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苹果多酚通过UHRF1抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移
目的 探讨苹果多酚体外对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移的影响及可能的作用机制.方法 对数生长期乳腺癌细胞用0、50、100、200、400和800 μg/mL苹果多酚处理24、48和72 h,台盼蓝染色测细胞活力;CCK8试剂盒测细胞生长和增殖;划痕实验观察细胞迁移能力的变化;Western blot检测蛋白质表达水平.结果0 ～ 800 μg/mL范围内,苹果多酚可浓度依赖性地抑制细胞活力和细胞增殖,下调泛素样含PHD和环指域1(ubiquitinlike with PHD and ring finger domain 1,UHRFl)和基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP2)的表达,以及UHRF1的调控靶分子DNA甲基转移酶3a(DNA methyltransferases 3a,DNMT3a)和3b(DNMT3b)的表达水平;而苹果多酚抑制细胞迁移的作用在400 ～ 800μg/mL浓度范围则比较显著.结论 苹果多酚通过下调UHRF1和MMP2的表达,抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的活力、增殖和迁移.
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围手术期食管鳞状细胞癌患者血清UHRF1水平变化
目的 检测食管鳞状细胞癌(ESCC)患者血清泛素样含PHD和环指域1(UHRF1)水平,分析其在不同临床病理参数亚组间的差异以及围手术期的变化.方法 收集130例ESCC患者术前血清,另收集其中62例患者的术后1周血清以及14例患者术后1周和2周血清,以67例体检健康者作为对照组.同时收集患者临床病理资料.用ELISA法检测血清UHRF1含量,采用独立样本t检验、配对t检验及单因素方差分析比较不同组间水平差异.结果 130例ESCC患者术前血清UHRF1含量明显高于健康人对照组(江7.680,P＜0.01);在不同年龄、性别、肿瘤部位和大体分型间UHRF1水平差异无统计学意义(P＞0.05),不同肿瘤大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移情况、pTNM分期间血清UHRF1水平差异有统计学意义(P＜0.05).62例患者术后UHRF1水平较术前明显降低(t=5.530,P＜0.01),且与健康人对照组差异无统计学意义(t=1.622,P＞0.05);14例患者术前、术后1周、术后2周血清UHRF1水平逐渐降低,差异有统计学意义(F=7.595,P＜0.01).结论 血清UHRF1可作为围手术期动态监测的潜在指标.
关键词： 食管鳞状细胞癌 泛素样含PHD和环指域1 动态监测 -
UHRF1和P53在结肠癌中的表达及临床意义
目的 探讨结肠癌组织中泛素样含PHD和环指域1(UHRF1)、P53蛋白的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学法检测70例结肠癌组织和30例癌旁正常组织中UHRF1、P53蛋白的表达情况,分析两者在结肠癌发生发展中的相关性,及其与结肠癌患者临床病理特征和预后的关系.结果UHRF1和P53在结肠癌癌组织中表达均明显高于癌旁正常组织(87.1％∶56.7％,x2=11.366,P =0.001;64.3％∶6.7％,x2=27.988,P=0.000),且两者在结肠癌中的表达呈正相关(r=0.248,P=0.038).UHRF1、P53蛋白在结肠癌中的表达与肿瘤TNM分期(x2=4.426,P=0.049;x2=6.000,P=0.016)、浸润深度(x2=12.553,P=0.002;x2=4.904,P=0.036)密切相关,与患者年龄(x2 =0.473,P=0.494;x2 =0.090,P=0.799)、性别(x2=2.297,P=0.166;x2 =0.512,P=0.617)、肿瘤大小(x2=0.638,P =0.481;x2 =2.392,P=0.215)、分化程度(x2=2.088,P=0.352;x2 =0.303,P=0.859)无关.Kaplan-Meier曲线提示,UHRF1、P53均阳性表达患者的中位生存时间为21.83个月,较单独UHRF1阳性表达者(24.49个月)短(Z=-0.624,P=0.533),前两者中位生存时间明显较UHRF1阴性表达者(37.33个月)短(Z=-2.856,P=0.004;Z=-2.694,P=0.007).结论UHRF1、P53在结肠癌中均呈高表达,二者与结肠癌的发生发展密切相关,其表达强度可以作为患者预后的重要指标.
