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桂枝汤对高、低体温大鼠下丘脑组织转录因子CREB的影响
目的:探讨体温变化时下丘脑组织中磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(pCREB)的活性及桂枝汤调节体温作用与此关系.方法:选用前列腺素受体3(EP3)发热大鼠模型及氨基比林低体温大鼠模型,采用比色法测定给予桂枝汤后大鼠下丘脑组织中pCREB活性.结果:两种模型下丘脑组织中pCREB活性均有升高倾向,以发热大鼠明显;给予桂枝汤可使发热大鼠的pCREB活性降低,而低体温大鼠的pCREB活性变化不明显.结论:pCREB参与了大鼠的体温变化过程;桂枝汤的解热作用可能与降低pCREB活性有关;pCREB基本上不参与低体温机制的调节或仅有较弱调节作用,桂枝汤的升温作用与其关系不明显.
关键词： 桂枝汤 大鼠 体温 下丘脑 cAMP反应元件结合蛋白 -
桂枝汤对体温双向调节作用机理探讨一对下丘脑中腺苷酸环化酶活性及环一磷酸腺苷含量的影响
桂枝汤在对两种不同体温状态模型大鼠呈现解热或升温作用的同时,对酵母诱导的发热大鼠,可显著抑制其下丘脑中AC活性,降低异常升高的cAMP含量;而对安痛定诱导的低体温大鼠,又可显著增强其下丘脑中AC活性,增加异常降低的cAMP含量.实验结果提示:桂枝汤对体温的双向调节作用可能部分是通过影响AC活性,从而改变下丘脑细胞中cAMP含量来实现的.
关键词： 桂枝汤 体温双向调节 腺苷酸环化酶(AC) 环一磷酸腺苷(cAMP) -
桂枝汤对低体温大鼠下丘脑组织蛋白激酶A和C活性的影响
目的:研究低体温大鼠下丘脑蛋白激酶A(PKA)、蛋白激酶C(PKC)活性的变化及桂枝汤的升温作用机理.方法:选用腹腔注射氨基比林低体温大鼠模型,先观测桂枝汤(p.o.)对模型大鼠体温的影响,继而采用放射性同位素法,测定给予桂枝汤后低体温大鼠下丘脑组织中PKA、PKC的活性.结果:桂枝汤可使低体温模型大鼠下丘脑组织中受抑的PKA、PKC活性显著增强,促进体温恢复.结论:PKA、PKC参与了大鼠的低体温过程,桂枝汤的升高体温的作用可能与提高下丘脑组织中PKA、PKC活性有关.
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桂枝汤对发热及低体温大鼠下丘脑15-羟基前列腺素脱氢酶活性的影响
目的:研究桂枝汤对发热和低体温大鼠下丘脑组织内15-PGDH活性的影响,进一步阐明桂枝汤体温双向调节作用机制.方法:采用核素示踪技术测定酵母性发热和安痛定性低体温大鼠及桂枝汤处理组下丘脑组织内15-PGDH活性,并观察其与体温变化的关系.结果:皮下注射酵母可降低下丘脑15-PGDH活性,桂枝汤灌胃可剂量依赖性地抑制该变化并促进发热大鼠体温的恢复,两者呈正相关;而腹腔注射安痛定后,随着体温下降,15-PGDH活性有升高倾向,桂枝汤可抑制该酶活性并加速体温恢复正常,但两者呈弱相关.结论:大鼠下丘脑内15-PGDH可能参与机体体温调节并可能是桂枝汤解热作用靶点之一,但与其抗低体温作用关联不大.
