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泛素连接酶SCFFBW7调控的靶蛋白研究进展
FBW7(F-box and WD repeat domain-containing7,FBW7)为F-box蛋白家族成员,是SCF型泛素连接酶复合物的底物识别蛋白,介导细胞内多种蛋白质经泛素-蛋白酶体途径降解.FBW7通过靶向降解多种癌蛋白如Mcl-1、Notch、HIF-1α、CyclinE和KFL5等,参与调控细胞增殖、分化、凋亡及肿瘤转移等多种生物学过程.作为一种肿瘤抑制蛋白,FBW7基因突变或缺失存在于多种人类肿瘤中,如白血病、乳腺癌、卵巢癌、胆管癌等,并在这些肿瘤的发生和发展中发挥重要作用.因此,针对FBW7的深入研究有助于理解肿瘤的发生发展机制以及开发肿瘤治疗新方案.本文就FBW7调控的癌蛋白研究进展作一综述.
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泛素-蛋白酶体途径及其对镉的应答反应
泛素-蛋白酶体途径是真核细胞内一种高效蛋白降解途径.它参与接触镉后细胞抗镉毒性的应答反应,是去除镉接触诱导产生的异常蛋白和修复镉损伤的DNA的重要途径.但接触镉也可使细胞内的泛素蛋白发生积聚,从而影响细胞的存活.这些反应的具体机制还有待进一步深入研究.
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蛋白酶体抑制剂MG-132对TGF-β_1诱导的人肾小管上皮细胞转分化的影响
TGF-β_1诱导的肾小管上皮细胞转分化是肾小管间质纤维化的重要细胞过程.泛素-蛋白酶体系统在此过程中起重要的调控作用.通过体外观察蛋白酶体抑制剂MG-132对TGF-β_1诱导的HK-2细胞株转分化作用的影响,并探讨其分子机制.RT-PCR法检测Smurf1、Smurf2和Smad7 mRNA的表达,免疫印迹法检测Smurf1、Smurf2和Smad7蛋白的表达,免疫组织化学法检测胞浆中FN和α-SMA的分泌.结果显示:MG-132干预组细胞Smurf1、Smurf2、Smad7 mRNA表达下降,而Smad7蛋白表达增加,胞浆中FN和α-SMA分泌减少.结果表明,MG-132可通过抑制TGF-β1诱导的HK-2Smurf1、Smutrf2的表达,抑制Smad7在26S蛋白酶体中的降解,减轻FN和α-SMA的分泌和沉积,从而抑制HK-2转分化,延缓肾小管间质纤维化的发展.
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高糖环境对肾系膜细胞NF-κB/IκB通路的影响及其调控机制
探讨高糖对肾系膜细胞IκB-α mRNA和IKB-α、NF-κB p65蛋白表达和NF-κB p65核转位的影响及作用途径.结果发现高糖促进IκB-α蛋白降解和NF-κB p65核转位,特异性泛素-蛋白酶体阻断剂MG132可明显逆转高糖导致的IκB-α蛋白降解和NF-κB p65核转位,提示高糖可通过泛素-蛋白酶体途径导致NF-κB信号通路的活化.
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慢性阻塞性肺疾病大鼠骨骼肌组织泛素系统基因及蛋白表达的变化
目的 探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠骨骼肌组织内蛋白降解的信号分子泛素一蛋白酶体系统基因和蛋白表达的变化及意义.方法 采用单纯熏香烟法复制COPD大鼠动物模型.western印迹法测定大鼠伸趾长肌内蛋白酶体C2亚基蛋白的表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测伸趾长肌内泛素和E2-14kmRNA表达变化.结果 RT-PCR分析结果显示,伸趾长肌组织中泛素、E2-14k mRNA表达(积分光密度值)较对照组显著增加(P值均＜0.05).western印迹法分析结果显示,伸趾长肌组织中蛋白酶体C2亚基蛋白的表达较对照组显著增强(P＜0.05).结论 COPD大鼠骨骼肌泛素系统基因表达和蛋白表达显著增强,提示骨骼肌内泛素-蛋白酶体途径活性上调,是蛋白降解增强的原因之一.
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胰岛素通过泛素系统对脓毒症病人骨骼肌代谢的调理作用
脓毒症病人中分解代谢增强现象极其普遍,尤以骨骼肌蛋白分解明显.泛素-蛋白酶体途径的激活为脓毒症病人骨骼肌蛋白分解的重要环节.其活性受炎性细胞因子和糖皮质激素等多因素影响.胰岛素在调理泛素-蛋白酶体途径的活性中起着重要的作用.以下就胰岛素通过泛素-蛋白酶体途径对脓毒症病人骨骼肌代谢的调理作用作一综述.
