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p38丝裂原活化蛋白激酶通路介导的早期生长反应基因-1活性与乳腺癌细胞表柔比星耐药性的关系
目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路介导的早期生长反应基因(EGR)-1活性与乳腺癌细胞表柔比星耐药的关系.方法 SB203580(15 μmol/L)干预后,激光共聚焦显微镜观察;流式细胞术、四甲基偶氮唑蓝(MTT)、凝胶电泳迁移率法(EMSA)、RT-PCR及Western blot分别检测耐药MCF-7/Adr及亲本MCF-7细胞内磷酸化p38MAPK蛋白表达、细胞凋亡及细胞内表柔比星浓度、EGR-1蛋白活性改变、细胞对表柔比星敏感性;EGR-1 mRNA、P糖蛋白、磷酸化p53及p38蛋白表达.结果 p38MAPK通路激活的MCF-7/Adr细胞经SB203580(15 μmol/L)干预24和48 h后,(1)MCF-7/Adr细胞(早+晚期)凋亡率分别由(0.54±0.17)%和(0.81±0.16)%提高为(25.36±1.17)%和(38.21±1.25)%,P<0.05,并呈一定时间依赖性;(2)MCF-7/Adr细胞的平均荧光强度分别为(32.45±2.36)及(41.66±3.12),均高于空白对照组及DMSO组MCF-7/Adr细胞的(14.17±1.45)及(16.28±0.63),P<0.01;MCF-7/Adr细胞对表柔比星药物的耐受性显著降低;(3)增加了MCF-7/Adr细胞的EGR-1活性,IC50分别为(21.53±2.17)和(8.77±1.02),低于空白对照组(40.74±2.56);伴随p38MAPK通路活性抑制和EGR-1 mRNA表达增加,磷酸化p53蛋白表达显著上调,而P糖蛋白显著下调.结论 p38MAPK通路与乳腺癌表柔比星耐药密切相关,可能与p38MAPK通路介导的EGR-1表达相关,EGR-1激活抑制了其下游耐药基因转录,从而使表柔比星耐药得以逆转.
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CYR61/CCN1调控良性前列腺增生的血管新生
目的 为了探讨与良性前列腺增生(BPH)临床进展相关的分子病理学机制,研究观察了富半胱氨酸61(CYR61)/CCN1在症状性和无症状性BPH组织中的表达和定位,以及与微血管密度(MVD)的相关性.方法 无症状性BPH标本10例与症状性BPH标本38例用于本研究.采用免疫组织化学法检测CCN1和CD31蛋白的表达.利用原位杂交技术检测CCN1mRNA的表达.利用免疫荧光双染法检测CCN1和CD31的同步表达.结果 在无症状性和症状性BPH标本中,CCN1蛋白以及mRNA表达分别为68.4%与60%(P＞0.05),47.4%与40%(P＞0.05).MVD评分在无症状性和症状性BPH标本中分别是19.2和27.6(P＜0.01).在症状性BPH中,MVD评分在不同前列腺体积中有所不同(P＜0.01),同时CCN1表达也同(P＜0.05).免疫荧光双染观察证实了BPH中CCN1和CD31的同步表达.结论 以上结果提示MVD所反映的血管新生和BPH的进展可能有一定关系,CCN1对症状性BPH中出现的血管新生具有调控作用.
关键词： 前列腺增生 新生血管化 病理性 胞间信号肽类和蛋白质类 微血管密度 -
血浆可溶性受体酪氨酸激酶Mer和Tyro3与急性冠脉综合征的相关性研究
目的 调查急性冠脉综合征(ACS)患者血浆生长抑制特异性蛋白6(Gas6)系统可溶性受体Axl、Mer和Tyro3的浓度,在实施冠状动脉介入手术(PCI)后的变化.方法 病例对照研究.收集2011年至2012年,北京大学人民医院心脏中心66例急性冠脉综合征患者为ACS组[平均年龄(63.5±14.5)岁,男40例,女26例],42例稳定型冠状动脉性心脏病患者为对照组[平均年龄(60.8±18.3)岁,男23例,女19例].ACS患者在PCI术前及PCI后1h、4h、24 h采集柠檬酸钠抗凝全血,稳定型冠状动脉性心脏病患者于门诊采血.分离血浆,ELISA试剂盒检测ACS患者血浆Gas6,可溶性受体Axl(sAxl)、可溶性受体Mer(sMer)、可溶性受体Tyro3(sTyro3).ELISA试剂盒检测凝血酶抗凝血酶复合物(TAT).ACS组与对照组数据比较,分析它们和临床生化指标及TAT的相关性.相关性分析采用Spearman's rank相关性检验,组间差别性检验使用Mann-Whitney U检验.结果 ACS组sMer(中位数28.02 μg/L,95％ CI 14.48～ 60.47)高于对照组(中位数14.91 μg/L,95％ CI7.87 ～25.86),U=42.5,P＜0.05.ACS组sTyro3(中位数16.91 μg/L,95％CI5.81～28.52)高于对照组(中位数9.53 μg/L,95％CI4.17～24.56),U=127.0,P＜0.05.PCI术后1～24 h其浓度变化无统计学意义,P值均＞0.05.sMer的浓度和凝血酶生成指标(TAT)相关(r=0.9218,P=0.014).结论 ACS患者血浆存在高水平可溶性受体酪氨酸激酶sMer和sTyro3,其浓度于PCI术后24 h变化无统计学意义.
