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辣椒碱对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响及机制
目的:观察辣椒碱(capsaicin)对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响及可能的分子机制.方法:设立不同浓度辣椒碱组以及空白组,采用细胞计数试剂盒-8法(CCK-8)检测辣椒碱(0,25,50,75,100,150,200,250 μmol·L-1)处理肝癌SMMC-7721细胞24 h后的细胞活性;穿透小室(transwell)检测辣椒碱(0,50,75,100 μmol· L-1)的肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭能力;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测辣椒碱(0,50,75,100 μmol·L-1)处理肝癌SMMC-7721细胞24 h后,对细胞中的E-钙黏蛋白(E-cadherin),波形蛋白(Vimentin),基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达水平的影响.结果:与空白组比较,辣椒碱(25,50,75,100 μmol· L-1)作用24 h后均对细胞存活率未产生明显影响,从150 μmol·L-1开始,随着辣椒碱浓度逐渐升高,细胞存活率逐渐下降(P＜0.01),且呈剂量依赖效应;与空白组比较,辣椒碱(50,75,100μmol·L-1)干预能显著抑制肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭,且呈浓度依赖效应(P＜0.01);与空白组比较,辣椒碱(50,75,100 μmo1·L-1)干预能明显上调肝癌SMMC-7721细胞中E-cadherin蛋白表达水平(P＜0.01),下调Vimentin,MMP-2,MMP-9蛋白的表达水平(P＜0.01).结论:辣椒碱干预对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭具有抑制作用,可能与其上调肝癌SMMC-7721细胞中E-cadherin蛋白的表达,下调肝癌SMMC-7721细胞中Vimentin,MMP-2和MMP-9蛋白的表达有关.
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BML-111下调c-Met抑制Hela细胞迁移和侵袭的研究
目的:探讨BML-111下调c-Met抑制Hela细胞迁移和侵袭的影响.方法:将Hela细胞分为3组:空白组、BML-111组;BML-111+Boc-2(c-Met特异性阻断剂)组,BML-111组与BML-111+Boc-2组分别转染100μg/L的BML-111、100μg/L的BML-111和100μg/L的Boc-2,采用MTT实验、细胞侵袭与转移实验观察细胞增殖、迁移和侵袭状况,采用Western blot实验分析NF-κB、c-Met、P53的蛋白表达状况.结果:BML-111的加入明显抑制Hela细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05),而Boc-2的加入有利于抵抗BML-111的抑制作用(P<0.05).BML-111的加入促进P53的表达,抑制NF-κB、c-Met的表达(P<0.05);而加入Boc-2处理后,NF-κB、c-Met、P53表达与BML-111组比较差异也有统计学意义(P<0.05).结论:BML-111可以对Hela细胞迁移、增殖与侵袭进行有效抑制,其机制可能是通过下调NF-κB、c-Met的表达来实现的.
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花姜酮对胰腺癌细胞迁移和侵袭的影响及机制的研究
目的:探讨花姜酮(zerumbone)对人胰腺癌绌胞株BxPC-3和Panc-1迁移和侵袭的影响及其相关基因的表达.方法:以BxPC-3和Panc-1为研究对象,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)实验选择毒性较小的花姜酮浓度,用细胞划痕实验、Transwell小室迁移和侵袭实验检测药物对细胞迁移和侵袭能力的影响,蛋白质印迹(Western blot)检测各细胞组CXC族趋化因子受体4(CXCR4)、促分裂原活化蛋白酶激酶1/2(MEK1/2)、磷酸化MEK 1/2(p-MEK1/2)、细胞外调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达变化.结果:花姜酮对BxPC-3和Panc-1细胞的生长均有抑制作用,且随着药物浓度的增高和作用时间的延长而增强(P＜0.05).低浓度药物作用后BxPC-3和Pane-1的划痕迁移率都低于对照组(P＜0.05).与对照组相比,Transwell迁移和侵袭实验中BxPC-3和Panc-1用药组的平均穿膜细胞数均减少(P＜0.05).蛋白质印迹检测结果表明:花姜酮抑制CXCR4、p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白的表达.结论:花姜酮具有抑制胰腺癌细胞株BxPC-3和Panc-1迁移和侵袭的作用,可能与下调CXCR4、p-MEK1/2、p-ERK1/2表达水平有关,为肿瘤的靶向治疗提供新的依据.