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宫颈鳞状细胞癌组织中Skp2与P27Kipl的表达及其临床意义
目的 探讨细胞S相激酶相关蛋白(Skp2)和P27Kipl在宫颈鳞状细胞癌(SCC)发生过程中的表达及二者关系.方法 用免疫组化方法检测10例正常宫颈组织、43例宫颈上皮内瘤变(CIN)和34例SCC组织中Skp2、P27Kipl蛋白的表达,用RT-PCR法对34例新鲜SCC组织进行Skp2 mRNA表达的检测.结果 Skp2 mRNA在SCC呈过表达;Skp2蛋白表达在SCC发生过程中呈增高趋势;Skp2蛋白阳性率与淋巴结转移有关(P<0.05);COX分析表明,Skp2是一个独立的预后参数.P27Kipl蛋白在正常宫颈中表达高,随病变进展表达呈下降趋势;P27Kipl蛋白阳性率与淋巴结转移相关(P<0.05);Skp2与P27Kipl表达呈显著负相关(P<0.01).结论 Skp2高表达和P27Kipl失活致细胞增殖周期失调在SCC发生过程中起重要作用,可作为SCC早期诊断、临床生物学行为和预后评价的新的参考指标.
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去泛素化酶的研究及其进展
泛素一蛋白酶体途径(ubiquitin-proteasome pathway)是细胞内一个重要的蛋白质降解调节系统.通过对底物蛋白的多聚泛素化并经蛋白酶体降解,可以影响或调节多种细胞活动,包括:基因转录、细胞周期调节、免疫反应、细胞受体功能及肿瘤生长、炎症过程等.该途径也是一个被严格调控的可逆过程,其中去泛素化酶的调节就是一个重要的环节.
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蛋白酶体抑制剂MG132诱导HepG2细胞凋亡及其机制研究
目的观察蛋白酶体抑制剂MG132对人肝癌细胞HepG2的致凋亡作用,并从泛素-蛋白酶体途径(UPP)相关基因E1、E2和E3及天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达初步探讨MG132的致细胞凋亡机制.方法采用多个浓度(2、5、10 μmol·L-1)的蛋白酶体抑制剂MG132处理HepG2细胞;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测UPP相关基因E1、E2、E3和凋亡相关基因Caspase-3 的转录水平;免疫细胞化学检测Caspase-3蛋白表达.结果对照组HepG2细胞凋亡率低于5%,在2、5和10 μmol·L-1MG132作用下,细胞凋亡率分别为42.9%、66.1%、72.8%,MG132诱导HepG2细胞凋亡具有量-效关系;RT-PCR检测发现细胞内UPP相关基因E1、E2、E3 mRNA表达下降,而凋亡相关基因Caspase-3 mRNA表达上调;免疫组化检测Caspase-3蛋白表达水平升高. 结论蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与MG132抑制UPP活性,使细胞内Caspase-3蛋白降解减少,同时上调Caspase-3基因转录,促进细胞凋亡.
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MG132诱导人血管内皮细胞凋亡及对caspase-3表达的影响
目的观察蛋白酶体抑制剂MG132对人血管脐静脉内皮细胞(ECV-304)的致凋亡作用及其对凋亡相关的天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3表达的影响.方法采用两个浓度(2, 5 μmol·L-1)的蛋白酶体抑制剂MG132处理ECV-304细胞;DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率;RT-PCR检测细胞内凋亡相关基因caspase-3 的转录水平;免疫细胞化学检测细胞caspase-3蛋白表达.结果对照组ECV-304细胞凋亡率低于5%,在2μmol·L-1MG132作用下,凋亡率为11.3%,MG132浓度升至5 μmol·L-1,细胞凋亡率增致44.5%,MG132诱导ECV-304细胞凋亡具有量-效关系;RT-PCR检测发现细胞内凋亡相关基因caspase-3 mRNA表达上调;免疫细胞化学检测细胞caspase-3蛋白表达水平升高.结论:蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导血管内皮细胞凋亡,其机制可能与MG132抑制UPP活性,促进caspase-3基因转录,使细胞内caspase-3增加而促进细胞凋亡.
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乳源免疫调节肽通过泛素-蛋白酶体途径抑制卵巢癌耐药性及其机制研究
目的 研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)抑制卵巢癌耐药性及其机制.方法 MTT法检测PGPIPN与抗癌药顺铂(DDP)联合用药抑制人卵巢癌敏感细胞株(SKOV3)、耐药细胞株(SKOV3-DDP)和原代卵巢癌细胞的半数抑制浓度(IC50)和细胞增殖抑制率,PCR法和Western blot法检测人卵巢癌细胞株和原代卵巢癌细胞用药情况下泛素-蛋白酶体途径相关基因的表达.结果 PGPIPN和DDP联合用药细胞增殖抑制率显著高于单独DDP组或PGPIPN组,差异有统计学意义( P＜0. 05),PCR和Western blot结果表明 PG-PIPN通过调节泛素-蛋白酶体途径相关基因表达降低卵巢癌细胞的耐药性. PGPIPN促进SIAH和PSMA1 表达,降低β-catenin基因的表达(P ＜0. 05,P ＜0. 01),且有剂量依赖性.结论 PGPIPN通过泛素-蛋白酶体途径降低卵巢癌细胞对DDP的耐药性.