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Dickkopf-1时间分辨免疫荧光分析方法的建立及其在肺癌诊断中的应用
目的 建立Dickkopf-1(DKK-1)时间分辨免疫荧光分析(TR-IFMA)方法,并评价其在肺癌诊断和病理分期中的价值.方法 用双抗夹心原理建立DKK-1 TR-IFMA,并对其灵敏度、批内、批间差异和准确性等各项指标进行考核.同时用以测定212例肺癌、72例肺良性疾病患者和120名健康人血清DKK-1含量,以分析血清DKK-1水平与肺癌不同临床病理特性的相关性.结果 DKK-1TR-IFMA的稳定性好,线性宽,其检测灵敏度为0.08μg/L,批内和批间变异系数均<6.5%,与商业ELISA试剂盒相关性好(r=0.972,P=0.01).肺癌组血清DKK-1水平[31.93(79.47～18.03)μg/L]显著高于肺良性疾病组[15.25(18.41～11.49)μg/L]和正常对照组[13.90(16.91～11.02)μg/L],但DKK-1水平与年龄、性别、肺癌病理组织类型无关,与TNM分期(r=0.37,P<0.001)、有无淋巴结转移(r=0.52,P<0.001)和远处转移(r=0.62,P=0.001)显著相关;血清DKK-1诊断肺癌的总敏感度为68.4%,特异度为92.2%,准确性为82.1%,阳性预测值为90.6%,阴性预测值为72.5%;血清DKK-1诊断小细胞性肺癌的敏感度和准确性稍高于非小细胞性肺癌(70.7%vs 69.5%,85.6%vs 80.7%).结论 DKK-1可作为一项肺癌血清学标志,适用于肺癌的辅助诊断和病理分期.TR-IFMA检测血清DKK-1方法准确可靠,且为肺癌的DKK-1定量检测提供了技术平台.
关键词： 肺肿瘤 胞间信号肽类和蛋白质类 荧光免疫测定 肿瘤标记 生物学 -
内皮微粒与缺血性脑血管病的研究进展
微粒是在血液循环或多种体液中发现的直径为0.05～1.00 μm的膜性小颗粒,已经发现血小板、内皮细胞、单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、星形胶质细胞和肿瘤细胞等在不同的刺激下都会释放微粒.循环中70％～90％的微粒来源于血小板,内皮细胞衍生的内皮微粒(EMP)只占5％～15％[1].EMP通过细胞间接触或可溶性介质的分泌,将信息[生长因子、炎性因子、趋化因子受体、mRNA和微小RNA(miRNA)等]转移到靶细胞发挥作用,成为细胞间交流的介质[2].缺血性脑血管病的病理生理机制复杂,许多因素参与其中.内皮功能障碍、血管损伤及炎性反应是缺血性脑血管病发生和进展的主要影响因素[3].内皮损伤使循环中EMP数量显著增加,而EMP增加又会传递上述损害因素.
关键词： 内皮细胞 胞间信号肽类和蛋白质类 中枢神经系统疾病 脑血管障碍 -
纽兰格林改善线粒体应激抑制心肌梗死后心力衰竭大鼠细胞凋亡
目的 观察纽兰格林(NRG)对心肌梗死后心力衰竭大鼠心脏保护作用,并探讨其机制. 方法 雄性Wister大鼠(体质量200～250 g)48只,结扎大鼠前降支建立缺血性心力衰竭模型,4周后存活且建模型成功的28只大鼠被随机分至NRG组和心力衰竭组,分别给予重组人纽兰格林(rhNRGβ) 10 μg·kg-1 ·d-1和等容量注射用水尾静脉注射,10 d；另有12只大鼠作为假手术组.超声检查NRG对心力衰竭大鼠心脏功能的影响；透射电镜观察非梗死区心肌组织线粒体超微结构；脱氧核糖核酸缺口末端标记(TUNEL)法测定细胞凋亡指数；免疫荧光法测定线粒体膜电位水平；Caspase-3试剂盒检测caspase-3活性；免疫印迹(Western blot)法检测细胞浆细胞色素C水平. 结果 与心力衰竭组大鼠比较,NRG组大鼠左心室收缩末期内径缩小(P＜0.05),左心室射血分数增加(P＜0.01)、短轴缩短率增加(P＜0.05),凋亡指数降低[(11.9±1.4)％与(18.1±3.0)％,P＜0.01].线粒体膜电位上升[(249.8±7.4)mV与(222.2±7.5)mV,P＜0.01],细胞色素C释放减少[(0.356±0.024)与(0.664±0.085),P＜0.01],caspase-3活性减低(P＜0.01). 结论 纽兰格林改善心肌梗死后心力衰竭大鼠线粒体应激,抑制心肌细胞凋亡,这一机制可能部分参与了纽兰格林的心脏保护作用.
