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多糖类药物在体外对LAK细胞增殖功能的影响和抗肿瘤作用的实验研究
目的:探讨多糖类药物在体外对LAK细胞增殖功能的影响和抗肿瘤作用.方法:建立B16黑色素瘤小鼠模型,取小鼠脾细胞培养,1组加IL-2,2组加IL-2和人参多糖,3组加人参多糖,分别培养,用台盼蓝染色,观察多糖类药物对LAK细胞增殖功能的影响.同时Ⅰ组瘤体周围皮下注射1组培养细胞,Ⅱ组注射2组培养细胞,Ⅲ组注射3组培养细胞,取肿瘤交界部位皮肤组织,光镜和电镜观察肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)的形态和分布特征.结果:人参多糖与IL-2联合体外培养表明,人参多糖能促进LAK细胞的增殖能力(P＜0.05).实验组肿瘤交界区可见不同程度的淋巴细胞浸润,其中以Ⅱ组为多.结论:人参多糖与IL-2联合体外培养能促进LAK细胞的增殖能力,且培养的细胞体内应用淋巴细胞浸润明显增多.
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桃红四物汤Ⅱ号抑制小鼠B16黑色素瘤生长及VEGF,KDR/FLK-1表达
目的:观察桃红四物汤Ⅱ号对小鼠B16黑色素瘤生长、血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子受体-2(KDR/FLK-1)表达及肿瘤微血管密度(MVD)值的影响.方法:采用C57BL/6J小鼠皮下接种B16黑色素瘤细胞建立模型,分别给予2.5,5,10 g·kg-1桃红四物汤Ⅱ号水煎剂、环磷酰胺0.05g·kg-1及联合用药桃红四物汤Ⅱ号10 g·kg-1+环磷酰胺0.025 mg·kg-1,检测各组肿瘤体积、重量、VEGF和KDR/FLK-1表达及肿瘤MVD值.结果:桃红四物汤Ⅱ号5,10 g·kg-1及联合用药组肿瘤体积、重量、VEGF和KDR/FLK-1表达及肿瘤MVD值均较生理盐水组明显降低(P<0.01).结论:桃红四物汤Ⅱ号能抑制小鼠B16黑色素瘤的生长,其抗肿瘤机制可能与抗血管生成作用有关.
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人参多糖及IL-2对小鼠黑色素瘤细胞体内的抑制效应
目的探讨依赖人参多糖及IL-2的肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)在体内抗肿瘤作用. 方法建立B16黑色素瘤小鼠模型,将30只C57小鼠随机分为4组,1组瘤体周围皮下注射IL-2,2组注射IL-2和人参多糖,3组注射人参多糖,4组仅注射生理盐水作为对照组,通过测量瘤重、瘤体积和抑瘤率观察其抗肿瘤作用.同时取瘤周部位皮肤组织,光镜和电镜观察TIL细胞的形态和分布特征. 结果人参多糖与IL-2联合体内应用抗肿瘤作用显著强于对照组(P <0.05).实验组瘤周区可见不同程度的淋巴细胞浸润,其中以2组为多,且可见TIL细胞与肿瘤细胞有膜接触. 结论人参多糖与IL-2联合体内应用抗肿瘤作用显著强于对照组,且T IL细胞前者明显增多.
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多糖类药物对LAK细胞增殖功能的影响和抑瘤作用的实验研究
目的探讨多糖类药物对LAK细胞增殖功能的影响和抑瘤作用.方法建立B16黑色素瘤小鼠模型,Ⅰ组瘤体周围皮下注射IL-2,Ⅱ组注射IL-2和人参多糖,Ⅲ组注射人参多糖,通过测量瘤重、瘤体积和抑瘤率观察其抑瘤作用;同时取小鼠脾细胞培养,1组加IL-2,2组加IL-2和人参多糖,3组加人参多糖,用台盼蓝染色,观察多糖类药物对LAK细胞增殖功能的影响.结果人参多糖与IL-2联合体内应用抗肿瘤作用显著强于LAK细胞(P<0.05);人参多糖与IL-2联合体外培养表明,人参多糖能促进LAK细胞的增殖能力(P<0.05).结论人参多糖与IL-2联合应用在体内抗肿瘤作用显著强于LAK细胞,在体外培养能促进LAK细胞的增殖能力.
