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葛根黄酮提高桑白皮降糖活性及其机制研究
目的:葛根黄酮(PF)对桑白皮提取物(ME)降糖活性的增效作用研究及其机制探讨.方法:4组大鼠(每组5只)分别灌胃给予含淀粉(2 g·kg-1)的桑白皮提取物(ME,34.5 mg·kg-1)、葛根黄酮(PF,211.5 mg·kg-1)、桑葛复方提取物(ME-PF,250 mg·kg-1)或蒸馏水,给药后于0～2h内取血测定其血糖水平；另取2组大鼠(每组5只)施行在体单向肠灌流实验,在ME的主要药效成分1-脱氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin,DNJ)相同浓度(10 μmol·L-1)下以ME或ME-PF进行灌流,以LC-MS/MS法测定灌流液中DNJ的浓度.结果:PF与ME联用时,可显著抑制大鼠餐后血糖水平的升高,与仅给淀粉组比较,2h内的总血糖血糖浓度-时间曲线下面积(AUC)水平从(8.71 ±2.26) h·mmol·L-1下降至(5.16 ±1.42) h·mmol·L-1,其下降幅度达40.8％,而单独使用ME和PF时血糖AUC的下降幅度较小,分别为13.6％[(7,52-±1.00) h·mmol·L-1]和11.8％(7.68±2.22 h·mmol·L-1).肠灌流结果表明,ME-PF中DNJ的平均有效渗透系数Peff值(3.5 ×10-3)cm·min-1,明显低于单独使用桑白皮的Peff值(7.5 ×10-3)cm·min-1,(P＜0.05)；肠吸收率亦有显著差别(P＜0.01),分别为14.8％,31.6％.结论:葛根黄酮能显著提高桑白皮提取物降低餐后血糖的作用,这很可能与其抑制桑白皮提取物中DNJ的肠道吸收,从而提高具有α-糖苷酶抑制活性的DNJ的肠道浓度有关.
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HPLC-MS-MS分析桑叶总生物碱组成及含量
目的:采用HPLC-MS-MS法,对桑叶总生物碱部位中的各生物碱成分进行分析和鉴别,采用柱前衍生化HPLC-UV测定生物碱部位中总生物碱的含量.方法:采用HiQSiL C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以9-氯甲酸芴甲酯(FMOC-C1)为柱前衍生化试剂,流动相乙腈-0.1％醋酸(50:50),流速0.8 mL·min-1,检测波长254 nm,电喷雾离子源(ESI),正离子检测模式,以1-脱氧野尻霉素(DNJ)为对照,外标法计算桑叶总生物碱含量.结果:鉴定了6个生物碱类成分分别为DNJ,fagomine,3-epi-fagomine,DAB,calystegine B2和2-O-β-Glc-DAB;测定3批供试品中总生物碱含量均达到75％以上.结论:该法简便、准确、灵敏,可用于桑叶总生物碱及其制剂的定性定量分析.
关键词： 桑叶 1-脱氧野尻霉素 总生物碱 高效液相色谱-质谱联用 含量测定 -
响应面分析法优化桑叶中1-脱氧野尻霉素的稀酸乙醇浸提工艺
目的:优化桑叶中1-脱氧野尻霉素(1-DNJ)的稀酸乙醇浸提工艺.方法:采用HPLC-ELSD测定1-DNJ含量,流动相乙腈-水(90∶10),ELSD漂移管温度40℃,载气流速3.5×105 Pa.以1-DNJ提取率为指标,在单因素试验基础上,通过响应面分析法考察浸提时间、乙醇体积分数及pH对桑叶中1-DNJ提取工艺的影响,利用Design Expert 7.1.6分析软件对试验数据进行分析.结果:佳工艺参数为乙醇体积分数66.53％,pH 6.66,浸提时间2.73 h;1-DNJ实际提取率0.194 6％,与理论量优值0.1％相差较小.结论:建立的二次多项数学模型准确可靠,优选的提取工艺稳定可行,为桑叶资源的开发利用提供参考.
关键词： 1-脱氧野尻霉素 HPLC-ELSD 响应面分析法 稀酸稀醇溶媒浸提工艺 桑叶 -
关键词：
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HPLC-ELSD分析米格列醇和杂质1-脱氧野尻霉素
目的:建立一种高效液相-蒸发光散色检测法用于米格列醇和1-脱氧野尻霉素的杂质分析.方法:使用随行标准曲线法测定杂质含量,采用Inertsil NH2(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-15 mmol·L-1 pH 5.5乙酸铵(75:25),流速为1.2 mL· min -1,柱温为35℃；Alltech ELSD2000检测器的漂移管温度为90℃,载气流速为2.9 L·min-1.结果:米格列醇和1-脱氧野尻霉素在0.02 ～5.05 mg·mL-1范围内峰面积对质量浓度呈现良好的对数线性关系,r分别为0.998 5和0.998 9；定量限和检出限分别为1和0.4 μg；两种化合物在该色谱条件下重现性良好；精密度n=6时,RSD分别为1.5％和1.0％.结论:本方法有效、快速、简便、结果可靠,可用于米格列醇和1-脱氧野尻霉素的杂质分析.