关键词： 结肠肿瘤 肿瘤抑制蛋白质p53 泛素样含PHD和环指域1 -
UHRF1基因沉默对人肺腺癌A549细胞侵袭和迁移的影响及机制
目的 观察泛素样含PHD和环指域1(UHRF1)基因沉默对肺腺癌A549细胞侵袭和迁移能力的影响,并探讨其机制.方法 将细胞随机分为3组,沉默组、空载组分别转染针对UHRF1基因的靶向shRNA干扰慢病毒质粒及阴性对照慢病毒空载质粒72 h,对照组不转染.采用Transwell实验观察细胞体外侵袭能力(穿膜细胞数),细胞划痕实验观察细胞体外迁移能力(24 h划痕相对宽度);分别采用RT-PCR法和Western blotting法检测细胞中的UHRF1、上皮间质转化(EMT)相关分子(E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin)mRNA和蛋白;甲基化特异性PCR检测细胞中KISS1和PAX5基因启动子区甲基化程度.结果 与对照组和空载组比较,沉默组穿膜细胞减少,24 h划痕相对宽度增大,细胞中UHRF1、N-Cadherin、Vimentin mRNA和蛋白表达减少,E-Cadherin mRNA和蛋白表达增加,KISS1、PAX5启动子区甲基化程度低(P均<0.01);对照组和空载组各指标差异无统计学意义(P均>0.05).结论 慢病毒介导的shRNA沉默UHRF1基因表达,可抑制A549细胞侵袭和迁移能力;其机制可能与降低KISS1和PAX5基因启动子区的甲基化程度,从而抑制EMT过程有关.
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耐药人胃癌细胞U HRF 1基因的表达变化及其与多药耐药的关系
目的：观察耐药人胃癌细胞泛素样含PHD和环指域1（UHRF1）基因的表达变化，并探讨其与胃癌细胞多药耐药的关系。方法取对数生长期人胃癌细胞SGC7901、耐长春新碱（VCR）的SGC7901（SGC7901／VCR）、耐阿霉素（ADR）的SGC7901（SGC7901／ADR），采用实时定量PCR法检测各细胞UHRF1 mRNA，采用Western blotting法检测各细胞UHRF1蛋白。取对数生长期SGC7901／VCR、SGC7901／ADR细胞分别转染抑制UHRF1表达的小干扰RNA（siUHRF1）（SGC7901／VCR-siUHRF1、SGC7901／ADR-siUHRF1）、无意义空白质粒（SGC7901／VCR-UHRF1、SGC7901／ADR-UHRF1），另设空白对照，不做任何处理。取对数生长期SGC7901细胞，分别转染过表达的UHRF1质粒（SGC7901-UHRF1）、无意义空白质粒（SGC7901-NC），另设空白对照。转染48 h 收集以上细胞备用。采用MTT法检测SGC7901／VCR、SGC7901／ADR细胞各干扰组和SGC7901细胞各干扰组对化疗药物[（VCR、ADR、5-氟尿嘧啶（5-FU）和顺氨氯铂（CDDP）]的药物敏感性，计算半数抑制浓度（IC50）；取SGC7901／VCR、SGC7901／ADR细胞各干扰组和SGC7901空白对照，加入5-FU共培养，采用流式细胞仪观察细胞凋亡情况。结果 SGC7901细胞UHRF1 mRNA及蛋白的相对表达量均低于SGC7901／VCR、SGC7901／ADR细胞，P均＜0．05。促进UHRF1表达可升高SGC7901细胞对VCR、ADR、5-FU、CDDP 的IC50，降低细胞凋亡率，P均＜0．05。抑制UHRF1表达可降低VCR、ADR、5-FU、CDDP对SGC7901／VCR和SGC7901／ADR细胞的IC50，升高细胞凋亡率，P均＜0．05。结论耐药人胃癌细胞中存在UHRF1高表达。UHRF1高表达可降低胃癌细胞的药物敏感性、提高细胞多药耐药性，可能与UHRF1抑制胃癌细胞凋亡有关。