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pEgr-TNFα质粒的构建及基因-放射治疗小鼠黑色素瘤的实验研究
目的研究pEgr-TNFα重组质粒的构建及其联合放射治疗抑制小鼠黑色素瘤的效果和对免疫系统的影响.方法将TNFα cDNA插入pcDNA3.1质粒的多克隆位点,用Egr-1的启动子替代pcDNA3.1质粒的CMV启动子,构建成pEgr-TNFα重组质粒;建立小鼠B16黑色素瘤动物模型,肿瘤局部注射脂质体包裹的质粒,在不同时间测量肿瘤体积,并检测照后15 d部分免疫学指标.结果pEgr-TNFα基因-放射联合治疗后第3～15天,肿瘤生长速率明显低于单纯照射组、单纯基因治疗组和空质粒对照组.小鼠脾脏NK细胞毒活性、IL-2分泌活性、腹腔巨噬细胞TNFα和IL-1β活性均明显高于单纯放疗组.结论pEgr-TNFα基因-放射联合治疗抗肿瘤作用明显优于单纯放疗组和单纯基因治疗组,同时可以减轻放疗对机体免疫功能的损伤.
关键词： pEgr-TNFα重组质粒 X射线照射 B16黑色素瘤 基因治疗 放射治疗 -
pEgr-ssEndostatin重组质粒瘤内辐射诱导表达及其抗肿瘤作用
目的观察pEgr-ssEndostatin基因-放射治疗对移植黑色素瘤B16小鼠的抗肿瘤作用及其在瘤内辐射诱导表达.方法肿瘤局部注射脂质体包裹的pEgr-ssEndostatin重组质粒后42 h,接受20 Gy X射线照射,观察放疗后不同时间肿瘤大小,检测放疗后第2天瘤内Endostatin转录水平.结果pEgr-ssEndostatin基因-放射治疗荷瘤小鼠能够增强放疗疗效;单纯接种pEgr-ssEndostatin质粒组和接种pEgr-ssEndostatin质粒+20 Gy照射组小鼠的肿瘤组织内有Endostatin mRNA表达,且pEgr-ssEndostatin质粒照射组的Endostatin mRNA水平高于单纯pEgr-ssEndostatin质粒组.结论pEgr-En-dostatin基因-放射治疗抗肿瘤作用明显优于单纯放疗和单纯基因治疗,肿瘤局部转染重组质粒后照射瘤内Endostatin表达增强.
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pEgr-IFNγ重组质粒辐射诱导表达及其抑瘤作用的实验研究
目的探讨pEgr-IFNγ重组质粒在接种B16黑色素瘤小鼠体内的辐射诱导表达及其抑瘤效应.方法小鼠肿瘤局部注射脂质体包裹的重组质粒pEgr-IFNγ后36 h,接受不同剂量X射线照射,观察各组小鼠照射后不同时间肿瘤生长速率和平均存活时间,照射后第3天用RT-PCR法检测瘤内IFNγ转录水平, 照射后第1,3和5天用 ELISA法检测小鼠血清中IFNγ含量.结果照射后第3 天重组质粒+20 Gy组瘤内IFNγ转录水平明显高于重组质粒组;照射后第1,3 天血清中IFNγ含量明显高于重组质粒组和对照组;照射后第9～15 天,4次(质粒+5 Gy)组小鼠肿瘤生长速率明显低于重组质粒+20 Gy组,且平均生存时间明显延长.结论多次基因-较小剂量放射治疗的抑瘤效应优于单次基因-较大剂量放射治疗;基因-放射治疗组可能通过诱导瘤内IFNγ表达增强,使血液中IFNγ浓度升高,从而提高荷瘤机体免疫功能和抗肿瘤能力.
