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帕金森病LRRK2基因研究
LRRK2基因是目前为止重要的帕金森病显性遗传基因.近年来对LRRK2基因的研究已取得一定成果,LRRK2基因的结构特征及其突变位点也相继被发现.相关的流行病学调查和试验证明LRRK2基因与帕金森病有相关性,但对于LRRK2基因的致病机理尚不明确.
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广西壮族人群帕金森病LRRK2基因的多态性分析
目的：探讨LRRK2基因3个位点的单核苷酸多态性（ SNP）与壮族人群帕金森病（ PD）的相关性。方法使用聚合酶链反应－限制性片段长度多态（PCR－RFLP）方法对112例壮族PD患者LRRK2基因的rs34778348（G2385R），rs1491942（N511K），rs7133914（R1398H）位点进行基因分型，并与156例健康壮族老年人比较，分析这些变异与 PD 的相关性。结果 rs34778348 A等位基因携带者罹患PD的风险也明显升高（OR＝1．632，95％CI：1．238～2．346，P＝0．029），总体上PD组等位基因A及纯合突变型AA的频率明显高于对照组（ P＜0．05）。另2个SNP的基因型和等位基因频率分布在两组间无差异（ P＝0．445～0．894）。结论 LRRK2 rs34778348与壮族人群PD的遗传易感性有关。
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LRRK2基因多态性与帕金森病相关性的研究进展
帕金森病是目前在中老年人群中常见的神经系统变性疾病之一，以黑质多巴胺能神经元变性缺失和残存神经元中出现蛋白包涵体为主要病理特征，该病以静止性震颤、肌肉强直、动作迟缓以及姿势反射障碍为主要临床表现。该病的发病机制是当前相关研究的热点，越来越多的证据已经表明遗传因素在帕金森病发病机制中起到重要作用。近年来LRRK2基因日益成为全球学者研究的热点。
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LRRK2基因与帕金森病
帕金森病是一种复杂的多因素共同作用的神经变性性疾病,遗传因素和环境因素被认为是发病的重要原因.越来越多的研究发现遗传因素在其发病中起着重要作用,而近LRRK2基因的发现更加确定了遗传因素在帕金森发病中不可忽视的作用.本文对LRRK2基因以及LRRK2基因在帕金森病中的研究做一综述.
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帕金森病研究中iPSCs疾病模型的选择和应用
帕金森病是一类以黑质多巴胺能神经元的进行性变性为特点的运动性疾病,在以往对帕金森病的研究中,由于缺乏对患者特异性的多巴胺能神经元的认识,阻碍了人们对疾病机制的认识和药物的研发.诱导性多潜能干细胞的出现弥补了这一缺陷,将人们对帕金森患者黑质多巴胺能神经元易损性和疾病的治疗研究推进到一个更崭新的发展阶段.
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广西壮族人群散发性帕金森病PARK2和LRRK2基因的多态性
目的：探讨帕金森病蛋白（ PARK）2和富亮氨酸重复激酶（ LRRK）2基因5个位点的单核苷酸多态性（ SNP）与广西壮族人群散发性帕金森病（PD）的相关性。方法使用聚合酶链反应－限制性片段长度多态（PCR－RFLP）方法对112例〔男59例，女53例，年龄（64．29±12．93）岁〕壮族散发性PD患者 PARK2基因的 rs1801582（V380L）、rs45530340（L63V）及 LRRK2基因的 rs34778348（G2385R）、rs1491942（N511K）、rs7133914（R1398H）位点进行基因分型，并与156例〔男84例，女72例，年龄（62．85±11．62）岁〕健康壮族老年人比较，分析这些变异与PD的相关性。结果SNP rs45530340 T等位基因明显增加PD的风险（OR＝2．252，95％CI：1．186～3．517，P＝0．009）；不管是早发、晚发或总体上，PD组的CT杂合基因型频率及T等位基因频率均明显高于对照组的相应亚组（P＜0．01～0．05），而PD组内的早发及晚发亚组在基因型频率及等位基因频率上无明显差别（P＞0．05）；SNP rs34778348 A等位基因携带者罹患PD的风险也明显升高（OR＝1．632，95％CI：1．238～2．346，P＝0．029），总体上 PD 组等位基因 A及纯合突变型AA的频率明显高于对照组（ P＜0．05）。另3个 SNP 的基因型和等位基因频率分布在两组间无差异（ P＝0．445～0．894）。结论PARK2 rs45530340及LRRK2 rs34778348与广西地区壮族散发性PD的遗传易感性有关。