关键词： 胞间信号肽类和蛋白质类 心力衰竭 细胞凋亡 线粒体 -
牛乳制品对非甾体消炎药所致小肠黏膜机械屏障损伤的影响
目的 探讨牛乳制品对非甾体消炎药所致小肠黏膜损伤的形态学结构及黏膜中表皮生长因子(EGF)表达的影响.方法 雄性SD大鼠80只,随机分为5组(每组16只),空白对照组和模型组予自由饮水,其余3组从第1天起分别予10%牛乳、10%牛初乳、酸牛乳管饲,第5天时除空白对照组外其余各组予双氯芬酸15 mg/kg管饲1次.于造模后24h和48 h分别评价小肠大体损伤评分、病理损伤评分,检测绒毛高度、肠黏膜超微结构变化.免疫组化法观察小肠黏膜EGF的表达.结果 24h和48 h时点牛初乳组大体和病理损伤评分均低于模型组.牛初乳组24h和48 h小肠绒毛高度分别为(145.7±16.5)μm和(139.2±19.0)μm,明显高于模型组[(119.2±19.2)μm和(105.4±18.4)μm],P＜0.05.牛初乳组透射电镜下见小肠黏膜微绒毛较整齐,扫描电镜下见小肠绒毛表面光滑,顶端微绒毛密集;而模型组、牛乳组、酸牛乳组的超微结构改变相似,透射电镜下可见微绒毛水肿,排列紊乱,部分脱落,扫描电镜下见小肠黏膜表面粗糙不平,局部破溃,微绒毛减少甚至缺失.牛初乳组48 h时点小肠黏膜EGF阳性面积为(6170.5±1483.9)μm2,显著高于模型组[(3517.1±985.8)μm2],P＜0.05.牛乳组、酸牛乳组的大体损伤评分、病理损伤评分、小肠绒毛高度、EGF阳性面积与模型组相似,差异无统计学意义.结论 牛初乳可有效防治双氯芬酸所致小肠黏膜损伤,维护小肠黏膜机械屏障的完整,推测其机制可能与牛初乳中的成分可维持小肠黏膜内EGF含量有关.
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组织工程修复肩袖损伤促进腱骨愈合的研究进展
肩关节已成为继腰背、膝关节之后运动系统疼痛的第三大好发部位[1]，特别是在60岁以上的老年人群中，肩袖损伤是引起肩关节疼痛的主要原因[2]，并且常伴有功能减退及睡眠障碍等。普通人群调查显示[3]，肩袖全层撕裂的患病率为22.1%(147/664)，其中无症状患者约为有症状的两倍，并随年龄的增长而增加[4-9]。肩袖损伤的处理是复杂的，对于非手术治疗失败的患者可行手术一期修补[10]。关节镜下肩袖修补术已成为肩袖损伤修复的“金标准”，具有创伤小、并发症少等优点[11]，可以使绝大多数患者肩关节功能恢复以及长期的疼痛缓解[4,12-19]。
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间充质干细胞对烧伤创面免疫调控作用的研究进展
间充质干细胞（MSC）因具有自我更新、快速增殖、多向分化及旁分泌细胞因子等功能，以及通过与创面中的各种免疫细胞相互作用调控创面组织细胞的免疫功能等特点，在创面愈合中具有重要作用。MSC可能通过与免疫细胞的直接接触及旁分泌细胞因子来调控创面组织细胞的免疫功能，延长皮肤移植物存活时间。具有抑制免疫细胞功能等独特的免疫学特点，为其应用于烧伤创面的治疗提供了可能的理论依据。
关键词： 间质干细胞 胞间信号肽类和蛋白质类 烧伤 免疫 创面 -
促性腺激素对小鼠卵泡生长分化因子9表达的影响
目的 探讨促性腺激素对小鼠卵泡生长分化因子9(GDF-9)及生长分化因子9B(GDF-9B)表达的影响.方法 以性成熟小鼠体外培养卵泡和性成熟雌性BALB/c小鼠作为研究模型,(1)体内实验:20只小鼠随机分为两组,A组10只,注射孕马血清促性腺激素(PMSG),每只10 IU,B组10只,注射同等体积的生理盐水,24 h后取卵巢组织,免疫组化检测GDF-9的表达,原位杂交技术检测GDF-9B的表达,比较两组间GDF-9、GDF-9B的表达差异.(2)体外实验:小鼠卵巢组织经胶原酶消化后收取卵泡58个,随机分为两组进行体外培养,C组32个卵泡,培养液中加入卵泡刺激素(FSH)100 IU/L,D组26个卵泡,培养液中不加FSH.C、D组卵泡培养72 h后收集卵母细胞,行免疫组化检测,根据细胞着色强度(+～++++)判定GDF-9表达情况.结果 (1)免疫组化:共计数370个卵泡,其中A组186个,染色强度为+～++++的卵泡数分别为41(22.0%)、86(46.2%)、42(22.6%)、17(9.1%)个,B组184个,染色强度为+～++++的卵泡数分别为78(42.4%)、79(42.9%)、26(14.1%)、1(0.5%)个,A组较B组卵巢组织GDF-9表达增强,差异有统计学意义(P＜0.01).卵泡培养后共收集卵母细胞58 个,C 组32个,染色强度为+～+++的卵泡数分别为9(28.1%)、17(53.1%)、6(18.8%)个;D组26个,染色强度为+～+++卵泡数分别为16(61.5%)、8(30.8%)、2(7.7%)个,C组较D组GDF-9的表达增强,差异也有统计学意义(P＜0.05).(2)原位杂交:共计数卵泡362个,其中A组184个,染色强度为+～++++的卵泡数分别为58(31.5%)、85(46.2%)、39(21.2%)、2(1.1%)个,B组178个,染色强度为+～++++的卵泡数分别为71(39.9%)、74(41.6%)、28(15.7%)、5(2.8%)个,A组与B组卵巢组织中GDF-9B的表达强度比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 促性腺激素在体内可增加卵巢组织GDF-9的表达,FSH在体外可增加卵泡GDF-9的表达,促性腺激素不影响GDF-9B的表达.