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桂枝汤含药血清对不同比例Poly(I∶C)-LPS组合刺激肺巨噬细胞的干预效应
目的:基于方证相应原理,旨在探索建立一种模拟病毒-细菌共感染的桂枝汤汤证体外细胞模型,为进一步桂枝汤汤证动物模型的建立积累数据.方法:研究桂枝汤含药血清对不同浓度比例的聚肌胞苷酸[polyinosinic polycytidylic acid,Poly(I∶C)]与脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)混合物刺激的大鼠肺的巨噬细胞(NR8383) Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)及其下游信号转导通路的影响.采用大鼠肺巨噬细胞株NR8383,分别用25,50,100 mg· L-1的Poly(I∶C)与1,5,10 mg·L-1 LPS刺激NR8383细胞,前者于3,6,12,24 h后取细胞上清,后者于6,12,24,48 h后取细胞培养上清液,酶联免疫吸附测定方法(ELISA)测定炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β)的含量,通过上述2个指标选择Poly(I∶C)与LPS合适的浓度区间与反应的适时间.利用其Poly与LPS配比为10∶1,20∶1,30∶1,40∶1,50∶1来探讨其对NR8383细胞的TNF-α,IL-1β的含量和TLR-2,3,4,6 mRNA表达的影响,以及桂枝汤含药血清的干预作用,通过上述TNF-α,IL-1β,TLR-2,TLR-3,TLR4,TLR-6 6个指标对实验结果进行综合评价,筛选刺激效应和桂枝汤干预效应为明显的Poly(I∶C)-LPS比例.结果:选择刺激时间为6h,Poly(I∶C)在50 mg·L-1以下,LPS在1 mg·L-1时作为合适的刺激浓度.在所用Poly(I∶C)-LPS(10∶1,20∶1,30∶1,40∶1,50∶1)中,与正常组比较,Poly(I∶C)-LPS 50∶1组合刺激效应显著(P＜0.01),与相对应的模型组比较,桂枝汤含药血清对Poly(I∶C)-LPS 10∶1组合干预效果为显著(P＜0.01).结论:Poly(I∶C)-LPS 10∶1刺激NR8383巨噬细胞株NR8383可以作为一种桂枝汤汤证细胞模型,用于桂枝汤及其类方的基础研究.
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桂枝汤对大鼠血压双向调节作用及其有效部位探讨
采用无损伤大鼠尾脉搏测压法,探讨了桂枝汤对大鼠血压的双向调节作用,并对其有效部位进行了筛选.结果表明:桂枝汤能明显降低自发性高血压大鼠(SHR)血压,能明显升高复方降压片致低血压大鼠血压,提示桂枝汤对大鼠血压具有明显双向调节作用;桂枝汤经化学分离提取所得A部分(Fr.A)和E部分(Fr.E)明显降低SHR血压,B部分(Fr.B)明显升高复方降压片致低血压大鼠血压;提示Fr.A、Fr.E和Fr.B为桂枝汤大鼠血压双向调节作用的有效部位.
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桂枝汤对发热大鼠下丘脑蛋白质组影响初探
目的:初步观察桂枝汤对发热大鼠下丘脑组织中蛋白质的差异表达,为进一步探讨桂枝汤的解热分子机制奠定基础.方法:应用蛋白质组技术,对酵母发热大鼠模型和桂枝汤治疗组下丘脑组织中蛋白质表达进行比较,观察其差异点.结果:发现模型和治疗大鼠下丘脑蛋白表达有明显差异,主要是蛋白表达量的增加和减少以及个别蛋白等电点的改变,其中在给予桂枝汤后有8种蛋白(Mr/pI:28.9 kD/4.47,24.4 kD/6.28,25.4 kD/6.39,25.9 kD/6.39,17.6 kD/7.38,17.2 kD/7.43,24.9 kD/7.39,26.9 kD/7.59)表达增强,6种蛋白(Mr/pI:14.3kD/4.83,28.5 kD/4.39,16.2kD/4.11,15.3 kD/6.7,30.5 kD/7.09,30.5 kD/7.13)表达降低,1种蛋白(Mr/pI:14.8 kD/5.4)等电点发生了改变,差异蛋白数量约占可分辨蛋白点的2.3%,本次实验未发现新的差异蛋白点.结论:桂枝汤的解热作用可能与改变下丘脑组织中某些蛋白质的表达及修饰有关.
