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NOSTRIN基因高表达诱导脐静脉内皮细胞生物活性改变的研究
目的 研究人内皮型一氧化氮合酶运输介导物(endothelial nitric oxide synthase traffic inducer, NOSTRIN)基因在体外培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)中的过度表达对该细胞生物学特性的影响.方法 脂质体介导转染体外培养的HUVEC,G418筛选阳性克隆.免疫组织化学法检测第八因子相关抗原(FⅧRag)的表达;细胞计数法绘制细胞生长曲线以观察细胞的增殖能力;Western 印迹检测细胞中NOSTRIN和eNOS蛋白质的表达;分光光度法和硝酸还原酶法分别测定细胞培养上清中eNOS的活性和NO代谢产物亚硝酸基/亚硝基(NO2-/NO3-)水平;光镜、电镜观察细胞的形态和超微结构.结果 转染前后细胞均为血管内皮来源细胞;转染NOSTRIN基因后细胞的增殖能力明显降低;Western印迹显示细胞转染NOSTRIN基因后其表达量明显增高,而eNOS蛋白质的表达量在各组细胞之间无差异(P＞0.05);转染NOSTRIN的细胞培养上清中eNOS活性[(11.727±3.09) U/ml]与转染空载体细胞[(22.69±3.36) U/ml]和对照组细胞[(21.85±3.47) U/ml]比较降低显著(P＜0.01),同时转染NOSTRIN细胞培养上清中 NO2-/NO3-[(25.56±2.49) μmol/L],与转染空载体细胞[(48.37±2.61) μmol/L]和对照组[(49.06±2.78) μmol/L]比较显著降低(P＜0.01);光镜和电镜观察看到转染NOSTRIN后对HUVEC有损伤作用(HUVEC拉长、微绒毛变短、细胞膜损伤,胞浆内有脂滴空泡,核膜不完整).结论 NOSTRIN的高表达影响了HUVEC的生物学特性,对HUVEC有明显的损伤作用.
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肝素结合性表皮生长因子样生长因子在坏死性小肠结肠炎新生大鼠线粒体途径细胞凋亡中的作用
目的 探讨肝素结合性表皮生长因子样生长因子(heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor,HB-EGF)在新生儿坏死性小肠结肠炎(neonatal necrotizing enterocolitis,NEC)新生大鼠模型线粒体途径细胞凋亡中的作用. 方法 新生无特定病原体Sprague-Dawley大鼠随机分为3组,每组10只.NEC模型组:采用代乳品人工喂养,并给予100％氮气缺氧90 s,4℃冷刺激10 min,每天2次,连续3 d；HB-EGF干预组:在NEC模型组基础上予HB-EGF灌胃,每次800 μg/kg,每天4次,连续3d.正常对照组:鼠乳喂养3d,不予任何干预.大鼠生后72h禁食12h后处死.取回肠末端组织,HE染色观察病理改变并评分；电镜下观察线粒体超微结构变化；免疫组织化学方法检测细胞色素C含量；Western印迹技术检测凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)及凋亡肽酶激活因子-1(apoptotic protease activating factor-1,APAF-1)的表达.组间差异比较采用单因素方差分析,两两比较采用q检验,P＜0.05为差异有统计学意义. 结果 (1)HB-EGF干预组NEC发生率为2/10,低于模型组(9/10),差异有统计学意义(x2=7.27,P＜0.01)；对照组未发生NEC.(2)NEC模型组线粒体在肠上皮细胞及肌层细胞中存在明显肿胀,基质内有多数电子透亮区,线粒体超微结构严重损伤.HB-EGF干预组有少量线粒体肿胀,损伤较NEC模型组减轻.(3)NEC模型组回肠组织细胞色素C表达较对照组增强,差异有统计学意义(0.030±0.018与0.002±0.001,q=6.15,P＜0.01),HB-EGF干预组回肠组织细胞色素C表达(0.014±0.018)较NEC模型组减弱,差异有统计学意义(q=3.53,P＜0.05).NEC模型组的APAF-1表达较对照组增强(1.364±0.299与0.215±0.033,q=15.31,P＜0.05),AIF表达也增强(0.181±0.050与0.127±0.045,q=3.71,P＜0.05)；与NEC模型组比较,HB-EGF干预组APAF-1的表达(0.455±0.123)减低(q=4.04,P＜0.05),AIF的表达(0.289±0.045)则明显增强(q=7.32,P＜0.05). 结论 HB-EGF能降低新生大鼠NEC发生率,其机制之一可能是通过下调APAF-1表达而减少新生大鼠线粒体途径细胞凋亡.
