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四川省输入性卵形疟原虫wallikeri亚种实验室检测分析
目的 鉴定四川省疑似输入性卵形疟原虫感染病例wallikeri亚种感染情况,并对2014-2017年全省1079份复核血样卵形疟原虫wallikeri亚种感染情况进行分析.方法 对2018年1-4月四川省10例疑似输入性卵形疟原虫感染病例进行血涂片镜检、快速诊断试纸条(RDT)检测和巢式PCR检测并进行测序分析,同时回顾性检测2014-2017年全省1079份复核血样卵形疟原虫wallikeri亚种感染情况.结果 2018年1-4月四川省10例疑似输入性卵形疟原虫感染病例镜检结果均为卵形疟原虫阳性,其中2例存在恶性疟原虫混合感染;RDT检测结果均为疟原虫阳性;常规巢式PCR检测除2例结果为恶性疟原虫阳性外,其余均为阴性;采用卵形疟原虫wallikeri亚种特异性引物进行PCR检测,10例均为阳性,序列分析结果显示为卵形疟原虫wallikeri亚种.对2014-2017年全省1079份复核血样进行回顾性检测,发现2例卵形疟原虫wallikeri亚种与恶性疟原虫混合感染病例,均为2017年报告,此前检测结果为单纯恶性疟原虫感染.结论 四川省首次鉴定发现输入性卵形疟原虫wallikeri亚种感染病例.
关键词： 卵形疟原虫wallikeri亚种 巢式PCR 输入性疟疾 实验室诊断 四川省 -
巢式荧光PCR结合高分辨熔链曲线检测结核分枝杆菌及其亚型
目的：建立一种检测结核分枝杆菌及其亚型的PCR方法。方法：根据人型及牛型结核分枝杆菌硝酸还原酶（nitrate reductase，narGHJI）基因启动子区215位上T-C的转换，设计巢式荧光PCR结合高分辨熔链曲线检测结核分枝杆菌及其亚型，测定其敏感性，并用琼脂糖凝胶电泳验证观察巢式荧光PCR产物的特异性。以人型结核杆菌标准株（H37 Ra）、卡介苗培养菌液、人型临床分离株和牛型临床分离株为标本，高分辨熔链曲线分析结核分枝杆菌亚型正态化熔链曲线及熔链温度。结果：巢式荧光PCR特异性地检出结核分枝杆菌narGHJI基因，其敏感性比荧光定量PCR高10倍左右；人型及牛型结核分枝杆菌narGHJI基因PCR产物的高分辨熔链曲线分成2个不同组合，熔链温度分别为（83．08±0．08）℃和（83．96±0．09）℃，差异有统计学意义（t＝217．23，P＜0．05）。结论：成功建立检测结核分枝杆菌及其亚型的巢式荧光PCR结合高分辨熔链曲线法。
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人疱疹病毒6型感染与神经胶质瘤关系的初步研究
目的:研究人疱疹病毒6型(human herpesvirus-6,HHV-6)感染与神经胶质瘤的关系.方法:巢式PCR法检测40例神经胶质瘤样本和13例正常脑组织样本中HHV-6、人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)、HHV-7 DNA序列.免疫组化染色法检测神经胶质瘤样本和正常脑组织样本中HHV-6、HCMV、HHV-7抗原的表达.结果:巢式PCR法检测结果显示,神经胶质瘤组织HHV-6DNA阳性率为42.5％,正常脑组织HHV-6 DNA阳性率为7.7％(P=0.020),神经胶质瘤组织HCMV、HHV-7DNA阳性率分别为20.0％和5.0％,正常脑组织未检测到HCMV和HHV-7DNA(P值分别为0.087和0.566).进一步用免疫组化染色法检测HHV-6早期抗原p41的表达,神经胶质瘤组织阳性率为27.5％,正常脑组织末见阳性表达(P=0.030).同时检测HHV-6晚期抗原gp 116/64/54的表达,神经胶质瘤组织阳性率为32.5％,ZF常脑组织未见阳性表达(P=0.014).用HCMVpp65抗体进行免疫组化染色后发现其在神经胶质瘤中阳性率为12.5％,正常脑组织未见阳性表达(P=0.229).HHV-7 pp85抗原在神经胶质瘤样本和正常脑组织样本中均未检出阳性表达.结论:根据PCR和免疫组化的检测结果,HHV-6感染在神经胶质瘤和正常脑组织中具有显著性差异,HHV-6感染在神经胶质瘤的病因和发展过程中起了一定作用.