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UHRF1表达下调对胃癌细胞增殖的抑制作用及机制
目的：探讨泛素样含 PHD 和环指域1（UHRF1）表达下调后对胃癌细胞增殖的抑制作用，并探讨其作用机制。方法将培养好的人胃癌细胞系（MKN45）随机分为空白对照组、阴性对照组（shNC）和干扰组，后两组分别感染病毒 shNC、shUHRF1，采用短发夹 RNA（shRNA）技术下调 MKN45细胞中 UHRF1表达，XTT 法测定各组细胞生长情况，平板克隆形成试验测算细胞克隆形成率，流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率；裸鼠皮下成瘤试验检测细胞体内生长能力。结果UHRF1表达下调后，MKN45细胞生长速度明显下降、克隆形成减少（P 均＜0．05）；干扰组 G0／G1期细胞比例增加，S 期细胞比例减少（P 均＜0．05），细胞凋亡率升高（P 均＜0．05）；裸鼠皮下肿瘤生长速度下降（P ＜0．01）。结论下调 UHRF1的表达能够抑制胃癌细胞增殖，该作用可能通过延长细胞周期进程和诱导细胞凋亡来实现的。
关键词： 胃肿瘤 泛素样含PHD和环指域1 细胞增殖 细胞凋亡 -
泛素样含PHD和环指域1沉默对人肿瘤细胞株HO-8910和HO-8910 PM 生物学功能的影响
目的 观察泛素样含PHD和环指域1(UHRF1)沉默对人肿瘤细胞HO-8910和HO-8910 PM的影响.方法 以人卵巢癌细胞株HO-8910和HO-8910 PM为研究对象,采用RNA干扰(RNAi)技术下调UHRF1在上述细胞中的表达;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HO-8910和HO-8910 PM细胞转染前后UHRF1 mRNA的表达水平;Western blot检测UHRF1蛋白的表达水平;转染第4天,用流式细胞术检测两株细胞转染前后的凋亡水平;转染后24、48、72、96、120 h,用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测UHRF1敲减前后两株细胞增殖水平的变化.结果 RNAi技术敲减UHRF1在HO-8910和HO-8910 PM细胞中的表达后,实验组(kd组)中UHRF1 mRNA和蛋白的表达均低于阴性对照组(nc组)和空白组(bl组,P＜0.01);流式细胞术结果显示,HO-8910细胞在kd、nc和bl组的凋亡率分别为(16.04±1.41)％、(8.43±0.94)％、(7.76±0.36)％,kd组细胞凋亡率高于nc组和bl组(P＜0.01),nc组和bl组比较差异无统计学意义(P＞0.05);HO-8910 PM细胞在kd、nc、bl组的凋亡率分别为(17.98±4.39)％、(8.92±2.39)％、(8.18±0.83)％,kd组细胞凋亡率高于nc组和bl组(P＜0.05),nc组和bl组比较差异无统计学意义(P＞0.05);CCK-8结果显示,HO-8910和HO-8910 PM细胞从转染后48 h开始,kd组细胞增殖率低于nc组和bl组,差异有统计学意义(P＜0.01),而nc组和bl组细胞比较,细胞增殖率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 抑制UHRF1在人卵巢癌细胞株HO-8910和HO-8910 PM的表达后,细胞的凋亡水平增高,增殖能力减弱.