关键词： 小肠结肠炎 坏死性 胞间信号肽类和蛋白质类 凋亡蛋白酶活化因子1 细胞凋亡 线粒体 大鼠 -
重度子痫前期患者血清及胎盘组织中apelin的表达水平及其意义
目的 研究重度子痫前期患者外周血清、脐血清、胎盘组织中apelin水平及其受体APJ(apelin receptor)在胎盘组织中的表达水平,以及apelin与胎盘重量和新生儿出生体重的关系,探讨apelin在子痫前期发病中的作用. 方法 选取2014年5月至12月在我院住院分娩的单胎、重度子痫前期孕妇28例为子痫前期组,同期正常孕妇20例为对照组.采用酶联免疫吸附试验法检测孕妇外周血清及脐血清中apelin水平,免疫组织化学法检测胎盘组织中apelin及APJ的表达情况.采用t检验,以及Pearson相关分析进行统计学分析. 结果 (1)与对照组相比,子痫前期组的母体外周血清及脐血清中apelin水平较高[分别为(46.27±7.40)与(70.08±11.35) pg/ml、(59.55±3.44)与(71.20±7.90)pg/ml,t值分别为8.210和6.180],但新生儿出生体重及胎盘重量较低[分别为(3 290.0±443.0)与(1 958.9±466.1)g、(551.2±78.3)与(321.9±98.1)g,t值分别为-9.960和-8.660](P值均＜0.05).(2)子痫前期组中apelin和APJ蛋白在胎盘组织滋养层细胞质中均低表达,其平均光密度值均低于对照组(分别为0.20±0.03与0.28±0.04、0.22±0.04与0.29±0.07,t值分别为-6.647和3.665,P值均＜0.05).(3)子痫前期组中,外周血清apelin水平与新生儿出生体重及胎盘重量呈负相关(r值分别为-0.662和-0.469),脐血清apelin水平与新生儿出生体重及胎盘重量呈负相关(r值分别为-0.560和-0.400),胎盘组织apelin水平与新生儿出生体重及胎盘重量呈正相关(r值分别为0.447和0.293)(P值均＜0.05).结论 子痫前期患者外周血清、胎盘组织、脐带血清中apelin水平发生显著变化,提示apelin参与了子痫前期的发病.
关键词： 先兆子痫 胞间信号肽类和蛋白质类 血清 胎盘 -
Lipoxin A4受体样蛋白基因转染增强Lipoxin A4拮抗结缔组织生长因子诱导的人肺成纤维细胞增殖
目的克隆Lipoxin A4受体样蛋白(LRLP)基因,并转染人肺成纤维细胞(HLF).观察其增强Lipoxin A4拮抗结缔组织生长因子(CTGF)诱导的细胞增殖作用.方法构建LRLP与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因的真核表达载体pEGFP/LRLP,并转染HLF,用G418筛选稳定表达融合基因的细胞克隆株HLF/LRLP.用10 nmol/L Lipoxin A4预处理HLF和HLF/LRLP细胞30 min后,加入1 μg/mlCTGF诱导细胞增殖.MTT法检测细胞增殖抑制率.流式细胞术检测细胞周期.Western blot检测细胞周期蛋白D1的蛋白表达量.凝胶迁移率改变试验检测信号转导子和转录激活子3(STAT3)的DNA结合力.结果 (1)成功建立稳定表达LRLP和GFP融合基因的HLF/LRLP细胞株.(2) 1 μg/ml CTGF刺激24 h,可显著诱导HLF增殖.Lipoxin A4预处理对其有抑制作用,10 nmol/L Lipoxin A4对HLF/LRLP的细胞增殖抑制率显著高于对HLF细胞的增殖抑制率(P<0.05).(3)与未转染和空载体转染的HLF相比,10 nmol/L Lipoxin A4诱导更多的HLF/LRLP细胞生长停滞在G0/G1期(P<0.05).(4) 10 nmol/L Lipoxin A4拮抗CTGF诱导的细胞周期蛋白D1表达上调,并且对HLF/LRLP细胞的拮抗作用强于对HLF细胞(P<0.05).(5) 10 nmol/L Lipoxin A4拮抗CTGF诱导的STAT3 DNA结合力上调,并且对HLF/LRLP细胞的拮抗作用强于对HLF细胞(P<0.05).结论 LRLP基因转染,增强Lipoxin A4 拮抗CTGF诱导的人肺成纤维细胞增殖.
关键词： 膜蛋白质类 即早蛋白质类 胞间信号肽类和蛋白质类 成纤维细胞 细胞分裂 -
结缔组织生长因子在进行性肌营养不良中的表达
目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)在进行性肌营养不良(PMD)中的作用.方法使用Duchenne型肌营养不良(DMD)8例、Becker型肌营养不良(BMD)2例、先天性肌营养不良(CMD)6例患儿的肌肉活检标本,借助免疫组织化学、双免疫荧光方法及Western印迹分析检测CTGF的免疫表达和定位.结果免疫组织化学和双免疫荧光法显示CTGF在正常肌肉的血管处明显表达;免疫组织化学法和 Western印记分析均显示在PMD的萎缩肌肉中CTGF的免疫反应明显增强,所有病变肌肉组织中,CTGF在再生纤维的膜、胞浆及胞核中、巨噬细胞及巨噬细胞浸润的坏死纤维中强烈表达,也免疫定位在非再生纤维的肌纤维膜、肌内膜及肌束膜的结缔组织中;双免疫标记显示在肌内膜及肌束膜的大多数激活的成纤维细胞表达CTGF;但年长的CMD患儿的晚期纤维化中CTGF弱表达或无表达.结论结果表明CTGF可能参与了PMD的发病过程,肌肉内的CTGF可能在肌纤维再生和肌肉纤维化的病变过程中起重要作用.