关键词： pEgr-IFNγ重组质粒 X射线 B16黑色素瘤 基因-放射治疗 -
pcEgr\|IFNγ基因治疗联合放射治疗抗肿瘤作用的实验研究
目的探讨pcEgr\|IFNγ基因-放射联合治疗对移植黑色素瘤B16小鼠的抗肿瘤作用及其免疫学机理.方法肿瘤局部注射脂质体包裹的pcEgr\|IFNγ重组质粒后36 h,接受20 Gy X射线照射,观察放疗后不同时间肿瘤大小,放疗后3 d瘤内IFN γ转录水平和15 d部分免疫学指标.结果pcEgr\|IFNγ基因-放射联合治疗后第3～15天,肿瘤生长速率明显低于单纯照射组,照后第9～15天明显低于单纯基因治疗组和空质粒对照组;治疗后第3天,pcEgr\|IFNγ基因-放射联合治疗组瘤内IFNγ表达水平明显高于单纯基因治疗组;脾脏NK细胞毒活性、IL-2和IFNγ分泌活性均明显高于单纯放疗组和单纯基因治疗组.结论 pcEgr\|IFNγ基因-放射联合治疗抗肿瘤作用明显优于单纯放疗和单纯基因治疗组,其机理可能与放疗诱导瘤内IFNγ基因表达增强,激活荷瘤机体抗肿瘤免疫功能有关.
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三七总皂苷联合环磷酰胺节律化疗抗肿瘤效应观察
目的 研究三七总皂苷(panax notoginsenosides,PNS)联合低剂量环磷酰胺(CTX)节律化疗的抑瘤、抗血管生成及对免疫功能的调节作用.方法 小鼠爪垫皮下注射B16细胞,建立B16-BL6黑色素瘤自发性转移模型.分为模型组、大剂量CTX组(MTD组)、低剂量CTX组(节律组)、三七总皂苷组、三七总皂苷联合低剂量CTX组(联合组).观察抑瘤率、胸腺和脾脏的脏器指数;ELISA法测定IL-2含量;进行外周血白细胞计数;肿瘤微血管密度(MVD)、血管内皮生长因子(VEGF)和趋化因子受体4(CXCR4)的表达情况;计数肺转移结节数.结果 节律组、三七总皂苷组及联合组小鼠肿瘤生长缓慢,抑瘤效果持久而稳定.联合组抑瘤率66.15%(P<0.01),对瘤体有较好的抑制作用.节律组相对于大剂量CTX组毒副反应降低,与PNS伍用后免疫功能各项指标明显提升,与MTD组比较有显著性差异(P<0.01),接近模型组水平,MVD、VEGF及CRCX4表达均下降(P<0.05),能够有效减少肺转移瘤灶数量.结论 三七总皂苷与低剂量CTX联合应用显示出有效地抗血管生成协同作用,减少转移,抑瘤效果持久,毒副反应小,能够提高小鼠整体机能状态与免疫水平.
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20(R)-人参皂苷Rh2抗B16-BL6黑色素瘤转移的作用
目的:探讨20(R)人参皂苷Rh2抗B16-BL6黑色素瘤转移的作用及其机制.方法:采用B16黑色素自发转移模型观察Rh2对B16黑色素瘤转移的作用,观察Rh2对B16黑色素瘤细胞自身侵袭能力的影响.结果:在B16黑色素瘤自发肺转移的实验中,Rh2组C57BL/6N小鼠肺部转移结节数明显减少,Rh2作用后的B16黑色素瘤细胞侵袭人工基底膜能力明显下降.结论:Rh2可明显抑制B16黑色素瘤的肺转移,该作用可能与降低B16黑色素瘤细胞的侵袭能力有关.