关键词： 高效液相-蒸发光散色检测 米格列醇 1-脱氧野尻霉素 -
反相高效液相色谱法测定桑枝中1-脱氧野尻霉素的含量
目的 建立测定桑枝中1-脱氧野尻霉素(DNJ)含量的方法.方法 采用9-芴基氯甲酸甲酯标记、配有荧光检测器的反相高效液相色谱法,色谱柱为DIAMONSIC C18柱(4.60 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%醋酸(1:1),流速为1.0mL·min-1,柱温为室温,检测波长为激发光254 nm与发射光322 nm,正交法考察反应温度、缓冲液pH值、反应时间3个因素对DNJ衍生化的影响.结果 DNJ在3.6～36 mg·L-1内具有良好的线性关系(r=0.999 9,n=5),检测限为0.08 mg·L-1(S/N=3),平均回收率为99.2%,RSD=3.5%(n=5),在30℃,pH 7下反应50 min,为DNJ衍生化的理想条件.桑枝富含DNJ,其含量在桑品种、生长季节和老嫩程度间存在显著差异.结论 方法准确灵敏、快速简便,可用于桑枝及其制品中DNJ含量的大数量样本测定.DNJ在桑枝中具有一定的累积作用.
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桑叶中总生物碱和1-脱氧野尻霉素的含量考察
目的 建立桑叶中总生物碱和1-脱氧野尻霉素(DNJ)含量的测定方法,并考察不同采摘时间、不同种植基地及药用部位的桑叶药材中总生物碱和DNJ含量.方法 采用雷氏盐比色法测定总生物碱含量;应用HPLC-ELSD测定DNJ含量.流动相为乙腈-水(80:20);流速:1.0 mL·min-1;柱温30℃;进样量:20μL.漂移管温度55℃;载气(N2)压力:0.15 MPa.结果 本实验所建立的方法准确、重复性好.不同采摘时间、采摘部位的桑叶中二者含量差异较大,不同种植基地的桑叶中二者含量变化相对较小.结论 测定结果表明,桑叶中DNJ和总生物碱的含量与采摘时间、种植基地及药用部位等密切相关,其中采摘季节、部位影响较大.
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钠基蒙脱土对桑叶生物碱部位中1-脱氧野尻霉素的缓释研究
目的 考察钠基蒙脱土(Na-montmorillonite,Na-MMT)对桑叶提取物中1-脱氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin,DNJ)是否存在缓释效果.方法 在搅拌条件下使其进入钠基蒙脱土层间,从而制备1-脱氧野尻霉素-蒙脱土复合物.通过计算钠基蒙脱土对1-脱氧野尻霉素的载药量来选择合适的吸附时间、温度、投料比,并对该条件下制备的1-脱氧野尻霉素-蒙脱土复合物进行体外实验,评价缓释效果.结果 当钠基蒙脱土用量为5.00g,桑叶提取物用量16.00 g(1-脱氧野尻霉素含量25.1％),在100℃下,于1 000mL去离子水中搅拌lh时,可制得1-脱氧野尻霉素载药量为111.64 mg·g-1的1-脱氧野尻霉素-蒙脱土复合物.所制备的1-脱氧野尻霉素-蒙脱土复合物在纯净水、磷酸二氢钠缓冲液(pH 7.4)、0.1 mol·L-1盐酸溶液中均能快速释放,且溶液体积越大,1-脱氧野尻霉素释放率越高.结论 钠基蒙脱土对l-脱氧野尻霉素具有缓释效果,可以用于1-脱氧野尻霉素缓释制剂的研究.
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1-脱氧野尻霉素及其衍生物生物活性研究进展
1-脱氧野尻霉素是一种多羟基生物碱,具有降糖、降脂、抗肿瘤、抗病毒等众多生理功能.随着研究的深入,对相关生物活性的解释愈加清楚,并且在这一过程中不断有新的生理活性被发现.因此笔者对近年来与1-脱氧野尻霉素(及其衍生物)生物活性有关的新发现进行总结,为1-脱氧野尻霉素的进-步研究及应用提供参考.