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慢性酒精中毒性疾病与泛素-蛋白酶体途径异常调节的研究
泛素-蛋白酶体途径是细胞内蛋白质降解的主要途径，在多种细胞生命过程中发挥重要作用。目前研究证实慢性酒精中毒可导致泛素-蛋白酶体途径异常调节，主要涉及蛋白酶体活性、泛素分子合成以及相关蛋白分子表达改变等，并且与一些慢性酒精中毒性疾病的发生有关，包括酒精中毒性肝病、酒精中毒性脑病和酒精中毒性肌病。这些发现为进一步揭示酒精诱导损伤的分子机制以及研发治疗慢性酒精中毒性疾病的新型药物提供了重要的研究方向。
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泛素-蛋白酶体途径在高体积分数氧肺损伤大鼠早期的激活
目的 探讨高体积分数氧(高氧)暴露早期大鼠肺损伤情况,以及泛素-蛋白酶体途径是否激活.方法 实验采用完全随机设计,SD大鼠20只随机分为高氧组和空气组,每组10只.空气组大鼠持续吸入空气(氧体积分数210 ml/L)72 h;高氧组大鼠持续吸入高氧(氧体积分数950 ml/L)72 h制备高氧肺损伤模型.并视肺形态学变化并确定大体病理分级,肺损伤病理评分;测定肺湿/干质量比值.免疫组织化学方法和Western blot方法检测肺组织泛素化蛋白的表达和蛋白酶体20 s的活性,评价泛素-蛋白酶体途径激活情况.结果 1.成功复制高氧肺损伤大鼠模型.2.大鼠高氧暴露后,出现明显肺水肿,肺湿/干质量比值增高(P=0).3.高氧组大鼠高氧暴露72 h肺组织鲜红色,饱满状,表面有点片状出血或局灶状出血,胸腔有少量积液.高氧组大体病理分级与空气组比较差异有显著性(P=0.005).光镜观察高氧组肺泡上皮肿胀,肺泡壁增宽,毛细血管扩张和充血,肺泡间质和肺泡腔水肿明显,肺泡内炎性细胞增多.高氧组肺损伤病理评分较空气组显著增高(P=0).4.免疫组织化学和Western blot结果均显示大鼠高氧暴露72 h肺组织泛素化蛋白表达显著增强(P=0).5.高氧组蛋白酶体20 s活性较空气组明显升高(P=0).结论 高氧暴露72 h对大鼠肺脏有明显损伤,弥散性肺泡上皮细胞、肺血管内皮细胞损伤,肺内炎性反应细胞浸润伴肺水肿为主要病理学改变.高氧暴露早期大鼠肺组织泛素-蛋白酶体途径激活,并参与肺损伤病理生理过程.
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过氧化氢诱导的氧化应激对ARPE-19细胞中泛素化途径的激活
目的 探讨H2O2诱导的氧化应激对人视网膜色素上皮(RPE)细胞系ARPE-19细胞中泛素及泛素化蛋白表达的影响.方法 MTT法建立H2O2诱导ARPE19细胞模型.不同浓度H2O2作用于ARPE-19细胞后,RT PCR检测细胞内泛素基因转录水平,细胞免疫荧光方法 检测细胞内泛素化蛋白的表达.用有(或无)蛋白酶体抑制剂MG-132预处理后再用H2O2处理ARPE-19,Western blot方法 检测细胞内泛素化蛋白.结果 氧化应激后UBA、UBB的转录水平明显增加(P＜0.05),UBC无明显变化.细胞内相对分子质量为 50000～ 250000的泛素化蛋白均增加,MG-132预处理后再用H2O2处理,细胞内增加的泛素化蛋白则多集中在相对分子质量 75000以上.细胞内泛素化蛋白表达增加,核内增加明显.结论 H2O2诱导的ARPE-19氧化应激过程激活细胞内泛素化途径.
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转化生长因子-β/Smads信号转导通路的泛素化调节在糖尿病视网膜病变中的作用
糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病常见和严重的并发症之一,参与的细胞因子和调节因子众多,其发病机制一直是DR防治研究的热点.研究证实,转化生长因子-β(TGF-β)参与了DR的发生和发展,Smads蛋白则能介导TGF-β/Smads信号通路的激活,进而参与DR的病理过程,而泛素-蛋白酶体途径(UPP)中的泛素连接酶Smurf则参与了TGF-β/Smads信号通路的降解调节.目前,相关研究已经取得了较大进展,就UPP对TGF-β/Smads信号转导通路的降解调节在DR中的作用进行综述.
