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野藤茶愈伤组织的诱导研究
目的 探讨影响野藤茶愈伤组织诱导因素,建立野藤茶愈伤组织培养方法.方法 以生长旺盛的野藤茶的叶、茎为外植体,采用组织培养方法,观察不同外植体、光照和植物生长物质种类及其配比对野藤茶愈伤组织诱导的影响.结果 叶和茎都能诱导愈伤组织,25℃、暗培养有利于愈伤组织生长,6-苄氨基嘌呤(6-BA)与α-蔡乙酸(NAA)和2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)的配合使用有利于愈伤组织的诱导,出愈率可达86.1%.结论 野藤茶愈伤组织的适宜培养基为MS +6-BA 1.5 mg·L(-1)+NAA 8 mg·L(-1)+2,4-D40 mg·L(-1)(pH 5.8).
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延龄草根茎组织培养研究
目的 建立延龄草组织培养体系,为解决资源问题、快速繁殖延龄草奠定基础.方法 从延龄草子房、叶、茎、地下根茎、根尖等材料中筛选出适宜的外植体,筛选适宜的无机盐离子(MS、1/2MS和B5)、细胞分裂素(BA、KT和2-ip)、生长素(IAA、NAA和IBA)种类和浓度,探索延龄草根茎愈伤组织诱导和芽分化的条件.结果 仅地下根茎可诱导愈伤组织,愈伤组织诱导率约36.4％;低浓度的无机盐离子浓度利于愈伤组织的诱导,BA是愈伤组织诱导的主要因素.结论 根茎是诱导延龄草愈伤组织的适宜外植体,愈伤组织诱导的适培养基为1/2MS+BA 2.5 mg· L-1+ IAA 1.5 mg·L-1+3％蔗糖+0.6％琼脂,芽分化适培养基为1/2MS+ BA 2.0mg· L-1+ IAA 1.5 mg·L“+3％蔗糖+0.6％琼脂.
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野生独一味的离体培养及植株再生
目的 研究利用组织培养技术快速获得独一味组培苗的方法.方法 以野生独一味为外植体,MS为基本培养基,研究不同浓度激素对叶片愈伤组织诱导及分化的影响.结果 适宜野生独一味叶片愈伤组织诱导的培养基为MS+ NAA0.2mg/L+ 2.4-D 1.0mg/L+6-BA 2.0mg/L;适宜不定芽分化的培养基为MS +6-BA 0.5mg/L+ NAA 0.05mg/L;适宜生根培养基为MS+ IBA 0.5mg/L+ NAA 0.1mg/L.结论 通过研究组织培养中不同激素配比,获得了独一味组培苗,初步建立了独一味快繁技术.
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川芎愈伤组织及悬浮培养物化学成分气相色谱-质谱联用分析
目的用气相色谱-质谱联用法分析川芎愈伤组织及悬浮培养物中的化学成分.方法建立川芎愈伤组织及悬浮培养体系,收集愈伤组织及连续三代的悬浮培养物,采用气相色谱-质谱联用法进行川芎愈伤组织及悬浮培养物化学成分的分析.结果川芎愈伤组织及悬浮培养物含有相似的成分,但与原植物中的成分区别很大,原植物中的主要活性成分在愈伤组织及悬浮培养物中也未发现.结论愈伤组织及悬浮培养物的特性与原植物有很大的区别.
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白藓组织培养及无性系建立的研究
目的 对白藓资源进行种质保存,满足人们栽培对种苗的需求.方法 以白藓嫩茎为材料,以植物组织培养方法为手段,进行了愈伤组织诱导,愈伤组织和不顶芽分化,试管苗生根,试管苗移栽、扦插和移植的研究.结果 1/2MS+BA0.5 mg·L~(-1)+NAA1.0～1.5 mg·L~(-1)为嫩茎愈伤组织的诱导培养和继代培养的理想培养基;MS+AgNO31.5mg·L~(-1)+BA0.8mg·L~(-1)+naa0.2mg·L~(-1)是嫩茎愈伤组织和不定芽分化培养的理想培养基;1/3MS+IAA0.4～0.6mg·L~(-1)是生根培养和试管苗生根继代培养的理想培养基;移栽的试管苗保持了野生白藓的所有生物学性状,成功地建立起白藓的无性系.结论 嫩芽诱导的愈伤组织建立的无性系能对其进行种质保存,所繁殖的种苗能满足人们栽培的需求.
