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Nod2基因突变与小肠CD相关性的研究
目的 探讨Nod2基因与中国人小肠CD发病的相关性及其可能作用机制.方法 通过双气囊小肠镜(DBE)进行病变部位组织取材,经病理学检查确诊的组织标本小肠CD 24份,结肠CD 44份,UC 40份,健康对照50份.提取组织标本基因组DNA,经聚合酶链反应(PCR)扩增Nod2基因全部12对外显子,纯化后直接测序,根据结果分析其突变与CD病变的关系.检测各组突变的Nod2 mRNA及其编码的NF-κB表达.结果 小肠CD组、结肠CD组、UC组和健康对照组均未检出西方人常见的3个Nod2基因多态性位点.小肠CD组的P268S突变率高于结肠CD组.UC组和健康对照组未显示该突变.小肠CD组Nod2突变标本其mRNA和NF-κB蛋白表达增加大于结肠CD突变标本,但差异无统计学意义(P>0.05),而小肠和结肠CD组无突变的CD患者与UC和健康者表达也无明显差异(P>0.05),但Nod2突变的小肠和结肠CD标本mRNA表达大于任何无突变的标本,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 中国人小肠和结肠CD患者中存在Nod2基因P268S突变,它可能通过调控NF-κB蛋白表达,导致细胞功能的改变,促进CD的发生.
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NOD1和NOD2:介导天然免疫的两种胞浆蛋白
NOD1和NOD2是新发现的一类参与天然免疫的胞浆蛋白质家族--核苷酸结合寡聚域样受体(the nucleotide binding oligomerization domain-like receptor, NLRs)中的两个重要蛋白受体,它们通过识别外源病原菌的模式抗原分子而激活NF-κB等核转录因子,启动相关细胞因子的基因表达,释放炎性因子和抗菌肽等, 其介导的信号通路在宿主抵御病原体感染的天然免疫中发挥着重要作用.
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NOD1与NOD2在变应性鼻炎中的表达及糖皮质激素对其的调节
目的:探讨NOD1与NOD2在变应性鼻炎(AR)患者鼻黏膜中的表达及糖皮质激素对其的调控作用.方法:收集13例AR患者下鼻甲黏膜及19例单纯鼻中隔偏曲患者下鼻甲黏膜(对照组),采用免疫组织化学方法和实时定量RT PCR方法检测下鼻甲黏膜样本中NOD1、NOD2的表达.另外收集5例单纯鼻中隔偏曲患者下鼻甲黏膜及5例AR患者下鼻甲黏膜,采用体外组织块培养方法,观察糖皮质激素对NOD1和NOD2表达的调节作用.结果:NOD1和NOD2 mRNA及蛋白在AR组中的表达较对照组明显增高(P＜0.05),免疫组织化学显示NOD1与NOD2在上皮层和黏膜固有层都有表达.组织培养结果表明,用糖皮质激素刺激后,AR患者鼻黏膜中NOD1和NOD2的表达显著下降(P＜0.05).结论:NOD1和NOD2作为先天性模式识别受体可能参与了AR的发病过程；糖皮质激素可能通过抑制NOD1和NOD2的表达而达到治疗AR的作用.
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TLR4,NOD2和NLRP3在牙髓炎中的表达
目的:分析牙髓炎中TLR4、NOD2和NLRP3的表达特征.方法:收集健康、龋病及牙髓炎的患牙共47颗分为3个组,采用免疫组织化学染色和单色免疫荧光染色方法检测每组牙髓组织中TLR4、NOD2、NLRP3的表达.结果:健康组中TLR4、NOD2和NLRP3仅在成牙本质细胞中少量表达.TLR4、NOD2和NLRP3在牙髓炎组及龋病组表达均明显高于正常组,大量表达于排列紊乱的成牙本质细胞和多种炎症细胞中,而在炎性病灶周边的牙髓成纤维细胞中三者也有表达.结论:本研究表明TLR4、NOD2和NLRP3在炎性牙髓组织中表达同时增高,提示三者均与牙髓炎的进展相关.
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NOD1,NOD2和NLRP3炎症小体与牙髓炎
模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs)识别病原相关分子模式(pathogen associated molecule patterns,PAMP)激活固有免疫系统,是抵抗病原微生物入侵的第一道防线.核苷酸结合寡聚化结构域蛋白(nucleotide-binding oligomerization domains,NODs)和NOD样受体蛋白3(NODlike protein 3,NLRP3)属胞质内PRRs家族.NOD1和NOD2激活NF-κB,MAPK,JNK,p38和ERK信号通路,促进TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-8和IL-12等多种炎性因子的转录表达.NLRP3炎症小体激活caspase-1,并促进IL-18和IL-1β表达.牙髓位于低顺应性根管系统中,牙髓环境环境与机体其他组织不同.目前的研究表明NOD1,NOD2和NLRP3炎症小体与牙髓固有免疫及牙髓炎的发生、发展有关.
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MDP通过上调口腔癌细胞COX-2/PGE2表达促进其趋化和增殖
目的 研究细菌细胞壁成分MDP对口腔癌细胞Tca8113 COX-2/PGE2表达的影响.方法 RT-PCR检测NOD2、COX-2在Tca8113细胞的表达；不同浓度MDP刺激Tca8113细胞后,采用RT-qPCR、MTT、ELISA及趋化实验分别检测其对COX-2/PGE2表达、细胞增殖和细胞趋化的影响.结果 ①Tca8113细胞表达NOD2、COX-2 mRNA; MDP促进COX-2 mRNA表达；②与对照组比较,MDP刺激Tca8113后PGE2分泌、细胞增殖、趋化显著增加(P＜0.05)；与MDP组比较,MDP+NS-398组PGE2分泌、细胞增殖、趋化显著降低(P＜0.05)；与NS-398组比较,MDP+NS-398组细胞增殖仍然显著增强(P＜0.05).结论 MDP促进肿瘤细胞趋化和增殖.上调口腔癌细胞COX-2/PGE2表达是其作用机制之一.