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桂枝汤对发热及低体温大鼠下丘脑可溶性一氧化氮合酶的影响
目的:研究发热和低体温大鼠下丘脑可溶性N0S活性的变化及桂枝汤对之的影响.方法:利用分光光度法测定酵母性发热大鼠、安痛定性低体温大鼠及桂枝汤治疗组下丘脑部位N0S活性.结果:皮下注射酵母5 5h后大鼠下丘脑组织内N0S活性显著升高,而腹腔注射安痛定可使该部位N0S活性明显降低,与体温变化呈正相关;桂枝汤(p.o.)可剂量依赖性地对抗酵母诱导的大鼠下丘脑N0S活性升高,与其解热作用平行;但在低体温模型上可进一步降低该区N0S活性,该作用与抗低体温作用呈负相关.结论:下丘脑可溶性N0S可能参与了大鼠体温调节;桂枝汤抑制酵母诱导的下丘脑N0S活性升高可能是其解热作用机制之一,但其抗低体温作用可能与该区N0S变化无关.
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给予桂枝汤的大鼠血清灭活对HSV-1致细胞病变的影响
将灌服桂枝汤后大鼠血清灭活,观察灭活前后血清对HSV-1致CPE的作用.结论是在以给药后的动物血清进行体外试验时,①要设正常动物血清对照,以观察正常动物血清本身的作用,②采用灭活后的含药血清为好,以去除血清中抗体与补体.③可根据中药复方的特点,以相当于临床等效剂量为中心,多设几个剂量组,以便正确判断含药血清的真正药效.
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发热大鼠脑组织15-羟基前列腺素脱氢酶活性的时相变化及桂枝汤的影响
目的:研究发热大鼠下丘脑和其他脑组织15-PGDH活性的时相变化及桂枝汤的影响.方法:利用Radio-TLC法测定发热大鼠及桂枝汤治疗组脑组织不同时间的15-PGDH活性.结果:皮下注射酵母后,伴随体温的升高,大鼠下丘脑PGDH活性先降低后逐渐恢复,桂枝汤可阻止该酶早期的活性降低并升高至正常值以上;其他脑组织PGDH活性也有类似变化,但桂枝汤可抑制后期的PGDH活性向正常恢复.结论:下丘脑PGDH活性降低,参与了酵母性发热的早期机制,升高该部位PGDH活性可能是桂枝汤解热机理之一.
关键词： 桂枝汤 体温调节 15-羟基前列腺素脱氢酶 下丘脑 大鼠 -
桂枝汤四个主要组成成分不同组合对白细胞介素1β刺激的脑微血管内皮细胞分泌前列腺素E2的影响
目的:研究桂枝汤四个主要组成成分不同组合对白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)刺激的大鼠脑微血管内皮细胞分泌前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)的影响.方法:通过放免法测定这些不同组合成分作用细胞后的上清液PGE2含量.结果:组合中有20组成分组合能降低因IL-1β刺激而产生的PGE2含量,并有统计学意义.结论:这些成分的组合有可能是桂枝汤有效部位A双向调节体温的物质基础.
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桂枝汤主要成分对PGE2刺激的胚胎大鼠下丘脑神经cAMP-PKA的影响
目的:cAMP-PKA(环磷酸腺苷-蛋白激酶A)是细胞内非常重要的信号转导途径.本实验研究了桂枝汤四个主要组成成分,桂皮酸、桂皮醛、芍药苷及甘草次酸,不同组合对PGE2(前列腺素E2)刺激的胚胎大鼠下丘脑神经细胞内cAMP-PKA水平的影响.方法:用放免法测定不同组合成分作用的细胞cAMP含量和PKA活性.结果:各成分作用时,桂皮酸(0.625μg/mL)、桂皮醛(10、0.625μg/mL)、芍药苷(0.625μg/mL)和甘草次酸(10μg/mL)对细胞cAMP含量或PKA活性有显著的降低作用;在27组不同成分的组合中,有19组对细胞cAMP含量、16组对细胞PKA活性有显著的降低作用.结论:桂皮酸、桂皮醛、芍药苷和甘草次酸的不同浓度组合可能与桂枝汤体温双向调节作用的物质基础有关,其作用可能与调节cAMP-PKA通路有一定的关系.