关键词： 促性腺激素类 胞间信号肽类和蛋白质类 卵巢 -
Gas6蛋白和mRNA在胎盘或蜕膜组织中的表达及其与子痫前期发病的关系
目的：探讨生长阻滞特异性蛋白6（Gas6）蛋白和mRNA在胎盘或蜕膜组织中的表达及其与子痫前期发病的关系。方法2013年10月至2014年6月于山东大学齐鲁医院产科以剖宫产术分娩的32例重度子痫前期孕妇作为重度子痫前期组，同期因社会因素以剖宫产术分娩的30例健康孕妇为健康对照组。检测两组孕妇的血糖、血脂、血小板计数、D-二聚体水平等临床指标；采用免疫组化SP法测定胎盘及蜕膜组织中Gas6蛋白的表达；采用逆转录（RT）-PCR技术检测胎盘组织中Gas6 mRNA表达水平；对Gas6 mRNA表达水平与各临床指标的相关性进行分析。结果（1）重度子痫前期组孕妇分娩孕周、血压、血浆白蛋白、血小板计数、新生儿出生体质量分别与健康孕妇组比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。（2）重度子痫前期组及健康对照组胎盘及蜕膜组织中均有Gas6蛋白表达，且两组孕妇Gas6蛋白表达均定位于胎盘合体滋养细胞的胞质及胞核中，以及蜕膜细胞的胞质及胞核中。（3）重度子痫前期组孕妇胎盘组织中Gas6 mRNA表达水平为0.60±0.38，健康对照组为0.34±0.22，两组比较，差异有统计学意义（P<0.01）。（4）胎盘组织中Gas6 mRNA表达水平与孕妇体质指数、收缩压及舒张压、游离脂肪酸、肌酐水平呈显著正相关（P<0.05）；与血浆白蛋白水平呈负相关（P<0.05）。结论 Gas6蛋白和mRNA在胎盘或蜕膜组织中高表达与重度子痫前期的发病存在相关性。
关键词： 先兆子痫 胞间信号肽类和蛋白质类 胎盘 蜕膜 -
卵巢上皮性癌组织中Notch1、Jagged1和NICD蛋白表达的意义及癌细胞中γ-分泌酶活性的初步探讨
目的 了解Notch1、Notch配体(Jagged1)及Notch细胞内区(NICD)在卵巢上皮性癌(卵巢癌)组织中的表达及其临床意义;初步探讨卵巢癌细胞系SKOV3细胞中γ-分泌酶活性,及γ-分泌酶抑制剂——氮-[氮-(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰]-S-苯基甘氨酸丁酯(DAPT)对SKOV3细胞γ-分泌酶活性的影响.方法 (1)选取2004年3月到2007年7月于北京大学第一医院住院并接受治疗的卵巢癌患者共43例,选取2009年10月到2012年5月于本院因卵巢良性上皮性肿瘤行卵巢肿物剥除或附件切除的11例患者作为对照,应用免疫组化法检测卵巢癌及卵巢良性上皮性肿瘤组织中Notch1、Jagged1及NICD蛋白的表达,分析其与卵巢癌患者临床病理指标的关系.(2)体外培养卵巢癌细胞系SKOV3、永生化卵巢表面上皮细胞系T29细胞,采用基于Gal4-VP 16/UAS系统和双荧光素酶报告基因系统的检测方法对SKOV3和T29细胞中的γ-分泌酶活性进行测定,并测定加入50 μmol/L的DAPT后γ-分泌酶活性的变化.结果 (1) Notch1蛋白在卵巢癌组织中的免疫组化综合评分为(6.7±2.2)分,与卵巢良性上皮性肿瘤组织的(5.4±2.7)分比较,差异无统计学意义(P=0.153);Jagged1及NICD蛋白在卵巢癌组织中的综合评分分别为(5.3±2.4)、(5.3±2.3)分,显著高于卵巢良性上皮性肿瘤组织的(1.6±1.4)、(3.1±1.7)分(P＜0.01).Notch1、Jagged1及NICD蛋白的表达与卵巢癌患者的年龄、家族史、腹水、血清CA125水平、肿瘤长径、手术病理分期、病理分化程度及病理类型均无关(P均＞0.05).Notch1、Jagged1和NICD蛋白表达的强弱与卵巢癌患者的5年生存率及中位生存时间均无关(P均＞0.05),Notch1、Jagged1、NICD蛋白(+++)表达与其(+)～(++)表达的卵巢癌患者的死亡风险的危险度比(HR)分别为0.771、1.648和1.316(P均＞0.05).(2) DAPT处理前,SKOV3细胞的γ-分泌酶活性为(100.0±5.3)％,明显高于T29细胞的(12.2±1.4)％(P=0.019).DAPT(50 μmol/L)处理后,SKOV3细胞的γ-分泌酶活性降至(6.6±0.8)％,DAPT处理前、后比较,差异有统计学意义(P=0.001).结论 Notch1信号传导通路中的Jagged1和NICD蛋白可能在卵巢癌的发生中发挥作用.卵巢癌细胞的γ-分泌酶活性高于卵巢上皮细胞,γ-分泌酶可能成为治疗卵巢癌的靶点.
