补体系统激活在吐温80导致类过敏反应中的作用

鱼腥草注射液是临床常用的清热解毒类中药注射剂,对呼吸系统、泌尿系统感染性疾病有良好的疗效,然而由于发现其可引起过敏性休克、呼吸困难甚至死亡等严重不良反应,于2006年在全国范围内被暂停使用和审批.

常用注射用辅料刺激RBL-2H3细胞脱颗粒的作用

目的 研究多种注射用辅料刺激肥大细胞RBL-2H3脱颗粒的作用,建立和完善注射用辅科引发类过敏反应的筛选评价体系.方法 以不同浓度的注射用辅料羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)、甲氧基聚乙二醇-聚乳酸共聚物40/60( mPEG-PDLLA40/60)、聚乙二醇400(PEG400)、聚乙二醇600 (PEG600)、聚氧乙烯蓖麻油(CrEL)和吐温80处理RBL-2H3细胞,测定β-氨基己糖苷酶释放率,并通过MTT法进一步研究有脱颗粒作用的受试物对RBL-2H3细胞的毒性作用.结果 HP-β-CD、高浓度的mPEG-PDLLA40/60( 40 mg/ml)和吐温80(3.0 mg/ml)均能直接刺激RBL-2H3细胞脱颗粒,呈浓度依赖性；PEG400、PEG600和CrEL在本研究的浓度范围内均不能直接刺激RBL-2H3细胞脱颗粒.HP-β-CD有明显的细胞毒性,但不呈浓度依赖性；mPEG-PDLLA40/60无细胞毒性；吐温80没有明显的细胞毒性,但呈浓度依赖性.结论 RBL-2H3细胞的β-氨基己糖苷酶释放试验方法灵敏、重复性好,其结果与临床报道有一定的相关性,提示其有评价注射用辅科类过敏反应的潜在应用价值.高浓度的吐温80直接刺激肥大细胞脱颗粒的作用可能是由其细胞毒性引起的.

中药注射剂过敏类反应研究新思路

中药注射剂(traditional chinese medicine injection,TCMI)引发的药物不良反应是限制其使用的重要因素,据统计,被列入中国国家基本药物目录(2004版)中的33种TCMI均有临床不良反应事件发生,其中过敏反应占75％,具体表现为皮肤瘙痒,各种过敏性皮疹,粘膜水肿等,且具有不良反应发生时间较早,累及多器官,涉及多品种的特点[1].

吐温-80引起动物类过敏反应的原因初步探索/注射用头孢他啶舒巴坦钠的特殊安全性

常用中药注射剂致敏性研究

目的：研究中药注射剂的过敏反应，测定致敏动物血清免疫球蛋白（IgE）抗体含量，观察其与过敏反应是否具有相关性，为提高过敏反应实验预测的准确性提供实验依据。方法：选用多种中药注射剂进行被动皮肤过敏实验（PCA）实验和类过敏反应研究，用ELISA法对致敏动物血清进行血清IgE水平检测。结果：双黄连注射液（SHL）、清开灵注射液（QKL）、鱼腥草注射液（YXC）、血塞通注射液（XST）、葛根素注射液（GGS）、穿琥宁注射液（CHN）的PCA实验结果均为阴性，刺五加注射液（CWJ）的PCA实验结果为阳性。SHL、QKL、YXC、XST、GGS、CHN、CWJ注射液组血清总 IgE水平与生理盐水组无明显差异；SHL、QKL、YXC、XST、GGS、CHN、CWJ注射液均引起了豚鼠的类过敏症状。结论：SHL、QKL、YXC、XST、GGS、CHN、CWJ均能引起豚鼠的类过敏反应，其过敏反应的发生与血清IgE抗体水平无相关性。

中药注射剂过敏及类过敏反应体外评价方法的初步建立

目的：比较RBL-2H3、P185、Ku812和RPMC 4个细胞系在过敏和类过敏反应评价中的敏感性。方法实验中选用了RBL-2H3、P185、Ku812和RPMC等4种细胞系。在培养过程中，在培养液中加入不同浓度的中药注射剂（临床有过敏反应或者类过敏反应的注射液）或者阳性对照药C48/80，然后观察不同时间点细胞脱颗粒率、组胺释放水平和IL-10表达水平。结果在进行过敏反应评价时，中药注射剂可引起Ku812细胞和RBL-2H3细胞的脱颗粒反应，并引起培养液中组胺释放量增加；在进行类过敏反应评价时，中药注射剂可引起RBL-2H3细胞，RPMC细胞和Ku812细胞的脱颗粒反应和组胺释放量的增加。在各细胞培养上清液中均未检测出IL-10。结论 RBL-2H3、RPMC以及Ku812细胞可用于中药注射剂引起的过敏和类过敏反应的评价，但是不同的细胞敏感性不同。