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基于解离度控制的桑枝生物碱树脂分离工艺优化
[目的]基于生物碱解离常数（pKa）与氨基酸等电点（pI）的差异，筛选树脂处理的活化剂种类，优化桑枝生物碱分离纯化工艺。[方法]分别采用常规的盐酸及不同pH值的缓冲液为活化剂对732阳离子树脂进行处理，柱前衍生化-高效液相色谱（HPLC）法对生物碱及氨基酸进行分析，比较桑枝水提液经吸附交换后的生物碱与氨基酸泄漏曲线，测定1-脱氧野尻霉素（DNJ）吸附量，考察氨水洗脱后产物中生物碱的色谱纯度。[结果]常规的盐酸活化剂处理树脂，生物碱及总氨基酸均未泄漏，而采用pH 5.6及4.6的缓冲液作为活化剂，总氨基酸提前泄漏；与pH 5.6缓冲液相比，pH降至4.6时，生物碱吸附量由1.84 mg/g（DNJ质量/树脂质量）提高至2.23 mg/g；缓冲液处理后的生物碱提取物，色谱纯度由23.6％提高至79.6％。[结论]通过调节树脂的pH值环境，可使生物碱和氨基酸以不同的解离状态存在，减少氨基酸吸附，提高阳离子树脂吸附选择性，提高生物碱分离纯化效果。
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桑叶总生物碱中1-脱氧野尻霉素的测定及方法学考察
[目的]为提取纯化后的桑叶总生物碱供试品中的1-脱氧野尻霉素建立测定方法及对方法学进行考察.[方法]1-脱氧野尻霉素供试品的含量测定采用柱前衍生化高效液相色谱法.[结果]制桑叶总生物碱供试品3份,经测定,供试品中1-脱氧野尻霉素的含量分别为7.99%,8.64%,7.09%.[结论]检测方法简单、快速、准确.
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桑树资源中1-脱氧野尻霉素的测定及其生物活性分析
目的测定桑树资源中1-脱氧野尻霉素(DNJ)并分析其生物活性.方法以氯甲酸芴甲酯(FMOC-Cl)柱前衍生RP-HPLC荧光检测法对DNJ进行分析;在酶水平测定样品的α-糖苷酶抑制曲线,在离体水平用反转肠囊实验测定样品的α-糖苷酶抑制活性.结果建立了DNJ的定量方法,并应用于桑树资源中DNJ的定量;这些中药材与DNJ对照品呈现了平行的α-糖苷酶抑制曲线,对淀粉水解和葡萄糖吸收具有较好的抑制作用.结论桑树资源可以作为α-糖苷酶抑制剂治疗糖尿病.
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HPLC-MS/MS法测定三叶片中1-脱氧野尻霉素的含量
[目的]建立高效液相串联三重四级杆质谱法(HPLC-MS/MS)测定三叶片中1-脱氧野尻霉素(DNJ)含量的方法.[方法]采用岛津GL Sciences Inc.NH2色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)；乙腈(含0.1％甲酸)-0.1％甲酸水(80∶20,V∶V)为流动相,流速为0.5 mL/min;质谱检测器:采用ESI电离源,离子为164.1/110.2,MRM模式.[结果]DNJ在61～2 440μg/L时呈良好的线性关系(r=1.000,n=6),低检测限为4.26μg/L,平均加样回收率为105.5％,RSD为7.9％.[结论]该方法简单、快速、准确,可用于三叶片中DNJ的含量测定.
关键词： 三叶片 1-脱氧野尻霉素 HPLC-MS/MS 含量测定 -
LC-MS/MS测定大鼠血浆中1-脱氧野尻霉素及药代动力学研究
目的:建立大鼠血浆中1-脱氧野尻霉素(DNJ)的液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)测定方法,并用于大鼠口服桑叶总生物碱后DNJ的药代动力学研究.方法:血浆样品经甲醇沉淀蛋白后,以乙腈-6.5 mmol·L-1甲酸铵水溶液为流动相,采用Agilent Eclipse Plus C18柱(2.1 mm×150 mm,3.5 μm)进行分离,梯度洗脱,流速0.4 mL·min-1.采用电喷雾离子源,多反应监测(MRM)模式,正离子检测,用于定量的离子反应为m/z 164.0→69.0(DNJ),m/z 208.1→146.0(米格列醇,内标).结果:DNJ在1～500 ng·mL-1浓度范围内线性关系良好,日内、日间精密度(RSD)均小于10.9％,准确度在92.4％～112.7％,DNJ和内标的提取回收率均大于84.1％.结论:本方法快速、灵敏、操作简便,可用于1-脱氧野尻霉素的药代动力学研究.