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浙江省鼠形动物蜱源立克次体感染状况调查
目的：了解浙江省不同类型地理环境中鼠形动物蜱源立克次体的感染状况。方法2009-2011年在安吉县、金东区和天台县用夹夜法捕获鼠形动物，进行分类鉴定、无菌采集肝脾标本，并采用巢式PCR方法检测无形体属与埃立克体属16SrRNA 以及立克次体属（包括斑疹伤寒群和斑点热群）与东方体属热休克蛋白基因groEL。结果3个调查点共捕获鼠形动物14种851头，社鼠（30.32％）、黑线姬鼠（18.80％）和青毛鼠（11.75％）为主要优势种，其中金东区、安吉县和天台县的优势鼠种分别为社鼠（39.20％）、青毛鼠（32.05％）和黑线姬鼠（59.57％）。562份肝脾标本中检出立克次体48份，阳性检出率为8.54％；其中无形体属占3.38％，斑疹伤寒群占1.78％，恙虫病东方体属占1.78％，埃立克体属占1.07％，斑点热群占0.53％。金东区和安吉县无形体属检出率较高为4.76％和4.27％，斑点热群仅在天台县检出。社鼠的立克次体阳性检出率高为14.97％。同一鼠形动物可存在多种立克次体混合感染。结论浙江省不同类型地理环境鼠形动物中广泛存在立克次体感染，不同地理位？和不同鼠形动物的蜱源立克次体检出率不同。
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一例输入性三日疟的实验室诊断报告
目的 分析一例输入性三日疟病例的实验室检测确诊病例.方法 对病例的流行病学病史作回顾分析,采集血样作血涂片镜检和疟疾快速诊断(RDT),由浙江省疾病预防控制中心通过巢式PCR检测确诊. 结果 该病例在本次就诊前一个月,刚从尼日利亚疟疾流行区务工返家,在国外务工期间曾有"疟疾"发病史,回国前后发病间隔2周左右.本次就诊外周血涂片镜检显示为恶性疟感染,RDT结果排除恶性疟感染,巢式PCR检测扩增出三日疟原虫条带后确诊为三日疟.结论 疟疾实验室诊断需要综合判断,血涂片镜检和RDT可初步提示疟疾的类型,巢式PCR检测有助于不同疟种感染的鉴别确诊.
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浙贝母土壤真菌DNA提取方法的优化
[目的]由于土壤理化性质的复杂性和真菌细胞壁结构的特殊性,从土壤样品中提取真菌基因组DNA往往比较困难,本实验通过方法优化以寻找适合浙贝母土壤真菌DNA的佳方法.[方法]分别采用传统玻璃珠法,Ultra CleanTM土壤DNA提取试剂盒法及改进的试剂盒法等3种方法,提取宁波浙贝母种植区的根际土壤微生物总DNA,利用巢式PCR扩增真菌DNA片段.[结果]3种方法均可提取土壤微生物总DNA.其中改进的试剂盒法提取的DNA电泳结果条带清晰,试剂盒法提取的DNA电泳结果次之,传统玻璃珠法提取的DNA电泳条带不清晰,且有拖尾.对上述三种方法所提取的DNA做巢式PCR分析真菌特异性,传统方法电泳无目的条带,试剂盒法只有第一次PCR电泳有目的条带,只有改进的UltracleanTM土壤DNA提取试剂盒法终获得了350 bp左右的目的条带,而且利用变性凝胶梯度电泳技术(Denatured gradient gel electrophoresis,DGGE)成功地检测到不同种源以及根际与非根际土中微生物的差异.因此认为改进的试剂盒法为提取土壤真菌DNA的优选择.[结论]在土壤真菌DNA提取中,合适的振荡方法是土壤真菌能否破壁的关键性因素.
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组织细胞性坏死性淋巴结炎中微小病毒B19的检测及其意义
目的研究人微小病毒B19感染与组织细胞性坏死性淋巴结炎(histiocytic necrotizing lymphadenitis,HNL)的关系.方法采用双盲法在32例真性HNL患者及13例正常对照淋巴结活检组织中用巢式PCR和免疫组化染色检测B19病毒基因组DNA和病毒蛋白.结果在32例真性HNL患者淋巴结中,B19病毒DNA和病毒蛋白阳性率分别为90.0%和59.4%,而在对照淋巴结中,两者阳性率分别为53.8%和23.1%.统计学分析显示在真性HNL中B19病毒基因组DNA及病毒蛋白的阳性率更高(P<0.05).结论 B19病毒在真性HNL中有更高感染率,推测与真性HNL的发病可能有一定关系.