射干抗病毒注射液致类过敏反应初步研究

目的:探究射干抗病毒注射液的致类过敏反应及其可能的作用机制.方法:通过体外动物类过敏试验,探究射干抗病毒注射液对小鼠耳廓血管通透性的影响;细胞水平上,采用MTT比色法筛选出射干抗病毒注射液对RBL-2H3细胞的安全作用浓度,并在安全浓度之下,以不同浓度,用中性红染色观察其脱颗粒状态,检测射干抗病毒注射液对细胞内颗粒物质β-氨基己糖苷酶释放量的影响,Fluo-3荧光标记细胞内Ca2检测细胞内钙离子变化,综合考察射干抗病毒注射液的体外致类过敏性.结果:射干抗病毒注射液可引起小鼠耳廓通透性增强,引发类过敏反应;并可诱导RBL-2H3细胞发生脱颗粒反应,使胞内钙离子浓度升高,且均具有剂量依赖性.结论:射干抗病毒注射液具有引发类过敏反应的风险,其机制可能与引起胞内Ca2+浓度增加有关.

大鼠腹腔肥大细胞与RBL-2H3细胞脱颗粒方法的建立及其在中药注射剂安全性评价上的应用

目的:建立大鼠体外肥大细胞以及RBL-2H3细胞脱颗粒试验的方法,评估2种细胞脱颗粒方法对中药注射剂(traditional Chinese medicine injections,TCMI)引起脱颗粒的可行性.方法:提取大鼠腹腔肥大细胞(rat peritoneal mast cell,RPMC),优化实验条件,用阳性药物C48/80和各种TCMI等与其共培养,通过甲苯胺蓝染色法计数腹腔MC脱颗粒率；通过RBL-2H3细胞与TCMI共同培养,底物显色法检测β-氨基己糖苷酶释放率.结果:阳性对照品C48/80的浓度与RPMC脱颗粒有一定的量效关系；参麦、冠心宁、痰热清、清开灵和生脉5种TCMI能显著引起细胞脱颗粒,并与药物浓度有一定的正相关性；RBL-2H3细胞脱颗粒方法中参麦、黄芪、银杏、痰热清、丹香冠心、清开灵和生脉7种TCMI能是β-氨基己糖苷酶释放率升高.结论:一些TCMI能引起体外RPMC和RBL-2H3细胞脱颗粒,2种细胞脱颗粒方法在评价一些TCMI可能引起类过敏反应方面具有一定的互补性与可行性.

清开灵和葛根素注射液对清醒犬血压的影响

目的:清醒Beagle犬静脉滴注给予清开灵注射液或葛根素注射液,观察药物是否引起类过敏反应及其对血压的影响.方法:经手术在Beagle犬体内埋植植入子,手术恢复后用文献报道的类过敏阳性药compound 48/80和聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯(吐温-80)来验证该动物检测模型的可行性,然后分别经静脉滴注给予清开灵注射液或葛根素注射液,采用DataquestA.R.T.4.3系统连续监测给药过程中及给药后Beagle犬血压的变化并观察犬的体征变化.结果:类过敏阳性药compound 48/80和吐温-80给药后犬出现骚动、皮肤潮红、巩膜充血等类过敏症状,且血压出现不同程度的下降,证明清醒Beagle犬遥测系统检测类过敏反应模型成立.清开灵注射液1.2,2.3,11.5 mL·kg-1对犬血压均未见明显影响；0.24 mL·kg-1葛根素注射液组的血压变化不明显,而0.47 mL·kg-1葛根素注射液引起犬血压明显降低,平均动脉压在药后30 min时从药前的(115.35 ±7.73) mmHg降低到(91.74± 10.18) mmHg (P ＜0.01),收缩压从药前的(147.33±14.65) mmHg降低到(112.88 ±6.51) mmHg(P ＜0.01),但未见明显的体征变化.结论:清开灵注射液对清醒Beagle犬血压没有明显影响,葛根素注射液可引起清醒Beagle犬血压下降,且与剂量相关,可能是由其自身的药理作用引起的,初步判断清开灵注射液和葛根素注射液没有引起清醒Beagle犬发生类过敏反应.

