药僵蚕炮制工艺研究
目的 优选蜜麸炒僵蚕的佳炮制工艺条件.方法 以乙醇浸出物、草酸铵和白僵菌素三者的含量为指标,采用正交实验,考察炒制时间、炒制温度和蜂蜜用量对蜜麸炒僵蚕工艺的影响.结果 蜜麸炒僵蚕的佳炮制工艺条件为A3B1C1,即每300g僵蚕用蜂蜜20 g,炒制温度为180℃,炒制时间为6min.结论 该条件下所得的炮制品质量可靠,优选的炮制工艺稳定可行.
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两种血小板稀释液的性能比较
血小板计数是研究止血与凝血障碍的重要指标之一，我国由于多年的习惯，很多医院均采用许汝和法血小板计数。但在计数过程中不可避免产生误差，利用改良草酸铵法，则能准确地计数血小板。1 检测对象 患者153例，其中血小板正常患者128例，血小板减少患者25例，包括肝炎8例，肝硬化3例，血小板减少性紫癜4例，再生障碍性贫血2例，癌症化疗8例，健康人对照50名。2 试剂与方法2.1 草酸铵改良液 草酸铵1.0 g EDTA-Na2 0.108 g，加蒸馏水溶解后，加入0.2 mL氯仿，再加蒸馏水至100 mL。轻轻振荡促使氯仿溶解(氯仿的溶解度是20 ℃水温时每升水8.2 mL)。避光保存。待2～3 d氯仿溶解后，加入4 g/L的结晶紫乙醇溶液20 μL。有定性滤纸滤过后室温避光保存。2.2 许汝和液(复方尿素液)
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两种方法血小板计数结果分析
目的:探讨血小板自动计数仪与草酸铵溶血法对血小板计数结果的差异.方法:选取进行血小板计数的患者196 例,分别采用两法进行血小板的计数.结果:两方法对血小板计数结果存在一定差异,血小板自动计数仪法,小于100×109/L 的患者为60 例,而草酸铵溶血计数法为58 例,但两者之间差异无统计学意义(P＞0.05 );草酸铵法血小板计数数量总体高于自动计数仪法,两者差异无统计学意义(P＞0.05 ),但其标准差差异有统计学意义(P＜0.05 ),其中,自动计数法的标准差为3.2,而草酸铵溶血法的标准差为5.8,显著高于自动计数法.结论:血小板自动计数仪与草酸铵计数法在绝对数量差异无统计学意义(P＞0.05 ),且其重复性优于草酸铵计数法,但因为自动计数仪部分出现假性低值现象,平时工作中应高度重视,如果患者计数出现明显异常,须用草酸铵计数法进行验证.
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血液分析仪血小板计数影响因素的探讨
血小板计数对血栓、出血性疾病和血小板减少性疾病的诊断与治疗有重要的参考价值.血小板计数参考方法:世界卫生组织(WHO)推荐的血小板计数方法,是用1g/dl的草酸铵液作溶血稀释剂,在相差显微镜下,用血细胞计数板人工计数.
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HPLC法测定不同产地僵蚕中草酸铵含量
目的:比较不同产地僵蚕和炒僵蚕中草酸铵的含量.方法:采用反相高效液相色谱法,色谱务件为色谱柱:Diamonsil 5μC18250× 4.6mm Dikma;流动相:磷酸氢二铵水溶液(5 g·L-1,pH 5.30);流速:0.5mL·min-1;柱温:30℃;检测波长:214nm.结果:草酸铵在15.0～150.0μg·ml-1 范围内,峰面积与浓度呈良好的线性关系,r=0.998(n=6),平均加样回收率为97.07%,RSD=2.67%(n=9).结论:炮制僵蚕中草酸铵的含量普遍低于僵蚕生品;僵蚕生品中草酸铵的含量2.21%～5.82%,炮制品2.31%～5.78%.
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3种表面活性剂对僵蛹制备工艺的影响
目的 考察3种表面活性剂对僵蛹制备工艺的影响.方法 以活蚕蛹和死蚕蛹为发酵基质,通过接种四川攀枝花当地僵蚕分离的白僵菌孢子,制成僵蛹.研究不同表面活性剂对制备工艺的影响,以草酸铵和白僵菌素含有量为药效指标,按照《中国药典》(2015)第一部僵蚕项下检验项目检验僵蛹,并与市售僵蚕的质量进行比较.结果 与浸泡生理盐水的对照蚕蛹比较,使用20％聚乙二醇400浸泡可以促进白僵菌孢子在蚕蛹表面萌发生长,僵蛹草酸铵含有量提高11％,白僵菌素含有量提高583％.僵蛹中总灰分和酸不溶性灰分高于市售僵蚕,浸出物和黄曲霉毒素总量低于市售僵蚕.结论 该工艺可以有效分离当地白僵菌,使用聚乙二醇400能缩短制备僵蛹时间,减低杂菌污染,显著提高白僵菌素含有量,同时提高草酸铵含有量,使用麸皮作为载体,为僵蛹炮制工艺提供基础.