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早孕母胎界面固有模式识别受体NOD1/NOD2的表达
[目的]明确早期妊娠母胎界面中固有模式识别受体NOD1/NOD2的表达情况.[方法]分别用免疫组织化学法及Real-Time PCR法检测12例早孕期绒毛及蜕膜组织中NOD1/NOD2表达.[结果]免疫组织化学结果显示绒毛组织中NOD1/NOD2主要定位于绒毛滋养细胞胞质中,蜕膜组织也检测到NOD1/NOD2分子的表达.在mRNA水平上,绒毛组织中NOD1/NOD2的表达量高于蜕膜基质细胞(DSC),分别为P=0.03和P=0.009；DSC中NOD1的表达量高于NOD2,P=0.029,差异具有显著性.绒毛组织中NOD2的表达高于NOD1,差异无统计学意义(P＞0.05).[结论]NOD1/NOD2在早孕期母胎界面中绒毛组织有表达,可能参与胚泡的着床.
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胞壁酰二肽激活小鼠原代肝窦内皮细胞中NOD2信号
目的 调查小鼠原代肝窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cells,LSECs)中NOD2信号通路激活后产生的免疫应答效应.方法 使用胶原酶灌注方法结合percoll密度梯度离心加抗小鼠LSEC免疫磁珠分离纯化小鼠LSEC.定量PCR检测小鼠原代LSEC NOD1和NOD2 mRNA表达水平,同时给胞壁酰二肽刺激小鼠原代LSEC;定量PCR检测NOD2、RIP2、TNF-α和IL-6mRNA表达水平;定量ELISA检测细胞上清IL-6和TNF-a蛋白产量.结果 小鼠原代LSEC中NOD2基础表达水平相对于NOD1基础表达水平较低.胞壁酰二肽刺激LSEC后诱导NOD2及其下游分子RIP2表达水平上调,接着诱导产生IL-6效应分子,而没有诱导产生TNF-α等其它细胞因子和趋化因子.结论 胞壁酰二肽能够激活小鼠LSEC中NOD2介导的信号通路,并诱导产生IL-6效应分子,可能在维持肝脏内环境稳定中发挥着重要作用.
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TNF及铜绿假单胞菌刺激呼吸道上皮细胞表达NOD2蛋白
目的:通过对TNF及铜绿假单胞菌(PAO1)刺激肺上皮细胞株(A549)表达胞浆蛋白NOD2的研究,进一步了解NOD2在机体天然免疫病原体识别过程中的作用.方法:培养呼吸道肺癌上皮细胞株A549,以TNF、铜绿假单胞菌PAOI刺激细胞,并以未刺激组做对照,通过半定量RT-PCR技术观察胞浆蛋白NOD2的表达变化.结果:与未刺激组比较,TNF、铜绿假单胞菌PAO1都能够上调A549细胞NOD2蛋白的表达.结论:TNFα与铜绿假单胞菌PAO1刺激能增强A549细胞胞浆蛋白NOD2的表达,提示细胞内受体NOD2在呼吸道天然免疫病原体识别过程中可能起重要作用.
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NOD2上调自噬抑制舌鳞癌细胞增殖和迁移
目的：探讨 NOD2在雷帕霉素（Rap）诱导下上调舌鳞癌 SCC-15细胞自噬对增殖和迁移能力的影响。方法：NOD2表达载体转染 SCC-15细胞上调 NOD2表达，NOD2-shRNA 载体转染 SCC-15细胞，抑制 NOD2表达；应用 Rap 诱导 SCC-15细胞正常组、NOD2上调组和抑制组的细胞自噬活性，采用 Western blot 检测自噬标记蛋白 LC3和 Beclin-1表达变化；MTT法检测 NOD2对自噬诱导后细胞增殖的影响；划痕实验检测 NOD2对自噬诱导后细胞迁移能力的变化。结果：Rap 诱导NOD2上调组细胞中 LC3-II 和 Beclin-1表达显著增强（P ＜0．05）、诱导 NOD2抑制组细胞中 LC3-II 和 Beclin-1表达显著降低（P ＜0．05）。与对照组相比，Rap 诱导 NOD2上调组细胞生长明显抑制（P ＜0．05），迁移速率减慢；诱导 NOD2抑制组细胞增殖加快（P ＜0．05），迁移速率增快。结论：NOD2可上调舌鳞癌 SCC-15细胞自噬抑制其增殖和迁移。
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NOD2基因对舌鳞癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响
目的：观察NOD2基因对舌鳞癌Tca8113细胞增殖、凋亡的影响。方法：构建NOD2表达载体（NOD2-pEZ-M29）和NOD2-shRNA表达载体，分别转染舌鳞癌Tca8113细胞48 h后，RT-PCR和Western blot 法检测NOD2和HBD-2分子及蛋白表达，MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡比例。结果：转染NOD2表达载体的Tca8113细胞NOD2和HBD-2表达较对照组显著增高，细胞增殖速度较对照组慢，凋亡较对照组高；转染NOD2-shRNA载体的Tca8113细胞NOD2和HBD-2表达较对照组显著降低，细胞增殖速度较对照组快，凋亡较对照组低。结论：NOD2可促进舌鳞癌细胞凋亡，抑制其增殖。在舌鳞癌细胞中，NOD2与HBD-2的表达呈正相关。