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曼陀罗愈伤组织培养及药用成分莨菪碱探讨
目的:探究曼陀罗愈伤组织的培养条件,并对愈伤组织中的莨菪碱成分进行研究.方法:使用不同的培养基条件对曼陀罗嫩茎进行体外培养,并对愈伤组织中所含有的莨菪碱进行有效分析.结果:与其他培养基比较,MS、1.0mg·L12,4-D条件下,曼陀罗愈伤组织的诱导和继代培养情况较好,且愈伤组织中的主要生物碱成分为东莨菪碱和莨菪碱.结论:MS、1.0mg· L-1 2,4-D是诱导和继代培养曼陀罗愈伤组织的理想条件,工业上可利用该条件进行愈伤组织培养,以便提取更多的莨菪碱供医药上使用.
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黄花石蒜愈伤组织培养研究
目的 探讨黄花石蒜愈伤组织的佳诱导条件,并确定培养物中是否含有生物碱活性成分.方法 以黄花石蒜的鳞茎为外植体,接种于不同激素组合的培养基上,开展愈伤组织诱导研究;以诱导出的愈伤组织为材料,采用紫外分光先度法测定总生物碱含量.结果 双鳞片在MS+2.4-D2 mg/L培养基上诱导愈伤组织效果佳;经UV法测定其总生物碱含量为13.33 mg/g.结论 黄花石蒜离体培养能够产生愈伤组织,且愈伤组织能够产生生物碱成分.
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凹叶厚朴愈伤组织中厚朴酚及和厚朴酚的提取方法和工艺的优选研究
目的 研究凹叶厚朴愈伤组织中厚朴酚及和厚朴酚提取方法 和工艺的优选.方法 采用超声波法、浸渍法及浸渍-超声波法提取厚朴酚及和厚朴酚,采用高效液相色谱法测定凹叶厚朴愈伤组织中酚的含量:采用正交试验设计,以超声波法为提取工艺,进一步考察溶剂、温度、提取时间对含量检出值的影响.结果 厚朴酚与和厚朴酚的含量浸渍法为0.135%与0.017%,超声波法为0.144%与0.018%,浸渍-超声波法为0.146%与0.018%;佳工艺为A3B2C3,即用丙酮30℃超声提取60 min.结论 本试验的结果 可以为凹叶厚朴的生物技术利用提供科学的实验及理论依据.
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凹叶厚朴茎段愈伤组织诱导中的褐变控制研究
目的 研究愈伤组织诱导过程中的褐变问题.方法 :将采集的标本进行外植体灭菌法再接种到培养基,在培养基中加抗褐变荆,进行防褐变试验.结果 外植体在4℃冰箱冷藏48 h的预处理对褐变有较好的控制效果.在培养基中加入抗褐变剂比加入吸附剂抗褐变效果好,抗褐变剂中Vc的效果佳,吸附荆PVP比活性发好.结论 培养条件,以低温遮光处理效果较好,先、温两个因素中,凹叶厚朴对光敏感,遮光能有效抑制褐变.液体浅层静置培养10 d后转入固体培养抗褐变的效果比单纯的固体培养效果好.
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凹叶厚朴用于细胞悬浮培养的愈伤组织的制备研究
目的 研究凹叶厚朴适用于细胞悬浮培养的愈伤组织.方法 通过对基本培养基(B5、MS和1/2MS)、外植体(茎段、顶芽和叶片)、激素浓度及组合进行筛选的方法进行厚朴愈伤组织诱导和继代研究.结果 B5为适合厚朴愈伤组织诱导的基本培养基;顶芽是佳诱导愈伤组织的材料;适合厚朴愈伤组织诱导的培养基为B5+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA;佳继代培养基为B5+2.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA,愈伤组织生长倍数达到2.87倍.结论 初步筛选出凹叶厚朴用于细胞悬浮培养的愈伤组织,为凹叶厚朴细胞培养奠定基础.
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黄芩组织培养技术及研究进展
通过查阅近10年相关文献,对黄芩组织培养应用领域、技术研究、影响因素、存在问题及对策进行了综述.阐明了组织培养在黄芩快速繁殖和无病毒种苗生产、培养次生代谢物中的应用;黄芩愈伤组织分化与再生、悬浮细胞培养、多倍体诱导、克隆技术的研究;外植体、培养基、培养条件对黄芩组织培养的影响及培养过程中杂菌污染、褐变、玻璃化的防治措施.可为黄芩资源开发利用及进行深入生物技术研究提供参考.