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泛素-蛋白酶体途径与EBV潜伏蛋白
泛素-蛋白酶体途径是真核细胞内重要的蛋白质调控系统,参与调节细胞周期进程、细胞增生与分化,以及信号传导等多种细胞生理过程,因此,细胞内蛋白泛素化降解是蛋白质重要的转录后修饰方式.EBV编码多种病毒蛋白,通过泛素-蛋白酶体途径调节病毒的潜伏,使病毒能在免疫活性较高的宿主体中存活.LMP1和LMP2A可能作为泛素-蛋白酶体途径的底物而受其调控,EBNA1则充当蛋白酶体降解过程中的阻滞剂.对它们在该途径中不同作用的深入了解将促使我们发展治疗EBV相关癌症的新策略.
关键词： Epstein-Barr病毒 蛋白质调控 泛素-蛋白酶体途径 -
泛素-蛋白酶体途径异常调控在吗啡耐受及依赖分子机制中的作用
吗啡是目前治疗中、重度疼痛常用和有效的阿片类药物。但是，长期反复使用吗啡容易产生药物耐受和依赖，这在很大程度上限制了吗啡的临床应用。泛素-蛋白酶体途径是细胞内蛋白质降解的主要途径，在多种细胞生命过程中发挥重要作用。研究表明泛素-蛋白酶体途径异常调控可能是吗啡耐受及依赖发生的重要机制之一，本文就此方面的研究进展作一综述。深入阐明吗啡诱导泛素–蛋白酶体途径异常调控的具体机制及其与中枢神经适应性改变之间的关系，对于进一步揭示吗啡耐受及依赖分子机制具有十分重要的意义。
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泛素-蛋白酶体途径及意义
泛素-蛋白酶体途径介导的蛋白降解是机体调节细胞内蛋白水平与功能的一个重要机制.负责执行这个调控过程的组成成分包括泛素及其启动酶系统和蛋白酶体系统.泛素启动酶系统负责活化泛素,并将其结合到待降解的蛋白上,形成靶蛋白多聚泛素链,即泛素化.蛋白酶体系统可以识别已泛素化的蛋白并将其降解.此外,细胞内还有另一类解离泛素链分子的去泛素化蛋白酶形成反向调节.泛素-蛋白酶体途径涉及许多细胞的生理过程,其调节异常与多种疾病的发生有关.
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MG132对兔颈总动脉球囊损伤后狭窄部位泛素和Caspase-3表达的影响
目的 采用球囊拉伤新西兰白兔颈总动脉,复制出血管损伤后狭窄模型;在损伤血管局部应用蛋白酶体抑制剂MG132,观察蛋白酶体抑制剂MG132对球囊损伤后血管狭窄部位泛素和Caspase-3表达的影响.方法 将新西兰白兔30只随机分成对照组、球囊损伤组和MG132组,喂养8周后取颈总动脉损伤段血管制成病理切片,采用免疫组织化学法观察泛素蛋白和Caspase-3蛋白的变化.结果 免疫组织化学法检测到球囊损伤组颈总动脉管壁泛素蛋白表达加强;而MG132组与球囊损伤组比泛素蛋白表达明显减少(P<0.01).Caspase-3蛋白表达显著增加(P<0.01).结论 局部应用蛋白酶体抑制剂MG132能抑制颈总动脉管壁泛素蛋白表达,并增强Caspase-3蛋白表达.
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蛋白酶体抑制剂MG132对球囊损伤后血管狭窄的影响
目的 观察蛋白酶体抑制剂MG132对球囊损伤后血管狭窄的影响.方法 将新西兰白兔40只随机分成正常对照组、高脂组、球囊损伤组和MG132组.球囊损伤组和MG132组兔采用球囊拉伤颈总动脉复制血管损伤后狭窄模型;MG132组在损伤血管局部应用蛋白酶体抑制剂MG132.喂养2周、4周和8周后取颈总动脉损伤段血管制成病理切片行HE染色,测定内膜厚度、中膜厚度和管腔面积,评价颈总动脉血管狭窄.结果 球囊损伤组颈总动脉发生明显狭窄、管腔减小、内膜增厚,有泡沫细胞和大量血管平滑肌细胞增殖,而MG132组的病变明显减轻.结论 用球囊拉伤新西兰白兔颈总动脉复制的血管狭窄模型,颈总动脉发生明显狭窄,局部应用蛋白酶体抑制剂MG132能够抑制血管内膜增生,抑制损伤后血管狭窄.
