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慈溪市2010-2011年手足口病病原学检测分析
目的:通过对2010-2011年手足口病(HFMD)病原学检测结果的分析,了解慈溪市HFMD流行特征.方法:收集监测哨点医院上送的临床诊断为HFMD病例标本,应用实时荧光(Real-time) RT-PCR法检测标本中的人肠道病毒(HEV)、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CVA16)特异性核酸.结果:443例标本中检出总肠道病毒阳性病例394例(88.94％),其中CVA16占总阳性率的22.34％,EV71占总阳性率的56.09％.病例年龄集中在1～5岁；男女性阳性比例为1.51:1;住院病例EV71阳性率为68.97％.结论:CVA16和EV71为该地手足口病的主要病原体,EV71是引起重症和住院病例的优势毒株型,在局部区域内CVA16型占主导.
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中成药佐治小儿手足口病63例分析
目的:总结分析现阶段小儿手足口病的临床特征及中西医结合治疗方法.方法回顾分析2008 年5 月至8 月本科住院的63 例手足口病患儿的临床资料.结果:该组患儿均具有典型的临床表现,符合2008 年版<手足口病诊疗指南>诊断标准.30 例伴发热,1 例重症,没有复发病例,所有患儿经积极中西医结合治疗均治愈,未出现严重并发症.结论:手足口病为儿科常见流行性病毒感染性疾病,本组患儿均临床表现典型,预后良好.临床医生及时正确诊断本病并给予有效的中西医结合治疗,可取得良好疗效,预防严重并发症的发生,在儿童集中场所要及时隔离患儿,防止疾病流行传播.
关键词： 手足口病 肠道病毒71型(EV71) 柯萨奇病毒 儿童 流行 -
2008～2011年贵州省肠道病毒71型分子流行特征分析
为研究贵州省肠道病毒71型(EV71)的基因型和分子流行特征,监测了全省报告的手足口病病例,选择2008年以来贵州全省部分EV71阳性标本进行病毒分离及VP1全基因测序(含重症病例、死亡病例和轻症病例),与国内外近年流行毒株及各亚型代表株进行基因比对,分析同源性及基因亚型.2008年、2009年及2011年贵州省流行的主要病原为EV71,获得109株参比序列毒株的同源性为95.3％～99.7％,贵州省毒株与邻省及山东省、上海市、南京市、吉林省和宁波市代表株的同源性高,轻症与重死病例的核苷酸及氨基酸序列无明显的特征性差异,未出现不同基因亚型病毒的输入或改变,仍属C4a亚型.同地区、同年度内的核苷酸序列差异小于跨地区、跨年度差异.
关键词： 肠道病毒71型(EV71) 手足口病 VP1基因 贵州 -
杆状病毒表达EV71病毒样颗粒的装配、制备纯化与鉴定
将EV71P1和3CD基因片段克隆人同一杆状病毒穿梭质粒Bacmid中,构建出重组杆状病毒表达质粒Bacmid-P1-3CD;脂质体介导其转染Sf9昆虫细胞获得共表达P1和3CD的重组杆状病毒(AcMNPV-P1-3CD).用IFA和Western-blot法对表达产物进行鉴定和分析.电镜结果显示P1经3CD切割装配成了大小约为27nm的类球形颗粒(即EV71VLPs).进一步分析影响杆状病毒表达系统的因素以对表达条件进行优化,结果显示MOI值和时间均可影响目的蛋白的表达,其中时间是主要因素.选择优化后条件利用无血清培养基对贴壁Sf9细胞在多层细胞培养器中进行VLPs的大量表达,密度梯度离心法纯化,SDS-PAGE结果可见三条大小约为39kD、34kD和26kD的VP1、VP0和VP3特异性条带.纯化后EV71VLPs颗粒结构完好,为下一步EV71蛋白结构的基础研究和基因工程疫苗的研究奠定了基础.
关键词： 杆状病毒 肠道病毒71型(EV71) 病毒样颗粒(VLPs) 制备 鉴定 纯化 -
2013～2015年中国重症手足口病的流行病学特征和病原构成
为阐明中国重症手足口病流行特征及病原构成情况,我们收集2013～2015年中国大陆地区上报的44 754例重症手足口病病例,按地理分布对不同地区重症手足口病的流行特征及病原构成进行分析.2013～2015各年重症发病数及占全部重症病例数的比例分别为10 276(22.96％),24 654(55.09％)和9 824(21.95％).91.35％的重症手足口病患者为0～3岁.发病人群中,男/女性别比为1.72∶1,散居儿童占87.02％.七大区病原构成以肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)为主,但其他EV在2015年东北、华南、华北、西北4个区病原谱的构成比均较2013年升高,华北的增幅大(30.92％增至59.74％).不同行政区确诊病例占同期重症病例数的构成比的差异具有统计学意义(x2 =1 784.04,P＜0.001).结果表明,在东北、华南、华北、西北4个区中,其他EV在重症手足口病的病原谱中的构成比不断增加,应重点关注其感染流行,并制定针对性的防控措施.
