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人体β-胡萝卜素的肠转化和吸收后转化的研究
目的:为了解部分中国人体内β-胡萝卜素(β-carotene, 以下简称β-C)转化维生素A (vitamin A, 以下简称VA)的效率,开展了本研究.方法:使用稳定同位素稀释法对15名50-60岁健康农村志愿者(男9,女6)进行β-C人体代谢实验.2周适应期和56天实验期内,志愿者接受常规膳食,避免大量VA和β-C摄入以及烟、酒和营养补充剂.实验第1天,给受试者含6mg氘标记β-C(2H8 β-C)玉米油胶丸,随半流质早餐(脂肪热能比25%)一起摄入.实验第4天,受试者以同样方法摄入含3mg氘标记醋酸视黄醇(2H8 RAC) 油剂胶丸.实验第1天和第4天摄入标记物后0,3,5,7,9,11,13h时,实验第2,3,5,6,7,8, 9,10,14,21,28,35,42,49,56天晨空腹时,采静脉血.用高效液相色谱仪(HPLC)分离血清β-C和VA 组分,再分别使用气相质谱仪(GC/MS)和液相质谱仪(LC/MS)测定VA和β-C组分的同位素丰度.根据VA和β-C的浓度和同位素丰度,描述标记VA和β-C在体内应答的血液动力学曲线.结果:所有15名受试者对2H8 RAC应答明显;但是在对2H8 β-C的应答方面,只有11名受试者2H4视黄醇应答曲线明显,有4名受试者血清2H4视黄醇应答曲线非常微弱.经过对备份血清样品进行的多次重复GC-MS测定,我们目前初步认定他们为对β-C转化能力低下的个体,有待进一步的研究.根据血清中2H4视黄醇(来自2H8 β-C)和2H8视黄醇(来自2H8-RAC)的曲线下面积(AUC),参照摄入的标记VA和标记β-C剂量,计算出的11名β-C转化正常者的1,6,13,20,27,34,41,52天时β-C转化为VA的平均转化系数,分别为7.1±3.4,5.6±2.7,5.4±2.9,5.1±2.8,5.0±3.0,5.0±2.9,4.9±2.9,4.8±2.8比1(摩尔单位).β-C的吸收后转化的比例6, 13, 20, 27, 34, 41, 52天时分别占(19.7±17.8)%,(22.7±20.5)%,(26.3 ± 21.2)%,(27.8±22.7)%,(28.6±22.7)%,(29.5±22.8)%和(30.1±22.1)% .结论:采用稳定同位素稀释技术,定量测定了11名中国成人个体体内β-C转化为VA的效率,按质量单位计近期(24h以内)(肠内)转化比值为13.1比1,远期(52天)转化比值为9.1比1 .远期52天时吸收后转化生成的视黄醇约占全部转化视黄醇的30%.
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同位素稀释的气相色谱-质谱法测定食品模拟物中邻苯二甲酸酯类增塑剂
目的 建立同位素稀释法测定4种食品模拟物中18种邻苯二甲酸酯(PAEs)类增塑剂的方法.方法 水模拟物、3％(W/V)乙酸模拟物和20％乙醇模拟物中的18种增塑剂用正己烷萃取,95％乙醇模拟物加水稀释至20％乙醇后,再用正己烷萃取,采用GC-MS进行分析,同位素稀释法定性定量.结果 18种PAEs经内标校正后的线性R2≥0.9991;线性范围DINP和DIDP为0.2～5.0 mg/L,DMEP、DEEP和DBEP为0.02 ～ 2.0 mg/L,其他13种化合物的线性范围为0.005 ～ 2.0 mg/L;18种PAEs的内标相对回收率85.3％ ～ 115.0％,DIDP和DINP的定量限为200.0μg/L,其余16种PAEs的定量限为0.1～6.7 μg/L,RSD≤10％.结论 与以往的国标方法相比,该方法扩大了邻苯二甲酸酯类的检测范围,解决了高醇模拟物的检测结果不稳定的问题,采用同位素稀释法定性定量,结果更准确,方法更简单、可靠.
