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同位素稀释-液相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中6种玉米赤霉醇类化合物
目的 建立动物源性食品中6种玉米赤霉醇类化合物残留量的同位素稀释-液相色谱-串联质谱的检测方法.方法 样品加入同位素内标后,用甲醇提取,离心后上清液经50℃水浴氮气吹至近干,乙酸乙酯溶解残渣后,采用氨基小柱固相萃取,正己烷-乙酸乙酯(20:80,V/V)和乙酸乙酯两种溶液洗脱后,氮气吹干,流动相溶解后,涡旋混匀过0.22μm有机滤膜后,LC-MS/MS多反应离子监测(MRM)模式检测,内标法定量.结果 6种玉米赤霉醇类化合物在3类动物源性食品中的加标回收率为84.8%~103.6%;RSD为3.7%~8.6%;检出限和定量限分别为0.03~0.07μg/kg和0.10 ~0.24 μg/kg.结论 该方法灵敏、准确,适用于动物源性食品中玉米赤霉醇类物质的检测.
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动物源性食品中α-玉米赤霉醇残留检测方法的研究
α-玉米赤霉醇(α-zearalanol,α-ZER)又名右环十四酮酚,是玉米赤霉菌在生长过程中产生的次生代谢产物玉米赤霉烯酮的还原产物.作为外源性激素,低浓度的α-ZER可促进蛋白质的合成,曾作为促生长剂广泛使用[1].
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快速检测动物组织中玉米赤霉醇残留的方法
[目的]探索快速检测动物肝组织中玉米赤霉醇残留方法的佳条件.[方法]首先对肝组织样品采用C18柱和免疫亲和柱的前处理方法,提取玉米赤霉醇;然后,采用竞争性酶联免疫吸附法(ELISA)进行检测.[结果]二种样品前处理方法的比较,免疫亲和柱提取法较好、提取效率高、可用多次、方法应用稳定;竞争性酶联免疫吸附法(ELISA)操作简单、方法可靠,适宜规模化检测.[结论]本研究认为,采用免疫亲和柱的前处理方法和ELISA的结合,能有效地发现动物肝组织中痕量玉米赤霉醇残留.
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植物雌激素α-玉米赤霉醇对内皮祖细胞的促增殖效应
内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPCs)是Asahara等[1]于1997年在外周血中发现的一种干/祖细胞,是成熟内皮细胞的前体细胞,它同时表达干细胞和内皮细胞的相关抗原,具有增殖、迁移、分化为成熟内皮细胞和聚集形成新生血管的作用.有报道EPCs水平降低可独立预测动脉粥样硬化的病程和预后[2].另外,EPCs集落形成能力与评价冠心病严重程度之间独立相关[3].目前认为循环中EPCs水平可作为评估内皮功能和预测心血管疾病的指标.氧化应激是导致EPCs数量改变及功能受损的影响因素之一[4],通过药物干预改善EPCs的氧化应激状态,保护其功能,可望成为心血管疾病防治的方向之一.
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植物雌激素α-玉米赤霉醇降低组织因子及核转录因子AP-1和NF-κB水平的作用
雌激素在体内具有广泛的生物学活性.妇女进入绝经期后,随着体内雌激素水平显著下降,出现与之相关的绝经期综合症,同时心血管疾病如冠心病、动脉粥样硬化等的发生率明显升高[1].
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采用噬菌体展示技术筛选玉米赤霉醇的单链抗体
目的 从噬菌体单链抗体库中筛选玉米赤霉醇(ZER)的阳性克隆.方法 人工抗原ZER-BSA作为包被原,采用负筛选,经过连续3轮固相"亲和-洗脱-富集"筛选,富集了噬菌体抗体库中阳性克隆的比例,同时采用Trypsin和ZER竞争洗脱2种洗脱方法.ELISA鉴定阳性克隆,运用SDS-PAGE方法对大肠杆菌分泌蛋白进行了时问条件的摸索.结果 随着淘洗轮数的增加,特异性噬菌体抗体得到了高度富集,从6个96孔板的克隆中筛选到10株阳性克隆(阳性大于阴性3倍视为阳性克隆),将菌株转换成功的5株测序发现有4株不同的阳性克隆,对一株进行了原核系统的表达,SDS-PAGE确定了目的 条带的存在,相对分子质量为Mr28 000.结论 为在天然噬菌体抗体库中制备玉米赤霉醇的抗体奠定了基础.