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不同炮制方法对僵蚕指标性成分的含量影响研究
目的 考察不同炮制方法对僵蚕中游离氨基酸、草酸铵的含量影响,方法以2,4-二硝基氟苯(DNFB)为衍生剂,采用柱前衍生高效液相色谱法测定僵蚕不同炮制品中游离氨基酸和牛磺酸的含量;采用薄层色谱法对各炮制品进行鉴剐比较;采用高效液相色谱法测定僵蚕各炮制品中草酸铵的含量.结果 各样品中游离氨基酸的含量以谷氧酸、精氨酸、脯氨酸、丙氨酸和酪氨酸为高.僵蚕各炮制品的薄层色谱未见明显差异,但僵蚕经过炮制后体内游离氨基酸和草酸铵的含量都有不同程度的下降.炮制品中游离氨基酸的总量约为生品总量的50%～65%,其中麸炒品低,仅为生品总量的48.8%.就草酸铵而言,各炮制品中草酸铵的含量约为生品总量的60%～82%,其中糖麸炒僵蚕的含量低,姜炙僵蚕、姜麸炒僵蚕其次,而麸炒僵蚕中草酸铵含量下降的少.结论 不同炮制方法对僵蚕各指标性成分含量都有影响,但影响幅度不尽相同.不同的炮制方法功效各异,各有所长,应在实际运用中根据需要灵活选择.
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草酸铵对僵蚕抗凝作用的影响
目的:研究草酸铵对僵蚕抗凝作用的影响.方法:以凝血酶时间(TT)为指标,用添加法比较不同浓度草酸铵对僵蚕提取液和凝胶分离液抗凝作用的影响.结果:添加草酸铵浓度在1.8～21.3 mg/ml范围内,对固形物含量15.8～31.6 mg/ml的提取液和14.6～29.1 mg/ml的凝胶分离液的TT值增加成正相关.结论:草酸铵对僵蚕提取液、凝胶分离样品的抗凝作用均有增强作用,随提取液浓度降低影响增大,而随凝胶分离液浓度增大影响增大.
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草酸铵对青霉素致痫大鼠的影响
目的:研究草酸铵对青霉素致大鼠癫痫模型的影响.方法:32只大鼠随机均分为4组:假手术组、模型对照组、小剂量草酸铵实验组(30 mg/kg)和大剂量草酸铵实验组(60 mg/kg),各组均记录脑电(痫样波频率、幅度及总持续时间),HE切片计数海马CA1、CA3区残存正常神经元.结果:模型对照组病理切片中大鼠海马区结构严重破坏,存活锥体细胞数明显少于假手术组(P＜0.01),痫样放电总时间明显长于假手术组(P＜0.01),痫样放电频率和幅度加强.大、小剂量实验组痫样放电频率和幅度均减弱,放电总时间均较模型对照组明显减少(P＜0.01);两组相应脑区的存活锥体细胞数则较模型对照组明显增多(P＜0.01).结论:草酸铵能抑制癫痫大鼠的痫样放电频率、幅度和总时间,能明显抑制海马区锥体层细胞坏死,对癫痫所致的脑部损伤有缓解作用.
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高效液相色谱法测定僵蚕中草酸铵的含量
目的 建立高效液相色谱法测定僵蚕中草酸铵的含量.方法 用CaCl2沉淀法作样品前的处理;色谱条件为色谱柱:Sino Chrom ODS-BP(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:磷酸氢二铵水溶液(5 g·L-1,pH 2.50);流速:0.5 mL·min-1;柱温:25℃;检测波长:214 nm.结果 草酸铵在15.0～150.0μg·mL-1范围内,峰面积与浓度呈良好的线性关系,r=0.995(n=6),平均回收率为96.5%,RSD为1.5%(n=5).结论 方法简便可靠,灵敏,专属性好,可用于僵蚕中草酸铵的含量测定.