关键词： 液相色谱-质谱联用法 1-脱氧野尻霉素 药代动力学 -
LC-MS/MS测定不同产地桑叶中1一脱氧野尻霉素含量
目的:建立液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)方法测定不同产地桑叶中1-脱氧野尻霉素(DNJ)的含量.方法:采用Waters Atlantis Hilic Silica柱(2.1 mm×100 mm,3μm),流动相:乙腈-0.4％醋酸水溶液(80∶20,v/v),等度洗脱,流速为0.4 mL/min,柱温30℃.采用电喷雾离子源(ESI源),多反应监测(MRM)模式,正离子检测,DNJ定量离子对为m/z 164.0→69.0.结果:DNJ在20～1000 ng(r=0.9997)范围内线性关系良好,平均回收率为91.7％.不同产地桑叶中DNJ的含量有较大差异,含量在0.05％～0.50％,四川产地的DNJ含量较高,达到0.50％,亳州产地含量较低,仅为0.05％.结论:该方法操作简单,分析快速,为桑叶药材中1-脱氧野尻霉素的质量控制提供了参考.
关键词： 液相色谱-质谱联用法 桑叶 1-脱氧野尻霉素 含量测定 -
1-脱氧野尻霉素对高糖培养小鼠系膜细胞增殖及细胞外基质合成作用研究
目的 观察1-脱氧野尻霉素(DNJ)对高糖培养小鼠系膜细胞增殖、合成细胞外基质(ECM)的影响.方法 体外培养小鼠系膜细胞,用MTT法检测细胞增殖,用ELISA法测定细胞上清液中Ⅳ型胶原、小鼠纤维连接蛋白(FN)含量,用半定量RT-PCR法检测TGF-β1mRNA、PPARγmRNA表达. 结果 (1)高糖组(HG)48 h促细胞增殖(P<0.05);HG 72 h、96 h均抑制细胞增殖(P<0.05). 甘露醇组(MG)与正常糖组(NG)比较差异无统计学意义(P>0.05). (2)DNJ抑制高糖培养细胞增殖作用呈剂量和时间依赖性. 选定HG+5 mmol/L DNJ作用48 h进一步实验. (3)高糖组Ⅳ型胶原、FN合成、TGF-β1mRNA、PPARr mRNA表达均显著升高(P<0.05或P<0.01). NG与MG相比差异无统计学意义(P>0.05). (4) HG+DNJ 5 mmol/L 组显著抑制高糖组Ⅳ型胶原 、FN 合成、TGF -β1mRNA表达升高(P<0.05),对PPARγmRNA表达升高无影响. 结论 DNJ可抑制高糖培养系膜细胞增殖及ECM合成增多,其机制与DNJ降低高糖培养系膜细胞TGFβ1 mRNA表达升高有关.
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1-脱氧野尻霉素对高糖刺激大鼠系膜细胞增殖的影响
观察1-脱氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin,DNJ)对大鼠系膜细胞增殖的影响及进行机制探讨.结果 显示,DNJ抑制高糖刺激的系膜细胞增殖呈剂量和时间依赖性.DNJ可降低高糖刺激的系膜细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、整合素β1 mRNA、蛋白及黏着斑激酶(FAK)的蛋白表达(P＜0.05或P＜0.01),抗整合素β1抗体、FAK抑制剂genistein也可抑制高糖刺激系膜细胞α-SMA的蛋白表达(均P＜0.01).
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辅助降血糖胶囊中1-脱氧野尻霉素的柱前衍生化-HPLC法测定
建立了柱前衍生化-高效液相色谱法测定辅助降血糖胶囊中的1-脱氧野尻霉素(1).在pH 8.5硼酸盐缓冲液中,1与芴甲氧羰酰氯(FMOC-Cl)反应生成荧光产物,可用荧光检测器检测.使用Agilent 20RBAX SB-C18色谱柱,以乙腈:0.2％乙酸(32∶68)为流动相,检测波长265 nm.1在10～200μg/ml范围内线性关系良好.回收率为98.3％,RS妒为1.99％.
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1-脱氧野尻霉素衍生物的研究进展
1-脱氧野尻霉素(DNJ)是一种多羟基哌啶生物碱.DNJ及其衍生物具有降血糖、抗病毒、抑制肿瘤转移等作用.此文综述了近年来DNJ及其衍生物的研究进展.
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桑叶中1-脱氧野尻霉素的纯化及含量测定
目的 提取纯化桑叶中1-脱氧野尻霉素(DNJ),并用柱前衍生化高效液相法进行含量测定.方法 桑叶加0.05 mol·L-1盐酸溶液超声提取,提取物进行反相柱色谱纯化,纯化物用柱前衍生化-高效液相-荧光检测法测定DNJ的含量.结果 桑叶中DNJ 的含量为0.27%～0.49%,纯化物中DNJ的含量达到了10.7%,DNJ在0.6～ 60 μg*mL-1 内浓度与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 7),平均回收率为104.46%.结论 运用反相色谱技术分离纯化DNJ简单易行,含量测定方法 精确,重复性好.