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EV71 3C蛋白酶表达纯化、活性分析及与抑制剂模拟对接研究
目的 表达和纯化肠道病毒71型(EV71)3C蛋白酶并通过与抑制剂相互作用预测其活性位点. 方法 将3C蛋白酶片段克隆至Pet-28a原核表达载体,重组质粒导人大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,获得3C蛋白酶融合蛋白,经Ni-NTA柱亲和纯化后以荧光多肽为底物检测3C蛋白酶的活性.使用AutoDock模拟3C蛋白酶与芦丁(Rutin)和芦平曲韦(Lupintrivir)对接. 结果 经酶切、PCR、测序证明pET28a-3C重组质粒构建成功,表达产物分子质量约23×103,纯化的3C蛋白酶酶活较好;对接结果表明Rutin和Rupintrivir通过形成氢键网和疏水键与3C蛋白酶底物结合位点结合,结合的活性氨基酸残基有His161、Gly163、Gly164、Phe170. 结论 成功制备了具有生物学活性的高纯度EV71 3C蛋白酶,建立了预测能力较好的对接模型,为以3C蛋白酶为靶点的药物设计和筛选奠定了基础.
关键词： 肠道病毒71型(EV71) 3C蛋白酶 蛋白纯化 酶活检测 分子对接 -
儿童危重肠道病毒71型脑炎及神经源性肺水肿的临床特征与救治
目的 探讨儿童重症手足口病合并中枢神经系统感染及神经源性肺水肿(NPE)的临床特征、救治经验和转归.方法 总结2008年5月至6月收入安徽省阜阳市级医院儿童重症监护病房(PICU)手足口病合并巾枢神经系统感染及NPE救治资料.结果 36例患儿中,平均年龄15.8个月(4月至4岁),死亡7例,病死率为19.4%.出现危重症状平均病程2.1 d(0.5～5.0 d).12例(33.3%)无皮疹.神经系统表现为脑干脑炎27例(75%)、脑干脑炎伴脊髓炎6例(16.7%)、腩炎3例(8.3%).NPE突出表现是突然呼吸急促、粉红色或血性泡沫液(痰)、非对称性肺水肿或肺出血,是直接死亡原因.主要救治措施为机械通气、甘露醇、甲基强的松龙、静脉丙种球蛋白、血管活性药物,其中9例患儿(25%)进行容量复苏.结论 EV71脑炎合并NPE,发病年龄小,进展快,病死率较高.早期诊断、及时呼吸支持、积极降颅压、维护循环功能是救治成功的关键.
关键词： 肠道病毒71型(EV71) 脑炎 神经源性肺水肿 手足口病 儿童 -
2011年武汉及周边城市手足口病病原学及流行病学研究
目的 了解武汉市及周边城市2011年4月至2012年3月手足口病的病原学及流行病学特征,为本地区手足口病的防治提供依据.方法 采集手足口病患者咽拭子标本,采用实时荧光定量PCR方法检测肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CA16)的核酸.结果 2011年4月至2012年3月共收集手足口病咽拭子标本1844例,其中EV71阳性372例,阳性率为20.2％；CA16阳性460例,阳性率为24.9％；EV71和CA16双阳性38例,阳性率为2.1％.在病例收集期间,武汉及周边城市暴发的手足口病有2个高峰期,第1个高峰期为2011年5～7月春末夏初季节,EV71亚型为主要病原体；第2个高峰期为2011年9～12月秋末冬初季节,CA16病毒为主要病原体；发病患者集中于1～3岁儿童,且男性明显多于女性；散居儿童人数明显多于幼托儿童；EV71亚型患者发热、中枢神经系统(呕吐、肢颤、嗜睡和惊厥)症状所占比例要显著高于CA16亚型.结论 2011年武汉市及周边城市2个手足口病高峰期的主要病原体分别是由EV71和CA16亚型引起的,及早了解手足口病病原体的构成及流行病学特征,对于其防控具有重要意义.
