首页 > 文献资料
-
2,2’,4,4’-四溴联苯醚的肝细胞氧化损伤毒性效应研究
目的 探讨2,2’,4,4’-四溴联苯醚(2,2’,4,4’-tetrabromodiphenyl ether,BDE-47)的L02肝细胞毒性效应.方法 采用CCK8法检测BDE47的肝细胞毒性效应,确定时间-剂量-效应关系.选取3个剂量组:高(80 μmol/L)、中(20 μmol/L)和低剂量(5μmol/L)的BDE-47染毒细胞,同时设立一个空白对照组和一个溶剂对照组,试剂盒检测各剂量组超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)和谷胱甘肽S-转移酶(GST)的表达,SPSS 13.0进行统计分析.结果 BDE-47具有明显的肝细胞毒性(与对照组相比,P＜0.01),染毒时间在12 ～72 h时呈现时间-剂量-效应关系,并发现BDE-47染毒肝细胞12 h的半数抑制浓度为80 μmol/L,为其显著作用时间点；BDE-47染毒L02肝细胞后,细胞外的LDH表达增加,细胞内MDA含量增加；而细胞内GST和SOD酶活力则呈现低浓度BDE47染毒时升高而高浓度时降低.结论 BDE-47对L02肝细胞具有一定的细胞毒性,并能够导致细胞氧化应激损伤.这可能是其生物毒性效应的重要机制之一.
-
何首乌及其主要成分对正常人L02肝细胞损伤作用的研究
目的 考察比较何首乌及其主要成分(大黄素、大黄酸、没食子酸、儿茶素)对肝细胞损伤作用的差异.方法 以正常人L02肝细胞系作为评价模型,考察何首乌及其主要成分对肝细胞抑制率及丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)的影响.结果 4 mg生药量/mL何首乌70％乙醇提取物作用L02细胞24 h的抑制率接近40％.相同浓度下,没食子酸、大黄酸及大黄素对肝细胞抑制率较高,儿茶素对肝细胞抑制率较低;大黄素、大黄酸对肝细胞的抑制率较没食子酸低;生化指标检测显示除AST外,没食子酸对其他生化指标影响均大于大黄素及大黄酸.结论 在一定浓度范围内,没食子酸、大黄素及大黄酸对正常L02细胞具有细胞毒性,可能与何首乌的肝损伤有关;相同浓度下,没食子酸的肝毒性大于大黄素及大黄酸.
关键词： 何首乌 L02肝细胞 肝毒性 丙氨酸氨基转移酶 天门冬氨酸氨基转移酶 -
L02细胞建立人鼠嵌合肝动物模型
目的:研究L02细胞移植到具有正常免疫活性的大鼠肝内的存活情况.方法:SD大鼠出生前宫内腹腔注射正常人L02肝细胞,诱导胎鼠对人L02肝细胞产生免疫耐受,出生2 wk时经脾移植DiI染色后的人L02肝细胞,建立人鼠嵌合肝动物模型.采用免疫荧光、SP免疫组化、DiI荧光示踪等方法,分别检测人白蛋白、特异性人增殖细胞核抗原PCNA(proliferating cell nuclear antigen)以及在荧光显微镜下观察人L02肝细胞在鼠肝内的分布.结果:于移植后1,2,4,6,8,10 wk在荧光显微镜下观察到人L02肝细胞在鼠肝内的动态分布;移植后2,4,6,8 wk大鼠均检测出人白蛋白,4 wk时分泌多;移植后2,4,6 wk检测出特异性人增殖细胞核抗原PCNA,以4 wk发现PCNA阳性细胞多.结论:移植的人L02肝细胞在具有正常免疫活性的免疫耐受鼠体内能够存活、增殖,并产生人白蛋白.