关键词： 组织细胞性坏死性淋巴结炎 微小病毒B19 巢式PCR 免疫组织化学 -
上海地区献血人群隐匿性HBV感染状况
目的 了解HBsAg阴性、抗-HBc阳性的献血人群中HBV DNA感染情况.方法采用酶联免疫法(ELISA)检测5 121份HBsAg阴性的合格献血者血清抗-HBc和抗-HBc阳性反应滴度;对抗-HBc阳性样本采用ELISA法检测血清抗-HBs,采用巢式PCR三区段扩增法检测HBV DNA.结果HBsAg阴性的献血人群中抗-HBc阳性反应率达26.4%,其中抗-HBs阴性占16.4%;抗-HBc阳性样本中PCR扩增出1例HBV DNA阳性样本,抗-HBc滴度为1∶8,血清抗-HBs阴性.结论抗-HBc检测用于献血者筛查的特异性太低,高度敏感和特异的核酸检测方法可有效检出隐匿性HBV感染,进一步降低输血传播HBV风险.
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合格献血者血浆HBV残留情况分析
目的 调查合格献血者血浆残留HBV的阳性率.评估输血后HBV感染风险.方法 收集945份合格献血者的血浆.采用ELISA法检测HBV核心抗体(抗-HBc)l提取血浆DNA,采用巢式PCR方法检测HBV DNA.结果 血浆标本以1;5稀释后抗-HBc阳性率为19.68%,而1 : 50稀释后阳性率则为2.33%.共检测出HBVDNA阳性标本3例,其中1例抗-HBc阳性,另外2例抗-HBc为阴性.合格献血者中隐匿性HBV感染率约为0.32%.结论 我国合格献血者标本中仍有部分血浆有HBV残留,抗-HBc阳性标本中HBV DNA阳性率较抗-HBc阴性标本高,应引起重视.
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两种检测方法在间日疟和卵形疟诊断中的应用分析
目的 分析疟原虫镜检和巢式PCR检测间日疟和卵形疟效果.方法 收集2012～2016年输入性间日疟和卵形疟病例血样,巢式PCR检测疟原虫ssRNA基因,并与显微镜检结果进行比对.结果 显微镜检和巢式PCR检测71份血样,间日疟、卵形疟、混合感染分别占74.6％、25.4％、0％和63.4％、29.6％、7％,符合率为81.7％;亚洲23份血样,镜检与巢式PCR均为间日疟,符合率为100％,巢式PCR检测非洲血样48份,间日疟、卵形疟和混合感染分别占45.8％、43.8％和10.4％,镜检与巢式PCR符合率为72.9％;巢式PCR检测26份卵形疟,经典curtisi、变种waIIikeri和混合感染分别占80.8％、11.5％和7.7％,检出变种waIIikeri总数占卵形疟19.2％.结论 巢式PCR检测疟原虫虫种鉴别优于传统镜检法,可提高疟疾病例诊断水平.
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日本血吸虫巢式PCR检测方法的建立
目的 探讨建立血吸虫巢式PCR(Nested-PCR assay)快速检测法.方法 针对血吸虫SjR2靶基因设计引物,建立巢式PCR反应体系,并与金标准的病原学方法对检测结果进行比较分析.结果 巢式PCR引物特异性好,可准确扩增日本血吸虫,通过比较分析,巢式PCR与病原学检测法一致性好.结论 巢式PCR检测法敏感性高、特异性好,可快速简便地检测日本血吸虫病.