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中青年人体内β-胡萝卜素转化为维生素A的效率
目的在前期对部分中老年农村居民进行了β-胡萝卜素(β-C)转化维生素A(VA)效率评价的基础上,再对10名农村中青年志愿者β-C转化效率进行研究.方法使用稳定同位素稀释法对10名38～49岁健康志愿者(男5,女5)进行β-C人体代谢实验.2周适应期和56天实验期内,志愿者接受常规膳食,避免大量VA和β-C摄入以及烟、酒和营养制剂.实验第1天,给受试者含6mg氘标记β-C(2H8β-C)玉米油胶丸,随半流质早餐(脂肪热能比25%)一起摄入.实验第4天,受试者以同样方法摄入含3mg氘标记醋酸视黄醇(2H8RAc)油剂胶丸.实验第1天和第4天摄入标记物后0、3、5、7、9、11、13h时,第2、3、5、6、7、8、9、10、14、21、28、35、42、49和56天晨空腹时,采静脉血.用高效液相色谱仪(HPLC)测定血清类胡萝卜素成分浓度,使用气相质谱仪(GC/MS)测定血清中不同来源视黄醇的同位素丰度.根据VA浓度和同位素丰度,描述标记VA在体内应答的血液动力学曲线.结果10名受试者口服2H8β-C和2H8RAc后,血清中2H4视黄醇和2H8视黄醇的应答反应均非常明显;52天时血清中2H4视黄醇(来自2H8 β-C)的曲线下面积(AUC)平均为(1289±547)nmol/d;52天的2H8视黄醇(来自2H8RAc)的AUC平均为(3560±1058)nmol/d;以摄入的2H8RAc作为VA参照,计算来自口服2H8 β-C的2H4视黄醇平均为(3434±1449)nmol/d.β-C转化为VA的转化系数平均为(3.89±2.76):1(摩尔单位)[范围是(2.00～9.61):1]或者(7.30±5.18):1(质量单位)[范围是(3.76～18.05):1].结论采用稳定同位素稀释技术,定量测定了10名中国农村中青年志愿者体内β-C转化为VA的效率,按质量单位计其转化比值平均为7.30:1.
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同位素稀释-气相色谱质谱联用法测定饮用水中环氧氯丙烷
目的 建立同位素稀释-气相色谱质谱联用方法测定生活饮用水中环氧氯丙烷.方法 在生活饮用水样品中加入D5-环氧氯丙烷内标应用液,先用活性炭对环氧氯丙烷进行富集,活性炭经2739×g离心脱水10 min,后加入1.0 ml丙酮浸泡1h并进行解吸,解吸液用气相色谱-质谱法进行测定,同位素内标法定量,并对方法的检测限精密度和准确度进行评价,用该方法对某市25批次饮用水中环氧氯丙烷进行测定.结果 采用该方法测定环氧氯丙烷,在0.0645～3.8700 μg/L范围内线性良好,线性方程为Y=2.828X +4.91×10-2(r＞0.999),测定浓度为0.0806、0.3230、3.2300 μg/L时,环氧氯丙烷的RSD分别为7.9％、4.7％、3.1％；加标平均回收率在95.7％ ～98.7％之间,方法检测限为0.015 μg/L,定量限为0.052 μg/L.检测的25批饮用水中环氧氯丙烷含量均在检测限以下.结论 该方法较国家标准方法操作简单,且灵敏度高,准确性、重现性好,适应于生活饮用水中痕量环氧氯丙烷的测定.
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中老年人β-胡萝卜素转化为维生素A的效率
目的:了解中国成人体内β-胡萝卜素( β-carotene, β-C ) 转化维生素A (VA)的效率.方法:使用稳定同位素稀释法对11名50～60岁健康志愿者(男7,女4)进行β-C人体代谢实验.2 w适应期和8 w实验期内,志愿者接受常规膳食,避免大量VA和β-C摄入及烟、酒和营养制剂.实验D1 ,给受试者含6 mg氘标记β-C(2H8 β-C )玉米油胶丸,随半流质早餐(脂肪热能比25%)一起摄入.实验D4 ,同样方法摄入含3 mg氘标记醋酸视黄醇(2H8 -RAc ) 油剂胶丸.实验D1 和D4 摄入标记物后0、3、5、7、9、11、13 h时,实验D2、3、 5、6、7、8、9、10、14、21、28、35、42、49、56 晨空腹时,采静脉血.用高效液相色谱仪 (HPLC) 分离血清β-C和VA 组分,再分别使用气相质谱仪 ( GC/MS )和液相质谱仪 ( LC/MS ) 测定VA和β-C组分的同位素丰度.根据VA和β-C的浓度和同位素丰度,描述标记VA和β-C在体内应答的血液动力学曲线.结果: 11名受试者对口服2H8-RAc和2H8-C的应答均非常明显;52 d时血清中2H4视黄醇(来自2H8 β-C)的曲线下面积(AUC )平均为1 102 ± 658 nmol/d,52 d的2H8视黄醇(来自2H8 -RAc)的AUC平均为3659 ±787 nmol/d, 以摄入的2H8 -RAc作为VA参照,计算来自摄入2H8-C的2H4 视黄醇平均为2599 ±1180 nmol/d .由此计算β-C转化为VA的平均转化系数为 (4.8 ±2.8) ∶1,范围为( 2.0～12.2 ) ∶1(摩尔单位),或者以质量单位表示为 ( 9.1 ± 5.3 ) ∶1,范围为( 3.8～22.8 ) ∶1.结论:采用稳定同位素稀释技术,定量测定中国中老年人体内β-C转化为VA的效率,按质量单位计转化比值为 9.1∶1 .