-
何首乌中大黄素对L02肝细胞CYP亚酶表达及细胞毒性的影响
目的：研究何首乌中大黄素( emodin )对 L02肝细胞CYP450酶主要亚型表达的影响,探讨其对L02肝细胞的细胞毒性机制。方法不同浓度的Emodin处理L02细胞,通过MTS法检测细胞的存活率,测定LDH释放率评价细胞损伤程度, Real time PCR法检测Emodin各给药组CYP450酶亚型mRNA表达的变化。结果 MTS结果显示,随着Emod-in浓度的增加,呈现明显的细胞损伤效应,细胞的存活率逐渐降低并呈现浓度和时间依赖性；同时,LDH释放率在给药48 h时相比于空白组均明显增高。在基因水平上,与空白组相比,Emodin能明显提高CYP450各亚型mRNA表达,并可剂量依赖性诱导CYP1A1、CYP1B1的表达。结论何首乌中大黄素对人正常肝细胞具有明显损伤作用,并能诱导CYP450酶mRNA表达。
-
三氯乙烯对肝细胞凋亡基因和肝代谢酶基因表达水平的影响
目的 研究三氯乙烯(TCE)对人肝细胞凋亡基因(Caspase-3、Caspase-8、BAX、Bcl-2)和肝代谢酶基因(CYP1A2、CYP2E1、CYP3A4)mRNA表达水平的影响. 方法 用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养肝细胞,DMSO作为溶剂对照,采用不同浓度TCE(0.2、0.4、0.8、1.6、3.2 mmol/L)染毒L02肝细胞24 h,另外用TCE 1.0 mmol/L染毒细胞不同时间(2、4、8、16、32 h),采用Real-time荧光定量PCR技术检测肝细胞中凋亡基因和CYP基因mRNA表达水平.结果 不同剂量TCE染毒后,凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、BAX表达水平比对照组升高21％～145％,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),Bcl-2表达水平下降20％～35％.TCE染毒引起CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1的mRNA表达明显上升,比对照组升高30％～550％,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).用TCE 1.0 mmol/L染毒2～32h,同样发现凋亡基因和肝代谢酶基因表达增加,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01). 结论 TCE可引起肝细胞凋亡基因和肝代谢酶基因表达变化,凋亡基因和肝代谢酶基因可能在TCE对肝细胞毒性效应中发挥重要作用.
-
根皮苷抑制体外LO2肝细胞脂肪变性作用的实验研究
目的：研究根皮苷对体外LO2肝细胞脂肪变性的抑制作用。方法体外培养LO2细胞，实验分正常对照组、模型组、辛伐他汀组和不同剂量的根皮苷组。药物作用24，48，72 h后分别检测油红O染色后脂滴吸光度，细胞内甘油三酯（TG）含量和细胞外培养基葡萄糖水平。结果与模型组比较，光镜下各给药组的细胞脂滴均明显减少。在24，48，72 h时模型组吸光度均显著高于正常对照组（P﹤0.01），各给药组吸光度均显著低于模型组（P﹤0.05，P﹤0.01）；在24，48，72 h时模型组TG水平均显著高于正常对照组（P﹤0.05，P﹤0.01），辛伐他汀组及根皮苷高、中剂量组TG水平均显著低于模型组（P﹤0.05，P﹤0.01）；在24 h时模型组细胞培养基上清液葡萄糖含量均高于正常对照组（P﹤0.05），各给药组葡萄糖含量均显著低于模型组（P﹤0.05， P﹤0.01）。结论根皮苷对油酸诱导的体外LO2肝细胞脂肪变性和糖代谢异常有显著的抑制作用。
-
白藜芦醇对过氧化氢诱导的L02肝细胞氧化应激损伤的保护作用
目的 观察白藜芦醇对L02肝细胞氧化应激损伤的保护机制.方法 采用60 μmol/L H2O2诱导L02肝细胞12 h后,成功建立L02肝细胞氧化应激模型.采用CCK8法测定白藜芦醇作用于L02肝细胞的安全剂量范围,选取白藜芦醇30 μmol/L作为佳干预剂量.实验分为3组,即正常组、模型组和白藜芦醇组,诱导成功后,采用生物试剂盒检测细胞内一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量的变化,运用Western blot法检测各组细胞沉默调节因子1(SIRT1)蛋白的表达.结果 与正常组比较,模型组NO和MDA含量显著增加(P＜0.01),SOD、GSH-Px水平明显下降(P＜0.O1),SIRT1蛋白表达量明显下调(P＜0.05).与模型组组比较,白藜芦醇组NO和MDA含量显著降低(P＜0.01),GSH-Px、SOD活性显著升高(P＜0.05),SIRT1蛋白表达量明显上调(P＜0.01).结论 白藜芦醇可以改善H2O2诱导的L02肝细胞氧化应激状态,其抗氧化机制可能与SIRT1蛋白的激活有关.
