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抗钠-钙交换体α-2(807-844)抗体对Langendorff灌流大鼠离体心功能的影响
目的 观察1~103 nmol/L抗钠-钙交换体(NCX)α-2(807-844)肽段抗体对离体大鼠心功能的影响.方法 化学合成的NCXα-2(807-844)肽段主动免疫新西兰大耳白兔制备并纯化抗体,采用Langendorff离体心脏灌流系统观察对大鼠离体心功能的影响.结果 主动免疫后兔体内抗α-2(807-844)抗血清滴度明显升高,经Protein A纯化后获得浓度为7.21 mg/mL的抗体;与对照组比较,1~10 nmol/L α-2抗体可明显增加大鼠离体心脏左室发展压(LVDP)及左室压大上升速率 (+dP/dtmax,P<0.01),且使左室压大下降速率(-dP/dtmax)减小(P<0.01);然而,102~103 nmol/Lα-2抗体则可不同程度地降低正常大鼠离体心脏LVDP、±dP/dtmax(P<0.01).结论 抗钠-钙交换体α-2(807-844)肽段抗体对离体大鼠心功能的作用与其浓度有关.在低浓度时,α-2抗体可使心肌收缩增强;而较高浓度的α-2抗体可同时抑制心肌收缩和舒张.
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抗钠-钙交换体α-2抗体对大鼠心脏正性肌力作用
目的 观察抗钠-钙交换体α-2(807-820)抗体对大鼠心功能影响并分析其机制.方法 以化学合成的α-2(807-820)肽段作为抗原免疫大鼠制备并纯化抗体,利用Langendorff离体灌流系统观察其对大鼠心功能影响;利用全细胞膜片钳技术观察抗体对心肌细胞钠-钙交换电流作用.结果 大鼠经主动免疫后,抗α-2(807-820)抗血清滴度明显升高,纯化后抗体浓度为6.3 mg/mL,聚丙烯酰胺凝胶电泳时仅有1条带出现;10和40 mmol/L的抗体可明显升高离体灌流大鼠心脏左室发展压、左室压大上升速率和下降速率,这一效应可被KB-R7943阻断;膜片钳实验表明,抗α-2(807-820)抗体(40 nmol/L)可使外向和内向的钠-钙交换电流分别从给药前的(1.05±0.17)、(0.86±0.21)pA/pF增加至(1.53±0.28)、(1.23±O.31)pA/pF(P＜0.05).结论 抗α-2(807-820)抗体通过激动心肌钠-钙交换体不仅可以增强心肌的收缩力和加快心肌收缩的速度,还可促进心肌舒张.
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颞叶癫(癎)大鼠海马区NCX3 mRNA和蛋白的表达变化
目的:动态观察钠-钙交换体(NCX)mRNA和蛋白在氯化锂-匹罗卡品致(癎)模型大鼠海马CA1、CA3及齿状回区表达的变化,探讨其在癫(癎)发生发展中的作用.方法:用氯化锂-匹罗卡品制备癫(癎)动物模型;应用原位杂交和免疫组化技术检测各时间点NCX3 mRNA和蛋白的表达.结果:急性期(6～24 h)海马各区NCX3 mRNA表达均随时间的延长逐渐减少;进入静止期各区表达趋向回升,慢性反复自发发作期(30、60 d)各区表达又出现不同程度的两次下调.除致(癎)后6 h大鼠海马各区的NCX3蛋白表达无明显变化外,NCX3蛋白变化趋势与NCX3 mRNA基本一致.结论:NCX3表达下调可能通过增加神经元钙超载,改变海马神经元的兴奋性,促使癫(癎)发生.
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钠离子通道参与调节小胶质细胞的生物学功能
小胶质细胞作为常驻的免疫细胞,遍布于大脑和脊髓中,提供持续的免疫监视活动.当中枢神经系统组织细胞受到损伤时,小胶质细胞发生激活从而引起多种生物学效应.近年来研究显示多种亚型的电压门控型钠离子通道在小胶质细胞表面表达,并参与调节小胶质细胞的激活、吞噬、多种细胞因子/趋化因子的释放,迁移以及浸润等生理过程.本文针对电压门控型钠离子通道参与调节小胶质细胞生物学功能的新进展进行了分析与归纳,并探讨其作用机制及未来研究的发展趋势.