关键词： 肌营养不良 即早蛋白质类 胞间信号肽类和蛋白质类 -
RhoA/Rho激酶在高肺血流肺血管结构重构中的表达及其活性研究
目的 探讨RhA/Rho激酶在高肺血流所致肺血管结构重构过程中所起的作用.方法 108只4周龄Wistar大鼠随机分到4个分流组、4个对照组,分流组大鼠接受左侧颈总动脉-颈外静脉分流术,对照组大鼠作假手术.在术后1、2、4、8周,分别测量右心室收缩压,作血气分析计算Qp/Qs.肺组织切片HE染色光镜下观察肺血管形态学改变,测量并计算中等血管中膜厚度所占管径百分比(MT%).免疫组化增殖细胞核抗原(PCNA)染色分析平滑肌细胞增生情况.用TUNEL细胞凋亡标记分析平滑肌细胞凋亡状况.pull down assay分析RhoA活性,Western blot检测RhoA、Rho激酶(ROCK2)的蛋白表达以及MYPT1磷酸化程度量化分析Rho激酶活性.结果 颈总动脉-颈外静脉分流导致肺循环血流量增加,Qp/Qs平均值为2.26±0.35.分流组RVSP在术后1周和8周较对照组高(t=8.799,t=5.332,P＜0.01).与对照组相比,分流组以平滑肌细胞过度增生和肥大为特征的中等肺动脉中膜增厚,MT%升高在第4周开始出现,到第8周更为明显(t=9.192,t=11.185,P＜0.01).分流组PCNA阳性平滑肌细胞在第1周显著升高,第2周达高值,与对照组相比,差异有统计学意义(t=7.213,P＜0.01),到第4周下降到显著低于对照组(t=4.183,P＜0.01),并持续降低,到第8周几乎观察不到增生的平滑肌细胞(t=6.152,P＜0.01).TUNEL阳性平滑肌细胞在第2周较对照组低(t=2.418,P＜0.05),并持续降低,到第8周几乎观察不到凋亡的平滑肌细胞(t=4.582,P＜0.01).RhoA和ROCK2表达在第1周即高于对照组(t=6.056,t=8.411,P＜0.01),第2周达高峰(t=9.342,t=10.437,P＜0.01).到第4开始下降,但是到第8周仍然显著高于对照组(t=4.743,t=4.455,P＜0.01).RhoA和Rho激酶活性在第1周也显著高于对照组(t=10.246,t=19.110,P＜0.01),到第4周达高峰(t=24.984,t=16.124,P＜0.01),然后开始降低,但是二者到第8周仍然显著高于对照组水平(t=4.934,t=10.426,P＜0.01).结论 在高肺血流所致的大鼠肺血管收缩和结构重构与RhoA/Rho激酶的表达和活性增强有关.
关键词： 高血压 肺性 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 胞间信号肽类和蛋白质类 肺循环 -
盐酸二甲双胍改善代谢综合征青少年脂联素水平和胰岛素敏感性的研究
目的观察盐酸二甲双胍治疗青少年代谢综合征(MS)前后血清脂联素水平和胰岛素敏感性的变化.方法对348例(男208例,女140例)7～16岁[(1147±212)岁]中、重度肥胖青少年进行体检和生化检测、口服葡萄糖耐量试验,检出其中符合MS诊断标准的36例,设为MS组,无生化检测异常的单纯性肥胖61例,设为单纯肥胖组.另设24例非肥胖青少年为对照组.对三组进行总体胰岛素敏感指数、稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和血清脂联素等的比较.对MS组患儿中20例给予连续口服盐酸二甲双胍治疗3个月,观察治疗前后的HOMA-IR和血清脂联素、生化指标的变化.结果 (1) HOMA-IR水平由低到高依次为对照组、单纯性肥胖组、MS组;胰岛素敏感指数和血清脂联素水平排序正好相反;HOMA-IR、胰岛素敏感指数和血清脂联素在3组间比较,差异均有统计学意义(均P<001).(2) 连续应用盐酸二甲双胍治疗满3个月的20例MS患儿:HOMA-IR下降[治疗前57 (19～124),治疗后29 (09～74),t=505,P<001],血清脂联素上升[治疗前(30±09)mg/L,治疗后(61±19)mg/L,t=619,P<001],血压、2 h血糖、甘油三酯、胆固醇、肝酶均有不同程度下降,治疗前后比较,差异有统计学意义(均P<001).结论 MS青少年脂联素水平和胰岛素敏感性比单纯性肥胖更低;应用盐酸二甲双胍治疗后MS青少年的脂联素水平上升,胰岛素敏感性改善,临床多项指标好转.