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血瘀状态下荷瘤小鼠肝转移的特点及相关机制研究
目的:以荷B16黑色素瘤细胞的血瘀证小鼠为研究对象,观察血瘀状态下恶性肿瘤肝转移的特点.通过观察血瘀状态下荷瘤小鼠血清HGF水平变化,了解血瘀证影响恶性肿瘤肝转移的相关可能机制.方法:雌性C57BL/6J小鼠,20只,6～8周龄,随机分为2组,每组10只.单纯荷瘤组:以生理盐水股四头肌注射,每天1次,连续14天,第15天经脾接种Bl6黑色素瘤建立肝转移模型;血瘀荷瘤组:以利血平注射液股四头肌注射,每天1次,连续14天,第15天经脾接种B16黑色素瘤建立肝转移模型.建立肝转移模型第12天摘眼球取血,脱椎处死动物,观察肝转移情况以及测定血清HGF水平.结果:①肝转移阳性率:单纯荷瘤组为100%,血瘀荷瘤组为70%,两组相比无明显差异(P＞0.05).②肝转移结节数及肝转移抑制率:血瘀荷瘤组肝转移结节数明显减少(P＜0.01),肝转移抑制率为65.41%.③血清HGF水平:血瘀荷瘤组血清HGF水平明显低于单纯荷瘤组(P＜0.01).结论:在血瘀状态下,HGF水平降低有可能影响肿瘤细胞在肝内的生长、运动、侵袭,终使荷B16黑色素瘤小鼠肝转移减少.
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人参皂苷Rg3抑制B16黑色素瘤生长和诱导凋亡的实验研究
目的观察人参皂苷Rg3抑制黑色素瘤生长和诱导其凋亡的作用并探讨其可能的作用机制.方法采用B16黑色素瘤实体瘤模型和TUNEL(TdT-mediated dUTP nick-endlabeling)染色观察Rg3对黑色素瘤生长和诱导凋亡的作用,免疫荧光染色方法检测caspase-3的表达情况.结果实体瘤模型中,Rg3各组瘤重明显低于对照组(P＜0.01),并且TUNEL染色和caspase-3免疫荧光染色见Rg3各组细胞阳性率均高于对照组(P＜0.05).结论 Rg3抑制B16黑色素瘤生长,并且促进肿瘤细胞caspase-3的活化和表达,诱导肿瘤细胞凋亡.
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透明质酸介导的树突状细胞肿瘤抗原提呈效应的形态学研究
目的:探讨透明质酸对树突状细胞肿瘤抗原提呈效应的调节作用.方法:建立B16黑色素瘤小鼠模型;用GM-CSF和IL-4诱导扩增小鼠骨髓来源的树突状细胞,并用透明质酸孵育,Brdu标记;经肿瘤周围皮下回输,以普通DC、生理盐水为对照组;测量瘤体积,计算抑瘤率.光镜、透射电镜、免疫组织化学法观察HA-DC于肿瘤局部组织和淋巴结内的分布和形态学特征.结果:HA-DC细胞组的抑瘤作用强于DC细胞组(P＜0.05);HA-DC细胞主要分布于肿瘤周围和淋巴结副皮质区,透射电镜观察可见HA-DC组肿瘤周围组织中有大量树突状细胞和淋巴细胞浸润,相互有膜接触,淋巴细胞以突起深入肿瘤细胞,并与其接触、融合,肿瘤细胞发生凋亡.结论:DC负载透明质酸后可以有效激活和扩增淋巴细胞,增强机体肿瘤特异性CTL效应.
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IL-2与化疗药物合用对B16黑色素瘤的细胞毒作用
目的研究IL-2与DTIC、DDP不同联合方案对B16黑色素瘤的细胞毒作用,为临床合理应用提供依据.方法采用MTT法检测各实验组的光密度(OD值),计算杀伤率.结果同时加IL-2组及先加IL-2,3小时后加DTIC组对B16抑制率降低,与单药DTIC比较有显著差异(t=3.05,P＜0.05;t=5.51,P＜0.01).同时给DDP和IL-2组或先加IL-2,3小时后再加DDP组对B16抑制率影响不大;与单药DDP比较没有显著差异(t=0.43,P＞0.05;t=0.49,P＞0.05).先加DTIC,3小时后再加IL-2组,与单药DTIC对B16的杀伤率比有所下降,但没有统计学显著差异(t=1.65,P＞0.05).先加DDP,3小时后再加IL-2组与单药DDP对B16的细胞毒作用相比,抑制率有显著提高(t=3.99,P＜0.05).结论IL-2能提高DDP的细胞毒作用,且应在先使用化疗药物的基础上给药.