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中药复方血清药理研究方法学探讨--Ⅳ
家兔灌胃桂枝汤,1日1次,连续3d给药以及1日2次,连续3d给药,末次给药后0.5～9h采血,分离血清,观察各含药血清对病毒致细胞病变作用的影响.结果:上述各方法制备的含药血清抗副流感病毒致CPE作用所表现出的有效时间点分别为:无明显有效时间点、4～5h、2h、5～7h、1～6h,1日2次给药3d及1日3次给药后采集的含药血清可引起培养细胞明显的退行性改变.
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桂枝汤及其生物转化模拟产物对IL-1β介导的bEnd.3细胞PGE2代谢通路的影响
目的:研究桂枝汤及其生物转化模拟产物对白细胞介素-1β(IL-1β)介导的小鼠脑微血管内皮细胞株(bEnd.3)细胞前列腺素E2(PGE2)代谢通路的影响.方法:制备了桂枝汤及桂枝汤生物转化模拟产物的含药血清(分别设五个浓度组),采用酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫印记法(Western blot),观察桂枝汤及其生物转化模拟产物对IL-1β刺激的bEnd.3细胞磷酸化丝裂原活化的蛋白激酶p38(p-p38 MAPK),胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)、分泌型磷脂酶A2(sPLA2)、环氧合酶2(COX-2)、前列腺素E合成酶(PGEs),15-羟基前列腺素脱氢酶(15-PGDH),磷酸化核因子κB(p-NF-κB)以及前3列腺素E2(PGE2)分泌及表达的影响.结果:IL-1β作用于细胞10 h后,各项指标均明显上调,与对照组比较,P<0.01.除质量终浓度为2.5%的桂枝汤含药血清对PGEs,sPLA2;终浓度为1%的模拟药对PGEs;终浓度为2.5%的含药血清对PGEs,sPLA2,cPLA2作用不显著外,其他各浓度组与模型组比较均出现显著性差异.结论:桂枝汤及其生物转化模拟产物对IL-1β刺激bEnd.3细胞合成PGE2的代谢酶系统有不同程度的抑制作用,从而降低了前炎症介质和中枢发热介质PGE2的释放和分泌.结果提示,桂枝汤及其生物转化模拟产物对脑微血管内皮细胞分泌PGE2具有相似的药效,为模拟产物的应用和开发提供了实验支持.
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桂枝汤有效部位B对胃肠运动双向调节作用的实验研究Ⅵ-对cAMP、蛋白激酶A和C活性的影响
目的:探讨桂枝汤有效部位B(Fr.B)对胃肠运动双向调节的作用机理.方法:应用放射免疫法测定阿托品致胃肠运动受抑或新斯的明致胃肠运动亢进大鼠下丘脑及胃肠组织cAMP含量、PKA和PKc活性.结果:对阿托品致胃肠运动受抑大鼠,Fr.B可拮抗下丘脑和空肠组织cAMP含量及PKA、PKc活性的降低,对胃窦组织PKA活性的降低也具拮抗作用;对新斯的明致胃肠运动亢进大鼠,Fr.B可升高胃窦组织PKA活性、下丘脑和空肠组织PKc活性,对cAMP含量无明显影响.结论:Fr.B对胃肠运动的双向调节与其影响下丘脑及胃肠局部组织中cAMP含量和蛋白激酶活性有关.