关键词： 二甲双胍 胞间信号肽类和蛋白质类 代谢综合征X 胰岛素抗药性 青少年 -
双歧杆菌DNA上调脐带血单个核细胞Th1应答
目的了解双歧杆菌基因组DNA(bDNA)的免疫调节作用、双歧杆菌制剂抗过敏可能的机制.方法使用bDNA体外刺激脐带血单个核细胞(CBMC),以空白、DNase Ⅰ完全酶解的bDNA(d-bDNA)和人DNA(hDNA)作为对照.在刺激后不同时间点终止培养,测定培养上清中细胞因子IL-12、IL-10的水平;计数分泌IFN-γ和IL-4的阳性细胞数量;并检测细胞内信号蛋白T-bet(T-box expressed in T cells)、GATA3 mRNA表达强度的变化.结果刺激12 h bDNA组细胞培养上清IL-12水平明显高于其他对照组(P＜0.05),这种IL-12水平升高也发生在刺激后24、48 h.刺激12、24h后,bDNA组细胞上清中IL-10水平比对照组、d-bDNA组和hDNA有所降低,但无统计学意义(P＞0.05).bDNA组加佛波脂(PMA)刺激后,分泌IFN-γ的阳性细胞数高于对照组(P＜0.05).bDNA组分泌IL-4阳性细胞数少于对照组、d-bDNA组及hDNA组(P＜0.05).bDNA组细胞在6、12、24h后,细胞中核转录因子T-bet mRNA的表达强度比对照组增强(P＜0.05).bDNA刺激不同时间后,细胞中核转录因子GATA3 mRNA的表达强度与其他组相比无明显差异.结论双歧杆菌基因组DNA上调CBMC IL-12、IFN-γ分泌及T-bet表达,下调IL-4分泌,促进CBMC Th1应答.这可能是双歧杆菌产生抗过敏作用的重要机制之一.
关键词： 二裂菌属 Th1细胞 胞间信号肽类和蛋白质类 DNA结合蛋白质类 反式激活因子类 -
川崎病Toll样受体MyD88非依赖性信号途径及其调节因子的研究
目的 探讨Toll样受体MyD88非依赖性途径及其调节因子在川崎病(KD)免疫发病机制中的作用.方法 急性期KD患儿32例,正常同年龄对照组16例,KD患儿分别于静脉丙种球蛋白(IVIG)治疗前后直接取血备检.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及荧光定量PCR(RealTime PCR)检测单核/巨噬细胞(MC)Toll样受体4及MyD88非依赖性途径传导分子/效应分子,如含Toll-白细胞介素-1受体结构域诱导干扰素接头分子(TRIF)、TRIF相关接头分子(TRAM)、TANK结合激酶1(TBK-1)、干扰素β(IFN-β)、干扰素诱导蛋白10(IP-10)、活化正常T细胞表达和分泌的调节因子(RANTES)、诱导性一氧化氮合成酶(iNOS)等,及负性调节因子细胞因子信号抑制因子1(SOCS-1)mRNA表达;流式细胞术检测MC细胞表面共刺激分子CD40的表达;甲基化特异性-荧光定量PCR分析SOCS-1基因胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸(CpG)基序甲基化状态.结果 (1)急性期KD患儿MC MyD88非依赖性途径传导分子TLR4、TRlF、TRAM、TBK-1和IFN-β mRNA表达水平显著高于正常同年龄对照组(P＜0.05);(2)趋化因子IP-10、RANTES和iNOS mRNA表达水平明显增加(P＜0.05);(3)急性期KD患儿MC细胞表面共刺激分子CD40明显高于同年龄对照组[(6.19±2.25)% vs.(2.00±1.37)%,t=7.98,P＜0.05],合并冠状动脉组(KD-CAL+)CD40表达明显高于无冠状动脉组[KD-CAL-,(9.63±2.96)% vs.(4.12±1.91)%,t=16.02,P＜0.05];(4)急性期KD患儿MC细胞SOCS-1 mRNA水平显著高于同年龄对照组[(4.31±0.83)×10-3 vs.(1.09±0.23)×10-3,t=20.43,P＜0.05],KD-CAL+组SOCS-1 mRNA表达明显低于KD-CAL-组[(5.73±1.04)×10-3 vs.(1.94±0.46)×10-3,t=14.15,P＜0.05];(5)KD患儿急性期SOCS-1基因CpG序列去甲基化水平明显增高[(26.9±8.6)% vs.(5.9±1.4)%,t=13.46,P＜0.05],KD-CAL+组SOCS-1基因去甲基化水平显著低于KD-CAL-组[(35.1±10.3)% vs.(13.2±3.7)%,t=8.63,P＜0.05].结论 急性期KD患儿MyD88非依赖性途径异常活化可能是导致KD免疫功能紊乱的因素之一.
关键词： 黏膜皮肤淋巴结综合征 受体 细胞表面 膜糖蛋白类 阻遏蛋白质类 胞间信号肽类和蛋白质类 -
蛋白尿负荷幼鼠肾组织核转录因子κB、致纤维化因子及纤维连接蛋白核酸表达的研究
目的探讨幼年大鼠持续蛋白尿致肾损伤的不同时间点肾组织NF-κB亚单位P65/Rel-A及凝血酶敏感蛋白(TSP-1)、转化生长因子(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)和纤维连接蛋白(FN) mRNA动态表达的趋势.方法 3周龄幼年Wistar雌性大鼠80只,分为BSA组(40只)和对照组(40只), 采用BSA诱导制备蛋白负荷肾病模型;考马斯亮蓝比色测大鼠尿蛋白;HE染色评价肾组织常病理变化;原位杂交检测P65/Rel-A、TSP-1、TGF-β1及CTGF mRNA表达;Northern blot检测FN mRNA表达.SPSS10对实验数据进行统计学处理.结果 (1)BSA组大鼠至3～4周蛋白尿达大量蛋白尿程度,肾间质炎症细胞浸润,肾小管蛋白管型形成,间质水肿,间质区加宽.(2)BSA组各级肾小管上皮细胞P65/Rel-A mRNA于细胞核的表达强度趋于增加,第1、2、3、4周半定量积分分别为: 2.33±0.20、2.76±0.12、2.96±0.19、 3.76±0.18(F=37.34,P<0.01).(3) BSA组 TSP-1 mRNA表达第1、2、3、4周半定量积分分别为: 2.60±0.28、3.39±0.41、2.77±0.08、2.71±0.13,于第2周时达高峰(F=11.14,P<0.01).(4)伴随蛋白尿的加重,BSA组TGF-β1及CTGF的mRNA于各级肾小管上皮细胞表达趋势进行性增强,与对照组比较及自身各时间点比较差异均有统计学意义(P<0.01).(5)Northern blot结果提示,BSA组FN mRNA于第2周明显上调,至第4周是对照组的3.6倍,是第1周的2.7倍,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01).结论大量持续蛋白尿过程中肾组织NF-κB信号途径活化,TSP-1、TGF-β1、CTGF的异常表达,肾间质FN的合成和异常集聚,可能是促进肾间质进一步损伤的机制之一.