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14-3-3γ过表达通过抑制LRRK2的去磷酸化防护鱼藤酮诱导的多巴胺能细胞损伤
目的 探讨14-3-3γ蛋白对鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制.方法 用腺病毒载体携带人14-3-3γ基因(Ad/14-3-3γ)感染PC12细胞,基因转移成功后,用鱼藤酮处理细胞.流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫荧光双标法检测14-3-3γ蛋白与LRRK2(leucine-rieh repeat protein kinase 2)的相互作用,免疫印迹技术检测14-3-3γ蛋白及LRRK2的Ser910及Ser935磷酸化水平.结果 Ad/14-3-3γ基因转入PC12细胞后14-3-3γ mRNA及蛋白均能过表达.14-3-3γ过表达能增加LRRK2的Ser910及Ser935磷酸化水平及与LRRK2的相互作用,降低PC12细胞的凋亡率(正常对照组4.26％±1.39％,鱼藤酮组36.20％±2.18％,Ad/14-3-3γ组12.78％±2.96％).结论 14-3-3γ蛋白过表达可能通过抑制LRRK2的去磷酸化,保护鱼藤酮诱导的多巴胺能细胞损伤.
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应用基于适配器连接介导的等位基因特异性扩增法检测LRRK2基因的单核苷酸多态性
目的:应用基于适配器连接介导的等位基因特异性扩增法(Adapter Ligation-mediated Allele-specific Amplification,简称ALM-ASA)技术,检测与帕金森病(PD)发病相关的LRRK2基因中的4个SNP位点(6055GA,7153GA,4321CT和2264CT),探讨该法用于筛查帕金森痛相关SNP位点的可行性,研究多个SNP位点同时检测的准确性和可靠性.方法:运用ALM-ASA法原理,改进使用多重PCR法代替单一预扩增法,使用4对引物在单管中预扩增含所待测SNP位点的四段片段,通过酶切、酶连和PCR特异性扩增检测判断SNP的类型.经PCR体外定点突变实验制备的相应位点的突变阳性片段,检验方法的准确性和可靠性.结果:采用该法成功测定了20名PD病人和20名健康中国人的LRRK2基因中受关注的4个SNP位点的多态性.并随机对其中10分样本的检测结果以测序法检测进行验证,结果完全一致.结论:ALM-ASA法极大提高了PCR反应的特异性,是一种准确、可靠,且费用低廉的SNP筛查方法,可推广应用于临床和实验室进行与PD有关的单核苷酸多态性的筛查检测.
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帕金森病相关基因的研究进展
帕金森病是仅次于阿尔兹海默病的第二大神经退行性疾病,表现为进展性的选择性的黑质多巴胺神经元的丢失,神经元中出现由α-突触核蛋白组成的路易小体是本病的重要病理特点.在65岁以上的人群中有1％-2％的人患有此病,在85岁以上的患者中则有4％患有此病.帕金森病表现为运动性和非运动性症状,运动性症状包括静止性震颤,运动迟缓,肌强直,姿势步态异常;非运动症状包括睡眠障碍,便秘和精神障碍等.目前此病的发病机制尚不清楚,很多人认为PD是由遗传因素和环境共同作用的结果.本文从基因方面对PD的发病机制作一综述.
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LRRK2在肾癌细胞中的表达及其对迁移能力的影响
目的 探讨LRRK2蛋白在人肾癌细胞ACHN中的表达及其对迁移能力的影响.方法 Western blot检测人肾小管上皮细胞(HK2)与人肾癌细胞ACHN中LRRK2蛋白的表达,小室体外迁移实验检测HK2与ACHN细胞迁移能力;体外培养ACHN细胞,分别转染pcDNA-LRRK2及LRRK2-siRNA 24 h,收获细胞Western blot检测LRRK2蛋白的表达,小室体外迁移实验检测ACHN细胞迁移能力的改变.结果 ACHN细胞LRRK2蛋白表达量及迁移能力显著高于HK2细胞(P<0.05);质粒转染方法 能有效介导ACHN细胞LRRK2蛋白表达上调(P<0.05),LRRK2蛋白表达上调可以使ACHN细胞迁移能力增强(P<0.05);脂质体转染方法 能够有效介导ACHN细胞LRRK2蛋白表达下调(P<0.05),LRRK2蛋白表达下调能够显著抑制ACHN细胞迁移能力(P<0.05).结论 LRRK2蛋白表达水平可能与人肾癌细胞ACHN恶性程度及侵袭转移特性有关.