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抗α-玉米赤霉醇单克隆抗体的研制及初步应用
目的:制备抗α-玉米赤霉醇(α-ZER)的单克隆抗体(mAb), 建立对动物源性食品中残留α-ZER及其同系物的检测方法.方法:结合O-羧甲基羟胺法和EDC法制备α-ZER-BSA偶联物, 免疫BALB/c小鼠, 采用杂交瘤技术制备mAb.用夹心ELISA测定mAb Ig亚类;按Beatty法计算亲和常数;间接ELISA法测定效价;用直接竞争ELISA检测mAb与α-ZER的同系物、己烯雌酚、 19-去甲睾酮、链霉素及氯霉素等的交叉反应;绘制α-ZER标准品竞争抑制曲线, 检定抗体的灵敏度.用该抗体建立的直接竞争ELISA对37份动物肝组织样品进行检测, 并与HPLC检测结果比较.结果:紫外线扫描证明, α-ZER-BSA偶联成功.实验获得8株可稳定分泌抗α-ZER mAb杂交瘤细胞株, 其中1株(4E5)分泌的mAb效价较高, 为5.142×107, 其Ig亚型为IgG1.该mAb能特异识别α-ZER及其同系物, 而与其它常用兽药无交叉反应.建立了α-ZER直接竞争ELISA, 从HPLC确认为阴性的37份样品中, 筛出8份阳性样品.结论:利用mAb建立的直接竞争ELISA检测方法, 适合动物源性食品中残留α-ZER及其同系物的快速筛选.
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免疫亲和净化-液相色谱-串联质谱测定中成药中14个真菌毒素
目的:建立同时测定中成药中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2,HT-2毒素,T-2毒素,赭曲霉毒素A,伏马毒素B1、B2,玉米赤霉烯酮,α-玉米赤霉烯醇,β-玉米赤霉烯醇,α-玉米赤霉醇以及β-玉米赤霉醇共14个真菌毒素的测定方法.方法:采用PBS溶液和70%甲醇- PBS溶液依次提取样品中真菌毒素,提取液经多功能免疫亲和柱净化,0.1%吐温- PBS溶液和水依次淋洗,甲醇洗脱,氮气流下浓缩定容,测定时采用Waters Xterra Ct8 MS(100 mm ×2.1mm,3.5μm)分析柱,0.3 mL·min -的流速,梯度洗脱,质谱测定采用多反应监测(MRM)模式.结果:14个真菌毒素的小检出浓度(LOQ)为1.0 ~5.Oμg·kg-1;4个中成药基质的3个不同水平的添加回收率(n=6)为75.7% ~ 97.9%,RSD为5.3% ~ 13.8%.结论:本方法采用了多功能免疫亲和柱净化,质谱定性定量,加快了检测速度,降低了中成药复杂基体的干扰,方法检测限满足了国内外中成药多个真菌毒素限量控制要求.
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玉米赤霉醇对大鼠的胚胎毒性
背景与目的:观察玉米赤霉醇(α-zearalanol,Zeranol)对大鼠胚胎毒性的作用.材料与方法:将交配成功的Wistar大鼠随机分成溶剂对照组(阴性对照)、阳性对照组(乙酰水杨酸)和实验组(Zeranol 1、10、100 mg/kg 3个剂量组),实验组大鼠于妊娠7~16 d灌胃染毒,各组大鼠均于妊娠20d处死.剖腹取子宫称重,记录活胎、死胎、吸收胎数,测量胎仔发育指标并检查其畸形.结果:高剂量组孕鼠全部流产;中高剂量组孕鼠的增重明显低于阴性对照组,差异有统计学意义(P=0.000),且活胎减少,死胎和吸收胎增加(P=0.000),胎仔平均体重、身长、尾长明显低于阴性对照组,差异有统计学意义(P=0.000);小剂量组与阴性对照组相比差异无统计学意义.中、低剂量组胎鼠的外观、内脏和骨骼均未见明显畸形.结论:在本试验条件下,10 mg/kg以上剂量的Zeranol对大鼠有胚胎毒性作用.