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唐古特大黄蒽醌代谢物合成前体的研究
目的:探索唐古特大黄蒽醌代谢物可能的前体,初步判断其合成途径.方法:选用唐古特大黄种子萌发的无菌苗为材料,诱导愈伤组织,研究添加不同前体、不同饲喂时间对唐古特大黄愈伤组织和成体大黄蒽醌产量的影响.结果:乙酸对蒽醌产量的促进作用大,在愈伤组织中达到了43.9％的增幅,在成体大黄中达到了45.8％;丙二酸其次,在愈伤组织中的增幅达到了15.8％,但在成体大黄中却只有3.6％的增长.苯甲酸和对苯醌对蒽醌产量无明显影响,莽草酸和α-酮戊二酸对蒽醌产量反而有一定的抑制作用.36 h是比较合适的饲喂时间,可将前体的饲喂效果充分发挥出来.结论:乙酸是唐古特大黄蒽醌代谢物合成的前体,它能大幅度的提高愈伤组织和成体大黄中蒽醌的产量,并由此推断出唐古特大黄蒽醌代谢物的合成途径是多酮合成途径.
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人参愈伤组织蛋白质双向电泳图谱的建立及初步分析
目的:建立人参根愈伤组织双向电泳图谱,为人参蛋白质组学分析及次生代谢产物合成途径研究提供方法参考和数据支撑.方法:采用3种不同方法提取人参根愈伤组织总蛋白;利用蛋白产率、纯度、SDS-PAGE蛋白条带确定其佳提取方法;利用双向电泳技术建立人参根愈伤组织双向电泳图谱;利用MALDI-TOF-TOF和Swiss-Prot软件对部分蛋白点进行质谱鉴定和功能分析.结果:改良酚抽提法(方法三)是佳人参根愈伤组织蛋白提取方法,可获得高分辨率双向电泳图谱,方法二次之,方法一获得的蛋白不能用于双向电泳分析;经质谱成功鉴定了方法二和方法三12个蛋白点.结论:本实验建立了适合人参根愈伤组织蛋白质提取的方法和双向电泳图谱.
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三七细胞悬浮培养过程中皂苷生物合成的动力学变化
目的:研究三七细胞悬浮培养过程中皂苷生物合成的动力学变化.方法:将三七愈伤组织进行悬浮培养40 d,用HPLC检测细胞生长过程中皂苷的动态变化.结果:三七愈伤组织悬浮培养生物量增长缓慢,但检测到6种皂苷的含量随培养时间而变化,人参皂苷Rg1、Re、Rh1、Rb1初始培养值分别为3.63、2.34、0.42、0.24 mg/g,培养25～30 d后增至高,分别为9.72、7.02、2.37、1.86 mg/g,而Rh2、F1含量无明显变化,即三七愈伤组织生物合成过程中原人参三醇型皂苷(Rg1、Re和Rh1)增长显著.结论:三七愈伤组织培养25 d,总皂苷含量达到高20.58mg/g,主要为原人参三醇型皂苷.
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白及愈伤组织总酚含量测定及抗氧化作用研究
目的:诱导出白及愈伤组织,对其中的总酚含量和抗氧化活性进行测定,并与白及块茎进行对比分析.方法:以白及种子为材料,诱导白及愈伤组织,采用Folin-酚比色法测定愈伤组织和白及块茎中的总酚含量；采用清除二苯代苦味酰基(DPPH·)自由基、铁离子还原/抗氧化能力(FRAP)测定法考察白及块茎和愈伤组织的抗氧化活性.结果:白及种子可以在白及愈伤组织诱导培养基中长出愈伤组织,白及块茎对DPPH·清除能力的IC50为6.92 mg/mL,愈伤组织对DPPH·清除能力的IC50为0.99 mg/mL,铁离子还原/抗氧化能力(FRAP)测定中,白及块茎与愈伤组织均具有较好的还原能力,且愈伤组织的还原能力优于块茎.白及愈伤组织中的总酚含量为0.702％,块茎中的总酚含量为0.394％.结论:白及块茎和愈伤组织均具有较强的清除DPPH·自由基和还原Fe3+的能力,白及愈伤组织中总酚含量比块茎中的总酚含量要高近1倍左右,表明愈伤组织抗氧化效果强于块茎.
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刺五加与其愈伤组织中皂苷合成关键酶基因表达的差异分析
目的:分析刺五加叶片、叶柄及其愈伤组织中SS、SE和bAS基因表达量的差异.方法:以刺五加叶片和叶柄为外植体,诱导获得愈伤组织.实时荧光定量PCR检测SS、SE和bAS基因的表达量.结果:刺五加SS、SE和bAS基因在刺五加叶片、叶柄及其愈伤组织中都有表达,SS、SE和bAS基因在叶片愈伤组织中的表达量分别为叶片中的89.3％、73.8％和83.4％,在叶柄愈伤组织中的表达量分别为叶柄中表达量的80.2％、87.7％和70.9％.结论:刺五加愈伤组织中SS、SE和bAS基因的表达量显著低于植株中的表达量.