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2015年重庆市3例输入性卵形疟原虫wallikeri亚种感染病例的实验室诊断
目的：分析重庆市2015年3例输入性卵形疟原虫wallikeri亚种感染病例病原、抗原及核酸检测过程，减少卵形疟原虫的漏诊和误诊。方法收集流行性病学资料及血样，按照WS259-2015疟疾的诊断标准对3例血样进行血涂片镜检、快速疟疾诊断试纸条检测（RDT）及巢式PCR检测。结果3例患者均为非洲务工归国人员，并都有疟疾发病史。血涂片镜检结果，3例血样均为疟原虫阳性。RDT检测结果3例均为除恶性疟以外其他疟原虫阳性。国家参比实验室推荐的巢式PCR检测DNA，3例均为阴性。用卵形疟原虫wallikeri亚种的种特异性引物的PCR检测，3例均为阳性。结论根据镜检、RDT和卵形疟原虫wallikeri亚种种特异性PCR检测确定，重庆市2015年首次发现了3例卵形疟原虫wallikeri亚种感染输入病例，为重庆地区首次发现。
关键词： 卵形疟原虫wallikeri亚种 巢式PCR 实验室诊断 重庆市 -
江西乙型肝炎病毒基因型分布及其与临床的相关性
目的 了解江西慢性乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布情况及HBV基因型与临床的关系.方法 选择HBV DNA阳性的慢性乙型肝炎患者血清150份,患者分别诊断为慢性HBV携带者、慢性肝炎轻度、中度、重度和慢性重型肝炎,每组30例,采用多对型特异性引物巢式PCR法检测HBV基因型.结果 本组慢性乙型肝炎患者HBV基因分型结果为B型118例(78.7%),C型31例(20.7%),D型1例(0.6%);在上述5组患者中C型比例分别为O%,16.7%,26.7%,30.0%和30.0%,其中慢性HBV携带者与其他组比,差异有统计学意义(P<0.05);B、C两基因型患者HBeAg阳性率分别为83.9%(99/1 18)和90.3%(28/31),HBeAb阳性率分别为16.1%(19/118)和9.7%(3/31),差异均无统计学意义(P>0.05).结论 江西地区HBV优势基因型以B型为主,C型次之,有少量的D型感染者.
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新疆汉族人群HBV基因型与临床病情的关系
目的了解新疆汉族人群乙型肝炎患者乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布及与临床病情的关系.方法新疆HBV感染者的血清226份,包括慢性乙型肝炎轻度、中度、重度、重型肝炎、肝硬化、肝癌患者.采用型特异性引物巢式PCR方法对血清中的HBV进行基因分型.结果新疆汉族人群HBV基因型以B、C混合型为主,占43.8%(99/226),B型31.46%(71/226),C型24.34%(55/226),未分型1例(0.44%),未见有A、D、E、F型分布.随机选取的4株HBV株经S基因序列的测定证实与本检测结果一致.C型HBV感染者的平均ALT、AST、γ-GT、AKP水平及HBV DNA浓度均高于B型、B+C型者(P＞0.05),C、B+C型TBIL平均水平高于B型,差异有统计学意义(P＜0.05).C型HBV感染者TP平均水平低于B、B+C型患者(P＞0.05).随着病情的加重,C型所占百分比逐渐高于B、B+C型,在LC、HCC中分别为36.4%,27.3%,C型感染者抗HBe阳性率逐渐增高,在HCC中B、C、B+C混合型者中抗HBe阳性率分别为26.7%、42.9%和32.6%(P＞0.05).结论新疆汉族人群HBV患者存在B、C与B+C基因型,以B、C混合型为主,基因型的分布与国内其它地方汉族人群相比有自身特点,且与临床病情有关,除TBIL外,各型在临床生化指标方面差异虽无统计学意义,但认为C型可能与较严重肝病有关,B+C型与HBV感染后病情的关系有待进一步明确.
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粪便中乙肝病毒的定量检测及其与乙肝病毒标志物的相关性研究
采集50例乙型肝炎未并发消化道出血患者的血液和粪便标本,采用酶联免疫法检测粪便和血清中乙肝病毒标志物( HBVM ), QIAmp DNA Stool kit 试剂盒法提取粪便总DNA,巢式 PCR 定性检测粪便中乙肝病毒 DNA ( HBV-DNA),实时荧光定量PCR( FQ-PCR)定量检测血清和粪便中HBV-DNA。根据血清HBVM 阳性的不同组合(感染模式)将50例患者分成3组,粪便乙肝表面抗原( HBsAg)阳性37例,血清HBsAg阳性46例,两者检出率差异有统计学意义(P<0.05),1例血清阴性者,粪便中HBsAg阳性。 FQ-PCR定量检测血清和粪便HBV-DNA含量分别为4.35±1.49和4.50±1.59。血清HBV-DNA检测,30例阳性(60%),粪便中HBV-DNA共检测出31例阳性(62%)。
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巢式PCR检测血清样品中HCV RNA的稳定性
目的 探讨保存时间对HCV RNA检测结果的影响.方法利用巢式PCR法检测在4℃条件下保存的已确诊HCV患者血清标本15例.结果 血清样本在4℃条件下保存4周所有标本均能够成功检测出HCV RNA,保存9周仍有26.7%的样品能够检测出HCV RNA.结论 利用巢式PCR法血清样品在4℃条件下至少能保存4周对HCV RNA的检测没有影响.