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小鼠巨细胞病毒抑制神经干细胞分化及其机制研究
目的探讨小鼠巨细胞病毒(MCMV)对体外培养的神经干细胞(NSCs)分化的影响及其机制.方法体外分离、培养BABL/c胎鼠NSCs,利用NSCs向神经细胞分化模型,用感染复数(MOI)为1的含LacZ报告基因的重组MCMV毒株RM461进行感染,通过免疫组化、流式细胞术和RT-PCR检测MCMV感染后Nestin、GFAP和NSE阳性细胞比率及对神经干细胞分化相关信号分子Wnt-1和neurogenin 1(Ngn1)基因表达的影响.结果体外分离培养的NSCs,神经干细胞特异性标志Nestin表达强阳性,并可进一步分化为GFAP阳性的星形胶质细胞和NF-200、NSE阳性的神经元.当NSCs分化培养2 d,感染组和未感染组Nestin阳性细胞分别为(62.2±1.8)%和(37.2±2.4)%(t=4.62,P＜O.01),差异有统计学意义;而GFAP阳性细胞的比例分别为(37.4±1.6)%和(50.3±1.8)%(t=9.89,P＜0.01),NSE阳性细胞的比例分别为(8.9±0.8)%和(23.4±1.3)%(t=5.09,P＜0.01),差异均有统计学意义.感染组和未感染组Wnt-1基因的相对表达量分别为0.14±0.03和0.32±O.04(t=7.21,P＜0.01),Ngn1基因的相对表达量分别为0.09±0.01和0.21±0.02(t=10.73,P＜0.01),差异均有统计学意义.结论(1)CMV可抑制NSCs分化,这可能是CMV致脑发育异常的重要机制;(2)CMV感染可抑制Wnt-1和Ngn-1的基因表达而影响NSCs分化,人为调控这两条通路可能为探寻防治CMV感染致脑发育异常的方法提供新策略.
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心力衰竭幼鼠心肌结缔组织生长因子的表达及药物干预研究
目的 研究心力衰竭(heart failure,HF;简称心衰)幼鼠心肌结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达及苯那普利的调节作用.方法 采用腹主动脉缩窄术建立幼鼠HF模型,术后6周经高频超声筛查将符合心衰标准的幼鼠随机分为HF组和苯那普利治疗组,另设假手术组.苯那普利治疗组灌胃给药4周,术后10周时行高频超声、心肌重量分析、免疫组化和逆转录-聚合酶链反应分别检测心肌功能、心室重构程度、心肌CTGF表达.结果 10周时于3组中各随机抓取15只幼鼠进行检测.与假手术组比较,HF组左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、室间隔舒张末期内径(IVSTd)、室间隔收缩末期内径(IVSTs)、左室后壁舒张末期厚度(LVPWTd)、左室后壁收缩末期厚度(LVPWTs)、左心室相对质量(LVRW)、右心室相对质量(RVRW)均升高(P＜0.01),而短轴缩短率(FS)、射血分数(EF)降低(P＜0.01),CTGF免疫阳性细胞增多,CTGF mRNA表达亦高[(0.609±0.065)vs(0.117±0.011),P＜0.01].苯那普利组与HF组相比LVESD,IVSTd,IVSTs,LVPWTd,LVPWTs,LVRW,RVRW降低(P＜0.01),FS、EF升高(P＜0.01),CTGF免疫阳性细胞减少,CTGF mRNA表达下降[(0.441±0.053)vs(0.609±0.065),P＜0.01].结论 HF幼鼠心肌CTGF表达明显上调,苯那普利可部分抑制HF心肌CTGF的表达,从而抑制HF时心室重构的发生,改善心脏功能.