关键词： 小胶质细胞 电压门控型钠离子通道 吞噬 迁移及侵袭 钠-钙交换体 -
钠-钙交换体单克隆抗体NCX-2D2对异丙肾上腺素诱发成年大鼠心律失常的抑制作用
目的 观察钠-钙交换体单克隆抗体NCX-2D2 对异丙肾上腺素( isoproterenol,ISO)诱发大鼠心律失常的影响,并探讨其电生理机制.方法 利用ISO建立大鼠离体和在体心律失常模型,观察NCX-2D2抗体对心律失常的影响;通过全细胞膜片钳技术,观察NCX-2D2抗体对大鼠心室肌细胞INa/Ca、ICa-L和DADs的作用.结果 10 mg·L-12D2抗体可明显抑制ISO诱发大鼠离体心脏心律失常的发生( P <0.01);80 μg·kg-12D2抗体可明显抑制ISO诱发麻醉大鼠心律失常的发生(P<0.01);5 mg·L-12D2 抗体可部分抑制ISO对大鼠心室肌细胞INa/Ca的增大作用(P<0.01),以及对ICa-L的增大效应(P<0.01),并可有效抑制ISO诱发大鼠心室肌细胞DADs的发生(P<0.05).结论 钠-钙交换体单克隆抗体NCX-2D2可明显抑制异丙肾上腺素诱发的大鼠室性心律失常,其抗心律失常机制与抑制心肌细胞钠-钙交换体和L-型钙通道,从而减轻钙超载和抑制延迟后除极有关.
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钠-钙交换体单克隆抗体NCX-3F10对大鼠心室肌主要离子电流的影响及对缺血/再灌注诱发心律失常的抑制作用
目的 观察NCX-3F10抗体对大鼠心室肌细胞主要离子电流的影响及其对缺血/再灌注(ischemia/reperfusion , I/R)诱发心律失常的作用.方法 ① 利用全细胞膜片钳技术记录大鼠心室肌细胞Na+/Ca2+交换电流(INa/Ca)及其他主要离子电流;② 结扎左冠状动脉建立大鼠在体及离体心脏缺血/再灌注心律失常模型,观察抗体对心律失常的影响;③ 利用IonOptix离子影像分析系统观察抗体对单个心室肌细胞钙瞬变的影响.结果 ① 5~40 mg·L-1的NCX-3F10抗体对INa/Ca呈剂量依赖性抑制作用,其抑制外向和内向电流的IC50分别为11.15和11.69 mg·L-1,大抑制率分别达到61%、62%;该抗体对钙电流(ICa-L)也有一定的抑制作用,对内向整流钾电流(IK1)、瞬时外向钾电流(Ito)、钠电流(INa)均无影响;② 在离体大鼠心脏I/R组,100%大鼠发生室速,88.89%大鼠出现室颤;再灌注前5 min给予NCX-3F10抗体(10 mg·L-1)干预后,大鼠的室速发生率下降至44.43%,室速、室颤持续时间明显减少(P<0.05);③ 麻醉大鼠再灌注前5 min给予NCX-3F10抗体(50 μg·kg-1)预处理后,大鼠室早个数、室速发生率及持续时间、室颤的发生率及持续时间均明显降低(P<0.05);④ 5~40 mg·L-1的NCX-3F10抗体对心肌细胞钙瞬变幅度呈剂量依赖性抑制作用.结论 NCX-3F10抗体对大鼠离体和在体心脏缺血/再灌注诱发的心律失常有明显抑制作用,其抗心律失常效应与抑制钠-钙交换电流和L-型钙电流、减轻细胞内钙超载有关.