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miR-132调节非小细胞肺癌hedgehog信号通路受体基因PTCH1及细胞增殖、迁移和侵袭
目的 研究miR-132在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞系H1299中的作用及相应的靶基因.方法 real-time PCR检测7种细胞系中miR-132的表达量.用CCK-8检测稳定株细胞H1299-pEGP-miR-132与H1299-pEGP-miR-null的生长速率的变化.使用稳定株细胞H1299检测miR-132对于细胞克隆形成、细胞迁移和细胞侵袭的影响.用Transwell结合matrigel的方法检测H1299-pEGP-miR-132细胞与H 1299-pEGP-miR-null细胞在72 h时细胞迁移和侵袭的变化,同时在H1299-pEGP-miR-132细胞中使用anti-miR-132进行了相关的实验验证.运用生物信息学方法预测miR-132的靶基因,并运用双荧光实验、real-time PCR和Western blot验证.在H1299-pEGP-miR-132细胞中共同转染anti-miR-132和PTCH1 siRNA检测其对细胞的增殖、迁移和侵袭的影响.结果 miR-132在肺癌细胞系中呈现高表达,在NSCLC细胞H1299中miR-132通过靶向调节PTCH1基因的表达发挥作用.H1299-pEGP-miR-132细胞的增殖(P＜0.01)、迁移(P＜0.05)、侵袭(P＜0.05)能力明显高于对照组.在H1299-pEGP-miR-132细胞中转入PTCH1 siRNA后细胞增殖能力升高(P＜0.05),迁移和侵袭能力降低(P＜0.001).H1299-pEGP-miR-132细胞15天形成的克隆数目是对照组细胞的1.41倍(P＜0.05).Western blot法检测显示miR-132使H1299中PTCH1蛋白表达量显著降低(0.68倍),anti-miR-132使PTCH1表达量显著升高(1.97倍).结论 miR-132可能参与NSCLC的细胞增殖、迁移和侵袭.它的致癌性部分归因于对Hh信号通路关键的负调控蛋白PTCH1的调节.
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LncRNA HOTAIR通过COX-2调控胃癌细胞增殖与侵袭
目的:研究长链非编码RNA (long non-coding RNA,lncRNA)HOX转录反义RNA (HOX transcript antisense RNA,HOTAIR)对胃癌细胞增殖、侵袭能力的影响及其相关分子机制.方法:培养人胃黏膜上皮细胞株(GES-1)和胃癌细胞株(SGC7901和MKN45),实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测HOTAIR表达,MTT法检测胃癌细胞增殖,细胞划痕实验、Transwell小室检测细胞迁移和侵袭;免疫印迹法分析COX-2及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物E-钙黏素(E-cadherin)表达.结果:与GES-1相比,SGC7901和MKN45细胞中HOTAIR表达上调(P＜0.05);敲减HOTAIR基因能抑制胃癌细胞增殖、迁移与侵袭(P＜0.01);胃癌细胞HOTAIR表达下调后COX-2蛋白水平降低,进而使E-cadherin蛋白水平升高(P＜0.05),且该效应可被外源性COX-2活性产物前列腺素E2 (prostaglandin E2,PGE2)所纠正.与HOTAIR敲减组相比,HOTAIR敲减+PGE2组细胞增殖、迁移及侵袭能力明显升高.结论:下调HOTAIR可能通过抑制COX-2表达,进而上调E-cadherin表达,抑制胃癌细胞增殖和侵袭转移能力,有望成为治疗胃癌的重要靶点.
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miR-383在结肠癌组织中的表达及其对结肠癌细胞株的作用
目的 研究miR-383在结肠癌组织和癌旁正常组织中的表达水平,分析其对HT-29、LoVo结肠癌细胞株的增殖、侵袭和迁移的调控作用,以及可能的调控机制.方法 采用qRT-PCR检测64对结肠癌组织与癌旁正常组织中miR-383的表达情况;利用miR-383类似物(mo-miR-383 mimic)上调结肠癌细胞株HT-29、LoVo中miR-383的表达,噻唑蓝(MTT)法和克隆形成试验检测其对细胞增殖的影响,迁移和侵袭试验检测其对细胞迁移和侵袭能力的影响,并用Western-blotting法检测miR-383靶基因APRIL、MCL-1及COX-2的表达.结果 miR-383在结肠癌组织中表达显著低于癌旁正常组织(P＜0.01),上调miR-383的表达能够有效抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并且上调miR-383的表达能够抑制增殖诱导配体(APRIL)的表达.结论 miR-383在结肠癌组织中表达降低,上调miR-383的表达对结肠癌细胞具有抑制增殖和降低侵袭及迁移能力的作用,其抑制作用可能是通过对靶基因APRIL的调控实现的.