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植物激素对红花再生体系的影响
目的:研究植物激素对红花再生植株的影响,为红花的良种快速繁殖、遗传转化等研究提供基础.方法:以红花无菌苗的子叶作为外植体,研究了植物激素对红花愈伤组织诱导、分化和生根的影响.结果:1.不同激素单独使用均能诱导出愈伤组织,但没有直接产生不定芽; 2.不同植物激素配合使用对不定芽的分化率明显不同,生根情况也存在差异显著; 3.子叶愈伤组织诱导培养基: MS+3%蔗糖+0.7%琼脂+1.0 mg/L NAA; 分化培养基: MS+3%蔗糖+0.7%琼脂+0.2 mg/L NAA + 1.0 mg/L 6-BA;生根培养基:1/4 MS+2.0 mg/L NAA +0.5 mg/L IAA.结论:通过单一激素与两激素配合使用,筛选出愈伤组织诱导、分化和组培苗生根的佳培养基.
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乌拉尔甘草不同外植体愈伤组织的诱导及影响因子研究
目的:探讨影响乌拉尔甘草愈伤组织诱导的因素,建立乌拉尔甘草愈伤组织培养方法.方法:采用组织培养法,比较不同外植体、光照、植物生长物质种类及其配比对乌拉尔甘草愈伤组织诱导和生长的影响.结果:不同外植体中,下胚轴愈伤组织诱导率高(平均 94%),且发生早,愈伤化程度高,筛选出下胚轴是诱导愈伤组织佳外植体,在MS+6-BA(1.0～2.0)mg/L+NAA(0.5～1.0)mg/L培养基上,愈伤组织可分化产生不定芽;2,4-D诱导产生非胚性愈伤组织,一定浓度的6-BA与NAA配合,诱导产生胚性愈伤组织;光照影响愈伤组织的诱导及生长.结论:不同外植体、激素含量及光照是影响乌拉尔甘草愈伤组织诱导和生长的主要因子.
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新疆阿魏愈伤组织诱导研究
目的:探索不同培养条件、激素组合对新疆阿魏愈伤组织诱导的影响.方法:以不同苗龄的新疆阿魏幼嫩子叶、下胚轴、幼根为外植体,在不同激素组合的脱分化培养基上培养,考察不同外植体、激素组合对诱导新疆阿魏愈伤组织的影响.结果:无真叶长出的阿魏幼苗较有利于出愈伤组织,诱导下胚轴愈伤组织的佳培养基为MS+2,4-D(1.0 mg/L)+KT(1.5 mg/L),诱导幼根愈伤组织的佳培养基为MS+NAA(0.5 mg/L)+6-BA(0.5 mg/L).佳继代培养基为MS+NAA(1.5 mg/L)+6.BA(2.5 mg/L).结论:NAA、2,4-D和6-BA均有一定的诱导效应,在愈伤组织继代增殖培养过程中6-BA的效果优于KT,添加GA_3有利于继代过程中胚性愈伤组织的产生.
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正交实验优化露水草愈伤组织诱导与分化的条件
目的:通过对露水草愈伤组织诱导与分化条件的研究,为露水草快速繁殖及转基因研究奠定基础.方法:利用正交设计方法对影响露水草愈伤组织诱导与分化的因素进行优化.结果:1.影响露水草愈伤组织诱导率的主要因素是生长素种类和外植体部位,生长素用NAA或2,4-D优于IAA和IBA,外植体用叶鞘部位极显著优于种子、根和叶;细胞分裂素种类和活性炭(AC)浓度对愈伤诱导率影响不显著.2.影响愈伤组织分化成芽的主要因素是愈伤组织的来源,根和叶形成的愈伤组织成芽率显著优于种子和叶鞘形成的愈伤组织;生长素、细胞分裂素种类和AC浓度对成芽率影响不显著.3.影响外植体直接成苗的主要因素是外植体部位,种子作外植体极显著优于叶鞘、叶和根;生长素、细胞分裂素种类和AC浓度对成苗率影响不显著.4.影响不定根诱导形成的主要因素是生长素种类,生长素用IBA成根率极显著优于IAA和NAA;6-BA和AC浓度对成根率影响不显著.结论:通过该项研究,露水草愈伤组织诱导与分化的条件得到较好优化.