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肠道病毒71型假病毒荧光定量检测方法在疫苗中和抗体检测中的应用
目的 假病毒荧光定量方法(PVLA)应用于EV71疫苗动物样本和人体样本检测的适用性研究.方法 分别采用细胞病变法(CPE)和PVLA方法检测82份EV71试验小鼠血清以及27份疫苗临床试验人体血清样本,比较两者检测的一致性.结果 应用两种方法检测82份疫苗免疫小鼠血清,EV71中和抗体滴度的相关系数为0.842,Bland-Altman分析显示高度一致性；检测27份EV71临床试验人体血清样本的中和抗体,两种方法具有高度一致性.结论 PVLA与CPE方法具有高度一致性,适用于疫苗免疫动物样本和临床评价人体样本EV71中和抗体的检测.
关键词： 肠道病毒71型(EV71) 假病毒 荧光定量 中和抗体 -
新型肠道病毒71型(EV71)疫苗质量控制和评价标准的研究
目的 研究建立新型肠道病毒71型(EV71)疫苗质量控制标准和评价体系,为EV71疫苗研发提供基础.方法 根据创新型疫苗研发的要求,充分发挥技术优势,开展EV71疫苗质控标准、标准品和评价方法研究.结果与结论 建立EV71灭活疫苗的中和抗体和抗原定量测定标准品,统一不同企业疫苗的质控标准,规范疫苗的评价体系,为EV71疫苗的研发提供保障.
关键词： 肠道病毒71型(EV71) 疫苗 质量控制 -
肠道病毒71型IgM EIA检测方法评价
目的 评估EIA试剂检测肠道病毒71型的准确性.方法 对2008年手足口病阳性标本,用EV71-IgM试剂与PCR检测、中和试验等比较不同地区EV71阳性标本的检出符合情况.结果 EV71-IgM试剂对EV71感染的急性期标本有较好的检出性,对不同地区的阳性标本检出良好,与高效价的中和阳性标本及病毒分离PCR阳性有较好对应性,检出时间早,灵敏度高,特异性为98.6%.结论 采用传统的酶联免疫法检测EV71,操作简单快速,对发病1～2 d的患者即可检出,适合作为临床EV71感染诊断的辅助手段.
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2013-2015年菏泽市手足口病病原监测结果
目的 了解2013-2015年菏泽市手足口病(HFMD)的病原情况,研究其流行病学特征,为菏泽市今后HFMD疫情的研判和防治提供参考.方法 从2013-2015年菏泽市各县区HFMD定点医疗单位收集的临床诊断病例的粪便或肛拭子标本中,提取病毒核酸,应用实时荧光定量PCR进行EV71、CoxA16和其他肠道病毒核酸检测.结果 2013-2015年共收集样本1 688份,其中阳性样本1 434份,检出率为84.95％;EV71阳性样本844份,阳性率为50.00％;CoxA16阳性样本197份,阳性率为11.67％;其他肠道病毒阳性样本393分,阳性率为23.28％.各年病毒型别分布差异有统计学意义(P＜0.05).结论 2013-2015年菏泽市HFMD主要由EV71和CoxA16引起.确诊病例病毒检出率从高到低分别是EV71、其他肠道病毒和CoxA 16.2014年出现过CoxA16病原的小暴发,2013和2015年均以EV71为主.
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肠道病毒71型VP2蛋白对细胞损伤作用
目的 研究VP2蛋白在肠道病毒71型(EV71)致病机制中的作用.方法 采集山东省临沂市人民医院轻症和重症手足口病(HFMD)患儿的粪便标本(SDLY 11和SDLY 107),应用MEGA 4.0软件对SDLY 11、SD-LY 107 VP2区氨基酸序列进行比对分析;参考SDLY 11、SDLY 107全序列测序结果设计VP2区扩增引物,构建表达载体VP2pBluescriptSK(+),通过体外转染Vero细胞表达VP2蛋白;乳酸脱氢酶实验检测不同临床症状病毒株的VP2蛋白对细胞损伤的影响.结果 序列比对分析结果显示,SDLY 11、SDLY 107 2个病毒株的VP2蛋白在第199位氨基酸处存在差异(V199I);SDLY 11、SDLY 107的VP2蛋白可在Vero细胞中表达;乳酸脱氢酶实验结果显示,2组蛋白对细胞损伤情况差异无统计学意义(P＞0.05).结论 EV71的VP2蛋白可能对细胞损伤的影响不大,其在致病机制中的意义尚需进一步研究.