穿心莲系列注射剂类过敏反应及其试验模型研究进展

调研了穿心莲系列注射剂不良反应的有关文献报道,分析了中药注射剂的安全性现状,并对检验类过敏反应的3种模型:体外细胞模型、啮齿类小动物模型以及大动物模型进行总结.穿心莲系列注射剂由于其起效快、作用强,在危重疾病急救及感染性疾病等的治疗上具有一定的优势.然而,近年来,随着中药注射剂在临床上的广泛应用,不良反应报道也逐渐增多,尤其是类过敏反应等安全性问题越来越突出,应建立敏感而可靠的检测模型和评价方法,才能从根本上解决中药注射剂的安全问题.

检测原代肥大细胞组胺释放分析中药注射剂致类过敏性

目的:通过检测组胺释放考察19种临床常用中药注射剂致大鼠腹腔原代肥大细胞脱颗粒情况,为评价中药注射剂致类过敏性提供参考.方法:应用荧光法检测组胺,并进行条件优化以适用于中药注射剂所致肥大细胞释放组胺的检测.分离大鼠腹腔肥大细胞,分别将19种中药注射剂、阳性药C48/80和肥大细胞混合孵育1h,采用优化的荧光法检测组胺,再计算组胺释放率并进行统计学分析.结果:荧光法检测组胺佳缩合反应时间为3 min,终止反应后7.5 ～ 30 min缩合物稳定性好;采用间接检测组胺释放率与直接检测组胺释放率两方法结果间无显著差异.痰热清、清开灵、参麦、丹参、血塞通、参附、双黄连、生脉、香丹、热毒宁、复方当归等11种中药注射剂致肥大细胞释放组胺作用明显.脉络宁、黄芪、艾迪、醒脑静、黄芪多糖、红花、盐酸川芎嗪、参芪等8种注射剂未见明显致肥大细胞释放组胺作用.结论:中药注射剂引发的过敏样反应可能大多为类过敏,检测组胺释放分析原代肥大细胞脱颗粒试验可以为评价中药注射剂的致类过敏性提供参考.

双黄连注射液类过敏反应研究

目的：观察双黄连注射液的类过敏反应，测定致敏动物血清组胺含量，探讨其与类过敏反应的相关性。方法将豚鼠随机分组，选用双黄连注射液按不同注射速度、不同剂量进行给药，观察豚鼠的类过敏反应，同时用ELISA进行血清免疫球蛋白E(IgE)、血清组胺含量检测。结果不同剂量、不同注射速度下的双黄连注射液均能引起豚鼠的类过敏症状；不同剂量、不同注射速度下的双黄连注射液组IgE水平与生理盐水组无明显差异；不同剂量、不同注射速度下的双黄连注射液组血清组胺水平明显升高，且呈剂量、速度相关性。结论双黄连注射液能引起豚鼠产生类过敏反应，豚鼠血清组胺含量的变化与双黄连注射液的给予剂量、速度有相关性。

舒血宁注射液不良反应及其致敏物质筛选研究

该研究通过豚鼠主动全身过敏试验和大鼠被动皮肤过敏试验及小鼠类过敏试验初步判定舒血宁注射液(Shuxuening injection,SXNI) 的"过敏反应"可能不一定是IgE介导的真正的过敏反应,而是以类过敏反应为主,并进一步证明SXNI的类过敏反应有一定的批间差异和剂量依赖性,建议建立SXNI类过敏反应检测法,对每批生产的产品进行类过敏反应检测,及时发现并控制产品风险,另外临床使用时应严格控制剂量浓度.接着又对舒血宁注射液中的主要单体成分及银杏提取物的不同流分进行了小鼠类过敏反应检测,结果证明舒血宁注射液中致敏物质可能主要存在于主要含黄酮醇苷的YXY-3流分中,后对YXY-3进行了进一步化学分离得到4个化学组分,小鼠类过敏试验证明其中YXY-3-1和YXY-3-2是舒血宁注射液中的主要致敏成分,但其具体化学成分还有待后续试验进行深入研究.

醒脑静注射液不良反应临床前相关研究

该研究首先通过选择不同批号的醒脑静注射液产品进行小鼠类过敏试验,结果在给予临床6.6倍剂量注射液后,临床具有不良反应报告的相应批号注射液可诱发小鼠发生轻微类过敏反应,其余批号则无,初步认为该小鼠模型可以很好地提示醒脑静注射液临床上使用的类过敏风险.另外通过改变部分工艺,制作出高浓度的醒脑静注射液并进行小鼠类过敏试验和豚鼠主动全身过敏试验,结果豚鼠未见明显Ⅰ型过敏样反应发生,而小鼠在给予临床6.6倍剂量注射液后发生轻微类过敏反应,故认为对于敏感或特异质人群(代谢异常),可能会造成醒脑静注射液进入体内后其中某些化学组分浓度增加,从而会导致其诱发类过敏反应的风险加大.而由于检测模型的限制,目前暂不能排除醒脑静注射液诱发过敏反应的风险.后,该研究又通过加大醒脑静注射液中冰片和辅料聚山梨酯(吐温)和(或)氯化钠的含量并再进行类过敏检测,结果表明上述3种成分混合后可能会产生新的微量致敏物质并诱发类过敏反应.