关键词： 卵巢癌 泛素样含PHD和环指域1 RNA干扰 -
泛素样含PHD和环指域1对胃癌细胞株SGC-7901生物学行为的影响
目的 观察RNA干扰下调泛素样含PHD和环指域1(UHRF1)基因对人胃癌SGC-7901细胞生长、凋亡、侵袭转移和周期分布变化的影响.方法 合成针对UHRF1基因的小干扰RNA(siRNA)片段,转染至胃癌细胞株SGC-7901;实验分为3组:转染组(转染特异性siRNA)、阴性对照组(转染非特异性siRNA)、空白对照组;细胞转染24h后用实时定量聚合酶链反应(Real-timePCR)和Western blot检测转染前后UHRF1的mRNA和蛋白的表达水平变化;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力;Matrigel和Transwell小室实验检测细胞迁移侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡及周期分布.结果 转染后,胃癌细胞株SGC-7901 UHRF1 mRNA的相对表达量为0.22±0.02,低于阴性对照组(P=0.003)和空白对照组(P=0.001),UHRF1蛋白的相对表达量为0.17±0.01,低于阴性对照组(P =0.001)和空白对照组(P=0.000);细胞增殖能力显著降低(P=0.000);转染组细胞和非特异性阴性对照组侵袭细胞数分别为(117.3±4.2)个和(433.3±5.5)个(P=0.000),迁移细胞数分别为(123.0±3.6)个和(377.3±4.7)个(P=0.000),细胞的侵袭迁移能力显著减弱;转染组凋亡率为(16.36±0.84)％较阴性对照组(9.67±0.36)％、空白对照组(8.63±0.10)％明显增加(P=0.002);细胞周期分布改变显著,G0/G1期的细胞明显增多(P=0.010).结论 UHRF1能促进胃癌细胞株SGC-7901增殖,增强其迁移侵袭能力,抑制细胞凋亡.
关键词： 泛素样含PHD和环指域1 胃癌 增殖 侵袭 细胞周期 -
下调泛素样含PHD和环指域1基因的表达对喉癌Hep-2细胞增殖侵袭能力的影响
目的 探讨下调泛素样含PHD和环指域1(ubiquitin-like protein containing PHD and RING finger domains 1,UHRF1)基因在喉癌Hep-2细胞中的表达后对其增殖,凋亡,侵袭迁移能力的影响.方法 实验分为空白组,阴性对照组和干扰组.利用UHRFl-siRNA干扰UHRF1在喉癌Hep-2细胞中的表达,采用qRT-PCR、Western blot检测UHRF1的表达变化.采用MTT法、流式细胞术、Transwell实验检测下调UHRF1表达后Hep-2细胞的增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的变化.Western blot检测下调UHRF1表达后Hep-2细胞内Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达的变化情况.结果 与空白组和阴性对照组相比干扰组下调UHRF1的表达后可明显抑制喉癌Hep-2细胞的增殖能力(P ＜0.001).空白组,阴性对照组,干扰组凋亡率分别为(5.47±2.77)％,(3.95±0.66)％,(18.95±1.10)％,干扰组凋亡率明显提高(P ＜0.001).空白组,阴性对照,干扰组每视野侵袭细胞数分别为(213.7 ±13.1),(221.3±10.3),(97.7±7.5),干扰组侵袭细胞数明显降低(P＜0.001).空白组,阴性对照,干扰组每视野迁移细胞数分别为(230.7±5.5),(222.7±11.2),(111.7±7.6),干扰组迁移细胞数明显降低(P ＜0.001).干扰组细胞Bax蛋白表达上调(P ＜0.001),Bcl-2蛋白表达下调(P ＜0.001),MMP-2蛋白、MMP-9蛋白表达下调(P ＜0.001).结论 在喉癌Hep-2细胞中下调UHRF1的表达后可明显抑制细胞的增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞的侵袭迁移能力.
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UHRF1与肿瘤
泛素样含PHD和环指域1(ubiquitin-like with PHD and ring finger domains 1，UHRF1)是新发现的一种与细胞生长有关的核蛋白基因，参与了细胞增殖、周期调控、凋亡及放射敏感性等重要的生物学过程。并且在多种肿瘤细胞中异常高表达，与肿瘤的发生、发展、侵袭转移及放化疗抵抗关系密切，可能成为肿瘤基因治疗的一个新靶点。本文就UHRF1与肿瘤的关系作一简要综述。
关键词： 泛素样含PHD和环指域1 核蛋白基因 肿瘤 放化疗抗拒