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妊娠不同时期脂肪细胞因子的动态变化与胰岛素抵抗的关系
目的 探讨妊娠不同时期脂肪细胞因子的动态变化及其与孕妇胰岛素抵抗的关系.方法 选择2004年10月-2005年10月在我院门诊行产前检查的正常孕妇67例,其中妊娠早期18例(妊娠早期组),妊娠中期19例(妊娠中期组),妊娠晚期30例(妊娠晚期组);另选同期正常非孕妇女46例为对照组.采用酶联免疫吸附试验检测各组妇女血清中可溶性肿瘤坏死因子α受体(Stnfr)-Ⅰ、Ⅱ水平;采用放射免疫法测定各组妇女血清中瘦素、脂联素水平;采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法检测妊娠晚期组妇女胎盘及脂肪组织中Stnfr 定位与阳性表达.结果 (1)妊娠早、中、晚期组及对照组妇女血清中Stnfr-Ⅰ水平分别为(799±173)、(1003±241)、(1278±306)及(729±167)ng /L,妊娠中、晚期组明显高于对照组,分别比较,差异有统计学意义(P＜0.001).(2)妊娠早、中、晚期组及对照组妇女血清中Stnfr-Ⅱ水平分别为(1383±305)、(1772±293)、(1933±498)及(1002±221)ng /L,妊娠早、中、晚期组明显高于对照组,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.001).并随孕期的增加,Stnfr-Ⅱ水平不断升高.(3)妊娠早、中、晚期组及对照组妇女血清中瘦素水平分别为(65±37)、(70±40)、(89±57)及(61±37)μg /L,妊娠晚期组明显高于对照组,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).(4)妊娠早、中、晚期组及对照组妇女血清中脂联素水平分别为(13±6)、(9±5)、(10±4)及(14±7)mg/L,妊娠中、晚期组明显低于对照组,分别比较,差异有统计学意义(P＜0.05).(5)妊娠晚期组妇女胎盘及脂肪组织中Stnfr-Ⅰ、Ⅱ均呈阳性表达,无阴性表达;Stnfr-Ⅰ阳性染色颗粒主要定位于胎盘绒毛组织中的合体滋养细胞以及细胞滋养细胞中的胞质和胞膜, Stnfr-Ⅱ阳性染色颗粒主要定位于胎盘血管内皮细胞中的胞质和胞膜.结论 孕妇血清中Stnfr-Ⅰ、Ⅱ及瘦素水平随孕期的增加不断升高;而脂联素水平则随孕期的增加有所下降,上述变化可能与孕妇的胰岛素抵抗有关.
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低分子肝素及肝素结合型表皮生长因子对孕早期滋养细胞生物学功能的影响
目的 观察低分子肝素及肝素结合型表皮生长因子(HB-EGF)对孕早期滋养细胞功能的影响.方法 2011年2月至11月在中山大学附属第二医院进行体外培养孕早期绒毛组织中的滋养细胞.按照不同浓度的低分子肝素分为0.025 U/ml组、0.25 U/ml组、2.5 U/ml组、25 U/ml组、250 U/ml组；按照低分子肝素、HB-EGF单独及联合用药,分为低分子肝素组(浓度0.25 U/ml),HB-EGF组(浓度10 μg/L),联合用药组(浓度0.25 U/ml的低分子肝素+10 μg/L的HB-EGF)；将加入DMEM设为对照组.采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测孕早期滋养细胞增殖能力,以平均吸光度(A)值表示；采用穿膜小室实验检测孕早期滋养细胞的侵袭能力,以穿透至膜下细胞数表示；并检测培养上清液中孕早期滋养细胞分泌的hCG水平以评价滋养细胞的分化能力.结果 与对照组比较,低分子肝素浓度为0.025 U/ml对孕早期滋养细胞增殖、侵袭能力影响不明显(P＞0.05)；低分子肝素浓度为0.25 U/ml、2.5 U/ml时,低分子肝素增加孕早期滋养细胞增殖、侵袭能力(P＜0.05)；低分子肝素浓度为25 U/ml、250 U/ml时,则低分子肝素显著抑制孕早期滋养细胞增殖、侵袭能力(P＜0.05).与对照组A值(0.44±0.04)比较,低分子肝素组(A值为0.51 ±0.05)、HB-EGF组(A值为0.56±0.04)、联合用药组(A值为0.69±0.06)均显著增高(P＜0.05).在侵袭试验中,低分子肝素组侵袭细胞数为(511±78)个,HB-EGF组为(669±67)个,联合用药组为(872±64)个,分别与对照组(405±67)个比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).低分子肝素组上清液中hCG水平为(7143±649)U/L,HB-EGF组为(11 762±1059)U/L,联合用药组为(11 015±1084)U/L,分别与对照组(8182±666)U/L比较,差异也均有统计学意义(P＜0.05).结论 低分子肝素可以调节孕早期滋养细胞的增殖、侵袭和分化能力.HB-EGF是低分子肝素对孕早期滋养细胞产生作用的一个重要因素.