中药注射剂对Ⅰ型变态反应试验的影响

目的:研究中药注射剂的过敏反应,测定致敏动物血清IgE抗体和组织胺含量,观察其与过敏反应是否具有相关性,为提高Ⅰ型过敏反应试验预测的准确性提供实验依据.方法:选用3种中药注射剂进行PCA,ASA试验和类过敏反应研究,用ELISA法对致敏动物血清进行血清OVA-sIgE、血清总IgE、组织胺水平检测.结果:3种中药注射剂的PCA试验结果为阴性,血清总IgE水平与生理盐水组无明显差异;3种中药注射剂+OVA(不引起过敏反应的剂量)的研究中双黄连注射液(SHL)、鱼腥草注射液(YXC)的PCA试验均为阳性,OVA-sIgE水平明显增加,清开灵注射液(QKL)的PCA试验为阴性,OVAsIgE水平增加不明显,各组血清总IgE水平增加不明显;3种中药注射剂的ASA试验结果为阳性,3种中药注射剂(临床剂量和临床等效剂量)均引起了豚鼠的类过敏症状,且反应强弱呈现剂量和注射速度依赖性,各给药组血清组织胺水平均较生理.盐水组明显增高,血清总IgE水平无明显差异.结论:SHL和YXC具有增加豚鼠对卵蛋白敏感性的作用,SHL,YXC,QKL均能引起豚鼠的类过敏反应,3种中药注射剂的过敏反应的发生与特异性IgE抗体和组织胺水平有相关性.

一种药物注射剂类过敏反应高内涵检测方法的初步建立

类过敏反应是药物注射剂常见的不良反应,但现有检测方法尚存在诸多不足.该研究采用荧光标记和高内涵筛选技术建立了一种类过敏反应体外检测方法,应用RBL-2H3细胞脱颗粒模型,以细胞膜特异荧光染料FM4-64标记细胞脱颗粒囊泡回收来确定阳性细胞数,以细胞核特异荧光染料Hochest 3334标记细胞核来确定细胞总数,从而计算药物刺激后的细胞脱颗粒率.为了考察高内涵检测方法可靠性,首先采用阳性药物Compound 48/80验证了高内涵检测方法与传统过敏介质β-氨基己糖苷酶释放和小鼠耳廓皮肤蓝染检测方法间一致性,结果显示高内涵检测方法与传统检测方法高度一致,且灵敏度高于传统检测方法;然后采用30批次临床报告过敏症状丹红注射液进一步验证高内涵检测方法的可靠性,结果提示高内涵检测结果与临床报告高度一致,而且高内涵方法一定程度上能够克服注射液自身颜色干扰问题.可见,类过敏反应高内涵检测方法是一种灵敏、可靠、简便且可实现高通量筛选的新方法,适用于药物注射剂类过敏反应评价,能够为临床安全用药提供指导.

清开灵注射液类过敏反应特点及致敏物质初步筛选研究

采用小鼠类过敏实验模型,研究清开灵注射液(Qingkailing injection,QKLI)的类过敏反应特点以及影响其类过敏反应的因素,并对其致敏物质初步筛选.结果显示,不同品系的小鼠(ICR,昆明,BALB/c,C57)在静脉注射QKLI后产生的类过敏反应有所不同,其中ICR和昆明小鼠的类过敏反应较BALB/c,C57强.用生理盐水配制的QKLI较5％葡萄糖注射液配制的QKLI诱导ICR小鼠产生的类过敏反应更强.当其剂量为临床2倍剂量时,部分批号QKLI可诱发明显或可疑类过敏反应,当剂量降低至临床等倍剂量时,所有批号QKLI均不诱发小鼠类过敏反应.不同批号的QKLI诱发的小鼠类过敏反应程度有所不同.因此QKLI的类过敏反应发生可能与机体不同体质有一定联系.不同溶媒可能影响QKLI的安全性.QKIL诱发类过敏反应具有批间差异性.另外临床使用时也应严格控制剂量.后通过比较QKLI中不同成分和中间体诱发的小鼠类过敏反应,初步认为致类过敏物质可能主要存在于中间体板蓝根提取物和栀子提取物中.