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共调节因子在乳腺癌ER信号转导通路中的作用
ER属于配体依赖的转录因子亚家族成员。雌激素可通过特异性结合并激活其受体传递信号，广泛调控机体的各种功能，如生殖功能、骨骼及其他组织的分化和维持等[1]。 ER介导的信号转导通路失调，可导致相关基因表达异常或改变细胞质内某些蛋白的功能，促使乳腺细胞增殖或抑制其凋亡，从而导致乳腺癌的发生；另外一些特殊的机制可促使乳腺癌由雌激素依赖型向雌激素非依赖型转化并造成治疗抵抗[2]。在乳腺癌发生、发展过程中，一系列蛋白与ER相结合形成转录复合体，调控基因转录活性，从而影响乳腺癌细胞的增殖，这类蛋白质被称为共调节因子。 ER介导的组织对雌激素的特异性应答是通过与其相互作用的共调节因子共同完成的。许多ER共调节因子的功能已被广泛研究，笔者就乳腺癌发生、发展过程中共调节因子在ER信号转导通路中的作用研究作一综述。
关键词： 乳腺肿瘤 雌激素受体 细胞因子类 胞间信号肽类和蛋白质类 -
结缔组织生长因子与转化生长因子及Smad信号通路在兔角膜创伤愈合中的作用
目的 探讨结缔组织生长因子(CTGF)与转化生长因子β1(TGF-β1)在兔角膜创伤愈合过程中的表达和对创伤愈合的作用,并对二者之间的相互作用及与此有关的Smad信号传导通路作初步研究.方法 选择Albino纯种白兔26只,随机分为4组:(1)空白对照组:2只兔(4只眼),未做任何处理.(2)单纯角膜创伤组:又分术后2、6 h,1、3、7、21 d亚组,每个亚组2只兔(4只眼).(3)TGF抗体组:颞侧球结膜下注射15.5μg TGF抗体,又分为3、7、21 d亚组,每个亚组2只兔(4只眼).(4)Smad4抗体组:颞侧球结膜下注射20μg Smad4抗体,又分为3、7、21 d亚组,每个亚组2只兔(4只眼).实验眼首先行直径3 mm、包含约0.05 mm实质层的板层角膜切除术,然后TGF抗体组术眼球结膜下注射TGF-β1抗体,Smad4抗体组术眼球结膜下注射Smad4抗体,用免疫组织化学和Mrna原位杂交方法分别检测CTGF、TGF-β1、纤维粘连蛋白(FN)在术后2、6 h、1、3、7、21 d的表达和Ⅰ型胶原、CTGF Mrna在术后6 h、3、7、21 d的表达及角膜纤维细胞活化增生情况.结果 (1)正常兔眼角膜未发现CTGF蛋白和Mrna的表达.TGF-β1蛋白在正常角膜上皮中有表达.(2)术后6 h角膜纤维细胞开始活化,创伤后TGF-β1在上皮和实质中的表达显著增加,同时CTGF Mrna表达上调;术后3 d TGF-β1蛋白、CTGF及Ⅰ型胶原Mrna的表达到高峰;术后7 d,3者在上皮中表达明显,TGF-β1蛋白在实质中表达减少;术后21 d,绝大多数纤维细胞恢复到伤前状态,CTGF蛋白和Mrna在上皮中偶见表达.(3)TGF抗体使实质中的TGF-β1、CTGF、FN表达减少,同时下调上皮中CTGFmRNA的表达.(4)Smad4抗体抑制实质层TGF的表达,而对CTGF表达无影响.结论 创伤能引起TGF-β1蛋白、CTGF蛋白及Mrna的表达增加,Ⅰ型胶原和FN蛋白合成增加.TGF-β1促进角膜纤维细胞活化,上调CTGF的表达;CTGF主要调节Ⅰ型胶原和FN生成,从而影响角膜伤口愈合和瘢痕形成;这两种调节作用可能不通过Smad通路传导.
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Gremlin对人晶状体上皮细胞转分化和细胞外基质合成的影响
目的 探讨细胞因子Gremlin对体外培养的人晶状体上皮细胞(HLEC)转分化和细胞外基质合成的影响.方法 实验研究.采用不同浓度Gremlin(0、100、200、400 μg/L)对体外培养的HLEC诱导24 h,倒置显微镜下观察细胞形态的变化;用200 μg/L Gremlin诱导HLEC不同时间(0、12、24、48、72 h),实时PCR和Western-blot方法检测转分化标志性蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、细胞外基质主要成分纤维连接蛋白(Fn)和Ⅰ型胶原纤维(COL-1)的表达.特异性地抑制Gremlin的表达(Gremlin.siRNA)对1.0 μg/L转化生长因子-β2 (TGF-β2)诱导HLEC不同时间(0、12、24、48、72 h)α-SMA 、Fn和COL-1蛋白和基因表达的影响.α-SMA 、Fn和COL-1蛋白和基因的表达与对照组的总体比较采用单因素及双因素方差分析,组间两两比较采用Turkey HSD检验及LSD-t检验.结果 正常HLEC为多角形贴壁细胞,用不同浓度Gremlin诱导24 h后,细胞变为长梭形,细胞间隙变大,呈纤维细胞样改变.