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健脾理气中药对荷B16黑色素瘤小鼠肝转移的干预作用
目的 观察健脾理气中药对C57BL/6小鼠肝转移的干预作用.方法 雌性小鼠50只,随机分为空白组、荷瘤组、脾虚荷瘤组、中药荷瘤组、中药脾虚荷瘤组,每组各10只.以异位接种法在C57BL/6小鼠中建立B16黑色素瘤肝转移模型.空白组、荷瘤组予灌胃冷开水,脾虚荷瘤组灌胃大黄合剂,中药荷瘤组灌胃健脾理气合剂,中药脾虚荷瘤组予灌胃大黄合剂与健脾理气合剂.连续给药12 d,停药后次日将所有动物脱椎处死,眼球摘除法取血进行血浆分离;对血清DNA进行定量并观察健脾理气中药对荷瘤肝转移小鼠生存质量、肿瘤生长和肝转移的影响.结果 在正常小鼠中,血循环DNA为(62.4±25.52)ng/ml、荷瘤伴有肝转移小鼠为(241±73.7)ng/ml(P＜0.01);用健脾理气中药抑制肿瘤生长和转移的同时,荷瘤小鼠血环DNA也同步下降.结论 健脾理气中药可显著地抑制小鼠B16黑色素瘤脾脏种植瘤的生长,能降低脾虚荷瘤组肝转移的发生率,降低脾虚荷瘤组肝转移的分期,降低荷瘤小鼠血微量DNA.
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拟康氏木霉胞外多糖对荷瘤小鼠免疫系统及肿瘤的影响
目的 观察拟康氏木霉胞外多糖(TPeps)对B16黑色素瘤小鼠免疫系统的影响,探讨其抑瘤作用的免疫学机制.方法 将B16黑色素瘤小鼠模型,随机分组为低、中、高剂量TPeps组,分别给予100、200、400 mg/(kg·d)TPeps灌胃,对照组灌胃生理盐水,连续15 d后处死小鼠,取出瘤块、胸腺及脾脏称定质量,计算抑瘤率、胸腺及脾脏指数;MTT法测小鼠脾脏淋巴细胞增殖活性;ELISA法检测小鼠血清细胞因子TNF-α、IL-2水平;流式细胞术检测小鼠外周血NK细胞及T细胞.结果 中、高剂量TPeps组的抑瘤率、胸腺、脾脏指数、脾脏T淋巴细胞增殖活性、血浆TNF-α和IL-2水平明显高于对照组及低剂量TPeps组;中、高剂量TPeps组外周血NK细胞、T细胞比例较对照组上升明显.结论 拟康氏木霉胞外多糖对荷瘤小鼠的肿瘤生长有明显抑制作用,其机制可能是增强荷瘤小鼠的免疫功能.
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吴氏消瘤散对荷瘤小鼠的抗肿瘤作用
目的 评价吴氏消瘤散(太子参、白术、炙鳖甲、山慈菇、漏芦、土鳖虫、急性子、炙龟甲、薏苡仁、枳实等)的抗肿瘤活性.方法 建立S180肉瘤荷瘤小鼠模型、B16黑色素瘤荷瘤小鼠模型、人肺腺癌A549荷瘤裸鼠模型,并测定肿瘤质量和肿瘤抑制率.结果 吴氏消瘤散低、中、高剂量对鼠S180肉瘤细胞及人肺腺癌A549细胞,中、高剂量对小鼠B16黑色素瘤细胞的生长有一定抑制作用,抑瘤率分别为S180肉瘤低剂量组为29.07％ ～ 39.74％、中剂量组为33.99％ ～41.01％、高剂量组为43.21％ ～51.56％;人肺腺癌A549低剂量组为25.17％ ～ 33.69％、中剂量组为31.04％～38.84％、高剂量组为34.55％ ～ 44.66％;B16黑色素瘤中剂量组为26.45％～35.66％、高剂量组为39.59％ ～67.21％.结论 实验表明,吴氏消瘤散具有一定的抗肿瘤作用.