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僵蚕抗凝活性及其成分的分析
目的对僵蚕不同部位抗凝活性及其主要成分的含量进行测定,为僵蚕的质量控制和用药提供依据.方法用凝血酶时间(TT)和经典化学方法为指标测定生、制僵蚕以及制僵蚕的不同部位的抗凝血活性大小以及总氮、铵态氮、蛋白质和草酸铵的含量.结果制僵蚕的抗凝活性、蛋白质和草酸铵含量均大于生僵蚕.制僵蚕不同部位凝血酶时间和蛋白质含量比较,其顺序是:透明胶状物＞全药＞僵蚕皮＞绿褐色物.结论生、制僵蚕以及僵蚕不同部位抗凝活性和蛋白质等成分含量不一致,建议根据用药目的选择生、制僵蚕,作为抗凝药物应用时,可选择制僵蚕或其某一个或几个部位.
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僵蚕两种入药形式下的化学成分溶出性能与抗惊厥作用比较
目的:对僵蚕煎液和粉末冲服两种入药形式下化学成分溶出性能与抗惊厥作用的差异性进行研究,为僵蚕入药方式的选择提供参考.方法:测定僵蚕煎液和粉末仿生胃液的干浸膏得率,采用高效液相色谱法测定僵蚕煎液和粉末仿生胃液中草酸铵的含量,采用二喹啉甲酸法测定僵蚕煎液和粉末仿生胃液中蛋白质含量.取小鼠按随机数字表法分为正常组(1%羧甲基纤维素钠溶液)、模型组(1%羧甲基纤维素钠溶液)、阳性组(苯妥英钠,2 mg/kg)以及僵蚕煎液和粉末混悬液的高、中、低剂量组(以生药计分别为0.75、1.5、3 g/kg),每组20只;灌胃给药60 min后给予小鼠电刺激,记录小鼠惊厥率.结果:僵蚕煎液与粉末胃液溶液的干浸膏得率分别为22.08%、26.40%(P<0.05),草酸铵含量分别为11.22%、16.83%(P<0.05),蛋白质含量分别为3.39%、4.92%(P<0.01).与正常组比较,模型组小鼠惊厥率显著升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组小鼠的惊厥率均显著降低(P<0.05或P<0.01),且僵蚕粉末混悬液组小鼠惊厥率均低于同剂量煎液组.结论:僵蚕粉末仿生胃液中化学成分的溶出性能优于煎液,且僵蚕粉末抗惊厥效果较煎液好.
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10批市售僵蚕商品药材质量评价
目的:采用多指标评价市售僵蚕药材质量状况,为临床合理用药提供参考.方法:按照2015年版《中国药典》(一部)对市售10批僵蚕药材外观性状进行观察,对水分、总灰分含量进行测定,采用傅里叶变换红外光谱法对药材进行鉴别,采用紫外-可见分光光度法和高锰酸钾滴定法分别测定有效成分蛋白质和草酸铵的含量.结果:10批僵蚕的水分含量在2.84%~4.07%之间(RSD<5%,n=3),总灰分含量在7.79%~34.32%之间(RSD<5%,n=3);紫外和红外光谱图基本相似,均能反映出蛋白质多肽类物质的特征峰;蛋白质含量在29.87%~57.19%之间(RSD<0.5%,n=3),草酸铵含量在0.27%~4.77%之间(RSD<5%,n=3).结论:10批市售僵蚕均为正品且为炮制品;水分含量符合2015年版《中国药典》(一部)规定,但总灰分含量未达其要求;其主要成分为蛋白质多肽类物质,但有效组分蛋白质多肽与草酸铵含量差异较大.
关键词： 僵蚕 傅里叶变换红外光谱法 蛋白质 草酸铵 -
两种白细胞稀释液在白细胞计数中的应用
目的 探讨1％草酸铵和2％冰醋酸两种白细胞稀释液在白细胞计数中的差异.方法 随机收集21份血液标本,分别用两种白细胞稀释液进行手工计数及仪器计数,比较其测定结果是否存在统计学差异.结果2％冰醋酸稀释的手工计数和仪器计数结果依次为0.5281±0.0308和0.5086±0.3109,1％草酸铵稀释的手工计数和仪器计数结果依次为0.5327±0.3378和0.5227±0.3333.手工-冰醋酸、手工-草酸铵、仪器-冰醋酸、仪器-草酸铵计数结果的相关性分别为0.8353、0.3190、0.3586和0.5764.1％草酸铵稀释液计数结果高于2％冰醋酸稀释液计数结果,但手工法和仪器法之间无统计学差异(P>0.05),两种稀释液计数结果之间无统计学差异(P>0.05).结论 1％草酸铵与2％冰醋酸作为白细胞计数的稀释液在检验工作及临床教学中可以通用.