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基因多态性与中国闽南地区散发性帕金森病的相关性研究
目的：研究 SNCA（rs356221）、ITGA8（rs7077361）及 LRRK2（rs1491942）基因单核苷酸多态性（SNP）与中国闽南地区汉族人群散发性帕金森病（Sporadic Parkinson’s Disease ，SPD）的相关性。方法收集2011‐08－2013‐12厦门市第一医院神经内科门诊及住院确诊、临床资料完整、明确无血缘关系的 SPD 患者168例，健康对照组177例，运用 SNaPshot 技术对目标位点进行基因分型，采用χ2检验和 Fisher 确切概率法统计分析各 SNP 数据。结果（1）SPD 组与对照组 LRRK2基因 rs1491942基因型频率和等位基因频率差异有统计学意义（P＝0.008／0.007），（CC ＋ CG）与 GG 相比差异有统计学意义（P＝0.003）；在各亚组中，LOPD（晚发型散发性帕金森病）组／女性组与对照组相比，差异均有统计学意义（P ＝0.006／0.001）。（2） SNSA（rs356221）、ITGA（rs7077361）基因型频率和等位基因频率差异均无统计学意义（P ＞0.05）。结论（1）LRRK2（rs1491942）基因单核苷酸多态性与中国闽南地区汉族女性晚发型散发性帕金森病发病相关，等位基因 C 可能是其发病的危险因素。（2） SNSA（rs356221）、ITGA（rs7077361）基因单核苷酸多态性可能与中国闽南地区散发性帕金森病发病无关。
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帕金森病患者PINK1LRRK2基因单核苷酸多态性分析
目的 探讨PINK1基因rs45530340位点及LRRK2基因rs1491942位点单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与淮海地区汉族人群晚发散发性帕金森病(Parkinson's disease,PD)的相关性.方法 收集152例晚发散发性PD患者和160例年龄和性别相匹配的健康对照者,入组者均来自淮海地区汉族人群.提取外周血全基因组DNA,应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增包含多态位点的目的 基因片段,通过琼脂糖凝胶电泳(AGE)检测PCR产物.对PCR产物分别用DNA限制性内切酶NlalV和SmlI进行酶切,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)、硝酸银染色检测酶切产物,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)技术分析基因型,计算所有研究对象两个SNP位点的基因型频率和等位基因频率.结果 (1)PINK1基因rs45530340位点基因型和等位基因在晚发散发性PD组和正常对照组中的分布无统计学差异(基因型:χ2=1.572,P=0.456;等位基因:χ2=1.318,P=0.251).(2) LRRK2基因rs1491942 位点基因型和等位基因在晚发散发性PD组与正常对照组中的分布差异有统计学意义(基因型:χ2=6.802,P=0.033;等位基因C:χ2=7.448,P=0.006,OR=1.571,95%CI=1.135~2.176).结论 (1)PINK1基因rs45530340 多态位点可能不是淮海地区汉族人群晚发散发性PD患者的危险因素.(2)LRRK2基因rs1491942多态位点C等位基因可能是淮海地区汉族人群晚发散发性PD患者的危险因素.
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LRRK2活化RhoGTPases信号通路在小胶质细胞吞噬α-突触核蛋白中的作用机制
目的：探讨小胶质细胞吞噬α‐突触核蛋白的分子机制。方法构建α‐Syn寡聚体诱导BV‐2细胞活化模型，免疫荧光检测BV‐2细胞内α‐Syn阳性包涵体的数量。Western blot检测BV‐2细胞LRRK2蛋白的表达。Pull down检测BV‐2细胞Rac1、Cdc42、RhoA的活性。结果与对照组相比，α‐Syn寡聚体诱导BV‐2细胞内α‐Syn阳性包涵体数量增加，LRRK2蛋白表达增加及Rac1、Cdc42、RhoA活性增加。结论小胶质细胞对α‐突触核蛋白的吞噬与LRRK2活化Rho GTPases信号通路相关。
关键词： LRRK2 Rho GTPases信号通路 小胶质细胞 α-突触核蛋白 -
LRRK2基因的基本特征及各种常见突变位点与帕金森病的关系
帕金森病(Parkinson's disease,PD) 是一种常见的中枢神经系统退行性疾病, 主要以静止性震颤、肌强直、动作迟缓和姿势反射障碍为主要临床表现, 其发病机制尚不清楚.