关键词： 肠道病毒71型(EV71) 手足口病(HFMD) VP2蛋白 细胞损伤 -
唐山市2009年手足口病病原学检测分析
近年来,手足口病(HFMD)疫情不断上升,多数病例通常症状较轻,根据典型的皮疹或疱疹即可做出诊断,但对于重症病例、临床诊断不明以及聚集病例,进行实验室病原学鉴别诊断具有重要的意义[1].为掌握河北省唐山市手足口病病原学分布及其特点,本研究对2009年唐山市疑似肠道病毒感染病例标本肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CA16)进行实验室鉴别诊断,并对检测结果进行分析.结果报告如下.
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手足口病常规检测方法改进分析
目的 为提高RT-PCR的检出水平,进一步改进手足口病的检测方法提供参考依据.方法 同时采用RT-PCR和real-time RT-PCR方法检测2011年2-5月河南省新乡市各级医院临床诊断为手足口病患者的100份粪便标本及50份非肠道病人粪便标本中肠道病毒通用型(PE)、柯萨奇病毒A组16型(CVA16)和肠道病毒71型(EV71)核酸；改进引物,RT-PCR检测CVA16;在NCBI中对RT-PCR使用的各组引物进行BLAST比对,并使用Primer Premier 6.0及Oligo 6.62软件分析各引物.结果 Real-time RT-PCR法检出CVA16、EV71和PE阳性率分别为36％、33％和71％,常规RT-PCR法分别检出20％、27％和64％,2者的PE、EV71检出率无统计学差异,而CVA16的检出率差异有统计学意义(x2=6.349,P＜0.05)；改进引物后,RT-PCR法CVA16阳性检出率提高到35％(x2 =5.643,P＜0.05),与临床诊断的符合率增加10％,接近real-time RT-PCR检测水平；2种方法的特异性、漏诊率及误诊率无明显差异.结论 常规RT-PCR法对CVA16的检出率较低,采用改进后的引物,其检出率达到real-time RT-PCR水平.
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肠道病毒71型山东临沂分离株3D区遗传进化分析
目的 构建肠道病毒71型(EV71)山东临沂分离株3D区的系统进化树,进行遗传进化分析,探讨3D区与神经毒力的关系.方法 于2009-2010年在山东省临沂市人民医院采集手足口病(HFMD)患儿的粪便标本和咽拭子标本107份,进行EV71的分离;用Bioedit和MEGA 4对EV71山东临沂分离株SDLY1、SDLY11、SDLY48、SDLY96、SDLY107的3D区进行序列分析,参比序列选自GenBank.结果 3D区的系统发生树分析结果显示,5株临沂分离株在发生树上比较集中,SDLY11、96、107的3D区同源性高,与CoxA16原型株G-10的系统发生关系较近,与EV71原型株BrCr/70的系统发生关系较远;3D区碱基构成比和氨基酸构成比分析显示,含量高的碱基为A(29％),含量高的氨基酸为亮氨酸(＞10％);基因序列比对和氨基酸序列比对分析结果显示,碱基突变较多,但大多为静默突变,临沂分离株与CoxA16 G-10之间的氨基酸突变中有很大一部分是赖氨酸与精氨酸之间的突变,在SDLY107的3D区发现了3个特有的氨基酸突变:N37S、K142R、G261E.结论 EV71山东临沂分离株3D区的进化可能与CoxA16 G-10有关,突变N37S、K142R、G261E可能与EV71的神经毒力有关.
关键词： 手足口病(HFMD) 肠道病毒71型(EV71) 3D区 遗传进化分析 -
肠道病毒71型致中枢神经系统感染研究进展
肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染多发生于＜5岁幼儿,已成为目前全球范围内取代脊髓灰质炎的重要的中枢神经毒性病原,严重威胁婴幼儿的健康.近年来,EV71在亚太地区的流行呈逐年上升趋势,特别是EV71更易导致中枢神经系统(central nervous system,CNS)感染,是手足口病患儿死亡的主要原因,已引起广泛的关注.