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同位素稀释-超高效液相色谱串联质谱法测定人体血清/全血中维生素B1
目的 建立快速、灵敏测定人体血清/全血中维生素B1的稳定同位素稀释-超高效液相色谱串联质谱(ID-UPLC-MS/MS)法.方法 血清/全血样本经蛋白质沉淀处理,上清液用双蒸水稀释,采用Thermo Hypersil GOLD aQ色谱柱分离,以10 mmol/L甲酸铵水溶液～乙腈为流动相,梯度洗脱.采用电喷雾离子源电离,正离子模式下,采用多反应监测(MRM)扫描方式检测,维生素B1和同位素内标的离子通道分别为m/z 265.2→122.0和269.2→122.0.结果 维生素B1在0.446～89.2 ng/mL范围内线性关系良好,r =0.999 6;低、中、高质控样本的日内、日间精密度的相对标准偏差(RSD)均＜5.34％;平均加样回收率在96.9％～102.6％,RSD均＜6.61％.结论 建立的方法简单快速、灵敏度好、准确度高,可用于人体血清/全血中维生素B1的测定.
关键词： 超高效液相色谱-串联质谱法 同位素稀释法 维生素B1 血清 全血 -
应用同位素稀释法验证生物电阻抗分析法测定人体成分的研究
目的:验证生物电阻抗分析法(BIA)用于成人体成分分析的精度. 方法:以同位素稀释法技术作为标准方法.纳入健康受试者,空腹留取基础尿液.应用BIA对每名受试者进行人体成分测定,然后口服双标水(2H和18O),经5h在体内平衡后再次留取标本.根据标本中同位素变化量计算出总体水(TBW),进而通过公式计算得出去脂瘦体组织(FFM)、脂肪组织(FM)以及FM％.比较两种方法测得结果,建立BIA校正线性方程. 结果:纳入12名健康受试者,体重指数(BMI)为21.53±1.51.2H和18O测定人体各成分间无统计学差异,选用2H作为校正BIA的标准方法.BIA测碍TBW、FFM、FM和FM％与2H测得结果相关系数分别为0.959,0.959,0.563,0.780.TBW校正方程为:y=4.057+0.798x. 结论:BIA测定人体成分与标准同位素稀释法有等效性,结果稳定,相关性好,适于快速评价人群的TBW和FFM等人体成分.
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细胞内外钾分布与人体健康的关系
一直以来,血清钾是临床上评价人体钾水平的唯一指标.然而,血清钾只是人体钾的一小部分,大部分钾储存在细胞内,血清钾浓度的变化不能反映细胞内钾浓度的变化,人体在负氮平衡情况下,细胞内钾大量减少,而血清钾浓度仍不发生太大变化[1],血清钾正常值范围早就受到质疑[2].尸体解剖、活组织检查或同位素稀释法可以测得人体的钾总量,但这些方法不适合广泛用于临床上对病人的诊断[3].
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QuEChERS净化—液相色谱串联质谱法测定血浆中8种抗凝血灭鼠剂
目的 建立QuEChERS净化,同位素稀释液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)测定血浆中大隆、溴敌隆、杀鼠醚、杀鼠灵、氯杀鼠灵、敌鼠、氯敌鼠、杀鼠酮抗凝血灭鼠剂的检测方法.方法 血浆样品经QuEChERS方法前处理,以杀鼠灵-D5作为同位素内标,采用BDS HYPERSIL C18(4.6 mm i.d×100 mm,2.4 μm)分离,以甲醇-乙酸铵缓冲液梯度洗脱,流速为0.50 ml/min.采用电喷雾电离(ESI)负离子质谱在多反应监测(MRM)模式下检测.结果 8种抗凝血灭鼠剂在0.20 μμg /L～25.0μg/L(或者0.50 μg/L～ 25.0μg/L)范围内有良好的线性关系(r＞0.999),检测限为0.044～ 0.19 μg /L,平均加标回收率为70.4％～101.5％(n=7),相对标准偏差1.7％～ 8.9％(n=7).结论该方法快速、简单,灵敏度高,可应用于中毒病人血样中8种抗凝血灭鼠剂的同时检测.
关键词： 高效液相色谱-串联质谱法 抗凝血灭鼠剂 QuEChERS 同位素稀释法 血浆 -
同位素稀释气相色谱质谱联用(GC-MS)测定鱼中指示性多氯联苯的不确定度评定
目的 评定采用气相色谱-质谱联用结合同位素稀释技术测定鱼类样品中指示性多氯联苯的不确定度,分析影响测量不确定度的各种因素.方法 依据GB/T5009.190-2006 《食品中指示性多氯联苯的测定》对鱼类中指示性多氯联苯进行测定,建立测量过程中各分量的数学模型,估算各不确定度分量对总不确定度的影响.结果 置信概率P为95％时,鱼类样品中总PCBs的测定结果为(27.26±0.72) μg/kg,k=2.结论 本方法不确定度主要来自添加内标的浓度和相对响应因子计算过程,样品称量及内标溶液量取的影响可以忽略不计.同位素内标的应用可有效控制分析过程对不确定度的影响.