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脂联素在子痫前期患者胎盘组织中的表达与其发病的关系
目的 探讨脂联素在子痫前期患者胎盘组织中的表达与其发病的关系.方法 采用免疫组化链霉菌抗生物蛋白-过氧化物连接(SP)法及RT-PCR技术,检测20例正常足月妊娠孕妇(正常妊娠组)、12例轻度子痫前期(轻度子痫前期组)及22例重度子痫前期(重度子痫前期组)患者胎盘组织中脂联素蛋白及其mRNA的表达,并分析其与子痫前期发病的关系.结果 (1)3组孕妇胎盘绒毛合体滋养细胞及细胞滋养细胞胞质内脂联素蛋白均呈阳性表达,且各组内胎盘母面及子面脂联素蛋白的表达水平相互比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).(2)重度子痫前期组胎盘组织中脂联素蛋白的表达水平(30 984±14 604)低于轻度子痫前期组(58 360±8910)及正常妊娠组(53 246±17 554),差异均有统计学意义(P＜0.01).重度子痫前期组中妊娠足月者胎盘组织中脂联素蛋白的表达水平(38 890±20 386)与未足月者(29 319±8997)比较,差异无统计学意义(P＞0.05);但与正常妊娠组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).(3)3组孕妇胎盘组织中均有脂联素mRNA的表达.其中重度子痫前期组胎盘组织中脂联素mRNA表达水平(1.0±0.2)低于轻度子痫前期组(2.9±0.8)及正常妊娠组(3.3±1.1),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 重度子痫前期患者胎盘组织中脂联素mRNA表达水平下降导致其蛋白表达水平也下降,提示脂联素的异常表达参与了子痫前期的发病.
关键词： 先兆子痫 胞间信号肽类和蛋白质类 胎盘 -
多囊卵巢综合征患者血清脂联素水平与胰岛素抵抗关系的研究
目的探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清脂联素(APN)水平与胰岛素抵抗的关系.方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定40例PCOS患者[PCOS组,根据体重指数(BMI)分为肥胖者(BMI≥25 kg/m2)19例,非肥胖者(BMI<25 kg/m2)21例]及15例健康志愿者和10例非PCOS不孕患者(对照组,其中肥胖者9例,非肥胖者16例)的APN水平,化学发光法、葡萄糖氧化酶法、放射免疫法分别测定空腹胰岛素、空腹血糖、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平.计算两组患者胰岛素敏感指数(ISI),评价胰岛素抵抗程度.结果 (1) PCOS组肥胖者APN水平为(1.6±0.5)mg/L,PCOS组非肥胖者为(3.0±0.6) mg/L,对照组肥胖者为(3.2±0.3) mg/L,非肥胖者为(4.9±0.5) mg/L,两组分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(2)PCOS组肥胖者胰岛素水平为(17±6)mU/L,非肥胖者为(14±6) mU/L,对照组肥胖者为(10±3) mU/L,非肥胖者为 (7±3) mU/L,两组分别比较,差异有统计学意义(P<0.05).(3)PCOS组肥胖者空腹血糖为(5.2±0.7) mmol/L,非肥胖者为(5.1±0.6) mmol/L,对照组肥胖者为(5.4±0.5) mmol/L,非肥胖者为(4.8±0.6) mmol/L, 两组分别比较,差异无统计学意义(P>0.05).(4)PCOS组肥胖者TNF-α水平为(1.32±0.14)μg/L, 非肥胖者为(1.02 ±0.12) μg/L,对照组肥胖者为(0.93±0.15) μg/L,非肥胖者为(0.63±0.18) μg/L,两组分别比较,差异有统计学意义(P<0.05).(5) PCOS组肥胖者ISI为-4.5±0.3,非肥胖者为-4.1±0.4,对照组肥胖者为-3.6±0.3,非肥胖者为-3.1±0.4,两组分别比较,差异也有统计学意义(P<0.05 ).PCOS组患者APN水平与BMI 呈显著负相关关系(r=-0.56,P<0.05),与ISI呈显著正相关关系(r= 0.49, P<0.05).结论 PCOS患者APN水平降低,并以PCOS肥胖者降低更明显;PCOS患者APN水平下降与胰岛素敏感性及胰岛素抵抗相关.