-
ZCWCC1蛋白在L02肝细胞脂肪变性中的表达变化
目的 研究ZCWCC1蛋白在人L02肝细胞脂肪变性中的表达变化并探讨其机制.方法 培养中加用500 μmol/L的油酸处理L02肝细胞,建立肝细胞脂肪变性体外模型,采用油红染色评价脂质蓄积程度,采用免疫荧光及激光共聚焦显微镜观察ZCWCC1蛋白在L02肝细胞脂肪变性时的表达改变,以Western blot对其进行半定量评价,并使用赖氨酸蛋白酶抑制剂N-乙基马来酰亚胺(N-Ethylmaleimide,NEM)及蛋白酶体抑制剂MG132对ZCWCC1蛋白表达变化的相关机制进行初步探讨.结果 油红染色及细胞甘油三酯含量测定证明L02肝细胞脂肪变性体外模型成功建立,激光共聚焦显微镜观察发现ZCWCC1蛋白主要定位在胞核内,其荧光信号随油酸诱导时间延长而减弱,Western blot检测结果显示,ZCWCC1表达水平也随油酸诱导时间延长(0、3、6、12、24、48 h)而降低[(56 283±303)、(56 753±539)、(55 561±996)、(56 257±326)、(48 339±712)、(43 022±2 198),P ＜0.01].NEM处理可使ZCWCC1降解增加,MG132处理可逆转ZCWCC1在L02肝细胞脂肪变性中的下降趋势.结论 ZCWCC1蛋白在L02肝细胞的脂肪变性过程中表达下降,可能与泛素-蛋白酶体途径有关.
-
过表达MORC2通过下调p53含量抑制L02肝细胞脂肪变性
目的 研究过表达MORC2对人L02肝细胞脂肪变性程度的影响及可能机制.方法 利用慢病毒转染技术在L02肝细胞中过表达MORC2,qRT-PCR及Western blot鉴定过表达效果后,对L02肝细胞进行脂肪变性诱导,测定细胞甘油三酯(triglyceride,TG)含量并比较过表达前后L02肝细胞的脂肪蓄积程度;利用芯片技术对过表达MORC2前后的基因表达谱进行检测与Pathway分析,筛选过表达MORC2时发生变化的通路并选择对脂代谢有调控作用的p53进行研究;Western blot检测在L02肝细胞脂肪变性诱导时过表达MORC2对p53蛋白含量的影响;在过表达MORC2的基础上对L02肝细胞过表达p53,qRT-PCR及Western blot鉴定p53过表达效果后,通过TG测定观察过表达p53对过表达MORC2改变的L02肝细胞脂肪蓄积程度产生的影响.结果 qRT-PCR及Western blot证明过表达MORC2成功;过表达MORC2的L02肝细胞在脂肪变性诱导后TG含量较MORC2正常表达的L02肝细胞明显降低(P＜0.01);基因表达谱芯片及Pathway分析显示脂代谢调控相关的p53通路在过表达MORC2后发生变化;Western blot显示过表达MORC2后,L02肝细胞中p53蛋白水平在脂肪变性诱导前后均降低;qRT-PCR及Western blot验证p53过表达成功,且过表达p53可部分解除MORC2对L02肝细胞脂肪变性的缓解作用.结论 过表达MORC2可通过下调p53从而缓解肝细胞脂肪变性.
-
三氯乙烯对L02肝细胞凋亡基因和CY P基因表达改变的探讨
目的：研究三氯乙烯（TCE）对人肝细胞（L02细胞）的凋亡基因（Caspase -3、Caspase-8、BAX、Bcl -2）和CYP基因（CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1） mRNA表达水平的影响。方法：用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养肝细胞，DMSO作为溶剂对照，采用不同浓度TCE（0．2、0．4、0．8、1．6、3．2 mmol/L）染毒L02细胞24 h ，另外用TCE 1．0 mmol/L染毒细胞不同时间（2h ，4h ，8h ，16h ，32h），采用Real-time荧光定量PCR技术检测肝细胞中凋亡基因和CYP基因mRNA表达水平。结果：不同剂量TCE染毒后，凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、BAX表达水平比对照组升高21％～145％，差异有统计学意义（P＜0．05或P＜0．01），Bcl-2表达水平下降20％～35％。TCE染毒引起CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1的 mRNA表达明显上升，比对照组升高30％～550％，差异有统计学意义（P＜0．05或P＜0．01）。用TCE 1．0 mmol/L染毒2 h～32 h ，同样发现凋亡基因和CYP表达增加，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0．05，或P＜0．01）。结论：TCE可引起L02肝细胞中凋亡基因和CYP基因表达变化，凋亡基因和CYP基因可能在TCE对肝细胞毒性效应中发挥重要作用。