细胞纤维样改变程度与Gremlin浓度相关.Gremlin可以诱导HLEC表达α-SMA、Fn和COL-1,并且随着时间的延长(0、12、24、48、72 h),α-SMA、Fn、COL-1 mRNA (α-SMA mRNA的表达:1.00±0.00,1.62±0.57,3.40±0.83,5.90±0.49,7.97±0.91;F=61.64,P＜0.05,q=6.43,13.13,18.66,P＜0.05;Fn mRNA的表达:1.00±0.00,3.26±0.23,5.86±0.90,10.17±2.16,12.89± 1.63;F=42.03,P＜0.05,q=6.45,12.18,15.79,P＜0.05;COL-1 mRNA的表达:1.00±0.00,1.78±0.88,6.80±0.44,12.7±2.46,21.2±3.66;F=51.79,P＜0.05,q=4.97,10.08,17.26,P＜0.05)和蛋白(α-SMA蛋白的表达:0.13±0.02,0.26±0.02,0.29±0.09,0.47±0.06,0.68±0.05;F=45.14,q=5.11,10.67,17.40,P＜0.05;Fn蛋白的表达:0.16±0.04,0.26±0.07,0.65±0.03,0.82±0.04,0.73±0.02;F=144.4,q=20.09,26.78,23.12,P＜0.05;COL-1蛋白的表达:0.11±0.02,0.23±0.09,0.41±0.05,0.61±0.03,0.74±0.03;F=75.47,q=9.99,16.60,21.07,P＜0.05)表达均增强,差异有统计学意义.特异性的阻断Gremlin的表达后,1.0 μg/L TGF-[2诱导人晶状体上皮细胞α-SMA、Fn、COL-1 mRNA (α-SMA mRNA的表达:F组间=81.89,P＜0.05,t=3.234,4.346,10.35;t=2.252,7.272,19.11,P＜O.05;Fn mRNA的表达:F组间=83.61,P＜0.05,t=2.538,8.202,11.99;t=6.316,7.304,14.80,P＜0.05;COL-1 mRNA的表达:F组间=73.64,P＜0.05,t=3.385,7.942,11.64;t=4.794,9.006,13.75,P＜0.05;GremlinmRNA的表达:F组间=46.11,P＜0.05,t=5.08,7.24,8.27;t=6.27,8.27,12.14,P＜0.05)和蛋白(α-SMA蛋白的表达:F组间=129.6,P＜0.05,t=4.34,4.85;3.83,4.34;13.03,14.82,P＜0.05;Fn蛋白的表达:F组间=26.18,P＜0.05,t=5.68,5.95;3.10,4.06;4.19,4.73,P＜0.05;COL-1蛋白的表达:F组间=41.37,P＜0.05,t=6.93,5.51;7.82,6.93;8.71,7.64,P＜0.05;Gremlin蛋白的表达:F组间=59.52,P＜0.05,t=2.24,3.49;5.74,6.23;6.98,9.98,P＜0.05)的表达较对照组明显减少.结论 Gremlin可以时间依赖性地诱导HLEC表达α-SMA、Fn和COL-1,特异性地抑制Gremlin的表达可以在较长时间内有效地抑制TGF-β2对HLEC转分化和细胞外基质合成的作用.
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衰老标记蛋白30高表达对紫外线诱导人晶状体上皮细胞凋亡的影响
目的 探讨衰老标记蛋白30(SMP-30)高表达对于紫外线B(UVB)诱导人晶状体上皮细胞凋亡的影响.方法 实验研究.以人晶状体上皮细胞系(HLE-B3)为模型,构建真核质粒pRFP-N1-SMP-30,利用脂质体转染的方法将其导入不同分组的细胞中,并以UVB刺激,用MTT法检测高表达的SMP-30对UVB诱导的HLE-B3细胞生存力的影响;利用细胞凋亡检测试剂盒测定高表达的SMP-30对UVB诱导的HLE-B3细胞凋亡的作用;并用免疫印迹法验证高表达的SMP-30对UVB诱导的凋亡相关蛋白表达的影响,通过活性氧自由基水平的检测分析高表达的SMP-30对UVB诱导的HLE-B3细胞活性氧表达的作用.数据的分析选择方差分析联合Dunnett的统计学方法.结果DNA测序证实插入的序列正确,证明pRFP-N1-SMP-30质粒构建成功.UVB照射后SMP-30高表达组HLE-B3细胞生存率为0.90±0.14,细胞的凋亡率为0.43±0.06,活性氧的水平0.52±0.02,与对照组相比差异均有统计学意义(t=5.830,9.934,12.19;P<0.05).UVB处理后,SMP-30高表达可显著下调Bax和cleav-caspase-3的表达,同时上调Bcl-2和Pro-caspase-3的表达.结论 高表达的SMP-30通过调控凋亡相关蛋白的表达及抑制活性氧的产生来缓解UVB照射导致的人晶状体上皮细胞的凋亡,从而发挥对晶状体上皮细胞的保护作用.
