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黄花石蒜对老年痴呆小鼠的药效学研究
目的:研究黄花石蒜对老年痴呆(AD)模型小鼠学习记忆能力的影响.方法:选用昆明种小鼠,皮下注射东莨菪碱(2mg·kg-1)制备老年痴呆小鼠模型,通过Y型水迷宫实验来观察黄花石蒜对AD模型小鼠学习记忆的影响.结果:与模型组比较,黄花石蒜醇提物高剂量组(40.2g生药·kg-1)和低剂量组(20.1g生药·kg-1)均能明显缩短AD模型小鼠Y型水迷宫测试的潜伏期(P＜0.05),减少其上岸错误次数(P＜0.05),明显改善小鼠学习记忆.结论:黄花石蒜醇提物能改善AD小鼠的学习记忆能力.
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石蒜属植物忽地笑的生物碱类成分提取和结构鉴定
目的:研究忽地笑生物碱部位的化学成分.方法:采用各种色谱方法对生物碱部位进行分离,利用NMR、MS等波谱手段对所分离的生物碱成分进行结构鉴定.结果:分离得到12个生物碱:O-甲基石蒜伦碱(1)、石蒜伦碱(2)、O-乙基石蒜伦碱(3)、力克拉敏(4)、石蒜碱(5)、加兰他敏(6)、O-去甲基力克拉敏(7)、N-去甲基力克拉敏(8)、伪石蒜碱(9)、漳州水仙碱(10)、O-去甲加兰他敏(11)、N-去甲基加兰他敏(12).结论:化合物3、8为首次从该植物中分离得到.
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黄花石蒜愈伤组织培养研究
目的 探讨黄花石蒜愈伤组织的佳诱导条件,并确定培养物中是否含有生物碱活性成分.方法 以黄花石蒜的鳞茎为外植体,接种于不同激素组合的培养基上,开展愈伤组织诱导研究;以诱导出的愈伤组织为材料,采用紫外分光先度法测定总生物碱含量.结果 双鳞片在MS+2.4-D2 mg/L培养基上诱导愈伤组织效果佳;经UV法测定其总生物碱含量为13.33 mg/g.结论 黄花石蒜离体培养能够产生愈伤组织,且愈伤组织能够产生生物碱成分.
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HPLC法测定黄花石蒜不同部位的加兰他敏含量
目的 测定黄花石蒜不同部位加兰他敏的含量.方法 采用HPLC法.色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.1%磷酸-甲醇(94:6),流速为1.0 mL/min,检测波长为238 nm,柱温为30℃,进样量为20μL.结果 加兰他敏在10.4～124μg/mL范国内线性关系良好(r=0.999 7),加样回收率102.8%,RSD为5.2%.黄花石蒜的花中加兰他教含量高,根次之,鳞茎和茎中含量少.结论 黄花石蒜不同部位中加兰他敏含量存在差异.
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黄花石蒜的组织培养研究
目的探讨黄花石蒜的佳组织培养条件.方法以黄花石蒜的鳞茎为外植体,接种于不同激素组合的培养基上,开展组织培养研究.结果(1)MS+BA10 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1培养基对小鳞茎的诱导有明显的促进作用,诱导率为68.7%;(2)MS+IBA 2 mg·L-1为诱导小鳞茎生根的佳培养基;(3)暗培养效果整体优于光培养.结论通过组织培养方法快速繁殖黄花石蒜是可行的.
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mRNA差异显示法筛选黄花石蒜中加兰他敏合成相关基因
目的 筛选和克隆黄花石蒜加兰他敏相关基因.方法 采用mRNA差异显示法(mRNA differential display PCR,DD-PCR),对7月份黄花石蒜产加兰他敏含量高的部位花蕊和含量低的部位花葶进行基因表达差异的研究,筛选其差异片段,再对差异片段进行回收、克隆、测序及序列分析和同源性比较.结果 黄花石蒜花蕊和花葶中存在明显的基因表达差异,发现差异条带44条,经序列分析和同源性比较,确认其中2个条带与黄花石蒜加兰他敏合成相关,另一条可能与加兰他敏运输代谢调控有关.结论 通过DD-PCR得到的3个同源序列为研究黄花石蒜中加兰他教的合成途径提供了有力依据.
关键词： 黄花石蒜 加兰他敏 mRNA差异显示技术 生物信息学 -
黄花石蒜花蕊和花葶组织中总RNA提取方法的比较
目的 筛选适合黄花石蒜花蕊和花葶组织中总脱氧核糖核苷酸(RNA)的提取方法.方法 采用CrAB法、SDS法和植物总RNA提取试剂盒法对黄花石蒜花蕊和花葶组织中总RNA进行提取并比较其效果.结果 CTAB法和SDS法均不能提取到完整的RNA;植物总RNA提取试剂盒能有效地去除蛋白质、多糖及DNA,28S条带的荧光亮度是18S条带的2倍左右,OD260/280值在1.8～2.0之间,花蕊和花葶的产率分别为304.1 μg/g和255.8 μg/g,并且试剂盒法提取的总RNA通过RT-PCR扩增能获得特异性条带.结论 试剂盒法适合黄花石蒜花蕊和花葶组织总RNA的提取,提取的总RNA质量高、完整性好、产率高,符合后续实验的要求.
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不同产地人工栽培黄花石蒜不同器官中加兰他敏含量测定
目的 探索人工栽培黄花石蒜中加兰他敏的佳采收器官及适产地,寻找高含量的药材原料.方法 采用HPLC法测定人工栽培黄花石蒜不同器官及不同产地中加兰他敏含量.结果 采用SPSS 17.0软件Corrected Model(模型检验)进行统计学分析表明:黄花石蒜不同器官加兰他敏的含量差别具有显著统计学意义(P＜0.001),其含量由高到低各产地均依次为:花＞根＞花葶＞鳞茎,其3个产地加兰他敏平均含量依次为花(0.135％)＞根(0.080％)＞花葶(0.020％)＞鳞茎(0.017％);不同产地黄花石蒜中加兰他敏含量差别无统计学意义(P＞0.05).结论 黄花石蒜花中含量远远高于鳞茎中含量,每年都可采收,花可作为提取加兰他敏的药材原料,代替传统上使用的一次性采挖的鳞茎;3个产地人工栽培黄花石蒜中加兰他敏含量有细微差别,若以花作为药材原料,则大围山可作为适种植区.
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人工栽培黄花石蒜适遮光度和佳采收加工方法的研究
目的:确定人工栽培黄花石蒜适遮光度及佳采收加工方法.方法:采用HPLC法对不同遮光处理的和不同采收加工方法的人工栽培的黄花石蒜花中加兰他敏含量进行比较分析,从而确定其适遮光度和佳采收加工方法.结果:不同遮光处理的人工种植黄花石蒜花中加兰他敏含量分别为:20％遮光0.110％,40％遮光0.138％,60％遮光0.144％,80％遮光0.122％;不同采收期的分别为:花蕾期0.104％,始开期0.117％,盛开期0.128％,枯萎期0.139％;不同加工方法处理的分别为:晒干0.086％、烘干0.115％、阴干0.118％.结论:生产上人工种植黄花石蒜花期以60％遮光度为适;盛花期及其后的枯萎期是人工种植的佳采收期,以烘干方法干燥为佳.