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桂枝汤加味治疗气血不和型儿童白癜风及对自身免疫的调节
目的:观察桂枝汤加味治疗气血不和型儿童白癜风的临床疗效及对T淋巴细胞亚群、免疫球蛋白和补体的影响.方法:将134例符合要求的患儿,采用SAS软件生成,随机按数字表法分为观察组与对照组各67例.对照组采用0.03％他克莫司软膏,适量外涂,2次/d.观察组在对照组治疗的基础上服用桂枝汤加味,1剂/d.两组疗程均连续治疗3个月.进行治疗前后白癜风面积评分指数(VASI),黑素指数(MCI),皮肤病生活质量(DIQL)调查量表和气血不和证评分,并评估复色情况;检测治疗前后T淋巴细胞亚群(CD3+,CD4+,CD8+,CD4 +/CD8+),补体(C3,C4)和免疫球蛋白(IgG,IgM,IgA)水平.结果:观察组临床疗效总有效率为84.13％,高于对照组的63.49％(x2 =6.938,P＜0.01);治疗后观察组VASI指数低于对照组(P＜0.01),DIQL和气血不和证评分均低于对照组(P＜0.01),MCI指数高于对照组(P＜0.01);观察组患儿复色率(62.83±11.47)％高于对照组的(53.78±10.29)％ (P ＜0.01);与健康对照组比较,白癜风患儿外周血免疫球蛋白IgG,IgA水平均明显下降,白癜风患儿外周血T淋巴细胞亚群CD3+,CD4+,CD4+/CD8+水平均有下降,CD8+水平升高(P＜0.01);IgM,C3和C4水平差异均无统计学意义;治疗后观察组患儿治疗后IgG,IgA水平均显著升高(P＜0.01),并高于同期对照组(P＜0.01),IgM,C3和C4水平变化均无统计学意义;观察组患儿CD3+,CD4+,CD4+/CD8+均较治疗前升高(P＜0.01),并高于治疗后对照组水平(P ＜0.05);CD8+下降,并低于治疗后对照组水平(P＜0.05).结论:桂枝汤加昧治疗气血不和型儿童白癜风,能缩小皮损面积,增加白斑黑素含量,提高复色率,改善了患儿生活质量,有明显的临床疗效,其作用机制可能与调节自身免疫失衡有关,值得临床进一步的研究.
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桂枝汤及其拆方对芍药苷溶出量的影响
目的:研究桂枝汤拆方前后芍药苷的含量变化.方法:采用Diamonsil RP-C18色谱柱(4.6 mm × 250 mm,5μm),流动相乙腈-水,流速1.0 mL min-1,检测波长230 nm.结果:桂枝汤拆方前后芍药苷含量由高到低的顺序为去大枣组＞去生姜组＞全方组＞去桂枝组＞去甘草组,去甘草组、去桂枝组与全方组比较均有显著性差异；去生姜组和去大枣组与全方组比较无显著性差异(P＞0.05).结论:甘草、桂枝均有助于白芍中芍药苷的溶出,生姜和大枣对白芍中芍药苷的溶出影响不大.
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桂枝汤提取物体温双向调节的研究进展
目的:综述近年来桂枝汤提取物体温双向调节的研究进展.方法:主要对近十年来有关于桂枝汤双向调节体温的文献进行综述.结果:桂枝汤及其提取物对体温调节多条信号转导通路有影响,能促进异常体温向正常方向转化.结论:桂枝汤及其提取物对体温具有双向调节作用.但其作用机制、物质基础还有待于更进一步研究.
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桂枝汤功用述评
目的:用中医理论和药理研究从7个方面评析桂枝汤的功用.方法:回顾近年来桂枝汤临床应用和药理研究文献,评析其中医理论与现代研究的相关点.结果:中医理论和药理研究皆支持桂枝汤7方面的功用.结论:桂枝汤功用广阔,可辨证用于内、外、妇、儿、神经精神等各科疾病的治疗.
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基于网络药理学探讨桂枝汤解热作用机制及药效物质基础
目的:基于网络药理学探讨桂枝汤解热作用的机制及药效物质基础;方法:利用ChemDraw绘制预测桂枝汤中化合物的结构,使用Swiss Target Prediction数据库搜索以上成分对应的靶点.使用Ingenuity Pathway Analysis(IPA)软件,寻找发热相关的基因.使用IPA软件分析桂枝汤中成分、发热相应靶点共同的通路.利用Cytoscape建立成分-靶点-通路网络,寻找主要药效成分.结果:建立了桂枝汤中主要成分与其靶点的网络图.使用IPA软件发现桂枝汤发热作用与以下6个通路相关:G蛋白偶联的受体信号,环磷腺苷(cAMP)介导的信号传导,Gαs信号,Gαi信号,腺苷酸活化水蛋白激酶(AMPK)信号,褪黑激素降解通路.桂枝汤中芍药苷代谢物Ⅰ,环磷酸腺苷与解热作用相关.结论:基于网络药理学探讨了桂枝汤解热作用的相关通路,预测了桂枝汤入血成分中芍药苷代谢物Ⅰ,环磷酸腺苷可能与解热作用相关.研究结果主要基于化学预测,还需要进一步实验验证.