清开灵注射液类过敏反应的实验研究

实验采用小鼠全身类过敏试验、大鼠皮肤类过敏试验及测量血液中组胺,VEGF,TNF-α含量来研究清开灵注射液致小鼠和大鼠的类过敏反应,为其临床用药安全提供参考.小鼠全身类过敏试验:ICR小鼠随机分为生理盐水(NS)对照组、阳性药Compound 48/80 (Comp) 25 mg·kg-1组、清开灵注射液(QKLI)3,6,12 mL·kg-1组(本实验所用QKLI为液体,故剂量单位选用mL · kg-1),各组分别一次性尾静脉注射含0.4％伊文思蓝(EB)的受试药,记录给药30 min后耳廓蓝染阳性率,对耳廓蓝染程度进行评分,测定耳廓伊文思蓝渗出量.大鼠皮肤类过敏试验:剃除大鼠背部和脊柱两侧的毛,经尾静脉注射含0.6％ EB的NS 2 mL·kg-1,10 min后,在麻醉的情况下,沿脊柱两侧,皮内注射阴性对照NS、阳性对照Comp(0.5 mg,50μL)、不同浓度QKLI(分别相当于清开灵注射液原液12.5,25,50 μL),各组注射体积均为50 μL.给药20 min后记录各注射点的蓝斑直径.对血液中组胺,VEGF,TNF-o的影响:ICR小鼠随机分成NS组、Comp25 mg.kg-1组、QKLI 12 mL·kg-1组.各组经尾静脉注射不含EB的受试物.给药30 min后,摘眼球取血,离心分离血清,采用ELISA方法测定.实验结果显示尾静脉注射QKLI 3,6,12 mL·kg-1后,小鼠耳廓出现不同程度的耳蓝染现象.提示QKLI可引起小鼠血管通透性增高,导致其发生类过敏反应;大鼠皮内注射QKLI(相当于原液25,50 μL/点)时可导致注射点处形成与NS组相比直径较大的蓝斑(P＜0.01);静脉注射QKLI后可引起血液VEGF明显增高,组胺有一定增高趋势,TNF-α未见增高.实验证明了QKLI有显著的使血管通透性增高的作用,从而诱发大鼠、小鼠而发生类过敏反应,其类过敏反应可能与组胺和VEGF释放有关.

中药注射剂类过敏研究进展

中药注射剂由于起效迅速,生物利用度高,已被广泛应用在临床危急重症领域.近年来随着其临床不良反应报道的增多,已越来越引起人们重视,其中急性过敏反应为其主要的不良反应.急性过敏包括Ⅰ型过敏和类过敏,其中后者占77％以上,为中药注射剂的主要不良反应,目前已发现多种中药注射剂包括鱼腥草注射液和生脉注射液等导致严重的类过敏反应的发生.但是国内外对类过敏反应产生的机制尚不完全清楚,均未建立评价中药致敏原的类过敏标准动物模型,有关中药注射剂类过敏反应的技术指导原则尚未制定,相关机制及类过敏成分尚不明确,相关研究方法也比较单一.该文主要从类过敏反应机制、评价指标及评价方法3方面对中药注射剂类过敏进行综述.类过敏反应机制主要包括直接刺激途径、补体途径、凝血途径、激肽释放酶-激肽途径和急性过敏途径共5条途径;评价方法主要包括整体动物模型和体外细胞模型;综述评价指标主要分析了类过敏发生途径的特征指标及类过敏发生后效应物质指标.

动物类中药注射剂的安全性研究进展

动物类中药注射剂是中药注射剂的重要组成部分,其多选取药效显著,副作用少的动物类材料,通过现代工艺制成了包括清热解毒类、补益类、活血化瘀类等多种药效可靠迅速、生物利用度高的中药注射剂.由于中药注射剂的成分复杂,质量标准待完善,及临床存在不合理用药等情况,使得中药注射剂的不良反应发生率明显高于口服中药.动物类中药含有丰富的蛋白和脂肪,而异种蛋白是动物类中药注射剂的主要致敏源.目前关于动物类中药注射剂的不良反应,主要表现为导致皮肤及黏膜和全身各系统的过敏样反应,并且首次用药过程中发生不良反应较常见.动物类注射剂发生过敏样不良反应的具体原因以及诱发过敏或类过敏反应的动物中药注射剂中的相关物质成分目前没有相关明确报道.该文就动物类中药注射剂的不良反应现状,过敏、类过敏研究,血管刺激性检测,热原检测,药代动力学研究及联合用药研究等做一综述,为动物类中药注射剂的质量标准完善,进行深入安全性相关研究提供参考.