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多次小剂量pEgr-IFN-γ基因-放射治疗的抑瘤效应及其机制的研究
目的:探讨多次小剂量pEgr-IFN-γ基因-放射治疗对接种B16黑色素瘤小鼠的抑瘤效应及其免疫学机理.方法:肿瘤局部注射脂质体包裹的重组质粒pEgr-IFN-γ后36 h,接受不同剂量X射线照射,观察各组小鼠照后不同时间肿瘤生长速率和平均存活时间.照后第3天用RT-PCR法检测瘤内IFN-γ转录水平,ELISA法检测小鼠血清中IFN-γ含量,并于照后第15天检测小鼠部分免疫学指标.结果:照后第9～15天,4次(质粒+5Gy)组小鼠肿瘤生长速率明显低于质粒+20 Gy组,且平均生存时间明显延长;照后第3天质粒+20Gy组瘤内IFN-γ转录水平明显高于质粒组,照后第1,3天血清中IFN-γ含量明显高于质粒组和对照组,照后第15天脾脏NK细胞毒活性、IL-2和IFN-分泌活性均明显高于20 Gy照射组.结论:多次小剂量基因-放射治疗的抑瘤效应优于单次大剂量基因-放射治疗.基因-放射治疗组可能通过诱导瘤内IFN-γ表达增强,使血液中IFN-γ浓度升高,从而提高荷瘤机体免疫功能和抗肿瘤能力.
关键词： pEgr-IFN-γ重组质粒 X射线 B16黑色素瘤 基因-放射治疗 -
土贝母苷甲对小鼠B16黑色素瘤和Lewis肺癌转移的抑制作用
目的:本研究旨在探讨土贝母苷甲对小鼠B16黑色素瘤和Lewis肺癌转移的影响.方法:采用裸BALB/c小鼠B16黑色素瘤实验转移和裸BALB/c小鼠Lewis肺癌自发转移模型研究土贝母苷甲对肿瘤转移的影响;采用免疫组织化学法检测土贝母苷甲对转移相关基因CD44v6、ErbB-2和nm23-H1表达的影响.结果:腹腔注射低于全身中毒水平剂量的土贝母苷甲明显减少接种B16黑色素瘤细胞小鼠的肺重和肺转移灶数量,而对小鼠的健康和活力无明显影响;土贝母苷甲(2、3 mg·kg-1·d-1×14 d)和环磷酰胺(50 mg·kg-1·wk-1×2 d)对B16黑色素瘤细胞肺转移的抑制率分别为 68.8%、82.8%和 49.1%.土贝母苷甲治疗组小鼠Lewis肺癌原发肿瘤的平均瘤重明显低于对照组(P＜0.05).土贝母苷甲(2、3 mg·kg-1·d-1×14 d)和环磷酰胺(50 mg·kg-1·w-1×2 d)治疗组小鼠的肝转移抑制率分别为 46.3%、52.0%和 54.7%.土贝母苷甲显著下调促转移基因CD44v6和ErbB-2的表达,上调抑转移基因nm23-H1的表达.结论:土贝母苷甲对小鼠B16黑色素瘤的实验性转移和Lewis肺癌的自发性转移都有显著的抑制作用.土贝母苷甲对肿瘤转移的这种抑制作用与其抑制原发肿瘤生长、下调促转移基因CD44v6和ErbB-2及上调抑转移基因nm23-H1的表达有关,提示土贝母苷甲是一个阻止癌扩散和转移的候补化合物.
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反应停对荷恶性黑色素瘤小鼠的抑瘤作用研究
目的:研究反应停对荷B16黑色素瘤小鼠的抑瘤作用.方法:取小鼠建立黑色素瘤模型后,随机分成阴性对照组、反应停(低、中、高剂量)组及环磷酰胺(CTX)组.各组给予相应药物后检测瘤重及生存期并计算抑瘤率;免疫组化方法检测肿瘤血管内皮生长因子(VEGF)表达及微血管密度(MVD)值,逆转录聚合酶链扩增试验法检测vEGF mRNA表达.结果:与阴性对照组比较,反应停各组瘤重略有降低(P>0.05),生存期延长(P<0.05),VEGF及VEGFmRNA表达下降、MVD值降低(P<0.05).结论:反应停无明显抑瘤作用,但可能通过抑制VEGF的表达、减少新生微血管生成而延长荷瘤小鼠的生存期.