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抗钠-钙交换体α-1(106-145)抗体对大鼠离体心功能的影响及其机制
目的 观察1~103 nmol·L-1抗钠-钙交换体(NCX)α-1(106-145)肽段抗体对离体大鼠心功能的影响并分析其作用机制.方法 用化学合成的NCX α-1(106-145)肽段主动免疫新西兰大耳白兔制备并纯化抗体,利用Langendorff离体灌流系统观察其对大鼠离体心功能的影响;利用全细胞膜片钳技术观察其对心肌细胞钠-钙交换电流、L-型钙电流、瞬时外向钾电流和内向整流钾电流的影响.结果 经主动免疫后兔体内抗α-1(106-145)抗血清滴度明显升高,Protein A纯化后抗体浓度为13.1 g·L-1.与对照组相比,1~10 nmol·L-1 α-1抗体可使大鼠离体心脏左室发展压(LVDP)和左室压大上升速率(+dp/dtmax)明显增加(P<0.01),并使左室压大下降速率(-dp/dtmax)减小(P<0.01),且KB-R7943(2 μmol·L-1)可使α-1抗体(1 nmol·L-1)的上述效应进一步增强.然而,102~103 nmol·L-1 α-1抗体则可使大鼠离体心脏LVDP、±dp/dtmax呈不同程度地下降(P<0.01).全细胞膜片钳实验结果表明,在1~103 nmol·L-1浓度范围内,抗α-1抗体对大鼠心肌细胞外向和内向Na+/Ca2+交换电流均表现出剂量依赖性的抑制效应,对瞬时外向钾电流和内向整流钾电流均无明显影响.此外,102~103 nmol·L-1 α-1抗体对L-型钙电流也具有抑制作用.结论 低浓度α-1抗体(1~10 nmol·L-1)可明显增强心肌收缩,这一效应与其在低浓度时专一性抑制Na+/Ca2+交换电流有关;高浓度α-1抗体(102~103 nmol·L-1)则可同时抑制心肌收缩和舒张,该作用与其同时抑制Na+/Ca2+交换电流和L-型钙电流有关.
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甲状腺素对心力衰竭大鼠心功能及心肌细胞钠-钙交换体表达的影响
目的:研究甲状腺素对心力衰竭大鼠的心功能及心肌细胞钠-钙交换体(NCX1)表达水平的影响. 方法:SD大鼠120只随机分为对照组(40只)、心力衰竭组(40只)和心力衰竭治疗组(40只).通过缩窄主动脉复制心力衰竭动物模型,测定血流动力学指标,应用免疫组织化学及Western blot研究NCX1的表达水平.结果:(1)心力衰竭组左室收缩压(LVSP)和±dp/dtmax较对照组明显降低(P<0.01),甲状腺素治疗组LVSP和±dp/dtmax较对照组降低(P<0.05),但甲状腺素治疗组LVSP和±dp/dtmax较心力衰竭组明显升高(P<0.01); 心力衰竭组左室舒张末压(LVEDP)较对照组明显升高(P<0.01), 甲状腺素组LVEDP较心力衰竭组明显下降(P<0.01);(2)免疫组化单位面积(200倍视野/0.442mm2)内NCX1阳性颗粒数对照组(8.3±1.5)个,心力衰竭组为(24.1±4.5)个,甲状腺素治疗组为(15.6±2.9)个,各组间有显著性差异(P<0.01);(3)Western blot分析灰度峰值对照组13.7±2.4,心力衰竭组为32.4±5.5,甲状腺素治疗组为20.2±3.9,各组间有显著性差异(P<0.001).结论:甲状腺素可能通过抑制NCX1的过渡表达而发挥改善心力衰竭时心功能的作用.