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SRC抑制胶质母细胞瘤的增殖、迁移、侵袭和干性维持的分子机制
目的 研究SRC在胶质母细胞瘤发生发展中的作用,并初步探讨可能的分子机制.方法 采用生物信息学的方法分析SRC在胶质母细胞瘤中的表达变化;利用shRNA下调胶质瘤母细胞系U87MG中SRC的表达,通过RT-PCR和免疫印迹法验证其抑制效率,并筛选出稳定干涉的细胞株;采用WST-1法、划痕愈合实验和Transwell迁移实验检测SRC shRNA干涉后细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化;利用干细胞培养液筛选出SRC shRNA稳定干涉的胶质瘤干细胞,观察SRC shRNA对肿瘤干细胞干性的影响;利用细胞免疫荧光法观察干性基因SOX2的表达变化.结果 在胶质母细胞瘤标本中SRC的表达水平高于对照组,筛选到两条有效的SRC shRNA序列;通过shRNA下调SRC的表达后可以显著抑制胶质瘤母细胞U87MG的增殖、迁移、侵袭和肿瘤干细胞干性维持,并且可以明显抑制SOX2的表达.结论 SRC通过调控胶质母细胞瘤的增殖、迁移、侵袭和干性维持影响其发生发展,其对干性维持的作用可能是通过影响SOX2的表达实现的.
关键词： 胶质母细胞瘤 非受体蛋白酪氨酸激酶 shRNA 细胞增殖 细胞迁移和侵袭 -
ERK通路激动剂EGF及抑制剂U0126对HepG2肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响
目的 研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)亚族细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路在HepG2肝癌细胞迁移和侵袭中的作用.方法 体外培养人肝癌HepG2细胞,采用ERK通路激动剂和抑制剂:表皮生长因子(EGF)及U0126刺激48h,分别应用MTS法、划痕实验法及Transwell小室法检测EGF和U0126对HepG2细胞增殖能力、迁移能力和侵袭能力的影响,qPCR和Western blot法分别检测ERK mRNA和磷酸化ERK蛋白的表达变化.结果 细胞增殖、迁移和侵袭实验结果均显示,激动剂EGF可显著提高HepG2肝癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力(P＜0.01),而U0126均对以上指标有抑制效应(P＜0.05).qPCR和Western blot结果显示,EGF可上调ERK mRNA和磷酸化蛋白的表达(P＜0.01),而U0126对ERK mRNA无明显影响(P＞0.05),但可显著下调ERK磷酸化蛋白的表达(P＜0.01).结论 ERK通路参与HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭过程,EGF和U0126对以上指标的影响可能与ERK mRNA的表达及蛋白磷酸化过程相关.
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长链非编码RNA MUC5B-AS1在人肺腺癌细胞系中的功能研究
目的 研究lncRNA MUC5B-AS1基因在肺腺癌中的表达情况及对肺腺癌细胞系生物学行为的影响.方法 利用RT-PCR、qRT-PCR检测肺腺癌细胞系中MUC5B-AS1基因的表达情况;构建MUC5B-AS1过表达载体,通过转染构建MUC5B-ASI过表达细胞系;采用CCK-8检测肺腺癌细胞的增殖情况;应用Transwell小室检测MUC5B-AS1过表达对肺腺癌细胞系迁移和侵袭的影响.结果 检测了MUC5B-AS1在4株肺腺癌细胞系(A549、SPCA1、H1975和H1299)和1株肺正常上皮细胞系(HBE)中的表达情况,发现MUC5 B-AS1在H1299细胞系中表达低,同时A549细胞系表达高;通过转染构建MUC5B-AS1过表达H1299、A549细胞系,利用qRT-PCR检测细胞系中MUC5B-AS1基因的表达,与对照组比较,MUC5B-AS1基因在H1299、A549细胞系均升高,且有统计学差异(P ＜0.05);CCK-8检测细胞增殖,与对照组比较过表达MUC5B-AS1对H1299、A549细胞生长并无影响(P＞0.05);应用Transwell小室检测MUC5B-AS1过表达对肺腺癌细胞系迁移和侵袭,过表达MUC5B-AS1促进H1299、A549细胞的迁移和侵袭,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 MUC5B-AS1可能在肺癌的迁移和侵袭发挥重要作用,但对肺腺癌细胞的增殖能力没有显著影响.