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LRRK2与帕金森病
LRRK2基因是家族遗传性帕金森病8型(PARK8)的致病基因.其编码蛋白LRRK2具有蛋白激酶活性,GTP酶活性,并作为支架蛋白参与蛋白质相互作用.现发现20余个LRRK2基因突变与家族性及散发性帕金森病相关,突变携带者具有典型帕金森病临床表现.突变的LRRK2蛋白致帕金森病机制仍不十分明确,可能与蛋白激酶介导的细胞毒性,细胞凋亡,线粒体功能障碍,氧化应激及泛素蛋白酶体系统异常相关.LRRK2及其突变蛋白的功能确立具有潜在的临床治疗前景.
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运用酵母双杂交技术筛选LRRK2相互作用蛋白
目的:使用酵母双杂交来筛选LRRK2基因的相互作用蛋白,以研究其功能.方法:使用的诱饵片段包含MAPKKK和ROC功能域的一部分与COR功能域的全长.诱饵片段由聚合酶链式反应(PCR)扩增后连入酵母表达质粒pGBKT7,pGBKT7-bait质粒经测序验证后转化酵母茵株AH109,用免疫印迹来检验该质粒在酵母中的表达,人类胎脑cDNA文库被转化到能稳定表达诱饵蛋白的酵母菌株中,并铺到含有x-a-gal的四缺(SD/-Trp/-ku/-His/-Ade)的培养皿上.分别使用含有pGBKT7或pGBKT7-bait的AH109酵母菌株进行回交检测,进一步确证从初步筛选中获得的阳性克隆,并用生物信息学来分析其中的文库质粒.结果:获得9个真阳性的克隆,经生物信息学分析其中有3个克隆中的序列不在已知基因的开放阅读框内.其余6个克隆中的序列在以下几个已知基因的开放阅读框中:STRBP,BAGS,PTPN23,L3 MBTL3,RALYL,KIAA1783.结论:经酵母双杂交后成功地获得了真阳性克隆.这些相互作用蛋白将为研究LRRK2的功能、帕金森病发病机制和其他神经性疾病提供一些新的线索.
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帕金森病LRRK2基因rs1427263位点的多态性
目的 检测帕金森病致病基因LRRK2在rs1427263位点多态性,分析帕金森病患者与健康人基因频率的差异.方法 采用SNaPshot微测序技术对116例帕金森病患者和95例健康人进行基因LRRK2单核苷酸多态性位点分析,对比两者之间频率的分布差异.结果 帕金森病患者和健康人rs142763位点等位基因频率、基因型频率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 云南汉族人群中LRRK2基因rs142763位点基因多态性与帕金森病无相关性.
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LRRK2基因核心启动子的预测
目的 运用生物信息学方法对LRRK2基因的启动子区域进行预测,以指导LRRK2基因核心启动子的克隆,为LRRK2基因的转录调控机制的研究奠定基础.方法 在数据库中查询LRRK2基因相关的序列信息,运用多种在线软件对LRRK2基因的转录起始位点、第一个外显子和启动子进行预测,并对预测结果进行综合分析.结果 将LRRK2基因脑组织主要剪切本(ENST00000298910,相当于NM_198578)的启动子定位于-803～-1区间.结论 LRRK2基因主要剪切本(ENST00000298910)的启动子区间可能定位于-803～-1区间.
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miRNA在帕金森疾病中的研究进展
目的：MiRNA在帕金森氏病的病理生理学中起重要作用。本文综述了miRNA调控PD致病基因的表达，为PD的诊断、药物靶向治疗提供新的策略。
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miRNA在帕金森疾病中的研究进展
目的:MiRNA在帕金森氏病的病理生理学中起重要作用.本文综述了miRNA调控PD致病基因的表达,为PD的诊断、药物靶向治疗提供新的策略.