关键词： 多囊卵巢综合征 胞间信号肽类和蛋白质类 胰岛素抗药性 -
子痫前期患者胎盘和脐动脉组织Rho相关蛋白激酶Ⅱ的表达及意义
目的 探讨子痫前期患者胎盘和脐动脉组织中Rho相关蛋白激酶Ⅱ(RockⅡ)的表达变化及其意义.方法 采用RT-PCR、蛋白印迹法分别检测35例轻度子痫前期患者(轻度子痫前期组)、38例重度子痫前期患者(重度子痫前期组)及45例正常晚期妊娠妇女(对照组)胎盘及脐动脉组织中RockⅡmRNA及其蛋白表达水平;采用免疫组化方法 对RockⅡ在胎盘组织中的表达进行定位,B超检测脐动脉收缩期大血流速度(S)与舒张末期血流速度(D)的比值.结果 (1)RockⅡ主要表达于胎盘合体滋养细胞的细胞质.(2)轻度子痫前期组、重度子痫前期组及对照组胎盘组织RockⅡmRNA表达水平分别为0.82±0.14、0.93±0.13及0.70 4-0.12,分别比较,差异也均有统计学意义(P＜0.01);轻度子痫前期组、重度子痫前期组及对照组胎盘组织RockⅡ蛋白表达水平分别为0.79±O.15、0.92±0.12及0.68±0.11,分别比较,差异也均有统计学意义(P＜0.01).(3)轻度子痫前期组、重度子痫前期组及对照组脐动脉组织RockⅡmRNA表达水平分别为0.69±0.13、0.55±0.12及0.76±0.10,分别比较,差异也均有统计学意义(P＜0.01);轻度子痫前期组、重度子痫前期组及对照组脐动脉组织RockⅡ蛋白表达水平分别为0.68±0.10、0.51±0.12及0.75±0.13,分别比较,差异也均有统计学意义(P＜0.01).(4)脐动脉组织RockⅡmRNA及蛋白表达水平与脐动脉S/D值均无相关性(P＞0.05).结论 RockⅡ在子痫前期患者胎盘组织中的表达水平升高,在脐动脉组织中的表达水平降低,可能参与了子痫前期的病理、生理过程.
关键词： 先兆子痫 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 胞间信号肽类和蛋白质类 胎盘 脐动脉 -
卵巢上皮性癌组织中Jagged1 mRNA的表达及沉默Jagged1基因的表达对裸鼠移植瘤生长的影响
目的：探讨Notch基因的配体——Jagged1 mRNA在卵巢上皮性癌（卵巢癌）组织中的表达及沉默Jagged1基因的表达对卵巢癌裸鼠移植瘤生长的影响。方法（1）收集2011年2月至2014年3月在河南省新乡市中心医院行手术治疗的48例卵巢癌及30例良性卵巢上皮性肿瘤患者的存档组织标本，采用实时荧光定量逆转录（RT）-PCR技术检测肿瘤组织中Jagged1、Notch受体——Notch1及其下游靶基因Hes1、Hey1 mRNA的表达。（2）培养卵巢浆液性囊腺癌细胞系SKOV3细胞接种于裸鼠腋窝皮下，构建卵巢癌裸鼠移植瘤模型，随机将裸鼠分为3组，Jagged1干扰组、空载体组和对照组，每组10只裸鼠，分别转染重组载体pcDNA3.1（+）-siRNA-Jagged1质粒（特异性沉默Jagged1基因的表达）、空载体pDC3.1质粒和磷酸盐缓冲液。转染结束后14 d，测量3组裸鼠移植瘤体积和瘤体质量，计算抑瘤率；采用实时荧光定量RT-PCR技术和蛋白印迹（western blot）法分别检测裸鼠移植瘤组织中Jagged1、Notch1、Hes1和Hey1 mRNA和蛋白的表达。结果（1）实时荧光定量RT-PCR技术检测显示，卵巢癌组织中Jagged1、Notch1、Hes1和Hey1 mRNA的表达水平均高于良性卵巢上皮性肿瘤组织，分别比较，差异均有统计学意义（P<0.01）。（2）转染结束后14 d，Jagged1干扰组裸鼠的移植瘤体积和瘤体质量分别为（491±68）mm3和（2.6±0.4）g，均明显小于空载体组[分别为（842±88）mm3和（4.4±0.8）g]和对照组[分别为（851±90）mm3和（4.5±0.9）g；P<0.05]；Jagged1干扰组裸鼠的抑瘤率为42.2%，显著高于空载体组和对照组（分别为2.2%、0；P<0.05）；Jagged1干扰组裸鼠移植瘤组织中Jagged1、Hes1和Hey1 mRNA和蛋白的表达水平均明显低于空载体组和对照组（P<0.05），而3组间Notch1 mRNA和蛋白的表达水平无明显差异（P>0.05）。结论 Jagged1 mRNA在卵巢癌组织中呈高表达；特异性沉默Jagged1基因的表达后，可抑制裸鼠移植瘤的生长，这可能是通过抑制Notch1信号通路而发挥抑癌作用。
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肝素结合表皮生长因子在紫杉醇耐药卵巢上皮性癌细胞和组织中的表达及意义