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细胞因子信号传导抑制因子在实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎视网膜内的表达
目的 探讨细胞因子信号传导抑制因子(SOCS)在实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎(EAU)视网膜内的表达与意义.方法 随机对照实验设计方法.90只Lewis大鼠采用分层随机抽样进行分组,分别为未治疗组40只大鼠、治疗组40只大鼠及正常对照组10只大鼠.用光感受器间维生素A类结合蛋白(IRBP)诱导EAU动物模型,治疗组从免疫后1～28 d,给予环孢素(CsA)灌胃,每天20 mg/kg体重,而未治疗组给予等量生理盐水,正常对照组未给予免疫和治疗.分别于免疫后7、14、21、28 d按分层随机号抽取治疗组与未治疗组各10只大鼠进行相关枪测,观察大鼠眼部炎性变化,双眼取材,分别用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹法检测大鼠视网膜内SOCS mRNA和蛋白的表达,酶联免疫吸附试验方法检测血清细胞因子白细胞介素4(IL-4)、IL-12、干扰素γ(IFN-γ)的水平.利用单因素方差分析对治疗组与未治疗组大鼠血清中细胞因子的浓度和视网膜内SOCS蛋白表达量进行对比分析,多重比较采用小显著差异法;用Mann-Whitney两样本比较秩和检验进行治疗组与未治疗组大鼠炎性反应分值比较.结果 免疫后14 d,未治疗组可见明显的虹膜睫状体炎,房水闪辉阳性,虹膜后粘连,瞳孔不规则甚至前房积脓,炎性反应分值是1.5±0.5;而治疗组眼部炎性反应不明显,炎性反应分值是0.5±0.3.未治疗组的IL-12、IFN-γ及IL-4免疫后14 d达到高峰(均P＜0.05),免疫后28 d IL-12、IFN-γ下降到正常水平(均P＞0.05),IL-4仍高于正常对照组(P＜0.05);治疗组中IL-12、IFN-γ的动态变化不明显(均P＞0.05),IL-4在整个病程中呈上升趋势(均P＜0.05).SOCS1、含SH2结构的细胞因子诱导蛋白(CIS)mRNA免疫后14 d表达高,未治疗组分别是正常对照组的3.41倍和3.36倍,治疗组分别为1.44倍和1.73倍;SOCS3和SOCS5mRNA在整个病程中逐渐升高,免疫后28 d表达高,未治疗组中分别为正常对照组的1.95倍和3.16倍,治疗组中分别为正常对照组的1.59倍和3.58倍.未治疗组SOCS1和CIS蛋白在免疫后7、14、21 d时显著高于正常对照组(均P＜0.05),治疗组二者免疫后14 d显著高于正常对照组(均P＜0.05);两组中SOCS3和SOCS5蛋白在免疫后均显著高于正常对照组(均P＜0.05).结论 EAU发生过程中视网膜SOCS1升高与Th1型反应增强有关;在发病的不同阶段中CIS与SOCS3升高和Th2细胞反应增强以对抗Th1细胞反应,与缓解葡萄膜炎的发病强度有关;SOCS5水平升高在眼局部炎性反应发生过程中可能起保护作用.
关键词： 自身免疫疾病 葡萄膜炎 视网膜炎 阻遏蛋白质类 胞间信号肽类和蛋白质类 -
反义寡核苷酸对转化生长因子β2刺激的人眼球筋膜囊成纤维细胞结缔组织生长因子表达的影响
目的 研究结缔组织生长因子(CTGF)在滤过泡瘢痕化形成中的作用.方法 对照实验研究.应用二甲基四氮唑盐(M1Tr)法检测脂质体对人眼球筋膜囊成纤维细胞(HTF)活性的影响;用脂质体包裹CTGF的反义寡核苷酸(ASODN)处理经转化生长因子β2(TGF-β2)刺激的HTF,然后用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和免疫细胞化学法检测纤维连接蛋白(Fn)的合成,用RT-PCR和免疫印迹法检测CTGF的表达.结果 3个不同浓度组的脂质体作用HTF后,其吸光度(A)值分别为0.178±0.069、0.196±0.071、0.141±0.036,与正常对照组(0.202±0.073)比较,差异无统计学意义(F=1.65,P＞0.05);单纯的TGF-β2刺激组(T组)与加入了脂质体的TGF-β2刺激组(D组)分别从基因和蛋白水平比较CTGF和Fn的表达,差异无统计学意义(t=0.90,2.32,0.75,2.11;P＞0.05);转染12 h后CTGF与Fn的Mrna水平比较,脂质体介导的CTGF反义寡核苷酸治疗组(A组)的相对灰度RI值明显高于脂质体介导的CTGF正义寡核苷酸对照组(S组)和D组(F=15.25,19.73;P＜0.05);CTGF与FN的蛋白表达水平与Mrna表达水平相一致.结论 CTGF的ASODN能够抑制TGF-β2对HTF表达CTGF和Fn的刺激作用.
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组织工程化人工神经的研究与进展
自体神经移植是治疗周围神经缺损的标准方法,但会造成供区神经损伤.随着生物工程技术的发展,目前已应用组织工程技术构建了人工神经导管,为修复长段周围神经缺损提供了新的方法和思路.
关键词： 神经组织工程 雪旺细胞 胞间信号肽类和蛋白质类 支架 -
PINCH-1蛋白的功能及与疾病的关系
PINCH蛋白(particularly interesting new cysteine-histidinerich protein)是LIM家族成员,包括PINCH-1[1]和PINCH-2[2]两个成员.PINCH-1在整合素和生长因子信号等的传导中起着十分重要的接头联结作用,与相关疾病,特别是肿瘤的发生、发展有一定的关系;PINCH-2则是PINCH-1的一个新发现的同源分子,它与PINCH-1在分布和功能上有很大重叠.本文主要就PINCH-1蛋白的相关研究情况作一综述.
关键词： LIMS1蛋白 人 整合素类 胞间信号肽类和蛋白质类 凋亡调节蛋白质类