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福建部分地区动物携带埃立克体调查及16S rRNA基因序列分析
目的 调查福建省部分地区动物携带埃立克体(Ehrlichia)的状况,分析16S rRNA基因特征.方法 收集永春县和上杭县牛、羊和狗的全血样本,用巢式PCR扩增埃立克体16S rRNA片段,纯化测序并进行序列分析.结果 永春县牛、羊和狗全血标本中埃立克体感染率分别为56.9％、38.8％和10.7％,上杭县羊全血样本中埃立克体感染率为65.3％.福建省部分地区牛、羊、狗的埃立克体16S rRNA基因序列,与相应的参考序列同源性均达98％～100％.结论 福建省部分地区的动物存在埃立克体感染.
关键词： 埃立克体 巢式PCR 16S rRNA基因 序列分析 -
山东省14例输入性卵形疟原虫wallikeri亚种的鉴定
目的 对山东省14例输入性卵形疟原虫wallikeri亚种进行鉴定分析.方法 收集14例输入性疟疾病例,进行快速疟疾诊断试纸条检测(RDT)、血涂片镜检、NP-1993常规巢式PCR鉴定和卵形疟原虫wallikeri(P.ovale wallikeri)亚种的特异性PCR检测.PCR扩增产物测序后,进行Blast比对分析.结果 14例患者RDT检测结果:泛疟原虫(非恶性疟)阳性12例,阴性2例;镜检结果,13例卵形疟原虫,1例间日疟原虫;NP-1993常规巢式PCR结果,14例样本4种疟原虫引物扩增结果均为阴性.P.ovale wallikeri亚种的特异性PCR检测结果:14例样本均能扩增到P.ovale wallikeri亚种特异性条带780 bp.Blast分析测序结果,检索结果为P.ovale wallikeri亚种.结论 14例镜检阳性、NP-1993常规巢式PCR检测阴性的输入性疟疾病例均确诊为P.ovale wallikeri亚种感染.
关键词： 疟疾 卵形疟原虫wallikeri亚种 巢式PCR -
东北林区啮齿动物的查菲埃立克体核酸检测
目的 调查东北林区啮齿动物的查菲埃立克体感染水平.方法 采用巢武PCR检测吉林省集安和辽宁省宽甸林区野鼠脾脏样本的查菲埃立克体16S rRNA DNA;对阳性扩增产物作DNA序列测定,并对测定的序列进行同源性比较和聚类分析.结果 检测两地野鼠132只,阳性19只,阳性率14.39％.其中,集安野鼠阳性率7.58％ (5/66),宽甸野鼠阳性率21.21％(14/66),宽甸野鼠阳性率明显高于集安(x2=3.9348,P=0.0473).不同鼠种查菲埃立克体阳性率无明显差异.扩增阳性DNA片段测序后与GenBank中注册的埃立克体16S rRNA基因对应序列进行同源性比较,JA-m51(集安株)、KD-m18(宽匐株)二者基因序列相差4个核苷酸,而JA-mS1与查菲埃立克体美国株及我国云南株核苷酸序列完全一致,进化树分析显示JA-m51、KD-m18与查菲埃立克体同属一个分支.结论 辽宁省、吉林省林区野鼠查菲埃立克体感染较普遍,该地区存在单核细胞埃立克体病的自然疫源地.
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福建部分地区人和动物嗜吞噬细胞无形体基因检测和序列分析
目的 了解福建省人和动物嗜吞噬细胞无形体的感染状况以及基因特征.方法 收集永春县和上杭县高危人群、家畜的全血,采用巢式PCR扩增无形体16S rRNA片段,PCR产物纯化测序并与序列比对分析.结果 永春县牛的无形体感染率高为53.85％,羊、狗无形体感染率分别为24.71％和12.50％.上杭县羊的无形体感染率为53.06％,高危人群的无形体感染率为8.33％.无形体基因序列与相应的参考序列同源性均达97％～100％.结论 福建省人和动物存在嗜吞噬细胞无形体感染.