目的：检测肝素结合表皮生长因子（HB-EGF）在紫杉醇耐药卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞和组织中的表达水平，并探讨HB-EGF与卵巢癌紫杉醇耐药性的关系。方法（1）体外实验：蛋白印迹法检测卵巢癌细胞株A2780（紫杉醇敏感）和A2780/Taxol（紫杉醇耐药）细胞中HB-EGF蛋白的表达。体外细胞实验分为4组，A2780+CRM197组、A2780/Taxol+CRM197组、A2780组、A2780/Taxol组，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测4组细胞的增殖能力[以吸光度（A）值表示]，流式细胞仪检测4组细胞的细胞周期比例，酶标仪检测4组细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）蛋白的活性[以4硝基苯胺（pNa）浓度表示]。（2）体内实验：将A2780和A2780/Taxol细胞分别接种于裸鼠腋下，建立卵巢癌裸鼠移植瘤模型；免疫组化SP法检测裸鼠移植瘤组织中HB-EGF蛋白的表达。体内动物实验分为4组，方法同体外细胞实验分组，每组5只裸鼠，观察4组裸鼠移植瘤的生长情况，并计算抑瘤率。结果（1）体外实验结果：A2780/Taxol细胞中HB-EGF蛋白的表达水平为2.11±0.41，明显高于A2780细胞的0.75±0.20（P<0.01）。A2780+CRM197组、A2780/Taxol+CRM197组细胞增殖的抑制作用随CRM197浓度的增加而增强，呈明显的浓度依赖性（P<0.01），且当CRM197浓度≥1μg/ml时，A2780/Taxol+CRM197组细胞增殖的抑制作用明显高于A2780+CRM197组细胞（P<0.05）；A2780+CRM197组细胞G0/G1期比例[（67±4）%]高于A2780组[（54±6）%]，A2780/Taxol+CRM197组细胞G0/G1期比例[（72±4）%]高于A2780/Taxol组[（24±8）%]，分别比较，差异均有统计学意义（P<0.01）；A2780+CRM197组细胞中pNa浓度[（40±6）μmol/L，即caspase-3蛋白活性]高于A2780组[（6±6）μmol/L]，A2780/Taxol+CRM197组细胞中pNa浓度[（66±12）μmol/L]高于A2780/Taxol组[（9±6）μmol/L]，分别比较，差异均有统计学意义（P<0.01）。（2）体内实验结果：接种A2780和A2780/Taxol细胞的裸鼠移植瘤组织中HB-EGF蛋白的表达水平分别为（5.0±2.2）、（10.8±3.3）分，两者比较，差异有统计学意义（P<0.01）。A2780/Taxol+CRM197组肿瘤体积和肿瘤质量分别为（546±85）mm3和（0.56±0.09）g，明显低于A2780/Taxol组的（1840±145）mm3和（1.76±0.23）g，A2780+CRM197组肿瘤体积和肿瘤质量分别为（818±63）mm3和（0.74±0.15）g，明显低于A2780组的（1355±119）mm3和（1.31±0.27）g，分别比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。A2780/Taxol+CRM197组的抑瘤率为68%，高于A2780+CRM197组的43%；A2780/Taxol+CRM197组的抑瘤率为68%，高于A2780+CRM197组的43%，分别比较，差异均有统计学意义（P<0.01）。结论紫杉醇耐药的卵巢癌细胞和组织中HB-EGF蛋白均高表达，与卵巢癌对紫杉醇的耐药性相关。抑制HB-EGF蛋白的表达可有效促进紫杉醇耐药卵巢癌细胞凋亡，抑制其生长。
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基因表达谱芯片在盆腔器官脱垂发病相关基因检测中的应用
目的 应用基因表达谱芯片检测绝经后盆腔器官脱垂(POP)患者与绝经后非POP患者子宫主韧带组织中差异表达的基因,探讨POP发生的分子机制.方法 选择2007年1-5月在北京协和医院妇产科手术的绝经后POP患者3例为POP组,同期因妇科良性疾病行子宫全切除术的绝经后非POP患者3例为对照组.获取两组患者的子宫主韧带组织,进行组织来源确定及形态学观察;应用基因表达谱芯片筛选两组子宫主韧带组织中的差异表达基因,并进行功能分析;采用实时荧光定量PCR技术验证所筛选的差异表达基因的表达水平.结果 POP组患者子宫主韧带组织中胶原纤维与平滑肌束失去正常的排列,形态紊乱,可见胶原纤维断裂,平滑肌束细碎.采用基因表达谱芯片共筛选出179个差异表达的基因,其中包括加个功能未知的基因.107个基因在POP组中表达上调,72个基因在POP组中表达下调.差异基因涉及多种功能蛋白和代谢通路,其中Wnt信号传导通路的变化显著(P=0.000).实时荧光定量PCR技术检测证实,COL1A1、DKK1、SFRP1、FZD5、WNT16b基因在POP组中的表达水平分别为2.98±1.40、3.03±0.48、8.13±4.42、5.19.4±3.50和12.40±3.88,均明显高于对照组(分别为1.09±0.08、1.20±0.18、0.41±0.51、0.87±0.24和1.40±0.47,P<0.05),与基因表达谱芯片的检测结果一致.结论 POP的病理牛理过程复杂,涉及多种功能蛋白和代谢通路,其中Wnt信号传导通路拮抗剂DKK1、SFRP1介导的神经退行性病变可能与POP的发病密切相关.
关键词： 子宫脱垂 寡核苷酸序列分析 胞间信号肽类和蛋白质类 膜蛋白质类 神经变性疾病