关键词： 肠道病毒71型(EV71) 中枢神经系统感染 致病机制 -
济南地区2009-2013年手足口病分子流行病学特征
目的 对2009-2013年山东省济南地区手足口病(HFMD)的病原及流行特征进行分析,了解HFMD的发病特点及流行趋势,为HFMD防控提供科学依据.方法 选取济南地区2009-2013年临床诊断为HFMD的病例为对象,收集各县(市、区)疾病预防控制中心对辖区内发生的HFMD病例的流行病学调查资料,采集患者发病1周内的粪便、咽拭子等标本共计3 792例,采用肠道病毒通用(PE)、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CoxA16)特异性引物通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)进行病原学分析;采用SPSS 11.0统计软件对流行病学资料进行统计分析.结果 2009-2013年济南地区3 792例HFMD患者(包括138例重症)标本中,2 843例检测到肠道病毒,阳性率为74.97％;其中1 143例为EV71阳性(40.20％),955例为CoxA16阳性(33.59％),其他肠道病毒(EV)阳性737例(25.92％),EV71和CoxA16混合感染阳性8例(0.28％);138例重症患者的感染病原主要为EV71 (86.36％);HFMD患者主要集中于＜4岁儿童(82.15％),发病高峰集中于4-5月份(31.70％),肠道病毒阳性检出率与性别无关;5年间呈现出EV71和CoxA16交替流行的态势,病原构成比之间差异有统计学意义(x2=116.38,P＜0.05).结论 山东省济南地区2009-2013年HFMD病原以EV71和CoxA16为主,并交替流行;EV71是引起HFMD重症及死亡病例的主要毒株类型.
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EV71疫苗接种意愿与接种行为差异分析
目的 了解肠道病毒71型(EV71)疫苗接种行为及其与接种意愿差异的影响因素,以更好地发挥该疫苗的作用.方法 在广东省广州市海珠区选取5个街道,于2016年6月在各街道接种门诊共选取1 483名6～35月龄儿童家长进行基线调查,其中1 113名于EV71疫苗投入使用约4个月后完成了随访调查,分析疫苗接种及其与接种意愿差异的影响因素.结果 基线调查、随访调查的愿意接种率分别为81.39％、83.47％;1 113名随访调查者EV71疫苗接种率为67.30％,与接种意愿差异有统计学意义(r=78.433,P=0.000).家长认为疫苗安全或不清楚是否安全、认为疫苗可以≥70％或不确定多大概率预防手足口病以及听从接种医生的安排或建议是家长让儿童接种EV71疫苗的有利因素(P＜0.05);而儿童有手足口病史、较清楚EV71病毒与手足口病关系的家长则倾向于不让儿童接种EV71疫苗(P＜0.05).对愿意接种者而言,认为疫苗安全或不清楚是否安全(OR很安全vs不安全=5.264,OR一般vs不安全=3.757,OR不清楚vs不安全=1.582)是促使其将意愿转变为实际接种的因素,而认为疫苗价格较贵(OR贵vs便宜=0.543)、较清楚EV71病毒与手足口病关系(OR清楚vs不清楚=0.544,OR部分清楚vs不清楚=0.731)则是阻碍其将意愿付诸行动的因素;对不愿接种者而言,听从接种医生的安排或建议(OR很大程度vs很小程度=3.074,OR一般程度vs很小程度=1.836)以及受朋友等其他人的影响较大(OR很大程度vs很小程度=2.445)是促使其意愿转变并终接种疫苗的因素,而清楚EV71病毒与手足口病关系(OR清楚vs不清楚=0.416)则是使其坚持意愿不接种疫苗的因素.结论 家长对EV71疫苗效果、安全性及EV71病毒与手足口病关系的认识以及接种医生的安排或建议是影响EV71疫苗接种的重要因素.
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鸭跖草不同提取方法提取物的体外抗病毒实验研究
目的:为建立鸭跖草抗病毒谱-效相关评价系统,对鸭跖草不同提取方法提取物体外抗病毒活性进行筛选,后选择鸭跖草75％乙醇冷浸提取物抗呼吸道合包病毒(RSV)活性和鸭跖草蒸馏水回流提取物抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)活性进行下一步研究.方法:采用体外抗病毒实验CPE法结合MTT染色法,以半数治疗浓度(EC50)和半数细胞毒性浓度(TC50)并以治疗指数TI值作为评价指标,观察鸭跖草不同提取物对肠道病毒71型(EV71)、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)和呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用.结果:中药材鸭跖草对于肠道病毒71型(EV71)病毒未见明显效果;75％乙醇冷浸的鸭跖草浸取液对呼吸道合胞病毒(RSV)病毒有较好的抗病毒效果,并且测得鸭跖草75％乙醇冷浸浸取液抗呼吸道合胞病毒(RSV)的治疗指数为21.1,阳性对照药治疗指数为29.8;采用蒸馏水提取的鸭跖草提取液对单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)病毒有较好的抗病毒效果,且测得鸭跖草蒸馏水回流提取物抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)的治疗指数为19.6,阳性对照药治疗指数为36.7.结论:鸭跖草在抗呼吸道合胞病毒(RSV)和单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)有一定的效果,为进一步进行鸭跖草抗病毒研究和建立鸭跖草谱-效模型提供了科学依据和数据支持.