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甲状腺素对慢性心肌缺血大鼠心功能及心肌细胞钠-钙交换体表达的影响
目的 研究甲状腺素对慢性心肌缺血心力衰竭大鼠的心功能及心肌细胞钠-钙交换体表达水平的影响.方法 SD大鼠120只随机分为对照组(40只)、慢性心肌缺血组(40只)和慢性心肌缺血治疗组(40只).通过结扎大鼠左冠状动脉复制慢性心肌缺血心力衰竭动物模型,测定血流动力学指标,应用免疫组织化学研究Na~+/Ca~(2+)交换体1(NCX1)的表达水平.结果 ①慢性心肌缺血组左心室收缩压和±dp/dt_(max)较对照组明显降低(P＜0.01),甲状腺素治疗组左心室收缩压和±ap/dt_(max)较对照组降低(P＜0.05),但甲状腺素治疗组左心室收缩压和±dp/dt_(max)较慢性心肌缺血组明显升高(P＜0.01);慢性心肌缺血组左心室舒张末期压较对照组明显升高(P＜0.01),甲状腺素组左心室舒张末期压较慢性心肌缺血组明显下降(P＜0.01).②对照组免疫组织化学单位面积内NCX1阳性颗粒数(10.3±0.5)个,慢性心肌缺血组单位面积内NCX1阳性颗粒数(27.2±3.6)个,甲状腺素治疗组单位面积内NCX1阳性颗粒数(14.5±2.5)个,各组间有显著性差异(P＜0.01).结论 甲状腺素可能通过抑制NCX1的过度表达而发挥改善慢性心肌缺血心力衰竭时心功能的作用.
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阿托伐他汀通过调节钠-钙交换体改善心力衰竭大鼠心脏功能
目的：探讨阿托伐他汀对心力衰竭大鼠心脏功能及心肌细胞钠-钙交换体表达的影响。方法：结扎大鼠冠状动脉左前降支8周，制备心肌梗死后心力衰竭模型。随机分3组，即假手术组、心力衰竭组与阿托伐他汀治疗组，分别于结扎后第2天给予安慰剂或阿托伐他汀治疗。8周后测定大鼠心脏功能及钠-钙交换体蛋白表达水平。培养原代乳鼠心肌细胞，通过缺氧模型分析阿托伐他汀对细胞内钙水平的影响。结果：阿托伐他汀治疗组较心衰组BNP水平降低，左室舒张末内径缩小，左室短轴缩短率升高。阿托伐他汀治疗明显降低心力衰竭时钠-钙交换体蛋白表达量，抑制缺氧诱导细胞内钙水平增加。结论：阿托伐他汀治疗改善心功能，可能与影响心力衰竭心肌细胞钠-钙交换体的表达及功能有关。
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心肌细胞晚钠电流的研究进展?
晚钠电流(late sodium current,INaL)是由一部分特殊的内向钠离子通道形成持续的内向钠电流,而这部分特殊通道具有较缓慢的失活特性。早在1986年有学者首次在蛙的缝匠肌中发现了 INaL 的存在,后来研究者发现在豚鼠、大鼠、兔、犬、甚至人类的心肌细胞上也存在 INaL。此外,INaL 由 NaV1.5所编码,它参与维持动作电位(action potential,AP)平台期。在不同病理状态下,INaL 会发生改变,并明显影响 AP 时程,通过多种机制诱发心律失常的产生。
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低钾加重大鼠心肌细胞再灌注损伤的机制
目的:观察低钾灌流液对大鼠心肌细胞再灌注时钙震荡的影响并探讨其作用机制. 方法:Ca2+荧光指示剂Fura-2标记心肌细胞,在代谢抑制并低氧25 min后,改用低钾台氏液([K+]=3.0 mmol/L)灌流,记录细胞钙震荡的变化. 以(再灌注末期细胞长度-缺血末期细胞长度)/(缺血前细胞长度-缺血末期细胞长度)×100%反映再灌注后细胞长度的恢复状况. 结果:与含正常钾浓度的灌流液对照组([K+]=5.4 mmol/L)相比,在再灌注10 min内,低钾灌流液组出现钙震荡的次数显著增加(P＜0.01,低K+组:138.80±9.54 vs对照组:82.30±8.16,n=6),心肌细胞长度的恢复显著被抑制[P＜0.01,低K+组:(24.30±6.01)% vs对照组:(54.50±6.56)%,n=6];再灌注期间给予钠-钙交换体反向交换模式抑制剂KB-R7943,可显著抑制低钾溶液对钙震荡和细胞长度的影响[P＜0.01 vs低K+组,n=6; 钙震荡:27.40±6.76和细胞长度恢复:(58.90±7.30)%]. 结论:低钾再灌注液通过增强反向钠-钙交换体活性加重钙震荡,进而引发心肌损伤.
